糖蛋白的研究进展

糖蛋白是由糖链与多肽链以多种形式共价修饰而形成的一类重要生理活性物质.糖蛋白在生物体内种类繁多,分布广泛,具有重要的功能.糖蛋白的性质及功能和糖链的结构有关,因此糖蛋白中糖链的结构及作用机制研究成为生物学基础理论的课题之一.就近年来糖蛋白研究中糖蛋白样品的提取分离、糖链释放及结构分析的技术方法及研究领域作了简要介绍.     

七叶皂苷对P-糖蛋白功能的影响

目的:探讨七叶皂苷时P-糖蛋白功能的影响.方法:构建稳定表达P-糖蛋白的LLC-PK1细胞系,以real-time RT-PCR和Western Blotting分析P-糖蛋白基因mRNA和蛋白表达,共聚焦显微镜观察P-糖蛋白细胞定位,流式细胞术检测细胞内罗丹明123荧光强度.结果:(1)P-糖蛋白在LLC-PK1细胞中稳定高表达;(2)转染细胞中P-糖蛋白定位在细胞膜上;(3)七叶皂苷抑制P-糖蛋白功能.细胞内罗丹明123荧光强度增加123%,但其抑制效果是维拉帕米的30%.结论:七叶皂苷抑制P-糖蛋白功能,但其抑制效果弱于维拉帕米.     

鸡传染性喉气管炎病毒糖蛋白G对病毒吸附、侵入、复制和细胞间接合传染的影响

利用分离纯化的鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)天然糖蛋白G及其制备的抗体处理, 测定对ILT病毒(E3毒株和Zhonghai毒株)吸附、侵入、复制和病毒从细胞到细胞直接感染的影响. 结果证明, ILTV天然糖蛋白G及抗糖蛋白G抗体对病毒的吸附和侵入无明显影响. 添加糖蛋白G对病毒从CEL细胞到CEL细胞直接感染和病毒在CEL细胞上的复制的影响不明显, 但添加抗糖蛋白G大鼠IgG却显著抑制病毒的复制, 表现为噬斑变小, 病毒复制曲线降低. 激光共聚焦扫描显微镜观察结果显示ILTV糖蛋白G存在于鸡原代肝细胞核外周质及细胞膜上, 并且糖蛋白G聚集在细胞融合部位. 推测糖蛋白G可能促进了细胞的融合或参与病毒从细胞到细胞的直接感染, 从而影响病毒复制和噬斑的形成.     

基于超滤膜辅助的糖蛋白全N-连接糖链的富集和质谱解析

糖基化作为一种常见的蛋白质翻译后修饰,对蛋白质的空间结构、生物功能等具有重要的影响.解析糖蛋白糖链结构有助于更清楚地认识糖蛋白及其功能.本研究建立了一种基于超滤膜富集血清中糖蛋白全N-连接糖链,并利用质谱技术对糖链结构进行分析的方法.根据糖蛋白及其糖链结构之间的分子质量差异,利用Millipore公司的10 ku超滤膜富集血清糖蛋白上酶解(PNGase F)释放的全N-连接糖链,并使用MALDI-TOF/TOF-MS解析糖链结构.通过该技术可以从血清中富集并鉴定到23种独特的N-连接的糖链结构,并且利用二级质谱进行了结构确认.该方法可以被用于从大量生物样本中富集糖蛋白全N-连接糖链,可以达到快速、高通量地解析糖蛋白N-连接糖链的目的.     

P-糖蛋白的研究进展

P-糖蛋白是一类能量依赖性的转运蛋白,能将许多结构不同的化合物逆向转运出细胞.P-糖蛋白的过表达与肿瘤细胞的多药耐药性(Multidrug Resistance,MDR)密切相关,是导致肿瘤化疗失败的主要原因.随着对MDR机制认识的深入,已针对P-糖蛋白的结构设计出多种形式的MDR逆转药物.近年研究发现,P-糖蛋白广泛存在于正常的组织和器官,参与药物和内、外源毒素的吸收、分布和排泄,行使解毒和防御保护的功能.因此,通过转植P-糖蛋白基因可有效地降低经济鱼类、虾等水产品和经济作物中有毒污染物的积累,对保护人类健康将有着积极意义.     

