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1.
用使质粒pKU3所携带的玉米Ac因子的5'末端和中间编码转座酶的基因片段分别发生缺失的方法构建成质粒pKU3(△B)和pKU3(△H)。质粒所携带缺失的Ac因子单独存在时都无自主转座能力,但当Ac(△H)和Ac(△B)共存于一个细胞时,由于Ac(△B)产生转座酶的互补作用促使Ac(△H)恢复转座能力,而当Ac(△B)和Ac(△H)因子被分离后即获得Ac(△H)因子的稳定插入突变株,它可克服因突变不稳定而给用转座因子标签法分离基因所造成的困难。将双因子系统导入烟草原生质体并获得再生植株,从而选得卡那霉素抗性植株,显示Ac(△H)因子已经从原质粒上的NPTⅡ前导顺序中切离。Sortharnblot和PCR分析表明:Ac(△H)和Ac(△B)因子已经整合在转化烟草的基因组并能遗传至F1和F2代植株中;有些植株后代中已检测不到Ac(△B)因子的存在,说明它们的Ac(△B)因子已与Ac(△H)因子相分离;各转化植株中Ac(△H)因子在基因组中的插入拷贝数从一个到几个不等;初步显示Ac(△H)因子多数插入或转座在基因组的结构基因中。 相似文献
2.
玉米转座因子Ac在单倍体烟草中转座的研究 总被引:5,自引:0,他引:5
把玉米转座因子Ac插入花椰菜花叶病毒35S启动子和链霉素抗性基因(SPT)之间,构建带嵌合基因Ac∷SPT的双元载体pSAC11。从普通烟草的花粉植株取单倍体组织,通过农杆菌转化法分别转化嵌合基因Ac∷SPT和Ac∷GUS(来自双元载体pSLJ721),得到单倍体转基因植株。对转化Ac∷SPT的单倍体叶组织进行链霉素抗性分析,同时对转化Ac∷GUS的单倍体作GUS活性鉴定,分别检测到Ac从Ac∷SPT和Ac∷GUS处切离。Southern杂交表明,Ac切离后在单倍体基因组的不同位点整合。上述烟草单倍体的转化体系的建立以及对Ac因子转座的分析,将有助于在单倍体细胞中进行转座因子标签研究。 相似文献
3.
不同启动子控制下Ac转座酶基因的表达对玉米Ds因子在水稻中切离频率的影响 总被引:8,自引:0,他引:8
用水稻愈伤组织比较了Ac启动子、35S启动子与Ubi启动子控制下Ac转座酶基因(Ts)的表达对Ds因子切离频率的影响。结果表明Ubi启动子与Ac转座酶编码区嵌合基因(Ubipro-Ts)反式激活Ds因子的切离频率最高,达到了72.9%。通过杂交将Ubipro-Ts基因导入Ds因子转化植株,得到9株Ubipro-Ts基因与Ds因子共存的F1代杂交水稻植株,其中有8株Ds因子发生了切离。用Inverse-PCR的方法从其中一株杂交植株中克隆到Ds因子的旁邻序列,其DNA顺序与亲本中Ds因子原插入位点的序列不同,表明Ds因子转座到了新的基因组位点。 相似文献
4.
不同启动子控制下Ac转座酶基因的表达对玉米Ds因子在水稻中切离频率的影响 总被引:4,自引:2,他引:2
用水稻愈伤组织比较了Ac启动子、35S启动子与Ubi启动子控制下Ac转座酶基因(Ts)的表达对Ds因子切离频率的影响。结果表明Ubi启动子与Ac转座酶编码区嵌合基因(Ubipro-Ts)反式激活Ds因子的切离频率最高,达到了72.9%。通过杂交将Ubipro-Ts基因导入Ds因子转化植株,得到9株Ubipro-Ts基因与Ds因子共存的F1代杂交水稻植株,其中有8株Ds因子发生了切离。用Inverse-PCR的方法从其中一株杂交植株中克隆到Ds因子的旁邻序列,其DNA顺序与亲本中Ds因子原插入位点的序列不同,表明Ds因子转座到了新的基因组位点。 相似文献
5.
