椪柑精油及其主要抑菌组分对菌核青霉的抑制作用

采用水蒸气蒸馏法提取椪柑(Citrus reticulate Blanco)果皮精油,并用GC-MS对其成分进行分析,共鉴定出46种成分,主要包括柠檬烯(57.67%)、β-芳樟醇(5.36%)、2-蒈烯(4.47%)、β-蒎稀(4.31%)、γ-松油烯(4.08%)、α-蒎烯(3.27%)、1,2-二异丙烯基环丁烷(2.87%)、β-月桂烯(2.77%)、α-侧柏烯(2.40%)、β-水芹烯(2.24%)、癸醛(1.80%)和香茅醇(1.49%)等。采用污染食物技术(poisoned food technique)和液体培养法(liquid culture)测定了不同浓度椪柑精油以及主要抑菌组分对菌核青霉的抑制作用。结果表明:不同浓度(0.5~20μl/ml)的椪柑精油对菌核青霉生长均有一定的抑制,且抑菌效果与浓度呈正相关。无论是采用污染食物技术还是液体培养法,20μl/ml椪柑精油均能完全抑制菌核青霉生长;随着培养 时间延长到7d, 20μl/ml椪柑精油抑菌效果有所下降,但仍能显著抑制菌核青霉生长。采用污染食物技术考察了椪柑精油中7种常见抑菌成分对菌核青霉的影响。结果表明,0.04μl/ml柠檬醛和1.07μl/ml β-芳樟醇能显著抑制菌核青霉生长,而其他组分无明显作用。实验结果表明,椪柑精油的抑菌作用可能归功于其所含的柠檬醛和β-芳樟醇。     

酿酒酵母INVSC1对油菜菌核病菌抑制作用的研究

以油菜菌核病菌为供试病原菌,在摇瓶发酵备件下,研究了酿酒酵母菌INVSC1在各种培养条件下对油菜菌核病菌的抑菌效果,确定了酿酒酵母的最佳培养条件：最佳培养温度为28℃,培养时间为20h,接种量为5％。酿酒酵母能抑制油菜菌核病可能与它发酵产乙醇有关。酿酒酵母抑制油菜菌核病的发现使生物防治又多了一类新的可供选择的生防菌。     

桑椹菌核病菌多样性调查

2003～2006年对本地果桑上桑椹菌核病病菌的多样性进行了调查,结果发现有5种核盘菌：Ciboria comnculoides,Ciboria shiraiana,Scleromitrula sp．,Scleromitrula rubicola和Synciboria ningpoensis。其中Ciboria shiraiana和Scleromitrula sp．的出现频率分别高达49．7％和41．9％。Scleromitrula sp．和Synciboria ningpoensis是2种新类型。Scleromitrula sp．的子囊盘高2．5～4．1mm,宽1．4～3．0mm,子囊孢子大小7．7～11．1×3．4～4．1μm,纵向有一明显内凹的特征。Synciboria ningpoensis的子实体冠状,2．3～2．5×3．0—3．8mm,由多个无柄的直径512～704μm微子囊盘组成。     

油菜菌核病菌生理生态研究

通过试验分析,结果得出,油菜菌核病菌生长温度范围在0～34℃之间,23℃以下菌丝生长速度与温度呈正相关,25℃以上则呈负相关,23～25℃最适宜,菌丝和菌核致死温度分别为45℃和75℃．该菌对酸碱度适应范围很广,PH1～14范围内只在PH_1条件下不能生长,其最适PH值为5～6。病菌利用铵态氮源能力最强,硝态氮源次之,不能利用亚硝态氮;对氨基酸利用能力以精氨酸最强,其次是酪氨酸、天门冬氨酸和谷氨酸,赖氨酸最差。植株内精氨酸和赖氨酸比值大的白菜型油菜“黄鳝籽”病情扩展最快。     

