大阪鲫鱼（Carassius Auratus cuvieri Temminck et．Schlegel）雌性特异血清蛋白生化特性及免疫细胞化学定位的研究

雌性特异血清蛋白存在于成熟雌性大阪鲫鱼血清中,雄鱼则无。注射雌二醇可诱导雄鱼及成熟雌鱼合成这种蛋白质并引起鱼肝细胞粗面内质网增加,糖元颗粒减少。从诱导的大阪鲫鱼血清中分离出电泳纯的雌性特异血清蛋白的分子量为４６６０００±４０００（ｎ＝１０）,电泳谱带有３条,用纯的雌性特异血海蛋白制备的兔抗鱼抗血清不与雄鱼血清发生免疫反应,而与正常成熟雌鱼及诱导鱼的血清形成１条免疫沉淀线。免疫细胞化学定位诱导及成熟雌鱼的肝细胞核外细胞质有阳性颗粒,在卵母细胞外围有成团的阳性颗粒分布。     

银鲫卵黄原的诱导、分离纯化及其生化鉴定

以雄性银鲫为实验材料,通过雌二醇（Estradiol-17β,E2）的多次诱导,使得E2诱导产物成为血清中的主要蛋白。而后,在快速蛋白液相色谱（FPLC）系统上,利用高交换量的阴离子交换层析Q柱,成功的从血清中提纯了与雌性特异蛋白相一致的E2诱导产物。糖、磷、脂蛋白分析表明,它是一类糖磷脂蛋白大分子。同时,它能被Mg^2 -Ethylenediamine tetraacetic acid(Mg^2 -EDTA)部分沉淀,这进一步证明,与雌性特异蛋白相一致的E2诱导产物就是卵黄原（Vitellogenin,VTG)。聚丙烯酰胺凝胶电泳表明,银鲫有两种VTG分子。     

鲫鱼雌性有关蛋白的研究

本文利用聚丙烯酰胺、SDS、超薄平板等电聚焦等多种电泳方法,对不同性别鲫鱼的血清分析后,发现了两种与雌性有关的特异血清蛋白,FSSP-Ⅰ及FSSP-Ⅱ。分离提纯了含量较多的FSSP-Ⅱ,其分子量、等电点、氨基酸组成分析的结果证明,它是一类与已报道过的鱼类雌性蛋白极不相同的、与性别有关的蛋白。为性别问题的研究提供了有意义的资料。     

鱼类抗冻蛋白的研究 Ⅰ.黄盖鲽血清抗冻蛋白的特性及分离

本文首次报道了中国沿海鱼类中有含抗冻蛋白的鱼种存在。从产于中国黄海的黄盖鲽血清中分离提纯了抗冻蛋白,并对其进行了研究分析。黄盖鲽抗冻蛋白具有十分明显的降低血液冰点的作用,存在特征性的热滞现象。该蛋白的分子量为4500道尔顿左右,经Sephsdex G-25柱层析及高效液相色谱逆向层析法二步提纯。氨基酸组成分析结果表明它含有60％左右的丙氨酸。抗冻蛋白产生于黄盖鲽的冬季血清中,而不存在于夏季血清中。从肝脏中提取mRNA。Northern杂交证实,黄盖鲽抗冻蛋白是一类在转录水平上受到调控的蛋白。该蛋白的提纯及对其特性的研究,对研究抗冻基因的克隆及表达都具有重要的意义。     

疫苗

<正>本文报道了无细胞及脂多糖的抗原成分,为一多糖组分(I)和蛋白组分(Ⅱ)的复合物。(I)包含脑膜炎双球菌B血清组特异的英膜多糖。(11)包含脑膜炎双球菌血清型 2和6特异的外膜蛋白,具单一的主要成分,分子量为42000士300。这些成分对制备脑膜炎疫苗是很有     

鸡贫血病毒衣壳蛋白的表达纯化及多克隆抗体制备

利用PCR技术,以pPrpo-VP1为模板扩增得到鸡贫血病毒的衣壳蛋白基因(VP1),以T4多聚核苷酸激酶磷酸化处理、纯化后,克隆至表达载体pET-30a( )中,从而构建了原核表达质粒pET30-VP1。将pET30-VP1转化至感受态细胞E.coliBL21(DE3)中,经IPTG诱导后,SDS-PAGE分析,可见约45kDa的目的蛋白获得表达。该蛋白经亲和层析纯化后,免疫6-8w的雌性Balb/c鼠,三次免疫后,采血分离血清,制得抗VP1的多克隆血清。以纯化的VP1为包被抗原,用ELISA方法检测,制备的血清效价达12800×以上。以Westernblot检测,该血清可与目的蛋白发生特异性反应,证明其具有良好的免疫原性。VP1蛋白的成功表达及其多克隆抗体的制备为进一步研究VP1蛋白的功能及开展CAV疫苗及诊断制剂的研制奠定了基础。     