伪狂犬病毒蛋白激酶基因的PCR扩增及其克隆鉴定 总被引:9,自引:0,他引:9
以BHK-21细胞单层上增殖的伪狂犬病毒(Pseudorabiesvirus,PRV),经离心浓缩后,用SDS-蛋白酶K消化法分离纯化PRV基因组DNA。参照PRVKa株和NIA-3株蛋白激酶(PK)基因的DNA序列,设计并合成了一对长度为26bp和32bp的引物,以纯化的PRV基因组DNA为模板,用PCR技术成功地扩增出我国伪狂犬病毒地方株的PK基因,并将它克隆于pUC19载体。酶切分析结果表明,所获PK基因克隆在PstI、SmaI、XhoI和SalI上的切点与PRVNIA-3株相同。为下一步进行PK基因的体外缺失和重组,以构建减毒的PK缺失疫苗株奠定了基础。 相似文献
6.
肝细胞核因子3参与乙肝病毒基因的转录调控 总被引:1,自引:0,他引:1
肝细胞核因子3参与乙肝病毒基因的转录调控刘定燮,王昌才(广州第一军医大学分子生物学研究所,广州510515)关键词肝细胞核因子3,乙肝病毒,转录调控Costa等在研究肝细胞甲状腺素和维生素A载体蛋白(transthyretin)基因的调控时发现,其转... 相似文献
7.
在利用合成寡核苷酸片段和利用简并PCR方法筛选白色念球菌MAPK相关蛋白激酶基因的过程中,都得到了一个新的MAPK基因CEK2(Candida albicans extracellular signal-regulated kinase2)。CEK2基因全长为1119bp,编码373个氨基酸,白色念珠菌CEK1同源性达56%。CEK2与啤酒酵母FUS3基因同源性很高,核苷酸的同源 达57%,氨基酸 相似文献
8.
探讨人白血病细胞系U937白血病抑制因子(LIF)受体α亚基和另一亚基gp130细胞内区与促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)的关系,旨在研究白血病细胞增殖和分化的机制。用基因重组技术将两基因细胞内区互换以构成两嵌合体受体(190/130,130/190)并分别在U937表达,其与野生受体竞争性结合白血病抑制因子,用免疫组化和免疫印迹法分析受体细胞内区形成同源性二聚体(190cyt-190cyt,13 相似文献
9.
二酰甘油-蛋白激酶C信使系统在LA90细胞转化中的作用 总被引:2,自引:0,他引:2
以LA90细胞(RSV温度敏感突变株LA90转化的小鼠成纤维细胞〕为模型,研究了二酰甘油(DG)-蛋白激酶C(PKC)信使系统在细胞转化中的作用。通过免疫沉淀法观察到LA90细胞在允许温度(33℃)时具有很高的pp60v-src激酶活性,远高于非允许温度(39℃),当从39℃转至33℃10分钟,激酶活性就已显著升高。同时运用3H-甘油掺入并结合板层析分离方法和酶活性测定,发现LA90细胞中DG含量和PKC活性在33℃条件下高于39℃,当由39℃转至33℃10分钟,细胞内DG含量和PKC活性均明显增加。我们进一步探讨了PKC活性与癌基因v-ser、p53基因表达的相关性,实验表明,PKC的激活剂TPA可刺激39℃条件下的LA90细胞中v-sre和p53基因表达,PKC选择性抑制剂H7可抑制33℃条件下LA90细胞中v-erc和p53基因表达。看来,pp60v-src可通过刺激磷脂酰肌醇(PI)代谢激活DG-PKC(diacylglycerol-proteinkinaseC)信使系统,后者通过某种途径调控v-src和p53等癌基因之表达。因此DG-PKC信使系统可能是pp60v-src转化细胞及被转化细胞维持转 相似文献
10.
采用大鼠海马脑片体外缺血模型,观察海马突触体内蛋白激酶C(PKC)活性的变化,以及这种变化对突触体谷氨酸(GLU)摄取的影响。结果显示:海马脑片体外“缺血”10min,其突触体内PKC活性基本不变,而缺血30min,突触体内PKC活性显著上升(P<0.01,n=6);非N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体拮抗剂DNQX有效地抑制PKC活性的同时,可降低胞外GLU的堆积,而NMDA受体阻断剂AP_5无作用。进一步实验证明,PKC激动剂PDB浓度依赖性地抑制突触体对3H-GLU的摄取(IC50=131±10μmol/L),此抑制作用可由PKC抑制剂H-7(100μmol/L)抵消。提示脑缺血诱发GLU堆积的作用机理可能是:脑缺血引发钙内流导致GLU过量释放,GLU又通过突触前非NMDA受体激活PKC,抑制其自身摄取,正反馈性加重胞外GLU的堆积。 相似文献
11.
