应用酶联免疫吸附试验(ELISA)快速检测狂犬病毒抗体的研究

国内检测狂犬病毒抗体一直用小鼠接种的方法,尚未见快速检测的研究报道,在建立了狂犬病毒组化免疫酶和免疫荧光方法后,由于防治狂犬病需要更敏感的方法。又建立了酶联吸附试验(ELISA)。 采用新鲜配制的磷酸铝凝胶吸附和释放,结合超速离心来提纯。浓缩组织培养的狂犬病毒,以此作为包被抗原,用辣根过氧化酶标记的SPA为第2抗体,底物为磷苯二胺,作间接ELISA测定小鼠血清中的     

酶联免疫吸附测定法

酶联免疫吸附测定法（ELISA）是一种灵敏度、特异性和精度都十分优良的测定方法。在诊断、疾病监控以及研究用途方面得到了广泛的运用。现在还在对其进行开发，以简化工序，提高灵敏度。此讲由SRL公司试药部的原田弘智对其进行讲解。[编者按]     

酶联免疫吸附法(ELISA)测定麻疹IgM

<正>因IgM应答出现暂短,因而作为期即感染或近期感染的指征,故在病毒性疾病急性期测定病毒IgM通常具有诊断的重要意义。已报告的有经甲肝病毒、Sendai病毒、疱疹病毒和带状疱疹病毒感染后,用ELISA法     

酶朕免疫吸附试验(ELISA)检测抗dsDNA抗体药盒研制

系统性红斑狼疮(SLE)是一种常见的结缔组织病,也是危及生命的重病。这种自身免疫病如累及肾病,在血中常有高水平的抗dsDNA抗体出现。这种抗体的升高或降低与疾病的恶化或好转密切相关。因而抗dsDNA抗体测定有鉴别诊断及判断预后的作用。也有人在观察衰老过程中自身抗体的变化。     

酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠抗天花粉蛋白的IgE类抗体的研究

检测小鼠IgE类抗体的经典方法是被动皮肤过敏试验(PCA),这是一种生物测定,因而在应用上受到一定限制,并且也受动物本身变化的影响。1973年Hoffman首次报道了用ELISA检测血清IgE。此后有不少工作者相继报道了应用ELISA检测IgE或抗原特异的IgE类抗体。为研究对天花粉蛋白的免疫     

用酶联免疫吸附法检测狂犬病病毒膜糖蛋白抗体

<正>当今的狂犬病疫苗刺激机体产生的是对病毒所有蛋白的抗体,而中和病毒的感染性是由于抗体对膜糖蛋白G引起的。虽然病毒中和抗体不是防止狂犬病的唯一因素,但是血清中和抗体的存在是主动免疫成功的可靠标志。WHO建议中和抗体需要在小白鼠或者细胞培养中测定,用快速荧光灶抑制试验(RFFIT)是细胞培养测定中和抗体所选择的方法。检测整个病毒或提纯的G蛋白的ELISA在文献中已有叙述,以整个病毒为抗原的方法,除了检出G蛋白抗体外还检出其他蛋白的抗体,因此将导致对保护力的错误评价。由于经济的原因,检测G蛋白抗体的ELISA方法无法被广泛应用。因此,我们试图研究一种提纯G蛋白的简单而经济的程序。本文结果表明基于这种蛋白的ELISA方法检测中和抗体具有高度的敏感性和特异性。     

酶联免疫吸附(ELISA)诊断肺肿瘤方法的建立

目的:早期确诊并得到及时治疗是有效防止肺肿瘤恶化的有效途径,本文旨在探讨建立ELISA的鉴定标准,以便早期筛选肺肿瘤特异蛋白质,有助于对该病的早期诊断.方法:实验主要以酶联免疫吸附(ELISA)试验为基础,以期获得诊断肺肿瘤的ELISA方法.以CA-125作为抗原,按照常规ELISA方法进行实验,确定抗原包被浓度、一抗稀释度及一抗最佳作用时间,达到优化ELISA检测肺肿瘤条件.结果:初步建立了ELISA方法检测肺肿瘤的条件,同时确定了抗原的最佳包被浓度为5μg/mL,血清一抗的最佳稀释比为1∶800,最佳作用时间为1.5 h.结论:ELISA检测肺肿瘤方法的建立,为临床中早期检测肿瘤的发生提供了数据支持,为进一步研究与优化肺肿瘤的检测方法奠定基础.     