不同水生脊椎动物的血清与黏液蛋白图谱分析

因脊椎动物的血清与黏液中含有大量蛋白质及其他生物活性物质, 而具有多种生理、生化与抗病防御功能。为了解水生脊椎动物血清与黏液中所含主要蛋白成分及其异同, 我们分别从中华鲟(Chinese sturgeonAclpenser sinensis grdy)、鲫鱼(Crucian carp Carassius auratus)、草鱼(Grass carp Ctenopharyngodonidellus)、赤点石斑鱼(Red-spotted grouper Epinephelus akaara)、青石斑鱼(Banded grouper Epinephelusawoara)、狗鱼(Pikes Esox reicherti)、江豚(Finless porpoise Neophocaena phocaenoides)、黄颡鱼(Yellow catfishPelteobagrus fulvidraco)、鳜鱼(Mandarin fish Siniperca chuatsi) 这9 种水生脊椎动物中, 采集血清和皮肤黏液样本。利用考马斯亮蓝G-250 法, 测定了不同水生脊椎动物的血清和黏液样品中总蛋白的含量; 经SDS-PAGE 蛋白电泳, 分别获得不同水生脊椎动物血清及黏液蛋白图谱; 比较和分析了同种动物血清和黏液、不同动物之间血清与血清或黏液与黏液之间蛋白图谱的差异。结果表明:这些动物的血清蛋白组分有显著相似性, 在分子量45—120 kD 之间, 蛋白条带大量集中分布; 除青石斑鱼外, 其他8 种水生脊椎动物都有分子量约为 28 kD 和 14 kD 相同或相近的两条蛋白带。草鱼、鲫鱼、鳜鱼、狗鱼、黄颡鱼和江豚的黏液蛋白, 除了都含有分子量大小约为45 kD 的蛋白条带外, 其他无显著相似性。对同种水生脊椎动物的血清与黏液蛋白比较, 虽然黄颡鱼的血清与黏液中分子量相近的蛋白带最多, 也仅约为38%, 可见其蛋白带的种类和含量都存在显著差异。       

64DP与人染色质的结合反应及细胞核内64DP的检测

现有结果表明64 DP(DNA结合蛋白)可能是一种急性期反应蛋白质。正常人每百毫升血清中含有约50mg的64 DP。目前,关于64 DP的生物学功能国内外尚无研究和报道。这方面的研究对阐明肿瘤及其它病理条件下血清64 DP含量增高的机制和意义有可能提供线索。 已知64 DP在体外具有和DNA结合的特性.它在体内的生理作用是否也和DNA有关呢?本实验首先分离纯化了人肝细胞染色质,用同位素标记的64 DP与染色质进行的结合实验及结合抑制实验表明64 DP能特异地与人染色质结合。进一步用~(125)I标记的兔抗64 DP抗体对人染色质作了固相放射免疫测定,结果定性地显示出染色质内可能含有64 DP。用兔抗64 DP抗体作为第一抗体,利用PAP免疫组织化学染色研究了16例正常肝组织切片,发现大多数切片(80％)中部分肝细胞核内有明显64DP显色颗粒。以上诸实验结果均提示细胞核内有64 DP存在,表明64 DP的生物学功能可能与它的DNA结合特性有关。     

尼帕病毒融合蛋白、受体结合蛋白的表达及特异性高免血清制备

尼帕病毒膜融合蛋白F和受体结合蛋白G在病毒感染和诱导机体产生保护性免疫中起重要的作用。通过PCR扩增获得尼帕病毒F1和G基因片段(均去掉信号肽和跨膜区),克隆至原核表达载体,IPTG诱导大肠杆菌表达目的蛋白,Western blot表明重组F1、G蛋白与兔抗尼帕病毒血清具有良好的反应原性;同时将F1和G基因克隆至经改造过的杆状病毒表达载体,获得了含有目的基因的重组杆状病毒,接种sf9单层细胞,间接免疫荧光检测表明F1、G蛋白在杆状病毒中正确表达,并与抗尼帕病毒血清具有良好的反应原性。以纯化原核表达的F1、G蛋白免疫兔获得了抗F1和抗G重组蛋白的特异血清,Western blot和间接免疫荧光检测表明所制备的血清具有特异性。试验所表达的抗原和制备的特异血清可用于尼帕病的诊断。     

蚕豆蛋白质亚基分析与特异种质鉴定

采用SDS-PAGE方法,对112份不同基因型蚕豆的清蛋白和球蛋白亚基的差异性进行分析。结果显示:(1)蚕豆清蛋白和球蛋白亚基的有效等位变异分别为1.750 0±0.452 3、1.545 5±0.522 2,多态性比率分别为75.00%、54.55%,清蛋白的亚基遗传多样性指数较球蛋白亚基高。(2)蚕豆清蛋白和球蛋白分别含有在不同基因型蚕豆中构成不同的12和10个亚基,其中清蛋白含有9个基本亚基,116kD、96kD、45kD为清蛋白的3个特异亚基;球蛋白含有8个基本亚基,58kD、35kD为球蛋白的2个特异亚基;研究共鉴定筛选出42个含有清蛋白特异亚基和21个含有球蛋白亚基的种质资源。(3)清蛋白的97kD、63kD基本亚基和球蛋白的97kD、56kD、47kD基本亚基存在一定的缺失现象,共鉴定出19个清蛋白亚基和21个球蛋白亚基缺失的优异种质。研究表明,蚕豆清蛋白和球蛋白亚基构成在不同种质之间具有差异性,除基本亚基外,部分种质还含有特异亚基或缺失亚基。     