丝裂素活化蛋白激酶参与内皮素刺激的兔主动脉平滑肌细胞增生 总被引:11,自引:1,他引:10
内皮素(endothelin,ET)是已知的体内活性最强的缩血管物质,其缩血管作用由G蛋白偶联受体所介导。但ET强大的促血管平滑肌细胞(VSMC)增生效应的机理尚未完全阐明。本研究选用培养的兔胸主动脉VSMC,探讨丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)在ET促细胞增生中的作用。结果表明:ET-1呈时间和浓度依赖性地促进细胞摄取 ̄3H-TdR和激活MAPK,此作用可被蛋白激酶C(proteinkinaseC,PKC)抑制剂Staurosporine(STP),H-7和ET_A受体拮抗剂BQ123所抑制,但不被酪氨酸激酶抑制剂HerbimycinA(Herb)所抑制,用PKC激动剂PMA(Phorbolmyristateacetate)预处理VSMC,使其PKC活性下调,可显著减弱ET-1对MAPK的激活能力。本结果提示:(1)MAPK参与ET-1所致的VSMC增生;(2)ET-1促细胞增生与激活MAPK的作用是由ET_A受体和PKC介导的。 相似文献
12.
插入玉米Ds转座因子的水稻转化群体及其分子分析 总被引:14,自引:1,他引:13
转座子标签法是一种利用转座因子插入高等植物基因组中造成基因突变,然后通过分离转座因子插入的旁邻顺序,进而克隆出突变基因的策略。这种策略在高等植物功能基因组学的研究中是十分有用的,为此目的,将玉米的Ds因子及bar基因连接至载体pCAMBIA1300的T-DNA区域中,构建成重组Ti质粒pDsBar1300。pDaBar1300中T-DNA区域中的潮霉素抗性基因可在转化过程中用作水稻转化植株的选择标 相似文献
13.
对酵母NMT基因在大肠杆菌中表达进行较详细的研究,进而构建了复制子为p15A并含卡那霉素抗性基因的相容性表达质粒pKZMT,将其与表达质粒pCZmCα1共转化进大肠杆菌BL21(DE3)F′,进行双质粒表达偶联加工修饰研究,其中pCZmCα1表达底物蛋白小鼠cAMP依赖的蛋白激酶催化亚基α(PKA-mCα)。SDSPAGE及Westernblot分析表明,双质粒表达系统中,PKA-mCα都得到了稳定的高表达,尤其在23℃低温诱导表达时,表达产物的可溶性部分明显增多;而酵母NMT被控制在有利于活性功能的可溶性低水平表达。[3H]myristicacid标记测定及放射自显影的结果显示,在大肠杆菌中表达的重组PKA-mCα被豆蔻酰化修饰。 相似文献
14.
转座因子 (transposableelement ,TEs)是指在生物细胞中能从同一条染色体的一个位点转移到另一个位点或者从一条染色体转移到另一条染色体上的DNA序列。 1 947年美国冷泉港实验室的“玉米夫人”McClintock首先在玉米中发现并描述了转座因子。转座因子的发现 ,打破了传统遗传学上关于基因在染色体上固定排列及同源染色体交换的观念 ,揭示了基因的流动性 ,具有重要的意义。1 .转座因子的结构特点和分类到目前报道为止 ,至少在 32种植物上有转座因子存在 ,其中研究最多的是玉米、金鱼草、拟南芥等[1] 。其… 相似文献
15.
