siRNA干扰小鼠睾丸支持细胞μPA表达的初步研究

该研究在验证小鼠睾丸支持细胞TM4有内源性uPA基因表达的基础上,针对uPAmRNA靶序列设计三段不同的siRNA序列（si-uPA）,通过瞬时转染TM4细胞,筛选确定uPA基因的有效干扰序列。将该有效干扰序列进行时效、量效实验,观察siRNA对TM4fi细胞uPAmRNA和蛋白表达的影响。结果显示,siRNA的最佳转染浓度为50nmol／L。三种si—uPA转染TM4细胞后,μPAmRNA和蛋白表达量均较空白对照组明显下降（P〈0．05）,以si—μPAl作用最为明显。si—μPAl转染24h后,转染组细胞μPAmRNA的表达均较对照组显著降低,其中100nmol／L组抑制效果最为明显,抑制率达到70％;随转染时间的延长,μPAmRNA表达持续降低,转染72h后,三组转染细胞μPAmRNA表达量分别为对照组的153．9％、35．3％和27．7％（P〈0．05）。该研究成功筛选出针对μPAmRNA靶序列的有效干扰序列,抑制效应持续至72h;同一时间点内,抑制效应随转染浓度的增加而增强,表现出良好的量效关系。     

miR-145通过下调PLCε抑制膀胱癌EMT和迁移及其机制研究

目的:探讨miR-145调控PLCε对膀胱癌细胞T24上皮间质转化(EMT)和迁移的影响及可能的分子机制。方法:(1)腺病毒感染T24细胞,划痕实验和Transwell检测细胞的迁移能力;RTPCR、Western blot分别检测PLCε及EMT相关分子的表达;为探究其分子机制,Western blot检测GSK-3β磷酸化(Ser9位点)和Snail的表达情况。(2)利用生物信息学技术预测可能调控PLCε的miRNA,结合文献报道的膀胱癌microRNA表达谱结果筛选出miR-145;转染miR-145 mimics至T24,q PCR检测miR-145、PLCε的表达,Western blot检测PLCε的表达。(3)转染miR-145 mimics,Western blot检测EMT相关分子及p-GSK-3β、Snail;划痕实验、Transwell检测过表达miR-145后细胞的迁移能力。结果:(1)干扰PLCε表达能显著抑制细胞的迁移,同时,使T24细胞中E-cadherin表达上调,N-cadherin和Vimentin表达下调;干扰PLCε后,GSK-3β磷酸化(Ser9位点)水平下降,Snail表达降低。(2)转染miR-145 mimics可使T24细胞中miR-145表达增高,且明显抑制T24细胞中PLCε的表达。(3)在T24中过表达miR-145,细胞迁移能力显著下降,EMT标志分子的表达情况与沉默PLCε结果一致。同时,与阴性对照组相比,转染miR-145 mimics组p-GSK-3β和Snail表达显著减少。结论:PLCε通过GSK-3β/Snail信号通路促进膀胱癌细胞T24发生EMT及迁移,miR-145可以逆转PLCε诱导膀胱癌EMT的发生,从而阻止膀胱癌细胞的迁移。     

miR-29b对TNF—α诱导的人脐静脉内皮细胞增殖与凋亡的影响

目的探索过表达miR-29b对TNF-α 诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）增殖与凋亡的影响及初步作用机制。方法MTT 法筛选TNF—α诱导HUVECs的最佳浓度和时间,建立细胞凋亡模型;MTY法筛选miR-29bmimic转染HUVECs的最佳转染时间和浓度：MTr法检测过表达miR-29b对TNF-α诱导HUVECs增殖活力的影响;Hoechst33342荧光染色检测过表达miR-29b对TNF—α诱导HUVECs凋亡的影响：Western印迹技术检测过表达miR-29b对Akt磷酸化水平、Bcl-2蛋白表达的影响。结果TNF—α诱导的HUVECs凋亡的最佳浓度为10ng／ml,最佳时间是48h;miR-29bmimics转染HUVECs的最佳浓度为50nmol/L,最佳作用时间是48h;过表达miR-29b能显著降低TNF-α诱导的HUVECs的增殖活力（P〈0．001）;Heochst33342荧光染色结果显示。miR-29b过表达能促进TNF-α诱导的HUVECs的凋亡（P〈0．05）;过表达miR-29b能显著下调Akt磷酸化（p-Akt）与Bcl-2蛋白的表达（P〈0．001）。结论过表达miR-29b可降低TNF-α诱导的HUVECs的增殖活力并促进其凋亡,其机制可能与下调Akt磷酸化、Bd-2蛋白的表达相关。     