贝莱斯芽孢杆菌L-1对梨灰霉和青霉病菌的抑制作用评价及全基因组分析

【目的】明确贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)L-1对梨灰霉和青霉病菌的抑制作用,明确菌株L-1无菌发酵液拮抗活性的稳定性及可能的拮抗机制。【方法】通过离体测定、活体测定和病原菌菌丝形态观察,评价菌株L-1对梨灰霉和青霉病菌的拮抗活性。以梨灰霉病菌为供试病原菌,利用牛津杯法测定菌株L-1无菌发酵液拮抗活性的稳定性。利用Pacbio RSII三代测序技术测定L-1的全基因序列,将全基因序列与基因蛋白质序列数据库进行BLAST比对分析,预测菌株L-1可能产生的次生代谢产物及潜在的作用机制。【结果】菌株L-1对梨灰霉和青霉病菌的活体抑制率分别为92.88%和77.47%,能引起病原菌菌丝膨大、畸形。菌株L-1在含10%Na Cl的培养液中仍能正常生长,其无菌发酵液耐高温、酸、碱、紫外照射和蛋白酶降解,对病原菌具有稳定的拮抗活性。全基因序列分析结果显示菌株L-1有112个基因参与了多种碳源的代谢,可以利用多种碳源进行生长;含有参与亚精胺、海藻糖等与菌株抗逆性相关化合物合成的基因;次生代谢产物预测结果显示:L-1含有合成surfactin、fengycin、bacillibactin、bacillaene、macolactin、difficidin、bacilysin等多种肽聚糖和聚酮糖类抗性化合物的基因簇,以及能够降解病原菌细胞壁的β-1,3-葡聚糖酶和几丁质酶相关的基因;此外菌株L-1含有生成乙偶姻等能够诱导植物抗性的基因。【结论】菌株L-1能有效拮抗多种梨果采后病害,抗逆性强,拮抗活性稳定,预测菌株L-1能够通过产生多种拮抗活性化合物和细胞壁水解酶类以及诱导植物抗性实现防病效果,具有很大的应用潜力。     

油菜菌核病菌对速克灵的抗药性风险研究

在室内条件下通过菌丝生长速率法测定了分离自安徽省10个县市的油菜菌核病菌（Sclerotinia scleroti-orum）对速克灵的敏感性。结果表明,速克灵对各供试菌株的EC50值分布范围为0.0899-0.4966μg/mL,平均为0.2541μg/mL,且供试菌株在含速克灵质量浓度为10 000μg/mL的PDA平板上菌丝生长几乎完全被抑制。表明各供试菌株对速克灵十分敏感,但其敏感程度地区间存在较大差异。通过室内药剂直接诱变法,获得了抗速克灵突变株。抗性突变株抗性测定结果表明,某些地区的抗性菌株抗性消失,有些地区的抗性菌株抗性继续保持。结果显示安徽省油菜菌核病菌对速克灵具有潜在的抗药性风险。     

青霉PT95菌株菌核内产生类胡萝卜素的研究

从土壤中分离到一株经鉴定属于Penicilliumthomiiseries的菌株PT95,该菌株在6种固体培养基上都能形成大量的橙红色菌核,其中在察氏培养基上形成的菌核量最大,而在马铃薯葡萄糖琼脂培养基上形成的菌核的类胡萝卜素含量最高。培养基初始pH对菌核形成和色素含量无明显影响,但对菌落生长速度有显著影响。光照培养对菌核形成和色素含量无明显影响。薄层色谱分析表明,PT95菌株菌核内产生的类胡萝卜素由两种色素成分组成,其中β-胡萝卜素占总色素量的64．3％。     

白藜芦醇对核桃细菌性黑斑病菌的抑制作用

旨为核桃细菌性黑斑病天然杀菌剂的开发提供理论依据,同时为白藜芦醇在农林作物病害防治上的应用奠定基础.测定了白藜芦醇对核桃细菌性黑斑病菌(Xaj)的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC).在白藜芦醇的亚抑菌浓度下,开展了以下实验:(1)通过结晶紫染色法检测了Xaj生物膜的形成;(2)测定了胞外多糖的产生量;(3)...     

