伤寒沙门菌与甲、乙、丙副伤寒沙门菌质控血清的制备

应用免疫学原理,将伤寒沙门菌O901、H901和甲、乙、丙型副伤寒沙门菌分别制成全菌体抗原,免疫实验兔获取免疫血清。依据伤寒沙门菌和副伤寒沙门菌的抗原成分的异同性,选择适当的吸收菌除去免疫血清中的交叉反应抗体和类属凝集素,而保留其特异性的抗体。通过对诊断菌液的验证试验,证实吸收充分的免疫血清具有质控血清的特性。具备可靠性能的质控血清,适用于伤寒沙门菌与副伤寒沙门菌的菌种检定及其效价检测;亦有利于肥达氏诊断菌液的质量控制。     

FUS-100尿沉渣分析仪在住院患者尿路感染筛检中的应用

目的 探讨FUS-100全自动尿沉渣分析仪(简称FUS-100)中的细菌和酵母定量计数在筛查住院患者尿路感染时的价值.方法 用定量细菌培养法和FUS-100检测505例疑似泌尿系统感染患者清洁中段尿标本.结果 505份尿标本培养阳性192份,阳性率为38.0％,其中36份标本有两种细菌生长,共分离出228株菌,革兰阳性球菌30株(13.2％),革兰阴性杆菌108株(47.4％),真菌90株(39.4％).以尿细菌计数≥23.72/μL、酵母计数≥0.65/μL为感染阳性标准,与中段尿培养相比较,FUS-100细菌定量计数的敏感性为85.5％,特异性为89.5％,阳性似然比为8.14,阴性似然比为0.16;酵母定量计数的敏感性为80.4％,特异性为97.2％,阳性似然比为28.71,阴性似然比为0.20.结论 FUS-100定量计数尿细菌和酵母可用于住院患者尿路感染的快速筛查.     

2005～2006年湖南省人感染高致病性禽流感(H5N1)实验室诊断及病毒基因特性研究

为了对2005~2006年湖南省2例不明原因肺炎病例进行实验室诊断,确定病因以及对其进行病原学研究,采集病例呼吸道标本和血清标本,对呼吸道标本采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(Real-time RT-PCR)和逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测H5亚型禽流感病毒核酸,对血清标本采用血凝抑制试验检测特异性抗体,并对其中1例死亡病例(病例2)的肺穿刺物标本进行病毒分离,所获毒株予以测序及同源性分析。结果显示,2例病例H5亚型禽流感病毒核酸检测均为阳性,病例1恢复期血清H5N1特异性抗体阳性,并且较急性期血清呈4倍以上增长;病例2急性期血清特异性抗体阴性,2例均为人感染高致病性禽流感病毒(H5N1)确诊病例。从病例2分离得到毒株A/Hunan/1/2006,测序及分子特性分析表明,其8个基因片段均为禽源,且与湖南本地禽类分离的病毒相似,并未与人流感病毒发生基因重组或产生显著变异。     

H7N9亚型禽流感假病毒的制备与验证

根据A/Anhui/1/2013(H7N9)病毒株HA和NA基因序列研究H7N9禽流感病毒的结构并制备相应的假病毒，并对此假病毒进行初步验证。将H7N9病毒株的HA和NA基因序列经公司优化合成后，经过接菌、提取质粒、假病毒构建等步骤来制备假病毒，并通过假病毒感染实验、透射电镜以及血清中和实验来验证假病毒制备是否成功。成功制备滴度均超过标准值104的A/Anhui/1/2013(H7N9)假病毒，在电镜下可观察到典型的流感病毒形态，并进一步使用本科室保存的29份血清样本（含4份H7N9阳性血清样本）、国家流感中心制备的四种不同亚型免疫组分（H1型、H3型、BV型和BY型）的抗血清以及商品化H7N9特异性抗体进行中和试验，结果显示4份阳性血清中和活性明显高于25份阴性血清，四种不同亚型抗血清的中和效率均低于40%，且商品化H7N9特异性抗体能够与其有效结合。本研究成功构建了H7N9假病毒并有效筛选出阳性血清，且具有良好的特异性，为流感大流行或疫苗免疫后人群血清学监测建立了科学有效的技术手段。     