酶联免疫吸附技术(ELISA)对大豆根瘤菌的鉴定

本文用直接ELISA法检测大豆根瘤菌USDA 110和RTt 50的纯培养菌体和根瘤。确定了该试验的最佳工作条件:酶标结合物HRP—Ab 110和HRP—Ab50的工作稀释度分别为1:3200和1:800,抗体Ab 110和Ab 50的工作稀释度分别为1:3200和1:800,抗原USDA 110和RTt 50的最适工作浓度均为6×10~7细胞/ml。该法能够特异地检测和区别慢生型和快生型大豆根瘤菌。在这两种类型的大豆根瘤菌中,同种内的少数菌株存在交叉反应,通过吸收可以消除,从而使ELISA的检测达到菌株     

用酶联免疫吸附法检测蛋白质的聚合

许多蛋白质二聚化或多聚化在调节其功能方面发挥重要作用,研究蛋白质的聚合有助于阐明相关的生物学过程. 本文使用酶联免疫吸附法,对分子量11 kD的马传染性贫血病毒核壳蛋白（nucleocapsid protein 11 kD, NCp11）的聚合进行检测. 首先利用亲和层析分别纯化了NCp11以及N 端或C 端融合有FLAG标签的NCp11. 然后将NCp11包被于聚苯乙烯96孔板底,加入带FLAG标签的NCp11与之聚合,再依次加入抗FLAG抗体、辣根过氧化物酶标记的二抗及底物,反应终止后于450 nm波长下读取吸收值. 结果表明,酶联免疫吸附法适用于NCp11聚合的检测,可对聚合的特异性、剂量依赖效应和影响因素等进行定量评价. 利用该方法不仅能检测蛋白质的聚合,而且具有灵敏度高、特异性好、通量高、成本低和快速简便等优点,有望获得广泛应用.     

不受纤维蛋白溶酶原干扰的脂蛋白(a)酶联免疫吸附测定法

实验证实脂蛋白(a)和纤维蛋白溶酶原之间具有免疫同源性,据此建立了不受Pg干扰的酶联免疫吸附法(ELISA)检测Lp(a)。a.根据Lp(a)含有apo(a)、apoB两种抗原位点,设计了抗apo(a)-Lp(a)-酶标抗apoB法;b.抗apo(a)经Pg亲和层析柱吸附处理后的抗apo(a)-Lp(a)-酶标抗apo(a)法。同时以火箭电泳为参考,经比较后,方法间相关性良好。     

酶标记免疫吸附试验(ELISA)用于抗乙脑抗体测定的探讨

近年来,ELISA 已成功地用于多种抗病毒抗体的测定。本法不但具有高度敏感性和特异性,且操作简便,适用于大批样品的检测。本研究探讨了应用 ELISA 进行抗乙脑抗体的测定,证明本法比血抑和补结敏感。适用于乙脑病人的血清学诊断和乙脑抗体调查。     

用斑点酶联免疫吸附试验检测轮状病毒抗原

我们用国产试剂和材料建立了一种以硝酸纤维素膜(NCM)作为固相载体的斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA),用于检测粪标本中的轮状病毒. 首先用铁笔将NCM划成5×5mm的小方格,然后将免抗人轮状病毒IgG打点至方格中心,室温凉干后,置封闭液中室温作用1小时,取出用PBST洗涤3～5次,每次5分钟,然后将膜直接浸入待检粪样、阳性抗原对照和阴性抗原对照中.置37℃ 30～60分钟,洗涤。随后将上述诊断膜浸入酶标兔抗人轮状病毒IgG中,室温45～60分钟,洗涤。用底物DAB显色数分钟,至阳性对照样本出现明显褐色斑点时,用自来水终止反应。根据斑点颜色深浅,肉眼即可判断阳性或阴性结果。     

用酶联免疫吸附试验检测肉毒毒素

<正>近年来建立的酶联免疫吸附试验(ELISA)给肉毒毒素的快速检测增加了一项重要的手段。某些酶既可结合于抗原(如竞争性酶联免疫吸附试验中的毒素),也可结合于抗体(如爽心法酶联免疫吸附试验中的IgG)。考虑到肉毒毒素是一种强毒物质,故更多地用后一标记方法。藉此已对A、B、E、G型肉毒毒素及A、B、E三型混合毒素,C和D型的毒素有关抗原和毒性的关系,一些肉毒梭     

酵母表面展示-酶联免疫吸附测定法的建立

以表面展示人源蛋白酶体α亚基6蛋白的重组酵母细胞,结合酶联吸附免疫原理检测技术,以表面展示有人源蛋白酶体α亚基6(proteasome subunit alpha6,PSα6)的重组酵母细胞及其对应的单克隆抗体3D7D12D为研究对象,建立酵母酶联免疫吸附(yeast-ELISA)检测技术,应用于检测小鼠单克隆抗体及单抗效价.应用该方法最佳酵母浓度为0.50A600;测得单抗效价为1∶5×105,与常规ELISA效价接近;交叉试验和阻断试验表明该方法特异性强;同时该方法可用于检测抗血清.结果表明,yeast-ELISA可直接应用于检测单抗,测得效价与常规抗原包被间接ELISA具有良好一致性,特异性好,无交叉反应性.     

