动物有但人类没有的抗HIV感染细胞的杀伤抗体

有关艾滋病的两个主要问题是:为什么只有人类发生这种病,而其他动物不发生这种病?受艾滋病毒感染的人体细胞能否在体内被破坏?国立癌症研究所(马里兰州弗雷德里克)的研究人员也许会帮助人们在某种程度上回答这两个问题,即他们认为抗艾滋病的疫苗和治疗艾滋病的有效方法很难发现。他们检验了依赖抗体的补体介导的细胞毒性(ACC),这是老鼠和猫体内抗病毒的一种反应。ACC 与抗病毒的中和抗体截然不同。研究小组检验了受艾滋病病毒感染的人和黑猩猩的血清,以及用病毒 gp120被膜蛋白免     

用于猕猴的艾滋疫苗研制成功

波士顿哈佛医学院免疫学家 Norman L .Letvin及其同事研制成功一种基于 DNA的疫苗来抵抗猕猴的艾滋病 .这种猕猴感染的艾滋病毒是猴免疫缺陷病毒 (SIV)与人免疫缺陷病毒 (HIV)的融合物 .这种疫苗编码 2种蛋白质 ,一种在 SIV中找到 ,另一种在 HIV中找到 .疫苗吸引免疫系统注意 ,激发免疫反应 ,只形成少量抗体 ,主要是加强细胞免疫 ,即形成 T杀伤细胞 .为了加强该疫苗 ,研究者加入白细胞介素 - 2 (IL- 2 )以及免疫球蛋白 G(Ig G) ,或是加入编码它们的 DNA.IL- 2加速大量制造 T杀伤细胞 ,而 Ig G则延长 IL- 2的半衰期 .用该新疫…     

关于艾滋病疫苗的新问题

最新研究指出:用于抗艾滋病病毒的抗体能增强该病毒的传染;艾滋疫苗的主成份经培养可以杀伤神经元;乙型肝炎的传染能加强艾滋病毒的复制。马萨诸塞医科大学的研究表明,在抗体被动性增强(antibody-dependent enhancement,ADE)中,抗体的 Fc 部分与巨噬细胞和单核细胞上的 Fc 受体相结合。如果抗体也结合了一种病毒,这种病毒就能被带入细胞。马萨诸塞医科大学的科学家把一个单核细胞放入 HIV 和人体血清中培养,证实了上述现     

乙型肝炎病毒DNA疫苗的研究进展

预防与控制乙型肝炎发病的乙型肝炎病毒(HBV)疫苗,是有重大的社会和经济意义。HBV的持续感染可引起慢性肝脏疾患,并逐步发展为肝硬化和肝细胞癌(HCC)。目前的乙肝重组亚单位疫苗可以使90％的接种产生保护性抗体;但是对慢性HBV携带,由于其机体对HBsAg蛋白产生耐受,不能产生体液和细胞免疫,因此它只能作为一种预防性的疫苗。DNA疫苗(基因疫苗)是一种新的疫苗技术,通过向体内递送编码抗原的细菌质粒,刺激产生特异的体液和细胞免疫反应。在小鼠和其他的肝炎病毒感染动物模型中,HBV DNA疫苗可以特异性地引起体液和细胞免疫,清除HBV转基因动物血循环中的HBsAg颗粒和HBV DNA。如果加入各种免疫调节细胞因子的基因,可以进一步提高HBV DNA疫苗的免疫效果,因此它不仅可作为预防性疫苗,也可作为治疗型疫苗。     

