琥珀酸脱氢酶与线粒体内膜的结合——泛醌的影响

猪心肌制剂经含水4%丙酮抽提除去泛醌(Q)及部分脂后,其琥珀酸细胞色素c 还原酶活力丧失,但在反应系统中添加Q 可恢复此活力。去Q 制剂再经碱处理除去琥珀酸脱氢酶后,与新鲜制备的水溶性琥珀酸脱氢酶重组,其重组活力,包括结合的琥珀酸脱氢酶和琥珀酸细胞色素还原酶活力,与正常重组(未去除Q 的)相比,结果相似,指出Q 对琥珀酸脱氢酶与膜的结合无明显的影响,脂环境也不是重要因素。     

琥珀酸脱氢酶与线粒体内膜的结合——泛醌的影响

猪心肌制剂经含水4%丙酮抽提除去泛醌(Q)及部分脂后,其琥珀酸细胞色素c还原酶活力丧失,但在反应系统中添加Q可恢复此活力。去Q制剂再经碱处理除去琥珀酸脱氢酶后,与新鲜制备的水溶性琥珀酸脱氢酶重组,其重组活力,包括结合的琥珀酸脱氢酶和琥珀酸细胞色素还原酶活力,与正常重组(未去除Q的)相比,结果相似,指出Q对琥珀酸脱氢酶与膜的结合无明显的影响,脂环境也不是重要因素。     

钙调素参与玉米线粒体琥珀酸脱氢酶活性的调节

经DEAE C-32柱纯化的玉米(Zea mays L.)线粒体琥珀酸脱氢酶(SDH),用NAD激酶(NADK)法测定时,无钙调素(CaM)活性,说明不存在游离CaM;而用ELISA法测定总CaM时,却可检测到CaM。纯化的SDH加热处理后,能激活NADK,可能加热释放出游离CaM。纯化SDH的电泳分析表明,天然聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)只显示1条主带;而SDS-PAGE则出现67.0kD、30.0kD、16.7kD 3条带,前两条带与SDH的大、小亚基分子量一致,第三条带与CaM电泳迁移率一致。上述结果说明CaM可能与SDH处于结合状态,而且其活性受CaM调节。     

去垢剂对线粒体内膜胆碱脱氢酶的增溶

五种去垢剂都能够增溶鼠肝线粒体胆碱脱氢酶,但是其中TritonX-100、Lubrol WX和Brij58等非离子型去垢剂对脱氢酶活力有抑制作用,抑制呈混合型。另一方面增溶的胆碱脱氢酶在去氧胆酸钠和胆酸钠等阴离子去垢剂溶液中则容易失活。线粒体经过冻化或在增溶时提高离子强度可以提高去垢剂的增溶效果,因而降低所需去垢剂的浓度。     

琥珀酸脱氢酶的研究——琥珀酸脱氢酶还原细胞色素c的性质

新鲜制备之水溶性琥珀酸脱氢酶能还原细胞色素c,此还原细胞色素c 之能力与其重组琥珀酸氧化酶系的能力呈平行关系,二者均很快减弱,数小时之内即全部丧失。还原细胞色素c 之能力受金属螯合剂如邻二氮菲,硫茂甲酰基三氟丙酮及组氨酸等试剂的抑制,抗霉素A 对它则无影响。除了能还原细胞色素c 之外,其他如氮蓝四唑、2,6-二氯酚靛酚均可作为受体,并且亦很快失活。泛醌-5不能被还原,以其他受体测活力时,泛醌-5亦无激活作用。经分析,其异咯嗪、非血红素铁以及不稳定硫之比为1∶(8～10)∶10。     

琥珀酸脱氢酶的研究——琥珀酸脱氢酶还原细胞色素c的性质

新鲜制备之水溶性琥珀酸脱氢酶能还原细胞色素c,此还原细胞色素c之能力与其重组琥珀酸氧化酶系的能力呈平行关系,二者均很快减弱,数小时之内即全部丧失。还原细胞色素c之能力受金属螯合剂如邻二氮菲,硫茂甲酰基三氟丙酮及组氨酸等试剂的抑制,抗霉素A对它则无影响。除了能还原细胞色素c之外,其他如氮蓝四唑、2,6-二氯酚靛酚均可作为受体,并且亦很快失活。泛醌-5不能被还原,以其他受体测活力时,泛醌-5亦无激活作用。经分析,其异咯嗪、非血红素铁以及不稳定硫之比为1:(8～10):10。     

琥珀酸脱氢酶实验的优化设计

琥珀酸脱氢酶作用的实验是《生物化学》课程的重要实验之一。由于材料来源、成本、操作、结果等在实验教学中存在的问题,影响了该实验的效果和开出率。采用普通鸽子胸脯处肌肉作为实验材料,并对实验条件和程序进行优化,从而使教学取得了较好的效果,实验开出率也得以提高。     

