TNF—α—IL—1β及LPS对血管平滑肌细胞一氧化氮合酶基因表达的…

通过ＲＮＡ印迹分析和亚硝酸盐含量测定检查ＴＮＦ－α、ＩＬ－１β和ＬＰＳ对大鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）诱导型一氧化氮合酶基因表达及ＮＯ生成的影响,结果表明,ＴＮＦ－α、ＩＬ－１β和ＬＰＳ均能显诱导ＶＳＭＣｉＳ基因表达和促进ＮＯ生成,其作用强度与浓度和作用时间有关;双因素（ＴＮＦ－α＋ＬＰＳ,ＬＰＳ＋ＩＬ－１β）对诱导ｉＮＯＳ基因表达及ＮＯ生成产生协同作用,ＰｏｌｙｍｙｘｉｎＢ和地塞米松可部分凶制     

脂多糖对血管平滑肌细胞一氧化氮合酶基因表达及细胞增殖的影响

应用ＲＮＡ迷分析和亚硝酸盐含量测定检查脂多糖（ＬＰＳ）对大鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）一氧化氮合酶（ＮＯＳ）基因表达及ＮＯ合成的影响,用Ｔ３Ｈ－ＴｄＲ参入实验观察ＬＰＳ对细胞ＤＮＡ合成的影响,结果表明,ＬＰＳＤ 诱导ＶＳＭＣｉＮＯＳｍＲＮＡ表达和促进ＮＯ合成的同时,抑制ＶＳＭＣＤＮＡ合成,证明ＬＰＳ的作用与其浓度和作用时间有关。     

脂多糖对血管平滑肌细胞一氧化氮合酶基因表达及细胞增殖的影响

应用ＲＮＡ印迹分析和亚硝酸盐含量测定检查脂多糖（ＬＰＳ）对大鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）一氧化氮合酶（ＮＯＳ）基因表达及ＮＯ合成的影响,用３Ｈ－ＴｄＲ参入实验观察ＬＰＳ对细胞ＤＮＡ合成的影响．结果表明,ＬＰＳ在诱导ＶＳＭＣｉＮＯＳｍＲＮＡ表达和促进ＮＯ合成的同时,抑制ＶＳＭＣＤＮＡ合成．证明ＬＰＳ的作用与其浓度和作用时间有关     

诱导型一氧化氮合酶在17β-雌二醇诱导的血管平滑肌细胞周期阻滞中的作用

利用大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC)作为模型,观察17β-雌二醇(17β-estradiol,E2)对VSMC诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)活性和蛋白表达的影响,并探讨其在内皮素-1(endothlin 1,ET-1)刺激的VSMC周期循环中的作用。检测指标包括同位素法测定iNOS的活性,免疫印迹法(western blot)检测iNOS蛋白表达,流式细胞仪检测细胞周期,观察一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)抑制剂N^G-硝基左旋精氨酸甲酯(N^G-nitro—L—arginine methylester,L—NAME)对E2抑制VSMC细胞周期的影响。结果显示,E2明显增加iNOS的活性和蛋白表达,在30min和12h时能诱导VSMC的iNOS活性明显增加,而60min和24h时VSMC的iNOS活性与对照组无显著差异,不呈明显浓度依赖性,雌激素受体(estrogen receptor,ER)拮抗剂Tamoxifen和L—NAME能明显抑制E2诱导的VSMC iNOS活性增加;E2增加VSMC的iNOS蛋白表达的作用在3h时起效,12h达高峰,以后逐渐下降,呈浓度依赖性,Tamoxifen能明显抑制马诱导的VSMC iNOS蛋白表达;E2明显抑制ET-1诱导的S期细胞百分比和G2 S／G1增加,使VSMC在G1期发生细胞周期阻滞,这些作用可被预先给予L—NAME所明显减轻。上述结果提示,E2使ET—l刺激的VSMC细胞周期循环在G1期发生阻滞与增加VSMC iNOS活性有关,该作用至少部分通过ER介导。     

一氧化氮合酶的作用机制

一氧化氮合酶的作用机制赵慧卿（安徽医科大学化学教研室,合肥２３００３２）关键词一氧化氮一氧化氮合酶８０年代以来,人们发现一氧化氮在许多生理过程中起着十分重要的作用［１］。在血管内皮细胞中,一氧化氮可激活可溶性鸟苷酸环化酶（ｓＧＣ）,通过升高环鸟苷酸水...     