糖蛋白折叠质量的监控机制

内质网是一种重要的真核细胞器,糖蛋白的糖基化开始于其中.在内质网中永久性折叠错误糖蛋白或幼稚型糖链糖蛋白,以及突变的糖蛋白被阻止进入高尔基体,而是选择性地被运到胞质,然后在蛋白酶体中被降解.至少两大分子伴侣家族结合蛋白（BiP）和钙联结蛋白（CNX）/钙网蛋白（CRT）参与了糖蛋白折叠的质量控制过程.     

动情周期中大鼠输卵管与植物凝集素BS-1结合的糖蛋白的表达

目的初步鉴定大鼠输卵管中存在与植物凝集素BS-1结合的糖蛋白,并研究其在输卵管中的定位和不同动情周期中糖蛋白的表达变化.方法根据阴道涂片检查将大鼠分为:间情期(DE)组、动情前期(PE)组、动情期(E)组和动情后期(ME)组.用冰冻切片法、荧光组化技术和共聚焦显微镜技术观察大鼠输卵管中与BS-1结合糖蛋白的分布及表达变化.结果大鼠输卵管中存在与BS-1结合的糖蛋白,并呈节段性分布,即峡部＞壶腹部.动情周期中大鼠输卵管糖蛋白的表达:动情期＞动情前期＞动情后期＞间情期.结论大鼠输卵管与植物凝集素BS-1结合的糖蛋白在动情期(E)峡部上皮表达最明显,具有雌激素依赖性.     

几种植物细胞表面糖蛋白的电镜细胞化学及其与植物抗逆性的关系

1.无论是小麦、玉米或长豇豆的叶片组织,经钌红染色显示的糖蛋白均明显地定位于细胞间隙周围游离的细胞表面上,在细胞壁的外部形成一个糖蛋白层,厚度一般为50—100nm之间。紧贴细胞壁的部分比较致密,外部边缘比较松散,有些呈现为丝状。2.抗寒性强的冬小麦幼苗叶片细胞表面的糖蛋白比不抗寒的春小麦品种显得丰富;并且在低温锻炼中,前者细胞表面的糖蛋白层有增厚的趋势,而后者的糖蛋白层明显变薄、甚至完全消失。3.当长豇豆叶片感染花叶病或玉米叶片感染小斑病后,黄色病斑组织的细胞表面的糖蛋白向细胞间隙中脱落,直至糖蛋白层完全消失。病斑周围的绿色组织细胞表面的糖蛋白层,有些也发生减少,甚至完全消失;有些则增厚。抗小斑病的玉米品种的细胞表面的糖蛋白比不抗品种显得丰富。以上情况表明,细胞表面的糖蛋白与植物的抗病性和抗寒性存在密切关系。     

人类疱疹病毒7型糖蛋白gB、gH、gL、gO介导细胞融合

人类疱疹病毒 7 型(HHV-7)的感染依赖于包膜糖蛋白在病毒生命周期的多个阶段发挥功能. 这些蛋白质可以介导病毒吸附,病毒包膜和宿主细胞膜融合以及病毒在细胞间的接触传播. 将表达 HHV-7 糖蛋白的 293T 细胞与 HHV-7 易感的SupT1 细胞共培养,检测虫荧光素酶报告基因的表达,以鉴定介导膜融合的 HHV-7 糖蛋白. 研究发现,HHV-7 糖蛋白 gB、gH、gL、gO 能介导 293T 细胞与 SupT1 细胞的融合,且融合可被抗 CD4 单抗所抑制. 结果表明,糖蛋白 gB、gH、gL、gO对于 HHV-7 引发的膜融合是必需的,其中某个蛋白质或所形成的蛋白质复合物可能是 CD4 的配体.     

基于凝集素-糖蛋白特异结合的特性筛选与鉴定空肠弯曲杆菌NCTC11168株糖蛋白

[目的]从空肠弯曲杆菌NCTC11168菌株中筛选糖蛋白.[方法]本实验基于凝集素-糖蛋白特异结合的特性,先用免疫印迹的方法确定空肠弯曲杆菌内糖蛋白能与凝集素SBA特异结合,再用包被有凝集素SBA的磁珠捕获样品中的潜在糖蛋白,通过N-乙酰半乳糖胺竞争性洗脱及双向电泳分离,最后利用串联质谱鉴定捕获的糖蛋白.[结果]质谱分析共鉴定到22种空肠弯曲杆菌蛋白,其中至少5种为已报道糖蛋白,包括Cj0633在内的17种为迄今为止未知的潜在糖蛋白.[结论]这种糖蛋白筛选策略可用于细菌糖蛋白的分离鉴定.     