构建MicroRNA．29a和microRNA-29c腺病毒并探讨其对膀胱癌细胞增殖能力的影响

构建miRNA．29a／c的重组腺病毒并观察其对膀胱癌T24细胞增殖能力的调控。以人全基因组DNA为模板,PcR扩增miR-29a、miR-29c,克隆至腺病毒穿梭载体pAdtrace．TO4-CMV。重组穿梭载体经pmeI线性化后与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化感受态大肠杆菌BJ5183,通过同源重组获得重组腺病毒质粒pAdEasy—1—miR-29a、pAdEasy—1．miR-29c,pacI线性化后转染HEK-293细胞,进行包装和扩增。实时荧光定量PcR检测感染腺病毒的膀胱癌T24细胞miR-29a、miR．29c的表达水平,并利用CCK．8实验检测细胞增殖能力。经DNA测序和限制性内切酶分析显示,重组腺病毒质粒pAdEasy—1—miR．29a、pAdEasy．1-miR-29c构建成功：感染腺病毒Ad—miR-29a和Ad—miR．29c后,经实时荧光定量PCR检测,膀胱癌细胞中miR．29a、miR．29c表达显著增高（P〈0．01）;过表达miR．29a／c后的CCK．8实验显示,细胞增殖能力明显低于对照组伊〈0．05）。以上说明已成功构建miR．29a、miR．29c腺病毒,过表达miR．29a／c可抑制膀胱癌细胞的增殖。     

CDADC1在人视网膜色素上皮细胞中功能研究

目的：研究细胞增殖相关基因CDADC1在人视网膜色素上皮细胞ARPE19中的表达及对ARPE19细胞增殖的影响。方法：采用基因重组技术构建荧光表达载体pEGFP－C1－CDADC1和真核表达载体pcDNA3．1-myc-CDADC1,用脂质体转染法转染ARPE19细胞,观察GFP—CDADC1融合蛋白在ARPE19细胞的表达定位,流式细胞仪测定CDADC1转染后对ARPE19细胞生长周期、凋亡的影响。结果：FP—CDADC1融合蛋白亚细胞定位显示,CDADC1低表达于ARPE19细胞胞浆,高表达于细胞核;pcD—NA3．1-myc-CDADC1瞬时转染ARPE19细胞显示24小时细胞无明显改变,48小时后重组质粒转染组S期细胞占细胞总数的19．37％,pcDNA3．1-myc空载质粒转染组S期细胞占10．87％,而空白对照组S期细胞占3．33％,重组质粒转染组与两对照组之间的差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：CDADC1在增生性玻璃体视网膜病变（PVR）发生和发展过程中可促进DNA的合成,引起细胞增生。     

抑制miR-130b-3p通过上调PTEN和灭活PI3K-AKT及整合素β1/FAK信号通路抑制膀胱癌细胞增殖

miR-130家族在癌的进展中发挥作用;然而,其家族成员在膀胱癌中的作用尚罕见报告。本研究证明,抑制miR-130家族成员miR-130b-3p表达促进PTEN表达,诱导细胞凋亡,抑制膀胱癌细胞增殖。首先,我们采用微阵列对来自膀胱癌患者的4对膀胱癌和癌旁组织进行了miRNA和mRNA组学分析,发现miR-130b-3p和miR-106b-3p在膀胱癌组织高表达,而miR-99a-3p、miR-199a-5p和miR-145-3p低表达。RT-q PCR检测30对膀胱癌组织5种miRNA的表达与微阵列中的表达状况一致。此外,我们在mRNA组学分析中还发现,miR-130b-3p在膀胱癌组织的高表达与PTEN表达呈负相关。为此,在后续研究中集中探索了miR-130b-3p在膀胱癌中的作用及其作用机制。生物信息学及荧光素酶报告结果证明,miR-130b-3p可直接结合PTEN的3'-UTR,靶向抑制PTEN的表达。转染结合CCK-8、EDU、流式分析、划痕及Transwell小室实验显示,转染miR-130b-3p模拟物可明显促进膀胱癌T24细胞的增殖、迁移及侵袭能力;相反,转染miR-130b-3p抑制物可明显诱导T24细胞凋亡。鬼笔环肽染色揭示,转染miR-130b-3p模拟物可促进细胞骨架形成,而转染miR-130b-3p抑制物抑制细胞骨架形成。Western印迹证明,转染miR-130b-3p可下调PTEN在T24细胞的表达,上调p-PI3K、p-AKT、p-FAK和整合素β1的表达;而转染miR-130b-3p抑制物上调PTEN的表达,下调p-PI3K、p-AKT、p-FAK和整合素β1的表达。上述结果提示,miR-130b-3p通过抑制PTEN表达,激活PI3K-AKT及整合素β1/FAK信号通路,在膀胱癌中发挥癌基因样作用;相反,抑制miR-130b-3p可上调PTEN表达,抑制PI3K-AKT及整合素β1/FAK信号通路的激活,诱导凋亡,抑制膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。我们的结果还提示,miR-130b-3p作为可能的临床标志物,对膀胱癌的诊断、靶向治疗具有潜在的应用价值。     

