中华鳖日本品系体内氟苯尼考药物代谢动力学研究

应用液相色谱-串联质谱技术研究了氟苯尼考在中华鳖日本品系(Pelodiscus sinensis Japanese strain)体内的残留代谢规律.在(25.0±2.0)℃水温下,150只体重为(250±50)g健康中华鳖日本品系连续7d投喂含30 mg/kg氟苯尼考的饲料,分别于最后一次给药后1h、2h、4h、8h、16 h、24 h、48 h、72 h、96 h、120 h、144 h、168 h、240 h、360 h采集肝、血液、肌肉和肾样品.样品中氟苯尼考的残留量采用乙酸乙酯提取,正己烷净化,电喷雾负离子多反应监测模式下进行测定,内标法定量,并利用3P97药动学软件进行数据分析.结果表明,氟苯尼考在中华鳖日本品系血液、肌肉、肝和肾中达峰浓度分别为167 μg/kg、188 μg/kg、67.15μg/kg和85.71μg/kg,达峰时间分别为4h、8h、8h和8h,消除半衰期分别为14.9 h、9.4h、29.5 h和13.0h,药动学方程分别为:C血液=210.332e-0.070 6t+ 938.161e-0.0465t,C肌肉=5 642.635e-0.077tt+5 765.891e-00744t,C肝=111.596e-0.0360t+ 4.339e-00235t和C肾=176.509e-0.0654t+ 615.697e-0.0536t.说明氟苯尼考在中华鳖日本品系体内残留代谢较快,建议休药期为15 d.     

马来酸罗格列酮对人肺腺癌（A549）细胞中PGC-1α表达及增殖的影响

摘要：为探讨马来酸罗格列酮对肺腺癌（A549）细胞中PGC-1a表达和活性的影响,以及抑制细胞增殖的机制,我们首先构建了pGL3-PGC-1a promoter重组质粒,转染人肺腺癌A549细胞,用双荧光素酶报告基因系统检测马来酸罗格列酮对PGC-1a启动子转录活性的影响;实时定量PCR检测胞内PGC-1a mRNA的表达;用Mitotracker green染色, 流式细胞仪检测线粒体质量;细胞计数检测马来酸罗格列酮对A549细胞体外增殖的影响。结果显示,马来酸罗格列酮能够抑制pGL3-PGC-1apromoter重组质粒的转录活性,降低A549细胞PGC-1amRNA水平的表达及线粒体质量,具有明显的剂量依赖性（P<0.05）。其抑制PGC-1a表达和活性的IC50（约为80 umol/L）与马来酸罗格列酮抑制A549细胞增殖的IC50（约为80 umol/L）相符。结论 马来酸罗格列酮能够抑制A549细胞中PGC-1a的表达与活性,进而降低细胞中的线粒体质量。这有可能是罗格列酮抑制A549细胞增殖的原因之一。     

马尔可夫药物动力学模型B

本文建立的Markov模型B适于计算肾、心、脑、皮肤、脂肪、肌肉中的血药浓度,它具有生理药动学模型的优点,即动力学参数具有解剖学和生理学意义,又能象房室模型一样用简单、优美的形式表示模型的解.     

PPARγ激动剂罗格列酮诱导人前列腺癌细胞系LNCAP凋亡的作用

目的:探讨罗格列酮(ROZ)对体外培养细胞系LNCAP增殖及凋亡的作用.方法:20、50、100 μmol/LROZ作用LNCAP细胞24 h、48 h、72 h后,MTT法检测ROZ对LNCAP细胞生长的影响.采用末端脱氧核苷酸转移酶原位标记(TUNEL法)和流式细胞术检测细胞凋亡情况.Western Blot检测LNCAP细胞中Casepase-3表达水平的变化.结果:ROZ(20μmol/L至100μmol/L)对前列腺癌细胞有显著的增殖抑制作用,以100μmol/L浓度最为明显.ROZ(100μmol/L)作用72h后最高增殖抑制率达78.58%.流式细胞仪检测结果显示,LNCAP细胞凋亡数目随药物浓度的增加呈递增趋势;100μmol/LROZ作用72h后凋亡细胞数达48.11%.与此一致,TUNEL染色阳性细胞数目在ROZ处理组显著增多,Western Blot检测显示,ROZ显著增加LNCAP细胞中Caspase-3蛋白表达水平.结论:ROZ在体外对前列腺癌细胞系LNCAP有明显的增殖抑制及促进凋亡作用,有望成为前列腺癌患者新的治疗方法.     

