妇女生殖道单纯疱疹病毒Ⅱ型和人乳头瘤病毒的感染及其相关关系的研究

为探讨妇女生殖道单纯疱疹病毒Ⅱ型（ＨｅｒｐｅｓＳｉｍｐｌｅｓＶｉｒｕｓ２,ＨＳＶ２）和人乳头瘤病毒（ＨｕｍａｎＰａｐｉｌａｍａｖｉｒｕｓ,ＨＰＶ）的感染及其相关关系,我们应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）对４８例患有性病、生殖道感染的妇女和３９例正常妇女进行了下生道ＨＳＶ２、ＨＰＶ的检测。ＨＳＶ２在实验组和对照组妇女中的感染率分别是７２９％和２５６％,两组有极显著性差异（Ｐ＜００１）;ＨＰＶ在实验组和对照组妇女中的感染率分别是５３３％和３３３％,两组无显著性差异（Ｐ＞００５）;两组中ＨＳＶ２、ＨＰＶ双阳性率分别是４５８％（２２／４８）和２３１％（９／３９）,有显著性差异（Ｐ＜００５）;在两组共８７份标本中,ＨＳＶ２和ＨＰＶ双阳性者占３１例,阳性率是３５６％。统计学分析表明：ＨＳＶ２和ＨＰＶ感染之间有极显著的相关性（Ｘ２＝２４０８,Ｐ＜００１）。研究表明：患有生殖系感染和性病妇女其ＨＳＶ２或ＨＰＶ和ＨＳＶ２混和感染的机率显著高于正常妇女,ＨＳＶ２和ＨＰＶ的感染具有协同作用。由于这两种病毒均与宫颈癌的发生有关,它们在生殖道中感染的相互作用机理有待于进一步研究。     

乙型肝炎病人重叠感染丙型肝炎的评价

应用ＥＬＩＳＡ和ＰＣＲ法检测５０２例乙肝病人血清,４０１例ＨＢｓＡｇ阳性血清中,有１１４例（２８．４％）抗－ＨＣＶ和ＨＣＶＲＮＡ双项阳性,２５例（６．２％）ＨＣＶＲＮＡ单项阳性;２１例（５．２％）抗－ＨＣＶ单项阳性。将ＨＢｓＡｇ乙肝病人分成ＨＢＶＤＮＡ,ＨＢｅＡｇ阳性组和ＨＢＶＤＮＡ,ＨＢｅＡｇ阴性组。前者抗－ＨＣＶ阳性率为１１．６％～２０．５％,ＨＣＶＲＮＡ阳性率为１６．２％～２０．５％。后者抗－ＨＣＶ阳性率为２０．２％～５５．６％,ＨＣＶＲＮＡ阳性率为２３％～６０．３％。结果说明长期携带ＨＢＶ者和慢性乙肝病人均可重叠ＨＣＶ感染。ＨＢＶＤＮＡ阳性组抗－ＨＣＶ和ＨＣＶＲＮＡ阳性率明显高于ＨＢＶＤＮＡ阳性组     

乳腺癌HSV—1,HSV—2与c—erbB—2的免疫组化研究

采用免疫组织化学Ｓ－Ｐ法检测５２例手术切除乳腺癌组织ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白和ＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２表达情况。结果发现癌组织中ｃ－ｅｒｂＢ－２阳性３４例（６５．４％）;ＨＳＶ－１阳性３８例（７３．１％）;ＨＳＶ－２阳性１５例（２８．８％）。癌旁组织３２例,阳性分别为３例（９．４％）;１２例（３７．５％）;２例（６．３％）。乳腺癌中ｃ－ｅｒｂＢ－２阳性率明显高于癌旁组织。乳腺癌及癌旁的ＨＳＶ－１阳性率明显高于ＨＳＶ－２,乳腺癌ｃ－ｅｒｂＢ－２阳性组中ＨＳＶ－１和ＨＳＶ－２的表达有显著差异,而在阴性组二者无差异,提示乳腺癌的发生可能和ＨＳＶ－１感染密切相关,ｃ－ｅｒｂＢ－２表达也可能和ＨＳＶ－１感染有关。     

