黄芪叶中黄芪甲苷的含量测定

目的 :测定黄芪叶中黄芪甲苷的含量 ,寻找提取黄芪甲苷的新药源。方法 :本实验以黄芪甲苷为标准品 ,采用薄层色谱—分光光度法测定黄芪叶中黄芪甲苷的含量。结果 :叶中的黄芪甲苷含量是根中的 2 .8倍。结论 :黄芪叶有潜在的开发价值     

柱前衍生化HPLC法测定黄芪中黄芪甲苷的含量

目的：建立黄芪中黄芪甲苷的柱前衍化高效液相色谱测定法,并用该法对不同产地黄芪中黄芪甲苷的含量进行比较,方法：以吡啶－苯甲酰氯（２．５：１）为衍生化试剂,对黄芪甲苷分子中的羟基进行苯甲酰化,以甲醇－四氢呋喃－水（９０：４：６,０．２％三乙胺）为流动相,ＶＤ３为内标物,在２３０ｎｍ波长处检测。结果黄芪甲苷在０．００４－０．０８０ｍｇ．ｍＬ＾－１范围内呈线性,相关系数为０．９９９９,平均回收率为９４．７     

黄芪桂枝五物颗粒中芍药苷的含量测定

目的:建立一个稳定可靠分离度好的方法测定黄芪桂枝五物颗粒中芍药苷的含量。方法:采用高效液相色谱法,色谱柱:YMC-Pack ODS-A(250×4.6mm,5μ);流动相:以乙腈—0.1%磷酸溶液(14:86)为流动相;检测波长:230nm;流速为1.0ml/min;柱温为30℃。结果:芍药苷的进样量在0.120μg~1.200μg范围内有良好的线性关系,平均回收率为99.22%,RSD为0.89%。建立了高效液相色谱法测定黄芪桂枝五物颗粒的含量的方法,该方法准确、可靠、分离度好。     

黄芪甲苷促进心肌干细胞分化的作用研究

目的 探讨黄芪甲苷对心肌干细胞分化的促进作用。方法 采用磁珠分选法,分离小鼠Sca-1＋心肌干细胞,通过免疫组化方法观察黄芪甲甙处理后心肌细胞表面标志蛋白desmin、α-sarcomeric？actin和C-TnT表达的变化,以判断是否对心肌干细胞分化有促进作用。结果 250 mg/L的黄芪甲甙诱导4周后免疫组化染色显示心肌干细胞明显表达desmin、α-sarcomeric actin和C-TnT。而未诱导的细胞desmin、α-sarcomeric actin、C-TnT 均为阴性。因此黄芪甲甙可以促进小鼠Sca-1＋心肌干细胞分化为心肌样细胞,这些细胞表达心肌特异性的蛋白。结论 黄芪甲苷对心肌干细胞分化的促进作用表明其在心肌损伤性疾病的康复中有潜在的治疗价值,值得进一步研究。     

HPLC法测定感冒退热颗粒中连翘苷的含量

采用DiamonsiltmC18(4 6mm× 2 5 0mm ,5 μm)色谱柱 ;以乙腈 水 (2 0∶80 )为流动相 ,流速为 1mL/min ,柱温为 30℃ ,检测波长为 2 77nm ,以外标法用HPLC测定了感冒退热颗粒中连翘苷的含量。连翘苷在0 10 2 9～ 1 6 4 6 4 μg范围内呈线性关系 ,其在制剂中的平均回收率 (n =6 )为 99 5 5 %。     

高效液相色谱法测定藿苏养胃口服液中黄芪甲苷的含量

目的：建立藿苏养胃口服液中黄芪甲苷前处理及含量的HPLC 测定方法。方法：前处理方法如下：100 mL样品中加入67 mL 浓氨水,振荡后静置5 min,转移至D101大孔树脂柱上,上样完毕后,依次以100 mL 氨试液、100 mL 水和100 mL 40%乙醇洗脱, 弃去洗脱液,然后以100 mL 70%乙醇洗脱,收集洗脱液,蒸干,用甲醇溶解并转移至5 mL 容量瓶中,以甲醇溶解;测定方法如下： 采用Agilent ZORBAX Eclipse XDB C18（4.6× 150 mm,5.0 滋m）色谱柱,以乙腈- 水（33:67）为流动相,流速1.0 mL·min-1,柱温35 ℃;ELSD 检测器的参数为：氮气流速1.60 SLM、雾化器温度30 ℃、蒸发器温度80 ℃。结果：黄芪甲苷线性范围为0.262~15.696 滋g（r = 0.9992）,平均加样回收率为99.46%（n=6）,RSD为2.3%。结论：所建立的前处理方法简便易行,准确度高,重复性好;检测 方法可作为藿苏养胃口服液的质量控制方法。     

