茶条槭愈伤组织的再生体系建立及其没食子酸含量的测定

通过愈伤组织诱导途径, 建立了快速高效的茶条槭再生体系。成熟种子在MS+1.0 mg·L-1 6-BA的培养基中萌发, 以茎段作为外植体, 在WPM+0.002-0.01 mg·L-1 TDZ+0.1 mg·L-1 6-BA中培养3周诱导形成愈伤组织, 诱导频率平均为98.0%。愈伤组织转入WPM+0.01 mg·L-1 TDZ+0.1 mg·L-1 6-BA培养基中得到再生芽, 分化频率为42.0%,平均每块愈伤产生再生芽10个左右。转到WPM+0.3 mg·L-1 IBA的培养基上的再生芽均可生根并长成完整植株, 小苗移栽成活率达到89.0%。实验还建立了愈伤组织中没食子酸的提取和HPLC检测方法。对深绿色愈伤组织连续培养2个继代后, 没食子酸含量达到2.8%。     

杂交狼尾草胚性愈伤组织的诱导与植株再生

以杂交狼尾草初级愈伤为材料,运用方差分析的方法研究不同因素对杂交狼尾草胚性愈伤诱导率与植株再生率的影响。结果发现,2,4-D和TDZ对杂交狼尾草胚性愈伤诱导影响显著,最佳的胚性愈伤诱导培养基为MS+3.0 mg·L-12,4-D+0.4 mg·L-16-BA+0.2 mg·L-1 TDZ,诱导率为54%;愈伤分化培养基以附加0.1 mg·L-1 TDZ+0.2 mg·L-16-BA+3.2 mg·L-1 CuSO4的 MS培养基为最佳,再生率为68.33%,褐化率为8.33%;分化培养基中添加0.8~3.2mg·L-1的CuSO4均能促进杂交狼尾草愈伤组织分化,而添加AgNO3对杂交狼尾草愈伤分化无显著影响。该技术为离体诱变获得杂交狼尾草低温种质材料奠定了基础。     

水杉愈伤组织诱导及植株再生

通过愈伤组织诱导器官发生途径,建立了水杉（Metasequoia glyptostroboides）的植株再生体系,探讨了不同外植体（种胚、幼叶切块、茎段、根段）和植物生长调节剂对不定芽直接再生和愈伤组织诱导器官发生的影响。结果表明：以种胚、无菌苗叶片、茎段和根作为外植体,在MS补加2,4-D、NAA和6-BA不同组合的培养基上都能诱导得到愈伤组织,其中种胚诱导愈伤组织效果最好,诱导率可达100%,茎诱导效果次之,诱导率为97.1%。诱导愈伤组织效果较好的培养基有：MS＋1.0mg·L-12,4-D＋0.5mg·L-16-BA、MS＋0.1mg·L-16-BA＋1.0mg·L-1NAA、MS＋0.5mg·L-16-BA＋1.0mg·L-1NAA、MS＋1.0mg·L-16-BA＋1.0mg·L-1NAA、MS＋0.5mg·L-16-BA＋2.0mg·L-1NAA、MS＋1.0mg·L-16-BA＋2.0mg·L-1NAA和MS＋0.5mg·L-12,4-D＋0.5mg·L-1NAA。以愈伤组织在MS培养基上植株再生效果最好,再生率为62.5%。     

芨芨草愈伤组织器官发生及植株再生

芨芨草(Achnatherum splendens(Trin.)Nevski)种子消毒并在MS培养基上萌发获得无菌苗,以幼苗的叶鞘和胚轴为外植体诱导愈伤组织,经继代后进一步诱导不定芽及生根.研究结果表明,诱导愈伤组织最适合的培养基为B5 1.5 mg·L-12,4-D 0.5 mg·L-1NAA;诱导芽分化较适合的培养基为B5 0.5 mg·L-1 6-BA 0.2 mg·L-1 NAA;1/4B5 1.0 mg·L-1NAA 0.2 mg·L-1 IBA 1.0 g·L-1活性炭培养基则有利于芨芨草试管苗的生根.本实验建立了完整的芨芨草植株再生体系,移栽成活率高.     