逆转录病毒介导诱导型一氧化氮合酶基因转染抑制血管平滑肌细胞增殖的研究

目的：研究逆转录病毒介导诱导型一氧化氮合酶（iNOS）基因转染对体外培养的大鼠主动脉血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的影响,探讨iNOS转基因治疗血管移植术后再狭窄的可行性。方法：将不同滴度的病毒上清转染体外培养的VSMC;采用RT-PCR、Western-blot检测VSMC内iNOSmRNA和iNOS蛋白的表达;用Griess法检测iNOS转基因细胞的培养液中一氧化氮（NO）的含量;用改良MTT、法检测iNOS转基因对VSMC增殖的抑制作用。结果：不同滴度的PLXSNiNOS转染体外培养的VSMC48h后,在VSMC内可检测到外源性iNOSmRNA和iNOS蛋白,表达水平随病毒滴度的增加而增强,呈现剂量依赖性;而用最高滴度的PIXSN转染体外培养的VSMC48h后,在VSMC内未能检测到外源性iNOSmRNA和iNOS蛋白表达;iNOS转基因细胞的培养液中NO含量显著增高,同时VSMC增殖受到明显抑制,均呈现剂量依赖性。结论：逆转录病毒介导iNOS基因可高效转染体外培养的VSMC,并在细胞内表达活性的iNOS蛋白,而且产生大量的NO,明显抑制VSMC增殖。为iNOS转基因治疗血管移植术后再狭窄的临床应用提供有力的实验依据。     

血管内皮型一氧化氮合酶的调节机制

血管内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的调控机制可分为基因表达水平调节和蛋白水平调节两个方面。其中,eNOS的基因表达水平调节主要包含启动子的调节和mRNA的稳定性调节两方面。而eNOS的蛋白水平调节又可分为三个方面:eNOS细胞内转位的调节机制;eNOS复合体形成的调节机制;eNOS氨基酸残基磷酸化的调节机制。eNOS的分子调控机制与临床疾病的发生、发展及其治疗有着密切的关系,故对eNOS分子调控机制的进一步了解有着非常重要的意义。     

一氧化氮在17-β雌二醇抑制血管平滑肌细胞增殖和原癌基因c -fos表达中的作用

实验利用大鼠血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMC)作为模型,观察17-β雌二醇（E2）对VSMC增殖和原癌基因c-fos表达的影响,并探讨VSMC源性一氧化氮（NO）在基中的作用,检测指标包括NO释放的测定,细胞计数、^3H-Tdr掺入,噻唑蓝（MTT）测定和c-fosmRNA表达,结果显示,E2（10^-12-10^-8mol/L)呈浓度依赖性地促进VSMC中NO的释放;10^-8mol/LE2能明显抑制10%小牛血清（FCS）和10^-7mol/L内皮素-1（ET-1）诱导的细胞增殖和DNA合成,E2的抑制作用均可被雌激素受体（ER）拮抗剂tamoxifen(10^-7mol/L)和一氧化氮合酶抑制剂L-NAME（10^-6mol/L)明显减轻;E2（10^-8mol/L)可明显抑制10^-7mol/LET-1诱导的VSMCc-fos表达,这种抑制作用可被L-NAME（10^-6mol/L)明显减轻,这些结果提示E2能抑制VSMC增殖和原癌基因c-fos表达,这种促进VSMC的NO释放密切相关,而且该作用至少部分通过ER介导。     