传输靶向COX-2 siRNA联合化疗药物对大鼠胃癌细胞生长的抑制作用

目的：通过动物实验探讨传输靶向COX-2siRNA联合化疗药物对大鼠胃癌细胞生长的抑制作用。方法：24只健康SD大鼠平分为三组,治疗组用COX-2-siRNA转染的胃癌SGC7901细胞接种,同时进行环磷酰胺、丝裂霉素C化疗治疗;阴性对照组,用阴性对照siRNA转染的胃癌SGC7901细胞接种,同时进行环磷酰胺、丝裂霉素C化疗治疗;对照组（n=8）,用未经转染的胃癌SGC7901细胞接种,不进行化疗治疗;三组转染后都接种了裸鼠。结果：治疗组、阴性对照组及对照组胃癌细胞凋亡率分别为（22．28±0．12）％、（1．23±0．17）％和（1．03±0．14）％,治疗组与阴性对照组和对照组比较差异都有统计学意义（t=18．152,17．555,P〈0．05）。治疗组的抑瘤率为76．7％,阴性对照组和对照组分别为12．8％和6．89％,治疗组的抑瘤率明显高于其他两组（x^2=15．211,13．899,P〈0．05）。Western blotting检测结果显示治疗组的COX-2蛋白表达含量得到了明显抑制。结论：传输靶向COX-2 siRNA和化疗药物的配合应用可有效抑制COX-2蛋白的表达,从而抑制胃癌细胞的生长,从而起到更好的治疗效果。     

微小RNA-451a对胰腺癌BxPc3细胞增殖、侵袭及迁移的影响

摘要 目的：研究微小RNA（miR）-451a对胰腺癌BxPc3细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法：体外培养BxPc3细胞,将不同浓度（50、100 和 200 μmol/L）miR-451a模拟物（mimic）转染至胰腺癌细胞株BxPc3中,利用荧光定量聚合酶链式反应（ PCR）法检测miR-451a的表达,MTT增殖实验检测不同浓度miR-451a对细胞增殖的影响,细胞划痕实验检测不同浓度miR-451a对细胞迁移能力的影响,Transwell实验检测不同浓度miR-451a对细胞侵袭能力的影响。Western blot法检测不同浓度 miR-451a转染后BxPc3细胞p-PI3K、p-AKT、TGF-β和p-smad2/3 蛋白的表达情况。结果：转染不同浓度miR-451a mimic后,胰腺癌BxPc3细胞内miR-451a的相对表达量明显升高,差异有统计学意义（P<0.05）。过表达miR-451a后,BxPc3细胞的增殖能力明显减弱,细胞迁移能力明显减弱,细胞侵袭能力明显减弱,差异均有统计学意义（P<0.05）。相比于0 μmol/L 组,转染50、200 μmol/L miR-451a后BxPc3 细胞p-PI3K、p-AKT、TGF-β和p-smad2/3蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,并且p-PI3K、p-AKT、TGF-β和p-smad2/3蛋白表达水平变化具有浓度依耐性。结论：miR-451a能抑制胰腺癌BxPc3细胞株的增殖、迁移、侵袭能力。     