甜高梁离体再生体系的建立和组织结构变化的观察

以甜高粱成熟种子为外植体,调节不同生长调节物质配比建立甜高梁离体再生体系。结果表明在MS＋2．5mg．L^-12,4．D＋0．3mg·L^-1KT培养基上愈伤组织的诱导率可达77．26％;比较不同浓度6-BA或TDZ与NAA配合诱导愈伤组织分化和苗形成的情况,TDZ的作用优于6-BA。观察培养组织的结构变化发现,甜高粱离体再生过程中除了体细胞胚发生途径之外,还伴随有器官发生途径。     

柚木无性系愈伤组织诱导及植株再生

以柚木优良无性系71-14组培苗节间茎段为材料,MS 为基本培养基,采用正交设计对6-BA、IBA、TDZ、NAA 等4个生长调节剂各4水平进行愈伤组织诱导,并以最佳组合使用不同浓度的 TDZ 进行柚木愈伤组织再生.结果表明：TDZ 对形成具再生能力的致密型愈伤组织影响最大,低浓度水平的 TDZ 和6-BA 更易形成致密型愈伤组织;以愈伤组织大小、诱导率和致密型所占比例采用隶属函数法评定得出最优的愈伤组织诱导培养基为 MS＋0．9 mg·L-16-BA＋0．04 mg·L-1 IBA＋0．02 mg·L-1 TDZ＋0．8 mg·L-1 NAA,愈伤组织诱导率达80．78％、平均直径1．65 cm,获致密型愈伤组织83．0％;得出优化的再生培养基为 MS＋0．132 mg·L-1 TDZ,分化率为34．22％;初步建立了以茎段为外植体的柚木优良无性系71-14的再生体系,为柚木转基因技术的研究提供技术支撑.     

紫茉莉不定芽诱导和植株再生

紫茉莉(Mirabilis jalapa)观赏价值较高,是一种重要的污染修复植物.组织培养技术为植物品种改良和选育的重要途径,但紫茉莉离体快繁方面的研究尚未见有相关报道.该研究以紫茉莉叶片和茎段为外植体,通过观察和统计外植体愈伤组织和不定芽的诱导情况,分析不同植物生长物质对紫茉莉植株再生的影响.结果表明:紫茉莉带芽茎段比较适合丛生芽的诱导,当带芽茎段在MS+1.0 mg·L-16-BA+1.5 mg·L-1 KT+1.0 mg·L-1 NAA+0.05 mg·L-1 TDZ培养基中培养时,不定芽的增殖系数较高.无论是MS或1/2MS培养基,都可诱导不定根的产生,其中生根效果较好的培养基为1/2 MS+0.5 mg·L-1 NAA.该研究结果探索了紫茉莉组织培养的最适条件,根据愈伤组织诱导率和不定芽的增殖系数筛选出了适宜不定芽诱导的培养基类型,根据不定芽生根情况确定了最佳的生根诱导培养基,为建立紫茉莉高效稳定的再生和遗传转化体系奠定了基础.     

药用植物栀子的组织培养

栀子(Gardenia jasminoides)为药用木本植物。以栀子果皮、种子团和种子为外植体,研究不同激素配比及不同培养方式对愈伤组织诱导和芽分化的影响。研究结果表明,培养基成分为MS+0.5 mg·L–12,4-D+0.25 mg·L–16-BA较适宜果皮和种子愈伤组织的诱导,诱导率分别为83.3%和88.5%;培养基成分为MS+1.0 mg·L–12,4-D+1.0 mg·L–16-BA较适宜种子团愈伤组织的诱导,诱导率为78.1%。3种外植体诱导的愈伤组织中,只有种子愈伤组织能通过液体培养分化出芽;TDZ对芽分化有明显的促进作用;最佳的芽分化培养基为MS+0.05 mg·L–1NAA+0.10 mg·L–1TDZ,其愈伤组织分化率为8.75%。该研究以栀子种子为外植体,并获得了再生植株,为药用植物栀子转基因体系的建立奠定了基础。     