表达猪瘟病毒E2蛋白的BacMam病毒的构建及其免疫原性分析

含具有哺乳动物细胞活性的启动子的重组杆状病毒(BacMam病毒)可有效转导多种哺乳动物细胞,并被广泛用于开发新型非复制型载体疫苗．将水泡性口炎病毒G蛋白(VSV-G)基因插入多角体启动子下游,得到经修饰的杆状病毒转移载体,将对虾白斑综合症病毒(WSSV)ie1启动子控制下的猪瘟病毒E2基因表达盒插入此载体中,构建了BacMam病毒BacMam/G-ie1-E2,以其感染Sf9细胞和转导HeLa细胞,通过间接免疫荧光试验和Western blot分析检测E蛋白的表达,同时用BacMam病毒直接免疫小鼠,用检测猪瘟病毒抗体的间接ELISA方法检测免疫小鼠血清抗体,用基于CFSE和WST-8的淋巴细胞增殖试验评价其细胞免疫应答．结果显示,BacMam/G-ie1-E2能同时在昆虫细胞和哺乳动物细胞中高效表达E2蛋白,免疫小鼠能诱导产生针对猪瘟病毒的特异性抗体,免疫小鼠脾细胞经猪瘟病毒刺激后能诱导特异性的淋巴细胞增殖．这表明,由BacMam病毒介导的基因转移有望用于开发针对猪瘟病毒的非复制型载体疫苗．     

rOmpF和OMVs亚单位疫苗可有效预防家禽感染肠炎沙门菌

正肠炎血清型沙门菌仍然是人类沙门菌感染病最常见的血清型,可通过受污染的食品(特别是家禽产品)感染人体。研制肠炎沙门菌亚单位疫苗不仅可以保护鸡免受沙门菌感染,还能切断沙门菌传染源。本研究分别以重组表达的外膜蛋白F (rOmpF)和提取的外膜囊泡(OMVs)制备了两种肠炎沙门菌亚单位疫苗,并在鸡中进行了肠炎沙门菌攻毒试验。结果显示,制备的亚单位疫苗不仅能诱导鸡体内产生抗体,还能引起较强的细胞免疫应答。     

抗禽传染性支气管炎病毒多肽疫苗EpiA免疫原性研究

设计基于B细胞表位和T细胞表位的禽传染性支气管炎病毒(IBV)多肽疫苗EpiA,并利用基因工程重组技术将EpiA在大肠杆菌中表达、纯化。ELISA和Western blot法验证其免疫原性后,将重组蛋白配以弗氏佐剂免疫鸡,并以灭活苗、GST和PBS为试验对照组。细胞免疫效应采用流式细胞仪(FACS)对免疫鸡外周血中CD4+ ,CD8+ T淋巴细胞进行计数,IBV特异性抗体采用ELISA法进行检测,并进行攻毒试验。结果显示,成功设计了多肽疫苗EpiA：ELISA和Western blot 证明所表达的融合蛋白能与标准IBV阳性血清产生特异性抗原-抗体反应,而且该融合蛋白能有效激发鸡体特异性体液和细胞免疫,与对照组差异显著(P≤0.01）。攻毒试验表明,多肽疫苗保护率可达73％,大肠杆菌生物合成重组抗IBV多肽疫苗将为IBV疫苗研究制备提供了新的途径。     

人类免疫缺陷病毒黏膜疫苗

在以往的20年间,有关发展艾滋病疫苗的研究曾经进行了大量的工作,但进展不大,通常诱生基于抗包膜抗体的疫苗效果并不理想。目前一般认为,细胞免疫应答,特别是CD8细胞毒性T淋巴细胞(CTL)／抑制细胞和CD4辅助性T淋巴细胞在人类免疫缺陷病毒的控制上是必需的。因此能诱生细胞免疫应答的疫苗在控制人类免疫缺陷病毒的播散上至关重要。本文阐述了有关黏膜疫苗的理论、艾滋病黏膜疫苗的种类以及经口免疫耐受性问题,并提出艾滋病应当视为一种自身免疫病。故抗炎症或免疫抑制药物应用似有其可取之处。     

运送DNA疫苗的减毒沙门氏菌载体系统

减毒沙门氏菌通过自然感染的方式高效地将DNA疫苗直接运送给体内的抗原提呈细胞(APCs)如树突细胞(DCs)和巨噬细胞,在粘膜和全身淋巴组织诱发以Th1型应答为主的细胞免疫和体液免疫,APCs尤其是DCs可能在其中起到了关键作用.减毒沙门氏菌已被应用于运送病毒、细菌和肿瘤DNA疫苗并取得一定效果,该途径所诱发的细胞免疫要强于肌注途径接种的相同DNA疫苗,原核表达的重组沙门氏菌和接种蛋白质抗原等免疫方法.本文还对如何增强携带DNA疫苗的重组减毒沙门氏菌的免疫效果作了探讨.     

