RNA原位杂交实用技术

利用互补RNA为探针进行原位杂交是分析组织或细胞内RNA分布的行之有效的方法,通过对mRNA分布的研究可以了解特定基因的表达情况。原位杂交技术过程较长,操作繁琐,从而在一些实验中不能得到很好的使用,为此本文根据我们过去的实际操作经验对该技术中的一些使用技巧作简要的介绍。     

染色体原位杂交技术

原位杂交技术是重复ＤＮＡ序列和多拷贝基因家族物理作图、低拷贝及单拷贝ＤＮＡ序列定位的常规方法,也是检测种间杂种染色体易位、重组的有效手段。可应用于分析染色体的结构和异源多倍体物种的进化,与染色体显带技术结合使用可精确而有铲地进行染色体图谱构建和细胞遗传学鉴定。     

RNA原位杂交实用技术

利用互补RNA为探针进行原位杂交是分析组织或细胞内RNA分布的行之有效的方法 ,通过对mRNA分布的研究可以了解特定基因的表达情况。原位杂交技术过程较长 ,操作繁琐 ,从而在一些实验中不能得到很好的使用 ,为此本文根据我们过去的实际操作经验对该技术中的一些使用技巧作简要的介绍。     

荧光原位杂交及其应用

荧光原位杂交(FISH)法是直接从组织或细胞中检测特定DNA或RNA的最有效方法。整个操作过程为:1)制备探针;2)细胞或组织显微镜标本的制作;3)原位分子杂交;4)荧光免疫检测;5)显微镜下观察。其中以1),2)步最为关键。FISH法的最大特点是灵敏度高,并可以进行定量分析。FISH法可应用于染色体上的基因定位,基因表达的检测,病毒感染的检查,特定核酸序列在细胞内的空间分布分析以及核酸复制过程中的定量分析等许多领域的实验中。     

细胞内RNA的原位杂交

本文介绍用原位杂交方法测定细胞内的RNA。该方法特异性较高,能保持细胞曲完整性。我们测定了不同细胞的rRNA基因的转录和原癌基因c-myc,c-H-rgs的转录,取得了较满意的结果。RNase处理细胞或质粒pBR322作探针,细胞中显影颗粒很少。本文对原位杂交方法学进行了初步的讨论。     

荧光原位杂交技术及其应用

荧光原位杂交技术(FISH)始于70年代后期,曾多用于染色体异常的研究,近年来随着FISH所应用的探针种类的不断增多,特别是全Cosmid探针及染色体原位抑制杂交技术的出现,使FISH技术不仅在细胞遗传学方面,而且还广泛应用于肿瘤学研究,如基因诊断、基因定位等。本文对FISH探针标记、信号处理等有关技术特点以及在细胞遗传学研究、基因图谱绘制、基因扩增检测等方面的应用做了具体的 综述。     

核酸原位杂交技术及其发展

在核酸分子杂交基础上产生的染色体核酸原位杂交技术(in situ hybridization of nuclear acids),是目前动植物及人类医学细胞遗传学研究中新发展起来的,能够对待测核酸进行定性、定位或相对定量的一项遗传分析技术,它的应用与发展将使动植物及人类染色体上的基因定位和杂种鉴定由细胞水平进入到分子生物水平,因此,业已引起了人们的极大关注与重视。     

荧光原位杂交技术的研究进展

荧光原位杂交(FISH)是在染色体、间期细胞核和DNA纤维上进行DNA序列定位的一种有效手段。近年来,围绕提高检测的分辨率和灵敏性,不断将免疫染色、量子点和微流控芯片等物理化学技术引入到荧光原位杂交中,促进了它的快速发展。本文主要综述了荧光原位杂交的基本原理和发展历程,重点介绍了免疫染色-荧光原位杂交(immuno-FISH)、量子点-荧光原位杂交(QD-FISH)和微流控芯片-荧光原位杂交(FISH on microchip)等多种新技术及其检测特点,如快速、灵敏、动态、多样化等。随着荧光原位杂交技术的不断完善与发展,将在细胞遗传学、表观遗传学及分子生物学等领域发挥更加重要的作用。     

DNA纤维上的原位杂交技术

ＤＮＡ纤维上的荧光原位杂交（Ｆｉｂｅｒ－ＦＩＳＨ）技术是一种非重要的分子细胞遗传学技术。对于高分辨物理图的绘制、基因组和染色体结构的研究、致病基因的定位克隆等都有很大作用,本文介绍了该技术的基本操作和应用,以及与引物原位ＤＮＡ合成（ＰＲＩＮＳ）等技术相结合进行更精确基因定位的潜力。     