罗格列酮对脓毒症小鼠转归的影响

目的:探讨罗格列酮对脓毒症小鼠转归的影响。方法:采用雄性昆明小鼠,以盲肠结扎穿孔法(CLP)建立脓毒症小鼠模型。48只小鼠随机分为4组:对照组(n=12)、脓毒症模型组(n=12)、罗格列酮预防组(预防组,n=12)及罗格列酮治疗组(治疗组,n=12)。各组分别于模型建立后24h和48h时留取血标本后活杀大鼠。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组大鼠血清高迁移率族蛋白1(HMGB1)及脂联素的含量。检测24h肌酸激酶(CK)、动脉氧分压(PaO2)、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)等各器官功能指标的变化并绘制各组小鼠的生存曲线。结果:血清HMGB1含量与脂联素存在显著负相关性(r=-0.889)。脓毒症组、罗格列酮干预组各时相点HMGB1水平均较对照组高(P0.05)。预防组和治疗组HMGB1含量较模型组呈减少趋势(P0.01)。而脂联素含量的变化与HMGB1相反。与脓毒症组相比,罗格列酮预防和治疗组血清CK、PaO2、ALT、AST、Cr、BUN水平均明显改善(P0.01)。预防组和治疗组小鼠生存率明显高于模型组(P0.01)。结论:罗格列酮可显著提高脓毒症小鼠的生存率,抑制晚期炎症介质HMGB1的表达,促进脂联素的分泌,对脓毒症小鼠的心、肺、肝、肾等重要器官均具有保护作用。     

妇宁康泡腾胶囊的药代动力学研究

目的研究妇宁康泡腾胶囊在家兔体内的药动学特点。方法用HPLC法测定甘草酸在家兔体内48 h血药浓度,采用3P87药动学程序计算药动学参数。结果主要药动学参数为t1/2=8.956 h,Tmax=8.27 h,Cmax=0.4544μg/ml,AUC=37.161。结论该制剂在家兔体内吸收代谢缓慢,其生物半衰期超过8 h。     

罗格列酮抑制人胃腺癌SGC7901增殖机制的研究

目的：探讨在体外不同浓度的过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）激动剂罗格列酮（ROZ）对人胃癌细胞系SGC7901的生长及细胞周期的影响。方法：采用MTT法比色实验、集落形成实验、电子显微镜,透射电镜,流式细胞仪分别观察不同浓度罗格列酮0.08μmol/L,0.4μmol/L,2μmol/L,10μmol/L,50μmol/L,作用于SGC7901细胞,对细胞增殖,细胞形态和细胞周期的影响。结果：ROZ可抑制SGC7901细胞的生长以及SGC7901细胞集落的形成,并呈现剂量依赖性,其半数抑制浓度（IC50）约为50μmol/L。透射电镜低倍镜以及高倍下可见凋亡细胞。流式细胞仪结果显示,ROZ可抑制SGC7901细胞,引起G0/G1期细胞大量增加,S期细胞减少,且细胞周期停滞于G1期。结论：ROZ具有抗肿瘤作用,能够抑制SGC7901细胞的增殖并诱导凋亡,这种作用与其诱导细胞周期G0/G1期的停滞和诱导凋亡作用有关。因此,ROZ有望成为胃癌治疗的辅助用药亦或治疗药,PPARγ有潜力成为肿瘤治疗的新靶点。     