鸽血变虫（Haemoproteus columbae Kruse,1980）生活史研究

本文首次报告我国鸽血变虫的生活史。自然和人工感染实验证明虱蝇是其昆虫媒介。本虫的配子体进入虱蝇体内6—10天后完成孢子有性增殖。 实验观察了本虫在鸽体内无性增殖期的形态、部位及在末梢血液中配子体的发育过程,并证明其潜隐期(prepatent period)为28—30天。 本工作亦对羽虱体腔中的卵囊和子孢子作了描述,提示羽虱也可能是本虫的媒介昆虫,有待今后研究证实。     

EFFECT OF VINBLASTINE AND COLCHICINE ON UPTAKE AND RELEASE OF PUTATIVE TRANSMITTERS BY SYNAPTOSOMES AND ON BRAIN ACTOMYOSIN-LIKE PROTEIN

Abstract— The effects of several inhibitors, including vinblastine and colchicine, on the accumulation of a number of putative transmitters by a rat brain synaptosomal preparation and their subsequent release by excess K⁺ was examined. In addition, the effect of the alkaloids on the ATPase activity of the actomyosin-like protein, neurostenin, isolated from the synaptosomal preparation, was studied. The uptakes of radioactive glutamate, GABA, dopamine and norepinephrine were energy-dependent, as evidenced by their susceptibility to 0.01 mM carbonyl cyanide m-chlorophenylhydrazone (Cl-CCP), 01 mM ouabain and temperature. The active accumulations of GABA, dopamine and norepinephrine were also greatly inhibited by 1 mM6-hydroxydopamine (6-OHDA), 01 mM mersalyl, 0.05–0.25mM vinblastine and 0.1–1.0 mM colchicine. Vinblastine was approximately 10-fold more potent (K₁, ?0.1 mM) than colchicine as an inhibitor. The release of actively accumulated dopamine or norepinephrine by excess K⁺ (increasing the [K⁺] from 5 to 30 mM) was inhibited somewhat when vinblastine was present during the entire incubation period. If the synaptosomes were preloaded with the radioactive compounds prior to addition of vinblastine, there was no discernible effect on the relative amount of material released by excess K⁺. However, the addition of inhibitor under the latter conditions caused a leakage of radioactivity into the medium even without excess K⁺ being present. Glutamate accumulation was somewhat different from that of GABA, dopamine or norepinephrine. Although it required energy for uptake, 6-OHDA, mersalyl, vinblastine or colchicine were not inhibitory. Studies of the oxidative metabolism of glutamate and GABA by this synaptosomal preparation indicated that the mechanisms of inhibition by vinblastine was not attributable to a metabolic effect. Both vinblastine and colchicine inhibited the Mg²⁺-stimulated, but not the Ca²⁺-activated ATPase of neurostenin. This effect was probably attributable to an interaction of the vinblastine with the neurin moiety of this actomyosin-like protein. We suggest that the inhibitory phenomena exhibited by vinblastine and colchicine in this synaptosomal preparation arose from the effect of these alkaloids on the neurin associated with the synaptic membrane.     

NAA对蜜环菌生长及CAT,SOD活性影响的研究

低浓度（低于30mg／L）的α－萘乙酸（NAA）能刺激密环菌的生长,其生长量可提高0～47．1％;并促进密环菌中SOD（超氧化物歧化酶）和CAT（过氧化氢酶）活性提高,随NAA处理浓度的增加及时间的延长（0～12d）2酶活性随之增强。过高浓度则2酶活性提高率下降,但仍高于对照。10mg／LNAA处理12dSOD活性提高61．1％,处理16dCAT活性提高54．7％。10mg／LNAA处理时可提高密环菌中可溶性蛋白质含量13．0％～17．4％。     

THE ACTION OF ALKALIES ON PEPTIDES AND ON KETOPIPERAZINES

1. The tripeptide glycyl-levo-alanyl-glycine in solution of either one or ten equivalents of alkali does not undergo racemization on standing. 2. The dipeptide levo-alanyl-glycine under the conditions given in (1) does not undergo racemization. 3. In ketopiperazines, levo-alanyl-glycine anhydride and in levo-prolyl-glycine anhydride under the influence of dilute alkalies, racemization takes place. 4. Racemization in the present experiments was never complete. The degree of racemization seems to depend, on the one hand, on the stability of the ketopiperazine ring; on the other, on the concentration of the alkali. 5. The significance of these observations will depend on the outcome of the work on a larger number of polypeptides and ketopiperazines. The work is now in progress in this laboratory.