定量荧光原位杂交测定端粒长度

目的:应用定量荧光原位杂交(Q-FISH)方法测定端粒长度。方法:选取4种端粒长度均一的标准细胞株采用Q-FISH的方法做出荧光亮度与端粒长度的标准曲线,从而得出实验细胞株的端粒长度,与DNA印迹法测定末端限制性片段(TRF)长度进行二者之间的相关性分析。结果:检测荧光强度的最佳线性曝光时间为400ms,相对于DNA印迹法,定量荧光原位杂交(Q-FISH)法所需标本量少,实验周期短,端粒长度结果与Southern杂交法具有很好的相关性。结论:采用定量荧光原位杂交方法测端粒长度具有重复性好、精确可靠的特点,适用于对珍贵标本的端粒改变进行分析。     

海岛棉原位杂交及核型比较

采用Ａ染色体组（Ａ genome)棉种亚洲基因组ＤＮＡ（gDNA)为探针,对海岛棉体细胞染色体进行荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）,结果发现５２条染色体中有杂交信号与否的刚好各一半,从而直观地证实了海岛棉异源双二倍体起源的理论,但是,染色体的长度Ａ亚组的并非全部大于Ｄ亚组的。海岛棉基于ＦＩＳＨ图像的核型公式为：２n=4x=52=38m 14sm(sat)。３对随体染色体序号分别是Ａ亚组第１１、Ｄ亚组第２２和２５,均属于近中部着丝点（sm)类型,随体均在各自杂色体的短臂上,而且与所有染色体无关晨同一亚组起源。Ａ亚组第５、６和９对染色体长臂发生长了片段的易位,易位的片段较大,占所在染色体和蔗的百分率依次为１９．２１％、１７．６９％和１２．８８％,在Ｄ亚组１３对染色体中,最少５对的着丝点区域多或少地显示出与亚洲棉gDNA探针杂交的红色荧光信号,意味着有Ａ亚组染色体的交换。     

斑马鱼整体原位杂交的技术改良

斑马鱼整体原位杂交技术广泛应用于基因表达谱、基因间相互关系和突变体筛选等方面,是研究斑马鱼发育相关基因功能的重要技术。本文从杂交探针的制备、浓度的选择和洗脱以及胚胎的脱色、蛋白酶K消化、底物显色等方面进行了摸索、改进及简化,获得了背景低、着色清晰、特异性高的实验结果,预示了简单实用、成本低廉的斑马鱼整胚原位杂交技术平台的成功建立。     

荧光原位杂交法检测双歧杆菌

检验荧光原位杂交法在双歧杆菌属鉴定方面的调途。方法：采用对数生长期的８株双歧杆菌和１０析其他厌氧、需氧杆菌在相同的条件下分别与双歧杆菌属特异性１６ＳｒＲＮＡ寡核苷酸基因探针和细菌界通用１６ＳｒＲＮＡ寡核苷酸基因探针在载玻片上进行原位杂交,在荧光显微镜下观察杂交结果,拍摄同一视野的荧光显微镜照片和相关显微镜照片,计算杂交率。结果所用的双歧杆菌菌株均与两种基因探针杂交,在荧光显微镜下发校菌与黑暗背景对     

固定液对原位杂交的影响

原位杂交 (ＩＳＨＨ )属于固相分子杂交范畴 ,它是用标记的ＤＮＡ或ＲＮＡ为探针在原位检测组织细胞内特定核酸序列的方法。它不仅保持了细胞固有形态而且对被测物准确定位。因此ＩＳＨＨ已被广泛应用于肿瘤的鉴定 ,预后分析及相关学科的研究之中。在长期的实验中发现不同的固定液对ＩＳＨＨ结果的影响明显 ,为此我们作了以下实验 ,拟寻找ＩＳＨＨ的最佳固定剂　　材料和方法大肠癌标本 16例均为病理科送检标本 ,每例在相同部分取 4块 2× 1× 0 2ｃｍ组织分别于以下固定液中固定 :Ａ组 :4 %多聚甲醛 ;Ｂ组 :10 %福尔马林 ;Ｃ组 :Ｃａｒｎ…     

增强原位杂交探针敏感性的研究

原位杂交(ISHH)属于固相分子杂交范畴,它是用标记的DNA或RNA为探针在原位检测组织细胞内特定核酸序列的方法.     

RNA原位杂交技术的一些应用技巧

目的:检测基因在动物组织或细胞中的时空表达模式。方法:转录反义RNA探针;利用RNA原位杂交技术检测人和小鼠牙原基中若干基因的表达。结果与结论:通过优化条件,转录出完整的反义RNA探针,并成功地利用RNA原位杂交技术在组织中检测到基因的表达;分析了一些在RNA原位杂交的过程中可能碰到的问题及其解决方法。     

植物小RNA荧光原位杂交实验方法

小RNA是对植物生长发育十分重要的一类小分子核苷酸,在多种生命过程以及胁迫响应中发挥重要调控作用。对小RNA的定位研究有助于揭示它们的功能,而小RNA荧光原位杂交(sRNA-FISH)是一种通过荧光检测技术对生物体内小RNA进行定性或半定量分析的技术,目前该技术已经在动物体内被广泛应用,而在植物体内的应用还比较少。该文...