血清检测抗-HCV和用HCV RNA筛查献血员HCV感染者的研究

为了证实在献血员中筛查献血员ＨＣＶ感染血清标志物的必要性，对５００名献血员进行血清抗－ＨＣＶ检测，阳性１４例（２８％），弱阳性１６例（３２％），对１６例弱阳性供血者加查ＨＣＶＲＮＡ，７例阳性。提示，对供血者常规筛查ＨＣＶ血清标志是必要的。     

肝癌组织中HBV核心基因启动了突变的研究

为深入了解乙肝病毒（ＨＢＶ）致癌机理,用磁式ＰＣＲ对广西１４例血清ＨＢＶ ＤＮＡ阳性的原发性肝癌患者癌组织、１０例乙型病毒性肝炎患者血清及１０例乙肝病毒无症状携带者血清ＨＢＶ核心基因启动子进行扩增,阳性者用Ｓａｎｇｅｒ氏双脱氧法做序列分析,发现肝癌组织１０例ＰＣＲ阳性,阳性率７１．４％,所有ＰＣＲ阳性标本的整合体均有乙肝病毒核心基因启动子双突变序列（ｎｔ１７６２Ａ→Ｔ,１７６４Ｇ→Ａ）,并且在其财     

肺癌中抗酸菌L型感染与PCNA及癌基因蛋白表达关系的研究

用改良抗酸染色及免疫组化染色（Ｓ—Ｐ）法探讨抗酸菌Ｌ型感染、增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）、Ｐ２１、ｃ－ｅｒｂＢ－２等癌基因蛋白表达在肺癌发生、发展中的作用及其相互关系。结果显示：（１）５０例肺癌中抗酸菌Ｌ型感染率为４２０％,伴抗酸菌Ｌ型感染者,ＰＣＮＡ指数显著增高;（２）５０例肺癌中Ｐ２１、ｃ－ｅｒｂＢ－２阳性表达率分别为４４０％和３４０％;且随肺癌分期的增加及淋巴结转移而显著增高。结果表明抗酸菌Ｌ型感染可能是肺癌的重要因素之一;Ｐ２１、ｃ－ｅｒｂＢ－２表达预示肺癌预后不良;抗酸菌Ｌ型感染和癌基因蛋白可能在肺癌的不同发展阶段起作用。     

戊型肝炎病人血清抗—HEV IgG与IgM和HEV RNA的动态变化

利用酶联免疫试验（ＥＩＡ）及逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）,检测了２１０份急性非甲非乙非丙肝炎患者血清和４０例戊型肝炎（戊肝）病人系列血清。在急性非甲非乙非丙肝炎血清中,抗－ＨＥＶ ＩｇＧ、抗－ＨＥＶ ＩｇＭ和ＨＥＶ ＲＮＡ阳性率分别为６２．８６％、４５．２３％和４０．４８％。在戊肝系列血清检测中,抗－ＨＥＶ ＩｇＧ阳性率发病１个月内为９２．５％,发病２￣６个月１００％,１２个月９４．７％,     

影响干扰素治疗慢性乙型肝炎疗效因素分析

为了解重组干扰素α２ｂ治疗慢性乙型肝炎疗效的影响因素,对住院治疗的１０８例慢性乙型肝炎进行研究。治疗前所有病例ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、ＨＢＶＤＮＡ均阳性,ＡＬＴ均大于正常值３倍。结果发现,总有效率女性高于男性（Ｐ＜００５）;病程短于３年者明显优于长于３年者（Ｐ＜００１）;ＣＡＨ明显高于ＣＰＨ（Ｐ＜００１）。９例治疗无效者,２例检出前Ｃ区变异;１例野生株和变异株混合感染者疗程结束后表现为无效。４７例治疗无效者（包括部分复发者）,检出干扰素中和抗体２例;结合抗体６例。治疗期间有类流感症状者显效率明显高于无反应者（Ｐ＜００１）;总有效率高于无反应者（Ｐ＜００５）。治疗中ＡＬＴ升高大于基值２倍以上者疗效更好（Ｐ＜００１）。结果表明,干扰素治疗慢性乙型肝炎疗效的影响因素较多。     