盐生植物海马齿离体再生

建立盐生植物海马齿（Sesuvium portulacastrum）的离体再生体系,为其生物技术改良奠定基础。以海马齿叶片、茎和腋芽为外植体, 在不同激素配比的培养基上进行愈伤组织诱导、继代培养以及不定芽的分化和生根培养。结果表明： 最适愈伤组织诱导的外植体为叶片, 其次为幼嫩的茎段和腋芽。以叶片为外植体, 愈伤组织诱导率最高的培养基为MS＋2.0mg·L^–12, 4-D ＋ 0.5 mg·L^–16-BA ＋ 3%sucrose; 芽分化最适培养基为MS ＋ 1.0 mg·L^–1 2, 4-D ＋ 0.2 mg·L^–1 6-BA ＋ 3% sucrose;生根最适培养基为MS ＋ 3%sucrose ＋ 0.1%AC。炼苗移栽后, 成活率可达80%。     

青海野生黑果枸杞再生体系的建立及遗传稳定性分析

以野生黑果枸杞(Lycium ruthenicum Murr.)的无菌苗叶片作为外植体,建立了两条再生体系:一条是经愈伤组织再分化的间接再生体系,一条是不经愈伤组织再分化的直接再生体系。并采用流式细胞术(FCM)及ISSR分子标记技术对两种途径再生苗进行了遗传稳定性分析。结果表明:(1)最佳愈伤组织诱导培养基为MS+1.5 mg·L-12,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D),诱导率达100%;最佳分化培养基为MS+1.5 mg·L-16-苄氨基腺嘌呤(6-BA)+0.1 mg·L-1吲哚-3-丁酸(IBA),1 g愈伤组织上的平均不定芽数为39.4个。(2)叶片直接诱导不定芽的最佳培养基为MS+0.5 mg·L-16-BA+0.3 mg·L-1α-萘乙酸(NAA),不定芽诱导率为92.9%,每个外植体上平均不定芽数为18.1个。(3)两条途径再生的不定芽在不含植物生长调节剂的MS培养基上,2周内均可正常生根。(4)FCM结果显示亲本苗及2种再生苗均为二倍体。(5)ISSR分析表明,间接再生苗的平均遗传相似性系数为0.84,直接再生苗的平均遗传相似性系数为0.91,直接再生体系是一种更加快速高效的繁殖方法。     

黑莓品种‘Arapaho’离体叶片不定芽诱导影响因素分析及再生体系建立

以黑莓(Rubus spp.)品种‘Arapaho’无菌苗叶片为外植体,通过正交和单因素实验分别研究了基本培养基类型、6-BA和1BA质量浓度以及暗培养时间、外植体的叶位和接种方式对不定芽诱导的影响,并研究了IBA质量浓度对不定芽生根的影响;在此基础上,初步建立了黑莓品种‘Arapaho’离体叶片的再生体系.正交实验结果表明:基本培养基类型对叶片不定芽诱导率及平均不定芽数的影响最大,而IBA质量浓度对叶片不定芽诱导率及6-BA质量浓度对平均不定芽数的影响较小;适宜‘Arapaho’叶片不定芽诱导的最佳培养基为含有2.0mg·L-16-BA和1.0 mg·L-1IBA的MS培养基.单因素实验结果表明:暗培养时间、外植体的叶位及接种方式对不定芽诱导率有显著影响;最适宜的暗培养时间为21 d;植株中、上部叶片的再生能力较强,其中第3和第4位叶的不定芽诱导效果最佳;叶面朝上接种更有利于不定芽的诱导.在含0.2 mg·L-1 IBA的MS培养基中,不定芽生根率达100.0％,且根数多、长势良好.黑莓品种‘Arapaho’离体叶片的再生体系为:以无菌苗的第3和第4位叶为外植体,经过适当修剪后叶面朝上接种于含有2.0 mg·L-16-BA和1.0 mg·L-1IBA的MS培养基上,暗培养21 d后置于光照条件下培养30 d;将不定芽转接到含有0.5 mg·L-16-BA和0.3mg·L-1 NAA的MS培养基上进行继代培养;当不定芽高约2 cm时转接到含有0.2 mg·L-1IBA的MS培养基上进行生根培养,最终获得完整植株.     