肿瘤患者血清中SARS-CoV抗体阳性原因分析

探讨SARS冠状病毒(SARS—CoV)抗体在SARS病原学诊断中的特异性及其在肿瘤患血清中的假阳性问题。应用ELISA和荧光定量RT-PCR技术检测了111例正常对照和40例肿瘤患血清中SARS—CoV抗体的阳性率。在111例正常对照中,IgM抗体均阴性,IgG抗体的阳性率为3．6％(4／111);IgG抗体诊断SARS的特异性为96．4％,两种抗体同时阳性诊断SARS的特异性为100％。40例肿瘤患中,IgM抗体均阴性,IgG抗体阳性率17．5％(7／40)。经RT—PCR检测,上述肿瘤患阳性病例均为阴性。结果表明,同时测定SARS—CoV的两种抗体可降低诊断的假阳性率,提高诊断的特异性。用非纯化SARS—CoV抗原制备的ELISA试剂盒测定肿瘤患的SARS—CoV抗体,可能出现假阳性。在肿瘤患中出现假阳性的原因可能与包被的抗原有关。     

6种沙门菌单克隆抗体的制备和效能评价

目的：制备稳定、特异、高亲和性的分别针对甲型副伤寒沙门菌、乙型副伤寒沙门菌、丙型副伤寒沙门菌、肠炎沙门菌、伤寒沙门菌和猪霍乱沙门菌的单克隆抗体。方法：用甲醛灭活的菌液抗原免疫BALB／c小鼠,取脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞融合;用灭活的菌液包被酶标板,ELISA筛选阳性克隆株,建立细胞系;选取高效分泌杂交瘤细胞,常规制备腹水并纯化,进行单抗特异性与亲和性评价。结果：筛选得到分泌6种沙门菌相应单克隆抗体的杂交瘤细胞株,获得高亲和性单抗;所有单抗与大部分病原菌（包括7种沙门菌、3株志贺菌、2株李斯特菌、4株致病性大肠杆菌、2株霍乱弧菌）无交叉反应,但由于同类型O抗原的广泛分布,抗乙型副伤寒沙门菌单抗与鼠伤寒沙门菌、抗伤寒沙门菌单抗与肠炎沙门菌有明显的交叉反应。结论：沙门菌单抗的制备,为感染性腹泻的监测、诊断奠定了基础。     

需氧厌氧培养方式对甲型副伤寒沙门菌检出率的影响

目的探讨需氧和厌氧血培养方式的选择对甲型副伤寒沙门菌检出率的影响。方法使用mini VI-TAL自动荧光血培养仪或BacT/Alert 3D培养仪对18684例疑似血流感染患者血液(含骨髓)标本进行需氧和(或)厌氧培养(其中仅做需氧培养935例,仅做厌氧培养16例,需氧和厌氧配对培养17733例,每瓶注入约5 ml血液)。结果18684例血液标本,共分离到甲型副伤寒沙门菌3888例(20.81%)。在17733例需氧和厌氧配对培养中检出3613例,其中仅需氧阳性406例占11.24%(406/3613),仅厌氧阳性405例占11.21%(405/3613),需氧和厌氧培养均阳性者2802例占77.55%(2802/3613),需氧和厌氧均生长的阳性报警时间分别为(22.56±13.22)h和(26.69±15.80)h,仅需氧阳性的报警时间为(32.85±23.33)h,仅厌氧阳性的报警时间为(34.46±18.44)h。结论需氧和厌氧血培养方式获得甲型副伤寒沙门菌的阳性率相同,采用需氧和厌氧瓶配对培养可提高阳性检出率,只做厌氧或需氧培养将有11.24%或11.21%阳性病例被漏检。     

虎血清H5 亚型流感病毒抗体调查

为查明我国圈养虎群中H5 亚型流感病毒的流行情况,应用血凝抑制(HI)方法检测了1998 ～ 2009 年间采集于哈尔滨、宜昌、桂林、唐山、上海和郑州等地的309 份虎血清样品的H5 亚型流感病毒抗体效价。结果发现1998 年4 月至2002 年4 月采集的20 份血清样品全部为H5 亚型流感病毒HI 抗体阴性。在2002 年7 月至2003
年6 月采样于上海、唐山、哈尔滨的34 只虎中,有31 只曾出现过高热、抽搐和肺炎症状,其中24 只虎的血清样品H5 亚型流感病毒HI 抗体呈阳性(抗体效价1∶ 10 ～ 1∶ 320),2 只无临床症状虎也为抗体阳性。对2004 年随机采集自哈尔滨的220 份血清样品调查发现抗体阳性率可达25.9% ,其中28 只有临床高热与肺炎病史的虎中有14 只抗体呈阳性(抗体效价1∶ 10 ～1∶ 80),其余无病史的192 只虎中有43 只抗体阳性。2009 年8 月采集的35 份血清中仅有3 份H5 阳性,抗体阳性率下降为8.6% 。上述结果表明H5 亚型流感病毒能够感染虎并对圈养虎的健康构成威胁,而且其公共卫生意义更值得关注。     