大鼠精子细胞的糖蛋白合成——电镜放射自显影研究

本实验用电镜放射自显影技术,在注射~3H-岩藻糖后30分钟和1、4、8、24小时示踪大鼠精子细胞合成糖蛋白的情况以及新合成糖蛋白的去路。实验结果表明: 1.在注射~3H-岩藻糖后30分钟到1小时,放射自显影标记最初出现在高尔基体上。岩藻糖分子首先在高尔基体的外周(皮质)部位掺入糖蛋白,随后,新合成的糖蛋白并不直接转运到别处,而在高尔基体中央(髓质)部位作短暂贮存。说明中央部位在功能上是高尔基体的一个重要组成部分。2.~3H-岩藻糖不仅掺入高尔基期和顶帽期精子细胞的高尔基体,而且掺入顶体期精子细胞的高尔基体,说明顶体期的高尔基体仍有合成糖蛋白的功能。3.新合成糖蛋白的去路,在精子细胞发育的不同阶段是不一样的。在高尔基期和顶帽期精子细胞中,新合成的糖蛋白     

基于超滤膜辅助的糖蛋白全O-连接糖链的富集和MALDI-TOF/TOF质谱结构解析

哺乳动物中约有50%以上的蛋白质都发生了糖基化修饰.连接在丝氨酸或苏氨酸上的O-连接糖链是常见的蛋白质糖基化修饰方式之一,其主要功能是维持与其连接的蛋白质部分的空间构象,保护其免受蛋白酶水解及覆盖某些抗原决定簇.糖链结构的解析有助于更清楚地认识糖蛋白及其功能.本研究建立了一种基于超滤膜辅助(FASP)富集细胞、血清和尿液中糖蛋白全O-连接糖链的方法,根据糖蛋白与其糖链结构之间的分子质量差异,利用10 KD超滤膜富集蛋白质样品中由β消除反应释放的全O-连接糖链,将糖链甲基化修饰后再使用MALDI-TOF/TOF-MS进行解析,同时利用二级质谱进行结构确认.通过上述方法可从标准糖蛋白mucin、细胞、血清和尿液样本中分别鉴定到83、29、33和85种O-连接糖链结构,利用该方法可以从复杂样品中富集和解析糖蛋白全O-连接糖链,实现快速、高效、高通量地解析糖蛋白O-连接糖链的目的.     

人肝癌细胞系的糖蛋白质组学研究

糖基化是最重要的蛋白质翻译后形式之一,糖基化蛋白的糖链部分影响着蛋白质的折叠和稳定性以及其生物学功能.许多恶性肿瘤组织与正常组织相比已显示出蛋白质糖基化的差异.采用蛋白质组学分析方法结合先进的糖蛋白荧光染色技术,研究了正常人肝细胞系(ChangLiver)和人肝癌细胞系(Hep3B)糖蛋白糖基化的差异.首先用细胞裂解法提取细胞总蛋白质,进行双向电泳(2-DE),然后用pro-QEmerald488糖蛋白荧光染料进行糖蛋白染色,得到两种细胞系糖基化蛋白表达谱,经2-DE分析软件Dymension分析2-DE图像,比较糖蛋白的糖基化程度,并对糖基化蛋白进行质谱鉴定.结果显示正常人肝细胞表达(74±2)个(n=3),而人肝癌细胞系表达(78±3)个糖蛋白(n=3).两者匹配的糖蛋白质点31个,Hep3B表达而ChangLiver不表达的糖蛋白质点47个,ChangLiver表达而Hep3B不表达的糖蛋白质点43个.两种细胞系糖基化程度存在明显差异,与正常人肝细胞相比,肝癌细胞发生糖基化改变的糖蛋白有25个,其中糖基化水平上调的有10个,下调的有15个,质谱鉴定出12个发生糖基化改变的糖蛋白.这些结果显示蛋白质糖基化改变可能在肝癌的发生和发展中起一定作用.     