脂质体介导人β防御素2基因转染膀胱上皮的实验研究

目的 探讨脂质体介导人β防御-2（humaβ-defensin2,hBD2）基因体内、外转染膀胱上皮细胞的可行性。方法采用脂质体法体外转染人膀胱上皮细胞株T24及膀胱灌注大鼠体内转染,ELISA检测细胞上清及大鼠尿液中hBD：的表达;RT—PCR及Western印迹检测细胞及大鼠膀胱中hBD：的表达;组织免疫荧光检测hBD,在膀胱黏膜的表达。结果RT—PCR及Western印迹检测显示,脂质体介导pCAGG—hBD2体、内外转染膀胱上皮细胞后均可表达重组hBD2;转染细胞上清及大鼠尿液中hBD2浓度分别为（36．5±3．2）ng／10。细胞和（4．77±1．4）ng／ml;转基因hBD2主要表达于膀胱黏膜上皮层。结论脂质体介导hBD2基因体内、外转染膀胱上皮细胞后均能获得高效表达,为泌尿系感染的防御素基因治疗提供了实验依据。     

靶向下调FOXM1基因表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响

目的：探讨靶向抑制FOXM1对乳腺癌细胞增殖能力的影响,为乳腺癌的个性化靶向治疗提供理论依据。方法：利用重组真核转录载体pSilencer1．0-U6-FOXMI—shRNA,脂质体法转染乳腺癌细胞株MDA-MB-231,下调其FOXM1基因表达。采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法、平板克隆形成实验观察细胞增值曲线以及克隆形成能力;采用实时定量·聚合酶链反应（Real—timeqPCR）、蛋白免疫印迹法（Westemblot）分别检测FOXMl基因在mRNA、蛋白水平的表达变化。结果：重组载体pSileneerl．0-U6-FOXMl-shRNA转染MDA-MB-231细胞后,与对照组相比,增殖速率明显下降（P〈0．05）,平板克隆形成显著减少（P〈0．05）,重组载体转染后显著抑制MDA—MB-231细胞中FOXM1基因在mRNA、蛋白水平的表达。结论：沉默FOXMI基因对乳腺癌细胞株MDA—MB-231生长具有抑制作用,为阐明乳腺癌发病机制提供了新的切入点,也为临床抑制肿瘤生长提供了新的作用靶点。     

幽门螺杆菌感染细胞模型的建立及感染相关microRNAs的筛选鉴定

目的：建立稳定的幽门螺杆菌（H.pylori）感染人胃上皮细胞模型;筛选并鉴定H.pylori感染相关microRNAs（miRNAs）的表达,为深入研究感染相关miRNAs的调控作用机制奠定基础。方法：将H.pylori标准株按MOI=100：1感染人胃上皮细胞,通过检测炎性细胞因子及炎症反应关键酶的表达综合评价感染模型;采用博奥公司miRNAs V3.0芯片分析细胞感染前后miRNAs表达谱变化,运用实时定量PCR技术和Northern杂交对表达显著差异的miRNAs进行分析鉴定。结果：H.pylori感染细胞24 h后,细胞分泌促炎细胞因子IL-8显著升高（P〈0.01）;启动炎症反应的关键酶COX-2的表达明显增加。芯片数据显示：H.pylori感染引起超过2倍显著差异表达的miRNAs包括：表达上调的PREDICTED-MIR191、miR-155、miR-92b、miR-30b、miR-146a、miR-16等,和表达降低的miR-181b、miR-324。实时定量PCR和Northern杂交结果显示感染相关miR-155和miR-146a在H.pylori感染细胞模型中表达均显著增加（P〈0.01）。结论：miR-155和miR-146a在感染细胞模型中的表达增加提示二者可能参与H.pylori感染的免疫调控过程。     

血浆microRNA在早期乳腺癌诊断中的价值

目的：探讨不同microRNA的表达及评估血浆microRNA作为早期乳腺癌诊断的新标志物的价值。方法：我们收集了49例早期乳腺癌的术前血浆作为实验样本和36例健康女性血浆作为对照样本。应用反转录和实时荧光定量聚合酶链反应,我们检测miR-21,miR-205,miR-222这三个候选基因的相对表达量并分析了这三个候选microRNA表达与临床病理特征的关系。结果：我们发现,与健康对照相比,miR-21（1．565,P=0．022）andmiR-222（2．258,P〈0．001）在乳腺癌病人血浆中的表达明显升高,而miR-205（0．591,P=0．001）在乳腺癌病人血浆中的表达明显下降。并且在临床病例资料数据的比较中,miR-21（P=0．0101）在乳腺癌病人中的表达水平与雌激素受体和孕激素受体相关。血浆中miR-222的表达水平在肿瘤不同分期中明显不同。结论：本实验证明miR一21,miR-205andmiR．222的表达水平与乳腺癌的病理特征明显相关,可以作为乳腺癌的潜在标志物。     