反向间接血凝抑制试验检测肾综合征出血热病毒总抗体

本研究用RPHI、IFA-IgG检测拟诊HFRS患者82例156份血清,其中66例检测出特异性抗体,非HFRS患者血清256份未出现假阳性反应。RPHI与IFA-IgG检测恢复期血清比急性期血清效价呈4倍以上升高者分别为83.6％及73.8％,5病日内血清阳性检出率为53.3％及41.9％,6～10病日为95.8％及79.2％。两种试验的一致率为88.5％,阳性检出率比较x~2=9.39,P<0.01,RPHI非常显著高于IFA-IgG。     

血中检测SARS冠状病毒N蛋白在SARS实验室早期诊断中的作用

为明确严重急性呼吸综合症(SARS)冠状病毒N蛋白在SARS实验室早期诊断中的作用,通过微量中和试验及酶联免疫方法、间接免疫荧光法检测疑似病人恢复期血清(大于28天)中SARS-IgG抗体,确诊SARS患者。同时收集发病不同时期SARS及普通发热病人血清,利用酶联免疫方法检测SARS-CoVN蛋白,并与荧光定量PCR早期诊断方法相比较。共检测：广州地区2003年12月～2004．年1月新发4例确诊SARS患者不同时期的血液和咽漱液标本;恢复期血清SARS-CoV中和抗体阳性病人不同时期的血清46份;广州地区2003年1月～4月临床确诊SARS患者159例的血清和56例疑似患者血清;非SARS普通发热病人血清97份;正常人体检血清100份。结果：4例新发SARS患者的不同时期标本中,3例患者急性期血均检出N蛋白,优于常用的荧光定量PCR检测方法。46份SARS-CoV中和抗体阳性的血清标本,N蛋白检出率为100％。159例临床确诊病例中,发病早期5天以内SARS-CoVN蛋白的检出率为92．3％,随后呈现逐步下降的趋势,在发病第18天仍可检出。56例临床疑似患者发病早期也有23．2％检出率。而97例普通发热病人及100份正常人血清中均未能检测出SARS-CoVN蛋白。表明在血清中检测SARS冠状病毒N蛋白的方法敏感性和特异性都好,对SARS实验室早期诊断具有重要作用。     

猕猴桃嫁接试验

本文报道猕猴桃不同嫁接时期、嫁接方法和不同分类群的砧木试验结果,猕猴桃最适宜的嫁接时期是落叶后至翌年萌芽前,嫁接方法以切接为好,嫁接成活率均在90％以上。同种和同一分类群的砧穗间有良好的亲和力,嫁接均有较高的成活率。不同分类群间嫁接效果较差,如中华猕猴桃桂海4号嫁接于中华猕猴桃砧木上的成活率,生长情况均比嫁接其它分类群为砧的有显著差异。     

云南森林植物区系研究

云南森林植物(系指木本植物)主要起源于新生代,少数古老种起源于古生代至中生代。云南森林植物区系成分极为丰富而复杂,据研究已知森林植物149科(蕨类植物1科,裸子植物10科,被子植物138科),840属,5271种。本文根据对云南森林植物15个分布区类型统计分析,证明云南森林植物区系明显富于热带性同时兼有丰富的温带成分,热带属占总属数72.12％,温带属占总属数21.87％,中国特有属在云南有46属,占云南总属数5.33％。中国特有属的三个分布中心。有两个分布中心在云南(即新特有属中心和古老特有属中心)。本文还对云南森林植物区系的地理成分起源;云南森林植物区系成分复杂、丰富之成因;云南森林植物开发利用之前景进行了研究和探讨。     

大鼠小肠神经激肽A免疫反应（NKA－Ⅰ）物质分布特征的研究

本实验采用免疫细胞化学ＰＡＰ法,将切片与铺片技术相结合,全面研究了Ｗｉｓｔａｒ大鼠（ｎ＝２０）小肠神经激肽Ａ免疫（ＮＫＡ－Ｉ）阳性物质的分布特征。结果提示：ＮＫＡ－Ｉ神经元单个或多个散在分布于粘膜下和肌间的神经节内,粘膜下神经节处多见。ＮＫＡ－Ｉ神经纤维广泛分布于小肠各段的各层结构中。在小肠粘膜上皮和腺上皮中可见散在分布的ＮＫＡ－Ｉ强阳性细胞,推测为ＮＫＡ－Ｉ内分泌细胞。本文还对ＮＫＡ－Ｉ的形态学特点及生理功能进行了讨论。