HBV-DNA与乙型肝炎血清标志物的相关性分析

目的：探讨乙型肝炎病毒（HBV）DNA载量与其血清标志物的相关性。方法：运用荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）、酶联免疫吸附实验（ELISA）分别检测503例患者HBV．DNA载量和HBV血清标志物。根据HBV血清标志物结果分为大三阳组、小三阳组、少见模式组、抗体阳性及全阴组,比较各组间HBV—DNA的阳性率及定量值。结果：在大三阳组、小三阳组、少见模式组、抗体阳性及全阴组HBV—DNA的阳性率分别为90％、65．1％、65．2％、2．0％,HBV—DNA的定量结果（10gHBV—DNA）别为6．32±1．96、2．01±1．68、3．48＋2．52f抗体阳性及全阴组阳性例数过低,不纳入统计）。大三阳组HBV—DNA的阳性率显著高于小三阳组（P〈0．05）。大三阳组、小三阳组HBV—DNA的阳性率与少见模式组比较,差异均无统计学意义（P〉0．05）,但大三阳组、小三阳组、少见模式组HBV．DNA的阳性率均显著高于抗体阳性及全阴组（P〈0．01）。HBsAg、HBeAg阳性组HBV—DNA的阳性率分别显著高于HB—sAg、HBeAg阴性组（P〈0．01）。小三阳组、少见模式组HBV．DNA载量均显著低于大三阳组（P〈0．01）,少见模式组HBV—DNA载量显著高于小三阳组（P〈0．05）。结论：HBV—DNA的阳性率与HBeAg、HBsAg相关;HBV—DNA栽量与HBV血清标志物模式相关。     

Epstein—Barr病毒膜抗原在中国仓鼠卵巢（CHO）细胞中的表达

将切去３＇端穿膜序列的ＥＢ病毒膜抗原（ＭＡ）基因,插入ｐＳＶ２－ｄｈｆｒ质粒的ＳＶ４０早期启动子下游,构建了真核表达载体ｐＳＶ２－ｄｈｆｒＧＰＴＲ,使两个ＳＶ４０早期启动子分别调控ＭＡ和二氢叶酸还原酶（ｄｈｆｒ）基因。将该重组质粒转化ＣＨＯ－ｄｈｆｒ细胞。在选择培养基中筛选阳性克隆,用氨甲喋呤加压扩增,建立了表达ＥＢＶ－ＭＡ的克隆细胞系。Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｏｌｔ分析证明,所表达的蛋白的分子量大约为     

Epstein─Barr病毒膜抗原在中国仓鼠卵巢（CHO）细胞中的表达

将切去３’端穿膜序列的ＥＢ病毒膜抗原（ＭＡ）基因,插入ｐＳＶ２－ｄｈｆｒ质粒的ＳＶ４０早期启动子下游,构建了真核表达载体ｐＳＶ２－ｄｈｆｒＧＰＴＲ,使两个ＳＶ４０早期启动子分别调控ＭＡ和二氢叶酸还原酶（ｄｈｆｒ）基因。将该重组质粒转化ＣＨＯ－ｄｈｆｒ细胞,在选择培养基中筛选阳性克隆,用氨甲喋呤加压扩增,建立了表达ＥＢＶ－ＭＡ的克隆细胞系。ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析证明,所表达的蛋白的分子量大约为３４０ｋｄ和２２０ｋｄ。经过细Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ２Ｂ琼脂糖凝胶层析初步纯化的抗原与福氏佐剂混合免疫小鼠,２周后小鼠血清中出现明显的ｇｐ３４０／２２０特异性抗体,表明切去嵌膜区结构的ＥＢＶ－ＭＡ基因在ＣＨＯ细胞中的表达产物具有同天然膜抗原相似的分子量大小、糖基化程度、免疫特异性和免疫原性,可望成为ＥＢ病毒人用基因工程亚单位疫苗。     

HIV—1 SF2株env基因（120）在大肠杆菌中的表达

运用基因重组技术,将ＨＩＶ－１ ＳＦ２株编码外膜蛋白ｇｐ１２０的ｅｎｖ基因片段与原核载体ｐＢＶ２２０进行重组,构建成质粒ｐＢＶＳＦ２ｅｎｖ,并在大肠杆菌（Ｅ．ＣｏｉｌＤＨ１０ｂ）中获得表达,经Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ反应证实,该重组蛋白与来自ＨＩＶ－１感染者的血清（含多克隆抗体）发生特异性反应。     

