土曲霉金色变种AT8951菊粉酶的纯化和性质的研究

土曲霉金色变种ＡＴ８９５１菊粉酶粗酶液经硫酸铵分段沉淀、ＤＥＡＥＣｅｌｕｌｏｓｅＤＥ３２离子交换、超滤、ＳｅｐｈａｄｅｃＧ－１５０凝胶过滤和ＦＰＬＣ,获得两个菊粉酶组分ＥＩ和ＥＩＩ,经分析型ＦＰＬＣ和ＰＡＧＥ鉴定为单一纯和分析纯。ＥＩ分量为６６ＫＤ,适适作用温度和ＰＨ分别５５℃和５．８;ＥＩＩ分子量为５６ＫＤ,最适作用温度为５７℃,最适ＰＨ为６．０。ＥＩ和ＥＩＩ皆为糖蛋白,多糖含量分别为２４．７％     

甘薯叶片蔗糖酶的分离纯化及其部分性质

纯化酶经聚丙烯酰胺凝胶电泳显示单一蛋白带,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示一条蛋白带,其亚基分子量为３９．８ｋＤ。用Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ Ｓ－２００凝胶过滤测得全酶的分子量为７９．４ｋＤ,该酶由两个相同亚基组成。其表观Ｋｍ为１２ｍｍｏｌ／Ｌ,Ｖｍａｘ为９９．５ｍｇ还原糖ｍｇ＾－１ｐｒｏｔｅｉｎ ｈ＾－１。     

黑曲霉M89菊粉酶的提纯与性质

黑曲霉(Aspergillusniger）M89菊粉酶经硫酸铵分级盐析、SephadexG-200凝胶过滤、DEAE-纤维素离子交换层析、聚丙烯酞胺凝胶电泳（PAGE）制备分离,提纯到4个菊粉酶组分EⅠ、EⅡ、EⅢ和EⅣ。用SDS-PAGE测定分子量分别为102．6、97．9、61．2和36．5kD;用等电聚焦电泳测得其等电点分别为4．15、4．24、4．48和4．15。4个组分的最适反应温度均为55～60℃;EⅠ的最适pH为pH4．0,其余3个组分为pH4．5．各组分的热稳定性有一定差异,分子量越小的组分,热稳定性越好,55℃处理90min,EⅠ有一定的热失活,其余3个组分无活力丧失,4个组分都是外切酶。     

外切菊粉酶的酶学研究进展

菊粉富含于菊芋、菊苣等多种菊科植物中,是一种来源丰富的可再生资源。菊粉是一种由D 呋喃果糖经β-2, 1-糖苷键连接,还原端经α-1, 2-糖苷键连接1个葡萄糖残基构成的果聚糖。菊粉能被菊粉酶水解,生产果糖、高果糖浆、菊粉寡糖,可通过微生物发酵生产燃料酒精等产品,在食品、生物能源、医疗保健等方面都有重要应用,受到广泛关注。介绍外切菊粉酶的分类、来源、结构和催化机理,重点总结近10年微生物来源外切菊粉酶的重组表达和酶学性质情况,简述外切菊粉酶在食品、能源等方面的应用,展望外切菊粉酶的研究热点及方向。     

青霉菊粉酶的产生和性质

由淀粉通过葡萄糖异构化生产高果糖糖浆,生产上受到原料的限制。果糖另一种来源是菊粉（Inulin）。菊粉是以β-2,1果糖苷键连接的一种多聚果糖,其末端含有一个蔗糖残基,它作为贮存性多糖大量存在于菊芋（Helianthus tuberosus）、菊巨(chicoryintybus)、大丽花（Dahlia pinnata）等多种植物中,至今尚未得到很好利用。菊粉可通过化学法或酶法水解生成果糖。利用菊粉酶     