大鼠局灶性脑缺血后一氧化氮合酶基因表达的变化

目的:观察大鼠局灶性脑缺血后3种类型一氧化氮合酶(NOS)mRNA表达的变化.方法:大鼠随机分为正常对照组、缺血后2、6、12、24 h组,以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法分别检测缺血脑组织NOS基因表达的变化.结果:脑缺血后eNOS、nNOSmRNA表达增强,分别于2、6 h达高峰;iNOS mRNA表达亦增高,但在缺血后12 h达高峰.结论:大鼠脑缺血早期eNOS和nNOS占主要地位,缺血后期iNOS占主要地位.     

诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因表达的调控

一氧化氮（ＮＯ）自由基有多方面的生物学功能。随着研究的深入,发现ＮＯ能与超氧阴离子（Ｏ－２·）反应生成激发态亚硝酸（ＯＮＯＯＨ＊）,它与靶分子能产生羟自由基（·ＯＨ）和二氧化氮（ＮＯ２）样反应,在体内原先认为的一些ＮＯ效应,现在知道主要是由于ＯＮＯＯ...     

河北环毛蚓神经系统 一氧化氮合酶的组织化学定位

用依赖还原型辅酶Ⅱ的黄酶组织化学方法,研究了环节动物门寡毛纲种类河北环毛蚓（Pheretima tschiliensis)神经系统k 一氧化氮合酶(NOS)阳性细胞及阳性纤维的分布,结果表明,河北环毛蚓神经系统中脑神经节背侧有大量细胞呈现NO强阳性反应,胞体和突起染色明显。咽下神经中偶尔能见少数染色较浅的神经元。在脑神经节腹内侧、围咽神经、 咽下神经节外侧部及腹神经链中都有一氧化氮合酶阳性纤维存在脸染色很深,实验结果表明,在环节动物中作为信息分子的一氧化氮已广泛存在于神经系统中。     

Induction and Regulation of Nitric Oxide Synthase in Retinal Müller Glial Cells

Abstract: Müller glial cells from the rat retina were examined for their capacity to produce nitric oxide (NO). Treatment of retinal Müller glial (RMG) cells with lipopolysaccharide (LPS), interferon-γ, and tumor necrosis factor-α induced NO synthesis as determined by nitrite release in media. Simultaneous addition of LPS, interferon-γ, and tumor necrosis factor-α caused the largest increase in NO synthesis. NO biosynthesis was detected after 12 h and was dependent on the dose of LPS, interferon-γ, and tumor necrosis factor-α. Stereoselective inhibitors of NO synthase (NOS), cycloheximide and transforming growth factor-β, blocked cytokine-induced NO production. Cytosol from LPS/cytokine-treated RMG cultures, but not from unstimulated cultures, produced a calcium/calmodulin-independent conversion of l -arginine to l -citrulline that was completely blocked by NOS inhibitor. The expression of NOS in RMG cells was confirmed by northern blot analysis, in which stimulation of these cells led to an increase in NOS mRNA levels. We conclude that RMG cells can express an inducible form of NOS similar to the macrophage isoform. High NO release from activated RMG cells might represent a protection from infection but may also contribute to the development of retinal pathologies.     

一氧化氮合酶的若干研究进展

一氧化氮合酶(NOS)是一氧化氮(NO)生物学与医学研究的重要内容.近年来,对NOS酶本质及其生化与分子生物学特性甚至某些分子遗传学方面的认识都在迅速发展和深化.研究表明,干预NOS-NO途径的某些环节,如酶激活、NO合成、释放与转运甚至有关酶的编码基因及其表达,将为某些临床问题的解决提供新的思路和手段．     