共表达PRRSV GP5蛋白和CSFV E2蛋白的“自杀性”DNA疫苗在小鼠体内诱导的免疫应答

为了获得新型双价"自杀性"DNA疫苗,将猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratorysyndrome virus,PRRSV)GP5基因克隆于此前构建的表达猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)E2基因的甲病毒复制子载体疫苗pSFV1CS-E2中.为了增强免疫效果,在密码子优化的GP5基因中插入了泛DR表位(PADRE),在CSFV E2基因后融合伪狂犬病病毒(PrV)UL49基因,获得了6种重组质粒.间接免疫荧光试验显示,PRRSV GP5和CSFV E2基因在瞬时转染的293T细胞中得到同时表达,将6种重组质粒和空载体pSFV1CS分别免疫BALB/c小鼠,用间接ELISA方法检测血清抗体水平,通过基于CSFE/WST-8的淋巴细胞增殖试验和细胞因子ELISA评价疫苗诱导的细胞免疫.结果显示,除pSFV1CS组外,从各疫苗组小鼠血清中均可检测到低水平的针对GP5和E2蛋白的抗体;各疫苗组小鼠脾细胞经CSFV和PRRSV刺激后均能诱导特异性的淋巴细胞增殖:部分疫苗组小鼠脾细胞经CSFV和PRRSV刺激后可分泌较高水平的IFN-γ和IL-4;引入UL49的疫苗组细胞免疫应答显著高于其它疫苗组.结果表明,这些共表达GP5和E2蛋白的自杀性DNA疫苗可以诱导体液免疫和细胞免疫,PrV UL49可以增强其细胞免疫应答.     

GM-CSF和IL-4增强Aβ表位DNA疫苗的免疫原性研究

目的:探究和评价粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)及白细胞介素4(IL-4)作为β淀粉样蛋白(Aβ)表位DNA疫苗的分子佐剂,增强DNA疫苗体液和细胞免疫反应的水平。方法:阿尔茨海默病DNA表位疫苗p VAX1-6Aβ15-T分别与重组DNA分子佐剂p VAX1-S-IL-4和p VAX1-S-GM-CSF联合免疫BALB/c小鼠,并检测其免疫原性。结果:分子佐剂IL-4组相比单独的DNA表位疫苗p VAX1-6Aβ15-T组抗体水平具有一定程度的提高;GM-CSF能明显提高DNA疫苗Aβ特异的抗体水平和泛DR辅助T细胞表位(PADRE)特异的细胞免疫反应,4次免疫后其抗体滴度提高了4倍。结论:GM-CSF佐剂能够有效地用于今后阿尔茨海默病DNA表位疫苗的研究中。     

HIV gag基因修饰在不同载体系统中对免疫效果的影响

目的:了解gag基因修饰前后在不同载体系统中的表达水平差异对免疫效果的影响,为确定HIV疫苗中能诱发较高水平细胞免疫的Gag靶抗原奠定实验基础。方法:将含有优化前后gag基因的HIV-1 DNA(pVRC)疫苗和重组痘苗病毒(rVV)载体疫苗单独或联合免疫BALB/c小鼠,利用IFN-γ酶联免疫斑点法和胞内细胞因子染色检测各组的细胞免疫效果,ELISA检测体液免疫水平,分别比较基因优化前后及在不同载体内的Gag诱发的免疫效果。结果:DNA疫苗中gag基因修饰后细胞免疫反应由472提高至925 SFC/106MNC,抗体滴度随免疫次数增加而提高,基因修饰后第二针的抗体水平由104.2提高至105.3,三针后则没有差别;而以rVV为载体的疫苗基因修饰前后细胞免疫反应(~320 SFC/106MNC)和抗体水平(~104.4)均没有差异。2种疫苗联合免疫均可显著提高Gag修饰前后在小鼠体内的免疫效果,基因修饰后细胞免疫反应由1700提高至2100 SFC/106MNC,抗体水平则没有差别。结论:gag基因修饰明显提高常规DNA疫苗免疫效果,并可进一步提高联合免疫效果,但对rVV疫苗单独免疫效果无明显影响。     