用二乙基亚硝胺(DEN)诱发大鼠肝癌,隔周测定肝脏胞液、膜性和胞核中的蛋白激酶A(PKA)和蛋白激酶C(PKC)的活力。发现胞液PKA在诱癌过程中活力改变不大,胞液PKC则逐步增高,在第13周和20周形成两个活力高峰。膜性PKA和PKC都呈双相变化,即在癌前期(10-14周)增加,癌形成期(17-20周)反而降至正常以下,胞核PKA和PKC也都在癌前期升至高峰,而癌形成期则低于癌前期,但仍高于正常(PKA)或接近正常(PKC)。因只有膜性PKC在大鼠老化时降低,故这些变化不是鼠龄变化的结果,而是DEN诱癌所引起,其变化机理可能与下降调节、细胞内转位或两型同工酶相反的升降变化有关。 相似文献
16.
报导了h-IL-3基因表达调节研究的结果:(1)人静止的外周血淋巴细胞几乎不表达IL-3mRNA,但受丝裂原PHA的刺激后则诱导IL-3mRNA表达,TPA与PHA联合处理,使IL-3mRNA的蓄积进一步增加,但TPA单独不足以诱导IL-3mRNA蓄积;(2)A23187/TPA能代替PHA/TPA的刺激,并直接诱导IL-3mRNA表达;(3)TREODN处理则显著抑制PHA/TPA诱导的IL-3mRNA表达。这些结果揭示:h-IL-3基因的表达在转录及转录后水平被调节,而且是可诱导的,诱导h-IL-3基因表达、需要Ca2+依赖及PKC依赖的两个信息转导系统,Fos蛋白是反式激活IL-3基因表达的转录因子,PKC依赖的转导系统,可能与IL-3mRNA的稳定性有关。 相似文献
17.
PAH基因内一个A/C多态性位点的分析 总被引:1,自引:0,他引:1
在苯丙氨酸羟化酶基因IVS3的3‘端-11位有一个A/C多态性位点,应用SSCP分析可进行简便检测,A等位基因的频率为0.656,C等位基因的频率为0.344,此位点的多态性信息含量(PIC)为0.351。A/C位点与同一内含子内的STR位点间没有连锁不平衡性,联合应用这两个多态性位点进行单体型连锁分析,对PKU家系进行产前基断诊断率可达75%。 相似文献
18.
核受体辅助因子及其信号转导 总被引:2,自引:0,他引:2
类固醇激素、核受体及其辅助因子在细胞增殖、分化中起重要的作用。核受体与相应的配体结合后同细胞内的辅助激活因子CBP/P300、PCAF、P/CIP和SRC家族等结合形成的复合物能使组蛋白乙酰化促进基因的转录,当缺乏配体时核受体同辅助抑制因子SMRI、mSin3A及HAD1具有很强的结合力使组蛋白去乙酰化抑制基因的转录活性。MAPK、PKA、AP-1、Sap-a、JAK/STAT、JAK信号传导中核受体辅助因子参与信号传导过程影响基础的转录。 相似文献
19.
刘永明 《中国生物化学与分子生物学报》1999,15(2):211-214
为了探讨解偶联蛋白(UCP)基因-3826多态性与UCPmRNA表达水平之间可能存在的联系,应用RT-PCR方法测定了UCP基因-3826多态性野生型(AA),杂合子(AG)和突变纯合子(GG)3组人群脂肪组织中UCPmRNA的表达水平.定量结果指出:3种基因型(AA、AG和GG)携带者腹膜内脂肪的UCPmRNA表达水平存在极显著差异(P<0.01),并显示突变等位基因(G)的数量与UCPmRNA表达水平呈负相关.此结果表明UCP基因A→G(-3826)变异与UCPmRNA表达水平降低密切相关.但该变异导致UCPmRNA表达水平降低的机制还有待进一步研究 相似文献
20.
蛋白激酶抑制剂噬菌体的构建和功能研究 总被引:2,自引:0,他引:2
人工合成编码cAMP信赖蛋白激酶(cAPK)的热稳定抑制剂第5-24位氨基酸「PKI(5-24)」的DNA片段,并将之克隆到phage display载体fd-tet-DOG1使中,使PKI(5-24)以融合于g3p蛋白的形式展示了噬菌体是到了PKI噬菌体,蛋白激酶抑制活性测定表达PKI噬菌体可有铲地抑制CAPK的活性。结合实验结果显示PKI噬菌体能与固相化小鼠CAPK催化亚基α(His6-mCα 相似文献