miR-188-5p对肾间质纤维化过程中MMP-13表达的影响

目的:探讨miR-188-5p对肾间质纤维化过程中基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinases,MMPs)表达的影响。方法:采用TGF-β1诱导肾小球系膜细胞(Mesangial cells,MC)纤维化,观察纤维化过程中miR-188-5p和MMP-13的表达变化;通过报告基因实验研究miR-188-5p对MMP-13的调控作用;通过脂质体转染的方法将人工合成的miR-188-5p mimics/inhibitor转入细胞内增加或减少miR-188-5p的表达,进一步观察miR-188-5p对MMP-13表达的影响。结果:TGF-β1诱导肾小球系膜细胞纤维化后miR-188-5p的表达明显升高,而MMP-13表达下调;报告基因实验表明miR-188-5p对MMP-13的表达有明显的调控作用,减少miR-188-5p的表达后MMP-13的表达上调,而增加miR-188-5p的表达后MMP-13的表达下调,呈明显负性调控。结论:在肾间质纤维化过程中,miR-188-5p可能通过抑制MMP-13的表达而发挥促纤维化的作用,本研究为肾间质纤维化的治疗提供了新的靶点。     

MicroRNA-294 promotes cellular proliferation and motility through the PI3K/AKT and JAK/STAT pathways by upregulation of NRAS in bladder cancer

In our study we examined the role of microRNA-294 (miR-294) in bladder cancer and related mechanisms. Realtime polymerase chain reaction (RT-PCR) was performed to determine the expression level of miR-294. Western blot was used to determine the expression of NRAS, mainly factors in the PI3K/AKT and JAK/STAT pathways. Cell counting kit8 assay, clonogenic assay, wound-healing assay, transwell and flow cytometry were used to explore, respectively, cell proliferation, survival, migration, invasion, and apoptosis of bladder cancer cell line T24. The expressions of miR-294 in bladder cancer cells including J82, HT1376, T24, and SW780 were significantly increased compared to those in human bladder epithelium cells (both HCV29 and SV-HUC-1). The proliferation rate, surviving fraction, migration, and invasion of T24 cells in miR-294 mimetic transfected group were significantly increased, while they were significantly decreased by miR294 inhibitor transfection. Moreover, miR-294 suppression could increase the apoptotic rate of T24 cells. In addition, drug resistance of T24 cells to cisplatin was increased in miR-294 mimetic-treated group, while it was decreased by miR-294 inhibitor compared to empty control. Overexpression of miR-294 could upregulate NRAS expression in T24 cells and activate PI3K/AKT and JAK/STAT pathways. We found that miR-294 expression was positively related with proliferation and motility of T24 cells. Moreover, miR-294 suppression could promote the sensitivity of T24 cells to cisplatin. We also found miR-294 could upregulate NRAS and activate the PI3K/AKT and JAK/STAT pathways in T24 cells.     

MiR-30a-3p对人滋养肿瘤细胞系JEG-3细胞侵袭功能的影响

目的：MiRNAs对于胎盘的形成和正常妊娠的维持起着至关重要的作用,它在胎盘中的表达失衡的可能导致了妊娠相关疾病的发生,我们前期研究发现miR-30a-3p在子痫前期患者胎盘上特异性高表达,推测miR-30a-3p可能参与了子痫前期的发生发展过程,本课题通过观察miR-30a-3p对人滋养肿瘤细胞系JEG-3细胞侵袭能力的影响,深入探讨miR-30a-3p在子痫前期发病过程中的作用。方法：应用瞬时转染技术在人滋养肿瘤细胞系JEG-3细胞中分别转染miR-30a-3p mimics、mimics NC为miR-30a-3p过表达组和阴性对照组,空白转染组为空白对照组,利用荧光实时定量PCR技术检测各组细胞中miR-30a-3p的表达,Transwell实验检测各组细胞侵袭能力的差别。结果：荧光实时定量PCR结果显示miR-30a-3p过表达组与阴性对照组、空白对照组相比miR-30a-3p的表达量明显升高,差异具有统计学意义（P〈0.05）;Transwell实验结果显示miR-30a-3p过表达组细胞的侵袭能力与阴性对照组、空白对照组相比均有降低,差异具有统计学意义（P〈0.05）。阴性对照组与空白对照组的侵袭能力差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：miR-30a-3p可以显著下调JEG-3细胞的侵袭力,miR-30a-3p有可能通过降低滋养细胞的浸润能力,导致滋养细胞对子宫肌层和螺旋动脉的浸润不足,造成＂胎盘浅着床＂,从而在子痫前期的发病过程中发挥了重要的作用,miR-30a-3p有望成为诊治子痫前期疾病的靶点。     