线粒体的内膜与外膜

线粒体,做为细胞内的“动力工厂”,几乎存在于所有真核生物的细胞内。在电子显微镜下,可以清楚地看到,线粒体是由双层膜即内膜和外膜构成的细胞器。我们知道,生物膜的主要成份是脂类和蛋白质,在一般的生物膜中,脂类和蛋白质各占其干重的50%左右。线粒体的外膜与一般的生物膜类似,但内膜则不同,其蛋白质约占80%,而脂类仅占20%。这说明线粒体内膜上的蛋白质含量明显地高于包括线粒体的外膜在内的一般的生物膜。我们曾用冰冻蚀刻复型的电镜制样技术,观察了仓鼠肾传代细胞(BHK-21)中的线粒     

琥珀酸脱氢酶的固定化及稳定性研究

琥珀酸脱氢酶(SDH)在细胞内是位于线粒体内膜上的酶,在呼吸链电子传递酶系中是一重要的环节。早在1955年,我国王、邹、汪等已将SDH从膜上拆离纯化,并进行了性质研究。酶从膜上分离后很不稳定,特别是当暴露在空气中,失活更为迅速。我们试图用已知结构的人工载体将SDH固定化,并观察固定化对酶稳定性的影响。本文报道这方面研究的初步结果。     

琥珀酸脱氢酶的x光光谱研究

使用同步辐射光源,以荧光模式研究了琥珀脱氢酶的X光吸收光谱,表明所含的铁硫蛋白中,铁处于硫的四面体配位中;由氧化态及还原态的铁K边化学位移大小可知每个铁原子得失电子个数,SDHu(A)为0.39,,SDH(I)为0.30,,都比1小得多;表明有配位体容纳电子的作用,也表明有重组活性的SDH(A),具有较强的接受电子能力.文中引用量子化学计算结果对光谱现象予以合理的解释.     

耳蜗琥珀酸脱氢酶显示方法的改进

在采用耳蜗顶部灌流方法测定琥珀酸脱氢酶的活性时,本文提出了两点改进,实验动物为豚鼠:(1)孵育前用2%戊二醛磷酸盐缓冲液(pH7.4,4℃)将耳蜗预固定30min,再冰凉(—20——40℃)约3min,以便消除血管纹屏障,使该部位和柯蒂氏器官的琥珀酸脱氢酶活性能同时被显示出来。(2)在孵育液中加入细胞呼吸抑制剂(阿密妥),可使耳蜗背景色变淡,从而减少假阳性现象。通过对一些豚鼠的实验观察,所得结果基本一致。     

肝线粒体琥珀酸氧化机制的研究

(1)DNP对于琥珀酸氧化的影响随浓度不同而异,低浓度时,呼吸受激活,其程度随浓度升高而增強,不出現抑制現象。高浓度(30μM以上)DNP只引起短时間氧化激活,随即引起抑制,随浓度升高,抑制出現愈早,氧化激活愈小,預先加入Amytal足以防止上述抑制現象,在抑制出現后加入Amytal亦能使琥珀酸氧化部分恢复。(2)砷酸盐激活的琥珀酸氧化仅在有Amytal的条件下,才出現抑制現象。(3)ATP对上述两种情况引起的琥珀酸氧化抑制都具有一定的解除作用。(4)就实驗結果所做分析支持琥珀酸氧化需要能量激活的看法。     

琥珀酸脱氢酶缺陷型肾癌的临床病理特征

目的探讨琥珀酸脱氢酶(succinate dehydrogenase, SDH)缺陷型肾癌的临床病理特征、诊断及治疗。方法分析SDH缺陷型肾癌的临床病理特征、免疫表型及分子遗传学特征。结果肾肿瘤灶呈实性、灰黄色,质软。镜检见肿瘤边界清楚,细胞排列呈实性、巢状、小管状,细胞质空泡状,胞质内含嗜酸性或浅染的絮状物质,未见核分裂像及坏死。免疫组织化学染色显示PAX8、CK(AE1/AE3)、EMA、P504s均阳性,SDHB阴性。患者组织蜡块全外显子测序结果提示SDHB基因外显子区域发现一处杂合突变。(c.725G>Ap.R242H)。结论 SDH缺陷型肾癌发病率罕见,具有特征性的病理组织形态学表现、免疫表型呈特征性的SDHB表达缺失。在临床诊疗过程中,应详细询问患者病情及家族遗传史,必要时进行基因检测明确诊断。     

呼吸链电子传递与线粒体内膜流动性

本文报告用稳态荧光各向异性研究呼吸链底物氧化启动电子传递时线粒体内膜的流动性变化。结果表明呼吸链底物使内膜流动性增大,磷脂分子脂酰链的活动度增加(从2位碳到12位碳)。FCCP(p-trifluoromethoxycarbonylcyanide phenylhydrazone)取消H⁺梯度时底物仍可使内膜流动性增加,提示流动性的增加与底物氧化启动的电子沿呼吸链的传递过程密切相关。     

脂质膜体与线粒体内膜的融合

<正> 膜融合现象在细胞免疫、细胞识别和相互作用、病毒感架、细胞分泌以及细胞器之间相互关系等方面均有重要意义。利用人工脂质膜体(liposome)与细胞(器)膜之间的融合,不但为阐明上述问题的分子机理提供了一种模型,而且将为细胞生物工程研究提供手段。本文是我们实验室关于脂质膜体与鼠肝线粒体内膜体(mitoplast)融合的一系列研究结果的简要报道。