重组钩端螺旋体外膜蛋白酶联免疫吸附(ELISA)检测方法的建立

目的建立以重组外膜蛋白为基础的钩端螺旋体抗体间接ELISA检测方法。方法以基因重组技术获取重组钩端螺旋体外膜蛋白LipL32,以该蛋白为抗原,特异的钩体抗血清进行ELISA方阵滴定、交叉性试验、阻断试验,并对北京地区的70份犬血清使用建立的ELISA方法以及德国Virion公司的全菌体钩端螺旋体ELISA试剂盒进行相互验证。结果方阵滴定试验确立以100ng/孔为抗原包被浓度,1∶160为血清稀释度。交叉性试验具有广泛性、阻断试验标明该方法特异性强、灵敏度高。两种方法数据经χ2检验,两者检出率之间差异不显著。结论重组LipL32蛋白具有结合活性。初步建立了以重组LipL32蛋白为抗原的钩端螺旋体抗体间接ELISA检测方法。     

应用酶联免疫吸附技术(ELISA)鉴定根瘤菌血清型和测定大田接种回收率

本文采用酶联免疫吸附技术测定了我国根瘤菌株与引进菌株NC92的血清型异同和大田接种花生后的结瘤比率,并比较了限定培养基和YMA培养基培养制备的抗原-抗体反应。结果指出,NC92酶标记抗体与其相对应的NC92菌株抗原起专性反应,不与供试的我国根瘤菌株抗原起反应;NC92菌株大田接种三个花生品种后的结瘸比率与不接种比较,达到极显著水准(P<0.01),不同花生品种间也达到显著水准(P<0.05),证明酶联免疫吸附技术用于根瘤菌血清型鉴定及其大田接种回收率测定是可行的。两种不同制备来源的NC92抗体和酶标记抗体     

抗体夹心酶联免疫吸附法测定重组溶葡萄球菌酶研究

用重组溶葡萄球菌酶免疫家兔获得抗血清,经亲和层析纯化后用HRP标记,以双向免疫扩散法确定抗血清效价,以Westernblot鉴定抗体的特异性,建立双抗夹心法标准曲线,鉴定其最小检出限、精确度、回收率。实验显示多克隆抗体能与溶葡萄球菌酶特异性结合,双抗夹心ELISA法检测抗原的最小检出限为0·98ng/mL,标准曲线在0·98~500ng/mL范围内线性良好。3份同批样本分别重复6次测定,平均批内变异系数为6·4%;3份不同批样本分别重复6次测定,平均批间变异系数为6·5%。血清中加入已知量的标准抗原,测得平均回收率为98·6%。此法检测重组溶葡萄球菌酶的可测范围广,灵敏度和精密度高,变异系数较小。结果证实建立的检测血清中重组溶葡萄球菌酶含量的双抗夹心酶联免疫吸附测定法(Enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)灵敏、准确、可靠。     

酶联免疫吸附试验(双抗体法)检测实验犬斯氏肺吸虫循环抗原的研究

近年来在肺吸虫病免疫诊断方面巳建立了不少检测抗体的方法,但这些方法作为考核疗效都不理想。本文报告以家犬作为斯氏肺吸虫病实验动物模型,应用双抗体法,观察其体内循环抗原的消长规律及治疗前后的变化,旨在探索解决临床上难于判定的药物疗效问题。检测材料及方法一、兔抗肺吸虫抗体的制备:用肺吸虫成虫抗原,免疫健康家兔获得的免疫血清(效价1:12800)经硫酸铵提取,再经Sephadex—G200柱层析纯化,用自动收集仪收集,作对流免疫电泳测定各管活性,混合浓缩以凯氏定氮测定,蛋白含量为2毫克/毫升,置4℃冰箱备用。二、酶标记抗体:取辣根过氧化物…     

酶联免疫吸附法（ELISA）检测四川“榨菜”病毒种类

1990至1991年在“榨菜”病毒病发生的始期和盛期,从四川九个县(市)近郊、远郊采集样品492份,用TuMV、CMV、TMV、PVX、PVY和CaMV六种抗血清,经酶联免疫吸附间接法进行检测,属于TuMV和TuMV与其它五种病毒之一或之二复合感染的有422份,占总样品数的85.77％,其中由TuMV单一感染的305份,占61.99％。此外,还有PVX、PVY、CaMV单一感染病样27份,占5.49％,而情况不明的43份,占8.74％,总检出率91.26％。检测结果表明,发病始期或盛期,近郊或远郊均以TuMV和TuMV与CMV复合感染的病毒为主,是四川“榨菜”生产上主要的病毒种类。