蔗糖酶和葡萄糖氧化酶的共固化

＃ 本文研究了用吸附交联技术共固定化蔗糖酶和葡萄糖氧化酶(GOD)的方法,考查了共固定化酶的动力学性质。试验结果表明:与溶液酶相比较,固定化蔗糖酶和GOD的响应滞迟期分别为3分钟和2分钟,稳态响应时间增加了6分钟和4分钟,Km值增大,pH—活力曲线变宽,最适pH值分别增大0.7和0.64,最适温度则降低7.3℃和16℃。 以活性氧化铝作载体,戊二醛作交联剂制备的共固定化蔗糖酶和GOD,其蛋白质固定化率为62.9％,分解葡萄糖的总速度为441.6IU,当蔗糖浓度为0.2％,以内时其反应速度与蔗糖的浓度呈正相关(r=0.996),使用半衰期1623次,在4℃下保存120天活力残存为83.7％。     

一个外切菊粉酶基因的克隆表达及酶学性质

从马克斯克鲁维酵母（Kluyveromycesmarxianus）DSM5418中克隆出外切菊粉酶（INU）的成熟肽编码区域,在毕赤酵母（Pichiapastoris）GS115中实现了高效分泌表达,体积酶活力达到15．27U／mL,进一步对重组酶进行了纯化与表征。经过（NH4）2SO4沉淀、透析和分子筛过滤后,得到了纯度大于95％的纯化重组酶,SDS-PAGE分析发现INU的表观相对分子质量为9．0×10^4,大于理论预测值6．0×10^4。纯化酶液的表征结果表明,INU的最适温度和最适pH分别为55℃和5．0,在此条件下INU对菊粉的K。值和比酶活分别为1．90mmol／L和433．86U／mg,对蔗糖的K。值和比酶活分别为27．81mmol/L和1249．49U／mg,I/S值为0．34;HPLC分析表明,INU酶解菊粉的产物由果糖和葡萄糖组成;金属离子Mn2＋、Fe3｜、K｜和Co2＋对酶有促进作用,而Zn2＋、Cu2＋、Ni2＋、SDS和EDTA对酶活力有不同程度的抑制作用。     

海枣曲霉β—葡萄糖苷酶的提纯与性质

A beta-glucosidase has been purified to electrophoretically homogeneity from the wheat bran culture of Aspergillus phoenicis by PEG 6000-phosphate biphasic separation, column chromatography on Sephadex G-100, DEAE-Sephadex A-50 and SE-Sephadex C-50. The enzyme showed optimal activity at pH 5.0 and 60 degrees C. It was stable in the pH range of 4.0-7.5 and up to 55 degrees C. The enzyme activity was strongly inhibited by Ag+ and Hg2+. The molecular weight of the enzyme was 118000 as determined by SDS-PAGE and 195000 by gradient-PAGE. The isoelectric point was pI 3.95 as determined by PAGIF.     

毛壳霉内切菊粉酶的纯化与性质

毛壳霉 (Chaetomiumsp .)C34发酵液经硫酸铵分级沉淀、DEAE 纤维素 11离子交换层析、Q SepharoseFastFlow离子交换层析、SephacrylS 2 0 0凝胶过滤、PhenolSepharoseTM HP疏水层析 ,得到电泳纯的内切菊粉酶组分 ,纯化倍数为 30 8倍 ,活力回收率为 7 7%。用SDS PAGE测得该酶亚基的分子量为 6 6kD。菊粉酶的最适pH为 6 0 ,最适温度为 5 0～ 5 5℃。菊粉酶在 5 0℃以下 ,pH5 0～ 8 0时较稳定。Cu2 完全抑制酶的活性 ,Mn2 、Zn2 、Fe2 、EDTA以及NBS(N bromosuccinimide ,N 溴代丁二酰亚胺 )对该酶有很强的抑制作用。该酶对菊粉有较强底物专一性 ,产物主要为低聚果糖 ,也可作用于蔗糖 ,I S值为 2 0。以菊粉为底物时 ,Km 为 0 199mmol L ,Vmax为 115 μmol (mg·min)。     

海枣曲霉β—木糖苷酶的提纯和性质

从海枣曲霉麦麸培养物抽提液中,通过聚乙二醇６０００－磷酸钾缓冲液双水相分离,相继用Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００凝胶过滤、ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ－５０离子交换柱层析、羟基磷石吸附层析、ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ－５０离子交换层析、ＳＥ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｃ－５０离子交换层析以及最适温度为６５℃,在ｐＨ３．５－６．５之间稳定,酶保温３０分钟时的半失活温度（ｔ１／２）为６８℃。酶的分子量为９     