罗格列酮对果糖饲养SD大鼠肝肾功能、血脂、血常规的影响

目的:了解罗格列酮(Rosiglitazone)处理果糖饲养的SD大鼠后对肝、肾功能,血常规的影响。方法:将24只成年健康SD大鼠随机分为A、B两组。A组持续喂高果糖饲料1月后再随机分为:①高果糖饲养组;②果糖饲养同时用罗格列酮处理组。B组喂标准饲料1月后随机分为:①对照组;②罗格列酮处理组。采用氧化酶法、放免法等技术方法测定大鼠的空腹血糖、血脂、胰岛素水平,肝功能,肾功能,血常规等指标。结果:与对照组相比:果糖饲养组大鼠直接胆红素、总胆红素、间接胆红素、血糖、胰岛素、总胆固醇、甘油三酯等指标均升高;而总蛋白、钾、钠、氯、胰岛素敏感指数等指标均下降,差异均具有统计学意义(P＜0．05)。而罗格列酮处理组中总胆红素、间接胆红素、尿酸和尿素/肌酐等指标均升高;而总蛋白、球蛋白、钾、钠、氨水平、甘油三酯、血常规细胞数、血红蛋白均下降,差异具有统计学意义(P＜0．05)。与果糖饲养组相比,果糖饲养罗格列酮处理组的总胆红素、直接胆红素、谷草转氨酶、间接胆红素、谷丙转氨酶、总胆固醇均升高;而胰岛素、甘油三酯、钙离子水平均下降差异均具有统计学意义,且前面三个指标的差异更明显(P＜0．05)。结论:罗格列酮在治疗过程中虽改善了果糖饲养SD大鼠所引起的胰岛素抵抗,但会加重肝肾功能障碍;对机体有一定的毒副作用。     

罗格列酮对胰岛素抵抗人肝细胞Angpil3和LXRα基因表达的影响

研究罗格列酮对胰岛素抵抗人肝L02细胞Angptl3基因及与脂代谢相关的LXRα基因的影响.采用高胰岛素诱导法建立胰岛素抵抗模型(IR-L02),分别加入含有和不含罗格列酮的不同葡萄糖浓度培养液培养,用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法(GOD-POD法)检测培养液残存葡萄糖量,并用RT-PCR方法检测基因Angptl3、LXRα mRNA表达水平的变化.结果表明相同葡萄糖浓度下罗格列酮作用组(IR-R组)的培养液残存葡萄糖量比无罗格列酮作用组(IR组)减少;IR-R组的Angptl3、LXRα mRNA表达水平较IR组显著升高(P<0.05).     

罗格列酮对胰岛素抵抗人肝细胞Angpil3和LXRce基因表达的影响

研究罗格列酮对胰岛素抵抗人肝L02细胞Angptl3基因及与脂代谢相关的LXRα基因的影响。采用高胰岛素诱导法建立胰岛素抵抗模型（IR-L02）,分别加入含有和不含罗格列酮的不同葡萄糖浓度培养液培养,用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法（GOD—POD法）检测培养液残存葡萄糖量,并用RT-PCR方法检测基因Angptl3、LXRαmRNA表达水平的变化。结果表明相同葡萄糖浓度下罗格列酮作用组（IR—R组）的培养液残存葡萄糖量比无罗格列酮作用组（IR组）减少;IR—R组的Angptl3、LXRαmRNA表达水平较IR组显著升高（P〈0．05）。     

HPLC测定板蓝根中靛玉红含量的方法

目的:建立板蓝根中靛玉红含量测定方法.方法:用HPLC法,色谱柱:Shim-packCLC-ODS(150 mm×6mm),流动相:甲醇:氯仿(80:20)(0.1%二乙氨,用醋酸调中性),流速:1 mL/min,检测波长:290 nm,柱温:24℃.结果:靛玉红在1.058～16.928 μg/mL的浓度范围内具有良好的线性关系(r=0.999 98),精密度RSD=1.02%,加样回收率为96.87%,重现性RSD=0.94%.结论:本法简单可行,准确性好,重现性高,是板蓝根中靛玉红含量测定的有效方法.     

HPLC法测定紫草涂膜剂中紫草素的含量

目的:测定紫色草涂膜剂中紫草素含量,以制定涂膜剂的质量标准.方法:采用HPLC法,流动相为甲醇-水(75:25),检测波长为516nm.结果:线性方程为Y=1.012×104～3.630×104,r=0.999 0,左旋紫草素在0.184～1.12μg范围内线性关系良好,平均回收率为97.76%,RSD%为2.95%(n=5).结论:建立的方法操作简便,结果准确,重复性好     

HPLC法测定葛花中鸢尾苷的含量

目的：测定8个产地葛花中鸢尾苷的含量,建立葛花中鸢尾苷含量测定的HPLC方法。方法：采用GRACEC18（250mm×4.6mm,5μm）色谱柱,流动相为乙腈-水梯度洗脱,流速为0.8mL/min,紫外检测波长为265nm;柱温为室温。结果：鸢尾苷的峰面积（Y）与浓度（X）在11.8～236.4μg/mL范围内具有良好线性关系,Y=34920X-1156.5,r=0.9995（n=7）;平均加样回收率为103.66%,RSD〈2%（n=9）;测得8批不同产地的葛花药材中鸢尾苷含量在37.00～113.1mg/g。结论：建立了高效液相色谱法测定葛花中鸢尾苷含量的方法,该法准确、可靠,可用于葛花中主要成分鸢尾苷的含量测定;不同产地葛花中均检测到鸢尾苷,但其含量有一定区别。     