肿瘤干细胞标记物CD133与miR-429在大肠癌组织中的表达及其相关性研究

目的：检测CD133不同亚群大肠癌细胞HT-29的miR-429表达情况,探讨miR-429及CD133的表达与肿瘤的发生发展之间的关系。方法：采用荧光活化细胞分选法（FACS）分选出CD133不同亚群细胞,实时荧光定量PCR分别检测两组细胞miR-429的表达,合成miR-429寡核苷酸和阴性对照miRNA并分别转染CD133＋和CD133＋两个亚群细胞。再将细胞种植于非肥胖糖尿病／严重联合免疫缺陷（NOD／SCID）小鼠体内构建移植瘤模型,不同时间测量肿瘤体积和重量,RT—PCR及蛋白质印迹检测CD133＋和CD133＋两组肿瘤CD133mRNA和蛋白质表达。结果：血清检出CD133＋细胞为67．9％,miR-429的表达量是CD133＋细胞的（1．83±0．91）倍（P〈0．05）,CD133＋比例与miR-429表达呈负相关（r=0．591,P〈0．05）;miR-429＋／CD133＋组的移植瘤体积及重量与对照组比较有统计学差异（P〈0．05）,且miR-429＋/CD133＋组成瘤时间较对照组晚约2周,但miR-429＋/CD133＋组的移植瘤CD133表达量低,与阴性对照组比较无明显差异（P〉0．05）。结论：miR-429可能作为CD133的负性调控因子,具有抑制肿瘤生长的作用,但miR-429与CD133在肿瘤发生、发展过程中的作用机制有待进一步研究阐明。     

探寻肝再生磷酸酶3在膀胱癌细胞T24中的作用

目的：已经有研究证明肝再生磷酸酶3（PhosphataseofRegeneratingLiver-3,PRL-3）在消化道肿瘤的发生发展过程中起到重要作用,但其在膀胱癌中发挥何种作用尚不清楚,本次研究主要探寻PRL-3在膀胱癌细胞T24中作用,以求为膀胱癌的治疗提供新思路。方法：采用siRNA干涉的方法下调T24中PRL-3蛋白表达水平,通过westernblot方法检测干涉效果,绘制细胞生长曲线、构建裸鼠种植瘤模型,检测PRL-3下调对细胞体外及体内增殖的影响。结果：我们所设计的siRNA能够下调PRL-3在A498细胞中的表达（F=7．26,P〈0．05）,细胞生长曲线显示下调PRL-3能够抑制细胞的增殖,这种作用从干涉后的第60h开始,随时间增加作用愈加明显（F≥8．35,P〈0．05）;动物实验表明,siRNA下调PRL-3能够抑制T24细胞在活体内的增殖,从干涉后第21天开始这种作用开始体现出来（F≥10．46,P〈0．05）,并且干涉组的肿瘤肿瘤明显低于两个对照组（F=13．63,P〈0．05）。结论：我们构建的siRNA能够在T24细胞中实现对PRL．3蛋白的下调,siRNA介导的PRL-3蛋白下调能够明显抑制T24细胞在活体外及活体内的增殖,这初步证明PRL-3在膀胱癌中发挥重要的作用。随着我们对PRL-3分子进一步深入的了解,揭示其发挥作用的具体机制,PRL-3很可能成为膀胱癌基因治疗的新靶点。     

脑挫裂伤致miR-9升高促进神经干细胞分化

目的：探讨颅脑损伤后miR-9表达的变化和对神经干细胞分化和增值的影响,为颅脑损伤后神经功能修复治疗提出新的思路。方法：通过RT-PCR技术检测miR-9在挫裂伤脑组织中的表达情况;培养胚胎来源神经干细胞,并通过免疫荧光鉴定神经干细胞及其分化;转染miR-9后,通过MTT测定神经干细胞的增殖情况,和流式细胞仪检测分化神经元所占比例。结果：miR-9在挫裂伤脑组织中表达显著上升。对神经干细胞过表达miR-9可显著促进细胞增殖,并诱导分化成神经元。结论：脑挫裂伤时miR-9显著升高,并具有着促进神经干细胞增值和诱导分化的作用,可为伤后神经功能修复提供新的治疗方法。