神经型一氧化氮合酶的活性调控

一氧化氮是重要的信使分子,在生物体内参与众多生理及病理过程。生物体内存在着复杂的一氧化氮合酶活性调控机制以精确调控一氧化氮的生成。在神经系统中,一氧化氮主要由神经型一氧化氮合酶催化生成。神经型一氧化氮合酶的活性主要受到翻译后水平上钙离子和钙调蛋白的调控,其调控方式包括二聚化、多位点的磷酸化和去磷酸化,以及主要由PDZ结构域介导的蛋白质-蛋白质相互作用。一氧化氮本身对其合酶的活性具有负反馈调控作用。近年来的研究提示,细胞质膜上的脂筏微区在神经性一氧化氮合酶的活性调控中也起到重要的调节作用。     

NO在植物中的调控作用

一氧化氮(NO)是一种易扩散的生物活性分子,是生物体内重要的信号分子.植物细胞通过NO合酶、硝酸还原酶、或非生化反应途径产生NO.NO参与植物生长发育调控和对生物与非生物环境胁迫的应答反应,大量证据表明NO是植物防御反应中的关键信使,其信号转导机制也受到越来越多的关注.本文主要通过讨论NO的产生、对植物生长周期的影响、在植物代谢中的信号调节以及参与细胞凋亡来阐述NO在植物中的作用.     

逆转录病毒载体介导诱导型NO合酶在神经细胞中表达

为了深入研究诱导型一氧化氮合酶基因表达产物在阿片耐受和依赖中作用,采用脂质体介导基因转染技术,将ｉＮＯＳ ｃＤＮＡ重组逆转录病毒载体导入ＮＧ１０８－１５神经细胞,获得Ｇ４１８抗性克隆,命名为ＮＧ－ＬＮＣＸｉＮＯＳ细胞。ＤＮＡ印迹杂交,ＰＣＲ扩增及ＲＴ－ＰＣＲ和蛋白质免疫印迹杂交分析,证实ＮＧ－ＬＮＣＸｉＮＯＳ细胞有外源ｉＮＯＳ基因整合,转录和表达;ＮＡＤＰＨ黄递酶（ＮＡＤＰＨ ｄｉａｐｈｏｒａｓｅ     

两种软体动物神经系统一氧化氮合酶的组织化学定位

运用一氧化氮合酶(NOS)组织化学方法研究了软体动物门双壳纲种类中国蛤蜊和腹足纲种类嫁Qi神经系统中NOS阳性细胞以及阳性纤维的分布。结果表明：在蛤蜊脑神经节腹内侧,每侧约有10-15个细胞呈强NOS阳性反应,其突起也呈强阳性反应,并经脑足神经节进入足神经节的中央纤维网中;足神经节内只有2个细胞呈弱阳性反应,其突起较短,进入足神经节中央纤维网中,但足神经节中,来自脑神经节阳性细胞和外周神经系统的纤维大多呈NOS阳性反应;脏神经节的前内侧部和后外侧部各有一个阳性细胞团,其突起分别进入后闭壳肌水管后外套膜神经和脑脏神经索。脏神经节背侧小细胞层以及联系两侧小细胞层的纤维也呈NOS阳性反应。嫁Qi中枢神经系统各神经节中没有发现NOS阳性胞体存在;脑神经节、足神经节、侧神经节以及脑—侧、脑—足、侧—脏连索中均有反应程度不同的NOS阳性纤维,这些纤维均源于外周神经。与已研究的软体动物比较,嫁Qi和前鳃亚纲其它种类一样,神经系统中NO作为信息分子可能主要存在于感觉神经。而中国蛤蜊的神经系统中一氧化氮作为信息分子则可能参与更广泛的神经调节过程。     

软体动物的一氧化氮及其合酶的研究进展

一氧化氮作为一种重要的信息分子,参与调节软体动物的嗅觉、运动、取食、机体防御及学习行为。本文从生理、生化、形态定位以及信号转导几方面综述了有关软体动物一氧化氮及其合酶的最新研究进展。