大花卷丹的组织培养及限制生长保存

离体保存是植物种质保存的重要手段之一,为实现对大花卷丹的保护性利用,本文对其组织培养体系及限制生长离体保存技术进行了研究。结果表明,在常温（23±2）℃、光照强度约为40μmol.m-2.s-1、光照时间14h.d-1的条件下,大花卷丹鳞片在MS＋6-BA1.0mg.L-1＋NAA0.2mg.L-1培养基中生长情况较好,能直接诱导芽,且小鳞茎的生长速度较快。将诱导出的小鳞茎切割后,接种到1/2MS＋NAA0.5mg.L-1＋活性炭2g.L-1生根培养基2～3周即能生根,生长状况良好。提高MS培养基中蔗糖达90和110g.L-1时可以抑制其生长,能够保存大花卷丹试管苗10个月,保存过程中生长正常,株高生长缓慢,但根长势较快。在蔗糖浓度90g.L-1基础上再添加30g.L-1甘露醇的培养基能进一步抑制试管苗根的生长。6个月后,转移到正常培养基上培养均能恢复生长,其鳞片在诱导培养基上能正常分化。因此,采用大花卷丹鳞片组织培养可以形成种苗,在培养基中添加高蔗糖浓度和甘露醇可以使其试管苗保存1年以上。     

枇杷属野生植物种胚离体培养和植株再生研究

以枇杷属Eriobotrya植物11个野生种、1个远缘杂交后代材料为试材,采用胚为外植体,在不同植物生长调节剂配比培养条件下,进行胚离体培养和植株再生研究。结果表明,胚培养的最佳培养基配方为MS + 6-BA 1.0 mg·L-1 + KT 1.0 mg·L-1 + NAA 0.1 mg·L-1。在此培养基中,所有试验材料均获得成功,其中栎叶枇杷E. prinoides的萌发率和丛芽率均达100%,有效地建立了枇杷属野生种的胚离体培养及其植株再生体系。     

盾叶薯蓣试管株芽的诱导

以盾叶薯蓣(Dioscoreazingiberensis)试管植株为材料,选取带芽茎段为外植体,转接到株芽诱导培养基上15d后,原茎段基部开始产生株芽突起,30d后每一茎段可产生3-5个已生根的株芽,株芽诱导率为100%,株芽诱导数为180个/40株,其移栽成活率可达90%以上。株芽形成的适宜培养条件:温度为26±2℃,光照时间14hd-1,光照强度为1500-2000lx;适宜培养基组成为:MS+6-BA4.0mgL-1+IBA1.0mgL-1+蔗糖6%-9%+活性炭0.5%+琼脂7%。离体诱导的盾叶薯蓣试管株芽能直接发育为新植株,为盾叶薯蓣的快繁提供了一种新的方法。     

米老排的组织培养和快速繁殖

以米老排人工林成年优树当年生枝条茎段为外植体,建立了“以芽繁芽”的组织培养快速繁殖体系。丛芽诱导培养最快的无性系,经过3个月的培养,一个外植体可获得17．2个芽。在添加6-BA1．0mg·L-1的Ms培养基上增殖率最高,月增殖率为2．43。促进苗高生长的最有效培养基是Ms＋6-BA0．4mg·L-1＋GA30．4mg·L-1。生根培养基为1／2MS＋IBA0．4nag·L-1＋O．1g．L-1活性炭,生根率达81．8％以上,每株苗生根7．8条,平均苗高为1．2cm。经生根培养20d和目光温室炼苗15d后,试管苗移植入黄泥和泥炭土（4：1,刃功混合基质中,成活率达85％以上。     