消栓通胶囊抗脑缺血作用的实验研究

目的:观察消栓通胶囊对双侧颈总动脉结扎的大鼠脑缺血的保护作用;对小鼠断头后存活时间的影响.方法:采用结扎大鼠双侧颈总动脉以造成脑缺血模型,观察消栓通胶囊的药理作用.结果:①a.消栓通胶囊对双侧颈总动脉结扎大鼠脑含水量及脑指数有显著影响,消栓通胶囊三个剂量组(0.20 g/kg、0.40 g/kg、0.80 g/kg),脑含水量明显减少,与模型组有显著差异(P＜0.05或P＜0.01).b.组织病理学检查表明消栓通胶囊组的脑组织神经细胞浓缩及深染较脑缺血模型组明显减轻;神经胶质细胞肿胀及间质疏松程度均明显轻于模型组.②消栓通胶囊三个剂量组(0.20 g/kg、0.40 g/kg、0.80 g/kg)均能明显降低全血粘度值,与模型组比较有明显差异(P＜0.05或P＜0.01);③消栓通胶囊三个剂量组(025g/kg、0.50g/kg、1.00 g/kg)给药14d,与正常组比较可延长小鼠断头喘气的时间(P＜0.05或P＜0.01).结论:消栓通胶囊对大鼠结扎双侧颈总动脉所致脑缺血损伤具有明显的保护作用.     

HPLC-ELSD法测定发酵液中L-精氨酸含量

建立了一种快速、准确的高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD)测定发酵液中L-精氨酸含量。采用Prevail C18色谱柱(C18 5μm,250×4.6 mm,Alltech),以5 mmol.L-1七氟丁酸(三氟乙酸调pH至1.0)和乙腈为流动相,采用梯度洗脱,总流速为1.0 mL/min。ELSD参数:漂移管温度为117.0℃,载气流速为3.2 L/min。L-精氨酸等氨基酸的回收率为96%~104%。能够快速、精确测定发酵样品中目的产物L-精氨酸与其它氨基酸含量。     

高效液相色谱法测定黄芪注射液中黄芪甲甙的含量

本文报道用高效液相色谱法测定黄芪注射液中黄芪甲甙的含量。色谱柱为:NOVA-PAK C_(18)4μm(4.6mm×250mm);流动相:乙腈-0.1％磷酸(33:67),205nm检测,外标定量。结果表明,建立的方法完全适用于黄芪注射液中黄芪甲甙的含量测定。其方法快速、灵敏、重现性好。     

干旱胁迫对蒙古黄芪生长和生理生化指标及其黄芪甲苷积累的影响

以二年生蒙古黄芪实生苗为试验材料,采用盆栽模拟自然界干旱的方法,连续控水14d,分析持续性干旱胁迫对蒙古黄芪实生苗生长、生理生化指标及其黄芪甲苷的影响。结果显示:(1)随着土壤相对含水量的降低,黄芪叶片相对含水量逐渐降低,而其中丙二醛含量升高,其根茎干重也降低。(2)随着胁迫时间的延长,黄芪根叶中抗氧化酶类SOD、POD、CAT、APX和GR活性呈先增加后降低的趋势,根中最高值较对照分别增加了72.1%、108.6%、178.0%、299.4%和303.4%,且根叶中渗透调节物质脯氨酸和可溶性糖含量也逐渐升高。(3)黄芪甲苷积累量在干旱胁迫第12天达到最大,比对照增加了53.0%,随后降低。研究表明,随着干旱胁迫程度的加深,黄芪苗生长受到一定程度抑制,但能通过调节自身保护酶活性和渗透调节物质含量来减轻干旱的损伤,最大程度地维持植株的正常代谢;适度水分胁迫有利于黄芪甲苷的积累,而重度胁迫不利于其积累。     

HPLC法测定前列舒乐颗粒中淫羊藿苷的含量

目的:建立前列舒乐颗粒中淫羊藿苷的HPLC测定方法。方法:以C18(4.6 mm×15 mm,5μm)为色谱柱,以乙腈-水(30∶70)为流动相,流速1 mL/min,测定波长270 nm。结果:线性范围在0.40～4.00μg(r=0.9999),平均回收率为99.79%,RSD=2.5%(n=6)。结论:本方法简便可行,重现性好,结果可靠,可以用来测定淫羊藿苷的含量,控制前列舒乐颗粒的质量。     

蛭龙活血通瘀胶囊的质量标准研究

目的:建立蛭龙活血通瘀胶囊的质量标准.方法:采用薄层色谱法对蛭龙活血通瘀胶囊中黄芪进行定性鉴别;采用HPLC-ELSD法对君药黄芪中的黄芪甲苷进行含量测定.结果:蛭龙活血通瘀胶囊中的黄芪薄层色谱中,在与对照品相应的位置上,显相同颜色的斑点;黄芪甲苷在0.0236mg/ml～0.236mg/ml间呈良好的线性关系,r2=0.9998,样品平均回收率为99.02%(n=6),RSD为1.02%.结论:所建立的鉴别法专属性强,定量方法操作简单,精密度、重现性好,可以作为控制活血蛭龙通瘀胶囊的有效方法.     