人红细胞膜血型糖蛋白的研究进展

血型糖蛋白(GP)是红细胞膜中主要含唾液酸的跨膜蛋白,有A、B、C和D四种.GPA是MN血型糖蛋白,GPB表达Ss、U血型,GPC、GPD则是Gerbich抗原,四种血型糖蛋白的结构有不同程度的同源性,尤以同类间的同源性程度最高,GPA在防止红细胞之间、红细胞与血管内皮细胞之间的相互作用有重要功能,并在配体诱导下影响红细胞膜的物理性质.GPC是维持红细胞正常形状、正常物理性质的重要因子.GPA和GPC的功能还分别与带3蛋白、带4.1蛋白有关.     

增龄对大鼠输卵管粘膜上皮糖蛋白的影响

目的揭示增龄对大鼠输卵管粘膜上皮糖蛋白的影响.方法分别以5只1月龄、8月龄和18月龄健康雌性SD大鼠作为性成熟前期组(IMG)、性成熟期组(MG)和更年期组(CMG).取输卵管石蜡切片,然后进行PAS及PAS-阿尔新蓝染色.结果①PAS反应显示:峡部粘膜上皮阳性反应明显,三组阳性产物平均光密度值相比,MG与IMG、CMG间差异有高度显著性(P<0.01).②PAS-阿尔新蓝染色显示:峡部粘膜皱襞处上皮细胞游离面有少量淡蓝色阳性产物出现,三组间淡蓝色阳性产物未见明显差异.结论大鼠输卵管峡部粘膜上皮能合成和分泌两种蛋白质:中性糖蛋白和酸性糖蛋白.增龄对大鼠输卵管峡部粘膜上皮中性糖蛋白的合成和分泌有明显的影响,对酸性糖蛋白无明显影响.     

植物凝集素串联法富集纯化血清多个亚糖蛋白质组

蛋白质糖基化修饰是哺乳动物中最为常见的一种翻译后修饰,蛋白质的寡糖侧链具有重要的生物学意义,如蛋白质分子间及细胞间相互作用、识别、肿瘤侵袭与转移等.本实验应用寡甘露糖型亲合层析柱、唾液酸型层析柱和O-连接糖蛋白亲合层析柱从血清中序列性提取寡甘露糖型、唾液酸型的N-连接糖蛋白及O-连接的糖蛋白,一维和二维电泳图谱显示血清...     

风疹病毒包膜糖蛋白的研究进展

风疹病毒(RV)是人类重要的致畸病毒之一,目前对其预防仅限于减毒活疫苗.对RV包膜糖蛋白的研究是生产安全有效的基因工程疫苗的基础.本文试从细胞内加工与转运、免疫原性及实验室表达等3个方面,对RV包膜糖蛋白近几年的研究进行综述.     

P-糖蛋白的细胞内转运及表达调控

肿瘤多药耐药(multidrug resistance,MDR)的发生多与P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)过度表达相关。作为一种糖蛋白,P-糖蛋白在内质网中合成、折叠,然后转运到高尔基体进行加工、修饰,最终定位于细胞膜,且只有定位于细胞膜的P-糖蛋白才与肿瘤多药耐药的产生相关。P-糖蛋白的表达与多种信号通路如MAPK、Wnt/β-catenin、PKC、NF-κB有关。研究证实,还有多种miRNA与肿瘤多药耐药的发生相关。本文综述了P-糖蛋白的细胞内转运过程及P-糖蛋白表达相关信号通路的研究进展,为以P-糖蛋白为靶标的肿瘤多药耐药逆转剂提供新的研究策略。     

糖蛋白组学研究技术进展及其应用

蛋白质的糖基化修饰与蛋白质功能密切相关,糖蛋白组学的相关研究已成为蛋白质组学研究的一个重要分支.本文在综述目前常用的糖蛋白组学技术方法的基础上,重点介绍了近两年出现的新技术策略及其应用.     

山药糖蛋白提纯工艺

用正交试验优化了水浸提-醇沉淀法提取山药糖蛋白的工艺条件,通过DEAE-52离子交换层析柱和Sephadex G-75葡聚糖凝胶对粗提物进行纯化.实验结果表明,较优的提取条件是:提取温度65 ℃,时间2h,浸提次数3次,料水比1∶15.此条件下糖蛋白粗品提取率为1.23%,各因素的影响程度顺序是温度>料水比>时间>浸提次数.粗提物经DEAE-52,SephadexG-75柱层析纯化得到两个糖蛋白组分.