土曲霉金色变种AT8951菊粉酶的纯化和性质的研究

土典霉金色变种AT8951菊粉酶粗酶液经硫酸铵分段沉淀、DEAE Cellulose DE32离子交换、超滤、Sephadex G-150凝胶过滤和FPLC,获得两个菊粉酶组分EⅠ和EⅡ,经分析型FPLG和PAGE鉴定为单一纯和分析纯。EⅠ分子量为66KD,最适作用温度和pH分别55℃和5.8;EⅡ分子量为56KD,最适作用温度为57℃,最适pH为6.0。EⅠ和EⅡ皆为糖蛋白,多糖含量分别为24.7％和22％,都属于内切酶。本文还对EⅠ和EⅡ的Km值和I/s值,温度、pH、离子对酶活作用的影响等进行了研究。     

蔗糖酶和GOD的共固定化研究

本文研究了用吸附交联技术共固定化蔗糖酶和葡萄糖氧化酶（ＧＯＤ）的方法,考查了共固定化酶的动力学性质。试验结果表明：与溶液酶相比较,固定化蔗糖酶和ＧＯＤ的响应滞迟期分别为３分钟和２分钟,４态响应时间增加６分钟和４分钟,Ｋｍ值增大,ｐＨ─活力曲线变宽,最适ｐＨ值分别增大０．７和０．６４,最适温度则降低７．３℃和１６℃。以活性氧化铝作载体,戊二醛作交联剂制备的共固定化蔗糖酶和ＧＯＤ,其蛋白质固定化率为９２．９％,分解葡萄糖的总速度为４４１．６ＩＵ,当蔗糖浓度在０．２％以内时其反应速度与蔗糖浓度呈正相关（ｒ＝０．９９６）,使用半衰期１６２３次,在４℃下保存１２０天活力残存为８３．７％。     

植物中蔗糖酶的生理功能研究

蔗糖分解为葡萄糖和果糖等六碳糖是在蔗糖酶的催化下进行的,催化产物为植物的生长、发育提供碳源和能源。蔗糖酶还参与细胞的生长发育、信号传导、及对各种胁迫的响应等方面。     

温特曲霉延胡索酸酶的提纯及性质研究

报道经硫酸鱼精蛋白沉淀、硫酸铵分级沉淀和葡聚糖凝胶G-200柱层析,再经冰冻干燥后从温特曲霉F-871菌体中获得延胡索酸酶,纯化倍数为31.70,回收率为36.64％,酶比活性为24.6U/mg。酶学性质研究表明:酶作用最适pH和温度分别为8.0和30℃,稳定pH范围为6.0～8.5,酶在35℃下保温30min后仍残留约90％以上的活力。     

固定化克鲁维酵母Y-179外切菊粉酶的研究

鹰嘴豆孢克鲁维酵母(Kluveromyces cicerisporus Y-179)分泌的糖基化菊粉外切酶经高碘酸钠氧化其分子表面的糖链产生醛基,再共价结合于氨基型固定化载体ZH-HA上,固定化酶活力达到4 000 U/g湿载体。所制备的固定化酶在pH 3.5和70℃温度下表现出最大反应活性,该固定化酶pH稳定性和热稳定性较游离酶明显提高。固定化酶在分批式反应器中重复水解菊粉50批次,活力没有明显损失,表现出良好的工作稳定性。     

青霉胞外菊粉酶的纯化和性质研究

青霉菌（ＰｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍＳＰ．９１－４）产生的胞外菊粉酶（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｎｕｌｉｎａｓｅ）粗酶液,经硫酸铵沉淀,超滤浓缩,Ｓｅｐｈａｄｅｘ－Ｇ－１００凝胶过滤,ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｃｅｌ离子交换柱层析等步骤,得到提纯３０倍的酶Ｅ。酶Ｅ反应时最适ｐＨ４．５,最适温度为５０℃,在ｐＨ４．７～７．６范围内,温度５０℃以下酶Ｅ活性稳定;其活性受Ａｇ＾＋,Ｃｕ＾２＋ＰＣＭＢ强烈抑制。采用