黄芪甲苷对辐射诱发肾损伤的干预作用及其机制

目的:探讨黄芪甲苷(AS-IV)对辐射诱导的小鼠肾脏损伤的防护作用及其硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)通路机制.方法:将小鼠分为正常对照组(Control)、二甲基亚砜(DMSO)溶剂组、辐射组(IR)、20 mg/kg AS-IV预防组(IR+AS-20 mg/kg)和40 mg...     

黄芪甲苷对高剂量S-氯胺酮诱导PC12细胞损伤的保护作用

以高剂量S-氯胺酮(S-ketamine, SK)诱导PC12细胞构建体外神经损伤模型,探究黄芪甲苷(astragaloside IV,ASⅣ)对高剂量SK诱导PC12细胞损伤的保护作用及其机制。采用CCK-8法测定细胞活力,并以此确定SK的最佳造模浓度和ASⅣ的最佳治疗浓度;流式细胞术测定细胞凋亡率;DCFH-DA荧光探针法检测细胞内活性氧(ROS)的含量;qPCR法检测目的基因的表达;Western blot技术检测目的蛋白的表达。结果显示,SK的最佳造模浓度为450μg/mL,ASⅣ的最佳治疗浓度为25μmol/L;与对照组相比,SK组细胞凋亡率、ROS含量、Caspase-9和Cytochrome C mRNA表达水平均显著升高(P<0.05),Bax、Pro-Caspase-9、Cleaved-Caspase-9和Cytochrome C蛋白表达量同样显著上升(P<0.05),而Bcl-2/Bax mRNA表达水平比值、Bcl-2蛋白表达量显著下降(P<0.05);ASⅣ治疗后,明显逆转了高剂量SK诱导引起的各项指标变化(P<0.05)。这说明黄芪甲苷...     

HPLC法测定慢严舒柠颗粒中黄芩苷的含量

采用高效液相色谱法测定慢严舒柠颗粒中黄芩苷的含量。色谱柱为ODS(C18),流动相为V(甲醇):V(水):V(磷酸)=47.0:53.0:0.2,流速为1 mL/min,检测波长为280 nm,柱温为室温。结果表明,黄芩苷进样量在0.084-0.840μg范围内线性关系良好(r=0.999 9),平均加样回收率为98.58%(相对标准偏差RSD=1.49%,n=5)。该方法简便、快捷、准确、重现性好,可用于慢严舒柠颗粒中黄芩苷的含量测定。     

黄芪甲苷Ⅳ通过影响β-actin对内皮型一氧化氮合酶的调节作用

目的：研究黄芪甲苷Ⅳ（AS-Ⅳ）对体外培养脐静脉内皮细胞中内皮型一氧化氮合酶（eNOS）的调节作用及可能的机制。方法：培养人脐静脉内皮细胞系EA-Hy926,用AS-Ⅳ进行干预,同时给予或不给予骨架蛋白β—actin聚合稳定剂phalloidin,用免疫共沉淀方法检测eNOS与单体8-actin结合状态的变化,用L-3H．精氨酸转化为L-SH-瓜氨酸的同位素法测定eNOS活性,I^125环-磷酸鸟苷（cGMP）放射免疫法检测细胞内cGMP水平,Westernblotting方法检测细胞中eNOS和蛋白激酶B（Akt）磷酸化水平,总蛋白水平。结果：（1）AS-IV作用10min后,细胞内单体β—actin与eNOS的结合明显增加（P〈0．05或P〈0．01）,预先给予phalloidin显著抑制了AS．IV引起的两者结合的增加（P〈0．01）。②AS—IV明显增加了eNOS活性（P〈0．05）、cGMP含量（P〈0．01）、eNOSSer-1177磷酸化水平（P〈0．01）、AktSer-473磷酸化水平（P〈0．001）,预先给予phalloidin明显降低了AS—IV引起的eNOS活性（P〈0．05）、cGMP含量（P〈0．01）和磷酸化水平的增加（P〈0．01）,但对Akt的磷酸化没有影响。结论：单体β—actin与eNOS的结合在AS-IV激活eNOS的过程中起着不可或缺作用,其主要是通过促进Akt对eNOSSer—1177的磷酸化来实现的。     