HPLC测定葡萄中活性物质—白藜芦醇的含量

采用ＨＰＬＣ法测定葡萄中白藜芦醇的含量。用以Ｃ１８ＯＤＳ为流动２相,检测波长为３０７ｎｍ。在此条件下,样品溶液的进样量在０．２８６－２８．６ｍｇ／Ｌ时,白藜芦醇５的含量与峰面积呈良好的线性关系,回收率为１２３．８５％。     

HPLC法测定银州柴胡中五种皂苷的含量

首次建立HPLC法同时测定银州柴胡中柴胡皂苷a、c、d、e和f五种皂苷含量的方法。流动相为乙腈-水梯度洗脱,柱子为HibarRT RP-18(4.6 mm×250 mm,5μm),流速1.0 mL/min,柱温30℃,检测波长210 nm。柴胡皂苷a、c、d、e和f的线性范围及相关系数分别为:21.78～43.56μg(r=0.9993),3.94～9.85μg(r=0.9994),20.68～51.70μg(r=0.9998),1.67～5.57μg(r=0.9997),1.91～6.70μg(r=0.9992);柴胡皂苷a、d的加样回收率分别为101.5%和98.5%。该方法操作简便,结果准确,重现性好,为柴胡药材多指标质量分析方法的建立和银州柴胡药用提供了参考依据。     

葛根素注射液中葛根素含量的HPLC测定

建立了一种简便、准确、可靠的葛根素测定方法。采用SymmetryC18(3.9mm×150mm,5μm)柱,流动相采用甲醇-水(体积比为3525),流速为1.00ml·min-1,检测波长为250nm。进样量在0.0368μg～0.589μg范围内线性关系良好,(r=0.9994)。该方法简便快速,准确可靠,可用于葛根素注射液的含量测定。同时,测定结果表明两种产品在含量上有差别,因此,保证和进一步提高葛根素注射液质量,并且规范质量标准势在必行。     

高效液相色谱法测定酵母中麦角固醇含量

本文建立了酵母中麦角固醇含量高效液相色谱测定方法。其色谱条件为,色谱柱HYPersilBDSC185u反相柱,流动相为甲醇:水(97∶3),紫外检测波长为283nm。酵母样加碱乙醇皂化、提取、洗涤、蒸干、定量测定。结果表明:标准曲线范围是002—08mg/ml线性良好,最低限量为001mg/ml;日内及日间RSD(n=4)分别在21～40%和24～48%,回收率为960～980%。本方法操作简便、准确、可靠。     

高效液相色谱法分离测定香兰素

用60％乙醇提取香荚兰豆的香兰素,经高效液相色谱法分离,在紫外波长330nm处测定。选取适当的流动相,能快速、准确地测定出香兰素,最低检测含量可达到0．01μg。     

HPLC法测定植物中乌索酸的含量

采用HPLC法测定6种植物中乌索酸的含量,为扩大植物中乌索酸药物资源的开发利用提供分离测定方法。色谱柱为SyrmnetryShieldRP18,流动相甲醇-水-磷酸(88：12：0．1),流速1．0mL／min,检测波长210m,柱温2．5℃。该方法的线性范围为0．192-3．072μg,R=0．9999,平均回收率为98．12％,RSD=1．7％(n=5)。HPLC法测定乌索酸含量灵敏、准确、重现性好。     

HPLC法测定花生根中白藜芦醇的含量

本文采用反相高效液相色谱法测定了花生根中白藜芦醇的含量.选用ODS-C18色谱柱(200 mm×4.6mm,5μm),以甲醇-水(4555)为流动相,流速为0.5 mL/min,紫外检测波长为303nm.结果表明,白藜芦醇峰面积与其浓度之间呈现良好的线性关系,线性回归方程为Y=15879.28X+12350.2,相关系数为0.9996.方法简单,快速,精密度好,回收率为98.8%,相对标准偏差为1.79%.