两株乙型肝炎病毒基因组结构分析及其复制和抗原表达特性的比较

为从全基因组水平研究乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的核苷酸结构及复制和抗原表达特性,分别从２例ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ阳性、ＨＢＶ ＤＮＡ滴度为１０＾１４和１０＾１３拷贝／ｍｌ的慢性乙型肝炎患者（编号为５６和２－１８）血清中扩增、克隆了ＨＢＶ全基因组,并测定了核苷酸序列。两株病毒基因组转染ＨｅｐＧ２细胞的培养上清中ＨＢｓＡｇ水平基本相同,但＃５６毒株表达的ＨＢｅＡｇ约为＃２－１８株的３倍,Ｓｏｕｔｈｅｒｍ印     

两例丙型肝炎病毒(HCV)和乙型肝炎病毒(HBV)重叠感染者的HCV核心区cDNA序列分析

从临床肝病患者中选择两例ＨＣＶ和ＨＢＶ重叠感染者ＨＳＱ和ＳＺＨ,他们血清中的生化指标丙氨酸转氨酶（ＡＬＴ）持续异常,肝活检病理示有严重的肝损伤。在ＡＬＴ异常期,血清学检测结果为ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ阳性,抗ＨＣＶＩｇＧ（包括Ｃ２２、Ｃ３３ｃ）阴性,但套式ＰＣＲ检测ＨＣＶＲＮＡ阳性,核心区ｃＤＮＡ序列分析发现该区有１个密码子（ＧＧＣｎｔ３８５—３８７）缺失,对应缺失的氨基酸是甘氨酸（ＧＬＹ）,从血清学检测和序列分析结果推测,在ＨＣＶ和ＨＢＶ重叠感染中,ＨＢＶ和ＨＣＶ均可处于持续复制状态,抗ＨＣＶＩｇＧ抗体阴性可能是ＨＣＶ的多蛋白前体翻译和病毒颗粒装配受到ＨＢＶ干扰的结果。     

复制型HBV转基因小鼠的遗传与繁育研究

本文采用类似系祖建系的方法,对复制型ＨＢＶ转基因小鼠模型的１７、２１、２５三个系列进行了繁育,通过ＰＣＲ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ分子杂交的方法,检测三个系列小鼠尾组织和血清的ＤＮＡ样品,以确定ＨＢＶ基因的整合和复制情况。结果表明,ＨＢＶ基因已稳定地遗传至第五代（Ｆ５）,且各世代小鼠血清中都存在ＨＢＶＤＮＡ,此外,整合阳性小鼠的血清中能测出ＨＢＶＤＮＡ的比率很高,Ｆ１代为９４．４４％（１０２／１０８）,Ｆ２、Ｆ３代为９５．３１％（６１／６４）,故在繁育中可以通过测血清中的ＨＢＶＤＮＡ来确定小鼠是否整合。     

病毒性肝炎HAV，HBV，HCV，HDV和HEV重叠感染的研究

采用ＥＬＩＳＡ法检测了１０８例乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染者血清中的五种肝炎病毒──甲型（ＨＡＶ）、乙型（ＨＢＶ）、丙型（ＨＣＶ）、丁型（ＨＤＶ）和成型（ＨＥＶ）肝炎病毒的标志物,并采用ＰＣＲ技术检测了患者血清ＨＢＶＤＮＡ、ＨＣＶＲＮＡ及ＨＤＶＲＮＡ。结果五种肝炎病毒重叠感染者３５例（３２．４％）,单纯ＨＢＶ感染者７３例（６７．６％）。ＨＢＶ、ＨＡＶＭ重感染率为４．６％,ＨＢＶ、ＨＣＶ二重感染率为９．２％,ＨＢＶ、ＨＤＶＭ重感染率为１４．８％,ＨＢＶ、ＨＥＶ二重感染率为１．９％,ＨＢＶ、ＨＣＶ和ＨＤＶ三重感     