黄芪甲苷对人骨髓间充质干细胞体外增殖及细胞因子表达的影响

目的：探讨黄芪甲苷对人骨髓间充质干细胞体外增殖及细胞因子表达的影响。方法：采用Percoll密度离心法和贴壁法分离纯化hBMSC;流式细胞术检测hBMSC表面标志;MTT法检测不同浓度黄芪甲苷干预72h后hBMSC的增殖情况;Real-timePCR法检测经黄芪甲苷干预后hBMSC对SCF、VEGF、SDF-1、GM-CSFmRNA的表达水平。结果：成功分离培养出laBMSC;不同浓度（20、40、80、160、320mg／mL）的黄芪甲苷可促进hBMSC增殖（P〈0．05）,其中160mg／mL组促增殖最明显;黄芪甲苷可促进hBMSC对SCF、VEGF、SDF-1mRNA的表达,而GM—CSFmRNA表达无明显变化。结论：黄芪甲苷可促进hBMSC体外增殖,可能与其促进hBMSC对SCF、VEGF、SDF-1mRNA表达有关。     

黄芪甲苷及其生物学活性

黄芪甲苷为中药黄芪中提取皂苷的主要成分.数十年来,已对它的药代动力学、药理作用和机制进行了广泛研究,取得了很大进展.目前已知它具有与血浆蛋白结合率高,肝肺中分布较高,脑中含量较低等特点,并且具有正性肌力,舒张血管,保护血管内皮细胞,抗炎,抗病毒等多方面作用,这些作用是通过阻止钙离子的释放、转运和积聚,依赖内皮的NO-CGMP途径,清除氧自由基等途径来实现的,已有效应用于心、脑、血管疾病和其他疾病的治疗.它的作用与机制仍有待于进一步的研究.     

黄芪甲苷对人骨髓间充质干细胞体外增殖 及细胞因子表达的影响*

摘要目的：探讨黄芪甲苷对人骨髓间充质干细胞体外增殖及细胞因子表达的影响。方法：采用Percoll 密度离心法和贴壁法分离 纯化hBMSC;流式细胞术检测hBMSC 表面标志;MTT 法检测不同浓度黄芪甲苷干预72 h后hBMSC 的增殖情况;Real-time PCR 法检测经黄芪甲苷干预后hBMSC对SCF、VEGF、SDF-1、GM-CSF mRNA 的表达水平。结果：成功分离培养出hBMSC;不同 浓度（20、40、80、160、320 mg / mL）的黄芪甲苷可促进hBMSC增殖(P<0.05),其中160 mg/mL 组促增殖最明显;黄芪甲苷可促进 hBMSC对SCF、VEGF、SDF-1 mRNA的表达,而GM-CSF mRNA 表达无明显变化。结论：黄芪甲苷可促进hBMSC 体外增殖,可 能与其促进hBMSC 对SCF、VEGF、SDF-1 mRNA表达有关。     

黄芪甲苷后处理对乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的作用研究

目的:观察黄芪甲苷(AstragalosideⅣ,AsⅣ)后处理对缺氧复氧损伤(simulated ischemia reperfusion injury,SI/RI)的SD乳鼠心肌细胞是否具有保护作用。方法:将乳鼠原代心肌细胞平均分为五组,即空白对照组(Control)、缺氧复氧处理组(SI/RI)、黄芪甲苷预处理(5,10、20μM)+SI/RI组(AsIV+SI/RI)。各组细胞经处理后,四氮唑溴盐比色法(MTT)检测各组细胞存活率;TUNEL染色法测定各组细胞凋亡率;SOD测试盒检测培养液中超氧化物歧化酶(SOD)含量,总嘌呤氧化酶(XOD)测试盒检测丙二醛(MDA)含量。Western blot法检测各组细胞抗凋亡蛋白Bcl-2和促凋亡蛋白Caspase-3的表达。结果:与空白组相比,缺氧复氧损伤组细胞活力显著下降(P0.05),凋亡率显著上升(P0.05),其培养液中SOD水平显著降低(P0.05),MDA水平显著升高。而不同浓度AsⅣ后处理组的心肌细胞存活率显著上升,凋亡率显著下降,培养液中SOD水平显著上升,MDA水平显著下降(P0.05),且呈浓度呈依赖性。Western blot结果显示AsⅣ后处理组细胞中的Bcl-2表达明显上升,Caspase-3明显下降。结论:黄芪甲苷后处理对缺氧复氧诱导的乳鼠心肌细胞损伤具有显著的保护作用,能够显著上调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,下调促凋亡蛋白Caspase-3的表达。