抗胞内菌感染免疫及其治疗

胞内菌感染因其胞内寄生的特点 ,而使得天然免疫、抗体免疫应答和体液抗菌物质等难以对其起作用 ,抗胞内菌感染以细胞免疫为主。CD4+ Th1细胞通过分泌IFN γ激活巨噬细胞 ,杀伤被吞噬的胞内菌 ,亦可通过Th1表达的CD40L与巨噬细胞表面CD40结合而激活巨噬细胞 ;Tc细胞主要经胞毒作用溶解感染的靶细胞 ,裂解所释出的病菌经抗体或补体调理后 ,由吞噬细胞清除。细胞毒T淋巴细胞 (CTL)通过分泌Th1细胞毒细胞因子 ,激活被感染的宿主细胞去杀伤病原体 ,或通过颗粒胞吐途径和Fas/FasL途径介导细胞毒性 ,直接溶解靶细胞和杀伤病原体 ,从而在宿主抗细胞内感染的免疫中充当重要角色。氟喹诺酮类药物因其在胞内的弥散和蓄积作用以及纳米粒药物因其对MPS的被动靶向性 ,成为目前抗胞内菌感染治疗的主要方式 ,而细胞疫苗的研制开发是抗胞内菌感染的最终手段。     

乙型肝炎病毒全S基因疫苗诱导小鼠的特异性免疫应答

乙型肝炎病毒(HBV)感染是我国常见病及多发病.HBV难以清除的原因之一就是机体的免疫功能障碍.目前虽然基因重组HBV表面抗原(HBsAg)疫苗预防HBV感染取得了较好的效果,但基因重组HBsAg疫苗主要能诱导特异性体液免疫,不能刺激机体的细胞免疫应答.近年来发现基因疫苗可诱导机体产生细胞及体液免疫反应,特别是诱导细胞免疫反应的能力优于蛋白、多肽类疫苗,更适应于慢性病毒感染的预防与治疗[1,2].为了探讨应用HBV基因疫苗预防HBV感染的可能性,本文构建了HBV全S基因和HBsAg基因疫苗,观察和比较了这两种疫苗经肌肉注射接种到Balb/C小鼠体内后的细胞及体液免疫功能的变化.     

抗艾滋病分泌型重组BCG疫苗的研究进展

抗艾滋病分泌型重组ＢＣＧ疫苗,是一种含有分泌融合蛋白质的牛分枝杆菌ＢＣＧ菌的疫苗。融合蛋白质是由外来抗原肽（艾滋病毒表面抗原肽）插入含有信号肽的载体蛋白（抗酸菌的α抗原）分子表面得到的。该疫苗能有效地诱导杀伤Ｔ细胞,显著提高抗体水平,用于艾滋病的预防和治疗。     

一种新型T细胞免疫原的原核表达及对口蹄疫疫苗的免疫增强作用

主要探讨了T细胞免疫原TI对口蹄疫疫苗的免疫增强作用。设计并原核表达产生了一种包含口蹄疫病毒VP1,VP4,3A和3D蛋白上多个T细胞表位与两个通用T细胞表位的T细胞免疫原,命名为TI;同时表达了O和Asia 1两个型口蹄疫病毒 VP1 蛋白的串联编码基因,表达产物命名为OA-VP1。将上述T细胞免疫原分别与OA-VP1和口蹄疫灭活疫苗按不同剂量组合免疫小鼠,于免疫后不同时间测定各组小鼠的体液与细胞免疫应答情况。采用微量中和试验检测小鼠O型和Asia1型中和抗体,采用流式细胞检测技术和测定γ-干扰素的水平来分析不同免疫组小鼠细胞免疫的水平。结果显示,与灭活疫苗或OA-VP1单独免疫组相比,添加TI抗原后灭活疫苗 (P＜0.01) 和OA-VP1免疫组(P＜0.05)小鼠均能产生高水平的特异性中和抗体;且CD4+ T细胞数量显著增多,IFN-γ产生水平显著升高 (P＜0.01)。说明TI抗原具有很好的诱导特异性体液与细胞免疫应答的作用,是一种很好的免疫增效剂,可作为口蹄疫蛋白亚单位疫苗和灭活疫苗中的一种有效成分,以提高疫苗的免疫效果。     