广西HBsAg阳性母亲的胎儿肝、肾细胞中乙肝病毒DNA存在状态的研究

采用核酸分子杂交Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹法,以３２Ｐ标记的ＨＢＶＤＮＡ为探针,检测ＨＢｓＡｇ阳性母亲引产的４０例胎儿的肝、肾组织。结果有２例胎肝和１例胎肾细胞ＤＮＡ出现大于３．２ｋｂ的杂交带,表明ＨＢＶＤＮＡ已处于整合状态。胎肾细胞基因组中查出ＨＢＶＤＮＡ整合为首次报道。     

HIV-1型核衣壳蛋白P24截短体在大肠杆菌中的表达,纯化和鉴定

用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）从ＨＩＶ １ｇａｇ基因中扩增出衣壳蛋白Ｐ２４截短体（ｔＰ２４）基因,插入质粒ｐＧＥＸ ４Ｔ３中构成重组表达质粒ｐＧＥＸ ｔｐ２４,将ｐＧＥＸ ｔｐ２４转化大肠杆菌ＢＬ２１后获得了高效表达,表达量占菌体总蛋白量的３４３８％。经Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析纯化的截短体Ｐ２４纯度为９２７７％。纯化的截短体Ｐ２４在间接ＥＬＩＳＡ和免疫印迹检测ＨＩＶ抗体阳性血清和正常人血清中,具有很高的抗原特异性和免疫反应性。     

广西HBsAg阳性母亲的胎儿肝,肾细胞中乙肝病毒DNA存在状态的研究

要用核酸分子杂交Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹法,以＾３２Ｐ标记的ＨＢＶＤＮＡ为探针,检测ＨＢｓＡｇ阳性母亲引产的４０例胎儿的肝,肾组织。结果有２例胎肝和１例胎肾细胞ＤＮＡ出现大于３．２ｋｂ的杂交带,表明的ＨＢＶＤＮＡ已处于整合状态,胎肾细胞基因组中查出ＨＢＶＤＮＡ整合为首次报道。     

逆转录-聚合酶链反应技术诊断丙型肝炎病毒感染

本文采用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ-ＰＣＲ）技术对２１２例住院及门诊病人其中肝病患者９８例（慢性肝炎４３例、肝炎后肝硬化４７例、原发性肝细胞癌８例）进行ＨＣＶ－ＲＮＡ检测。结果９８例慢性肝病患者血清中ＨＣＶ-ＲＮＡ-ＰＣＲ阳性２７例（２７．６％）,１１４例非肝病患者血清中ＨＣＶ-ＲＮＡ-ＰＣＲ阳性９例（７．９％）,两组间差异非常显著（Ｐ（０．０１）,各种肝病患者的ＨＣＶ-ＲＮＡ-ＰＣＲ阳性率均高于非肝病组。６８例患者同时进行了ＨＣＶ-ＲＮＡ-ＰＣＲ检测和抗－ＨＣＶ检测,２５例抗－ＨＣＶ阳性的患者中ＨＣＶ－ＲＮＡ-ＰＣＲ,２１例阳性（８４％）,４３例抗－ＨＣＶ阴性的患者中ＨＣＶ-ＲＮＡ-ＰＣＲ,９例阳性（２０．１％）、有输血及血制品史者４８例,其中ＨＣＶ-ＲＮＡ-ＰＣＲ阳性１６例（３３．３％）,１６４倒无输血史者中ＨＣＶ-ＲＮＡ-ＰＣＲ阳性２０例（１２．２％）,两组间差异非常显著（Ｐ（０．０１）。结果表明：１．ＨＣＶ感染与慢性肝病有密切联系,说明ＨＣＶ感染是慢性肝炎、肝硬化、肝癌的致病因素;２．ＨＣＶ-ＰＣＲ法具有特异性好、灵敏度高、简便快速等特点,弥补了抗－ＨＣＶ检测的不足之处,是目前确定ＨＣＶ感染的主要手段;３．ＨＣＶ感染与输血关系密切,因此对献血员进行常规ＨＣＶ检测对预防由输血所致ＨＣＶ感染有着极其重要的临床意义。