桂林小花苣苔离体快速繁殖技术

对抗结核植物桂林小花苣苔（Chiritopsis repanda var.guilinensis）进行离体培养与快速繁殖技术研究。结果表明：桂林小花苣苔叶片外植体的最适初代诱导培养基为MS＋0.5mg·L^-16-BA＋0.05mg·L^-1IBA,pH8.0;最适继代增殖培养基为MS＋0.1mg·L^-16-BA＋0.05mg·L^-1IBA,pH6.0,繁殖系数7.0/35天;最适生根培养基为1/2MS＋0.2mg·L^-1NAA,pH6.0,生根率为93.6%。模拟桂林小花苣苔自然生境,在春季对生根试管苗进行大棚移栽,成活率达90%。根据上述快繁技术,理论上每株试管苗每年可繁殖桂林小花苣苔种苗46万株。     

梭梭(Haloxylon ammodendron)组织培养和快繁技术

为了优化梭梭分化苗生根的培养基配方和培养条件,以剪去幼根的梭梭无菌苗茎、叶部分作为外植体,通过芽生芽途径获得了梭梭再生苗,重点对生根培养基和培养条件进行了系统的研究,根据试验结果得出结论:梭梭腋芽诱导培养基为MS+6-BA 2 mg.L-1,壮苗培养基为MS+6-BA 1.5 mg.L-1+GA3 1.0 mg.L-1,生根培养基为1/4MS+5%蔗糖+IBA0.2 mg.L-1+NAA 0.8 mg.L-1,生根率为74%。     

‘香槟’月季的组织培养和试管开花诱导

本文对‘香槟’月季（80sachinensis‘Xiangbin’）的组织培养技术和诱导试管开花进行了研究。结果表明：以茎段为外植体能诱导获得无菌苗,适宜的启动培养基为MS＋6-BA1．0mg-L-1＋IBA0．1mg·L-1,幼芽继代增殖的最佳培养基是MS＋6．BA1．0mg·L-1。＋IBA0．1～0．2mg·L-1,诱导生根的适宜培养基为1／2MS＋NAA0．3mg·L-1,生根率达80．0％。诱导试管开花的适宜培养基为MS＋6．BA0．5mg·L-1＋NAA0．1mg·L-1最适宜的诱导试管开花的蔗糖含量是30g·L-1;在三角瓶中培养,试管花可以正常开放,在培养瓶中培养花芽不能正常开放;MS培养基中增加2倍磷的含量,可以提高花芽诱导率,为25．O％;诱导试管开花的最适培养条件为温度21℃,光照强度80～100μmol·m-2．s-1,光照时间16h—d-1。     

菊芋试管苗的初代培养及愈伤组织不定芽诱导

菊芋（Helianthus tuberosus Linn.）为菊科（Asteraceae）向日葵属（Helianthus Linn.）多年生草本植物,耐寒、耐旱、耐贫瘠、耐盐碱[1];其地下块茎富含菊糖,还可通过发酵生产乙醇,在功能性食用多糖及生物能源方面的开发潜力巨大。菊芋主要通过块茎进行无性繁殖,其种子成活率和发芽率均很低[2],严重阻碍了菊芋的杂交育种。近年来以植物组织培养为基础的一系列现代育种技术为菊芋的种质改良提供了新途径,但由于菊芋的愈伤组织难以诱导不定芽或体胚发生,导致以农杆菌转化为主的转基因育种技术的应用受到限制。     

阳桃胚乳愈伤组织诱导和不定芽发生的研究

首次成功建立阳桃胚乳组织培养并获得胚乳再生植株。胚乳愈伤组织诱导以培养基MS 2,4-D2．0mgL^-1 BA0．2mgL^-1的效果最好,诱导频率可达94．7％,愈伤组织乳白色,结构致密,生长旺盛;将其接种在培养基MS ZT3．0mgL^-1 NAA0．2mgL^-1上,愈伤组织由乳白色致密型转变为淡绿色致密型,进而形成绿色芽点,分化出不定芽,分化频率可达73．3％;胚乳植株在培养基MS ZT2．0-2．5mgL^-1 NAA0．05mgL^-1上进行壮苗和营养繁殖。