Flt3配体增强HCV核心-包膜E2融合基因DNA疫苗诱导的细胞免疫应答

建立一种可高效诱导细胞免疫应答 ,对丙型肝炎病毒 (HCV)感染可能起预防和治疗作用的DNA疫苗。将小鼠Flt3配体 (FL)信号肽和胞外段cDNA插入结构优化的HCV核心 包膜E2融合抗原DNA疫苗pST CE2t,构建成pST CE2t FL。将pST CE2t FL转染COS7细胞 ,Westernblot和ELISA检测表明该重组质粒能表达HCV核心 包膜E2融合抗原和可溶性小鼠FL。分别将pST CE2t、pST CE2t FL和空载体pCI neo肌肉注射接种BALB c小鼠 ,检测小鼠的体液和细胞免疫应答。结果表明两种DNA结构均能在小鼠体内诱生细胞和体液免疫应答 ,但pST CE2t诱导的体液免疫应答强于pST CE2t FL ,而后者诱导的细胞免疫应答明显强于前者。FL能明显增强HCV核心 包膜E2融合抗原DNA疫苗诱导的细胞免疫应答 ,对于发展HCV预防和治疗性疫苗有潜在的应用价值。     

核酸疫苗的研究及应用进展

核酸疫苗(DNA疫苗)是20世纪90年代发展起来的一种新型疫苗。核酸疫苗不仅可引起体液免疫反应,而且能诱导高水平的细胞免疫应答,尤其是细胞毒T淋巴细胞(CTL)反应,被认为在病毒、细菌、寄生虫等病原体感染的防治中具有更大的优势。核酸疫苗既可作为病毒、细菌或寄生虫的预防疫苗,也可作为非感染性疾病如肿瘤病的治疗用疫苗。     

CpG特征结构与树突状细胞

近年来的研究表明 :ＣｐＧ特征结构是脊椎动物免疫系统识别微生物ＤＮＡ并产生针对抗原的保护性免疫反应的主要机制 ,它在体内及体外均能诱导以Ｔｈ1细胞为主的高水平、高特异性的细胞免疫应答 ;是质粒ＤＮＡ疫苗及裸ＤＮＡ疫苗诱导机体免疫应答的原因之一 ,在临床实验中ＣｐＧ ＯＤＮ已被用作抗原疫苗、ＤＮＡ疫苗治疗肿瘤、变态反应性疾病的强有力佐剂。ＣｐＧ特征结构能够诱导机体产生以Ｔｈ1细胞为主的细胞免疫应答是因为它能够作用于Ｔ细胞、Ｂ细胞、ＮＫ细胞、巨噬细胞及树突状细胞等免疫细胞。树突状细胞是机体最主要的专职抗原呈递…     

日本证明用化学合成的pre-S制造的乙型肝炎疫苗有效

东京都临床综合研究所肝炎研究室和特殊免疫研究所、自治医科大学预防生态学教研室教授真弓忠等用化学合成法合成了乙型肝炎(HB)病毒 DNA 的 pre-S 区段中的19个氨基酸,并把它投予黑猩猩,初步确认了能产生中和抗体。这项成果已刊载在《美国国家科学院院报》(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)1986年,第83卷9174～9178页。pre-S 区段所编码的蛋白质被认为是使肝炎病毒吸着在肝脏细胞表面的聚白蛋白上的受体。因此,如在体内诱导对 pre-S 区段的产物的抗体,就能预防乙型肝炎感染,这就很有希望得到有效的新型乙型肝炎疫苗。以前使用的乙型肝炎疫苗和现在正在进行临床试验的经基