草酸青霉BZH-2002产果胶酶特性研究

对草酸青霉菌（Penixillium oxalicum）BZH-2002菌株固体发酵果胶酶的特性及浸提条件进行了研究,确定其最佳产酶时期为72—92h,利用干物质量最快的时期为24—72h发酵产酶期间培养基介质中pH值呈“V”字形变化。该菌株以甜菜渣、葵花盘为碳源,以（NH）2SO4为氮源时产酶率最高,分别高达4．33万和4．56万U／g干物质,（NH4）2SO4最佳用量0．9g/10g甜菜渣。此外,浸提方法对果胶酶产率也有一定影响,1％NaCl作为浸提液的效果最好,最佳浸提时间1h,浸提温度25—40℃。     

应用PCR方法检测油菜菌核病菌对多菌灵的抗药性

通过保守的寡核苷酸引物B1/B3扩增出油菜菌核病菌MBC^HR和MBC^S菌株的部分β-微管蛋白基因,结果发现编码的198位氨基酸由Clu(GAG)突变为Ala(GCG),表现高水平抗药性。根据MBC^HR菌株的突变设计2个快速检测方法：第一种方法是根据MBC^HR菌株197和198位密码子（GACGAG→GACGCG）形成HhaI酶切点（3'CGCG 5'）,将B1/B3的扩增产物874bp片段酶切成193bp和681bp片段,而MBC^S菌株的PCR产物不被酶切;第二种方法用198位突变密码子作为3'末端碱基设计2个等位基因特异性寡核苷酸引物（ASO）用一地“nested”PCR或直接从基因组DNA扩增。通过PCR扩增和ThaI酶切能直接检测油菜菌核病菌的MBC^HR和MBC^S菌株,所得结果与传统菌落直径法相吻合。     

稀土元素对油菜菌核病菌生长及其生化性状影响的研究

研究了氧化镧 (La2 O3 )对油菜菌核病菌 (Sclerotiniasclerotiorum ,Ss)生长及其生化性状的影响 .结果表明 ,La2 O3 浓度在 3 0～ 45 0mg·L-1时 ,固体培养和液体培养中对Ss生长均呈明显抑制作用 ,且生长抑制率 (Y)随La2 O3 浓度增加而相应增加 .液体培养中油菜菌核病菌产生的果胶酶活性随溶液中La2 O3 浓度增加而相应增加     

海洋真菌菌核青霉FS50固体发酵代谢产物

采用硅胶柱、反相硅胶柱、凝胶柱、薄层制备和HPLC等色谱技术对1株分离自南海沉积物的海洋真菌菌核青霉Penicillium sclerotiorum FS50的大米发酵提取物进行分离纯化,从中分离得到7个化合物。通过波谱数据分析,化合物1-7分别被鉴定为:6,8‐dihydroxyisocoumarin‐3‐butyl formate(1),6,8‐dihydroxyisocoumarin‐3‐carboxylic acid(2),6‐methoxy‐8‐hydroxyisocoumarin‐3‐carboxylic acid(3),(+)‐sclerotiorin(4),4‐methyl‐5,6‐dihydropyren‐2‐one(5),5‐羟甲基糠醛(6),胡萝卜甙(7)。化合物1为新化合物,化合物2,3,6为首次从青霉属中分离得到。     

应用PCR方法检测油菜菌核病菌对多菌灵的抗药性

通过保守的寡核苷酸引物B1/B3扩增出油菜菌核病菌MBCHR和MBCS菌株的部分β-微管蛋白基因,结果发现编码的198位氨基酸由Glu(GAG)突变为Ala(GCG),表现高水平抗药性。根据MBCHR菌株的突变设计2个快速检测方法:第一种方法是根据MBCHR菌株197和198位密码子(GACGAG→GACGCG)形成ThaI酶切位点(3’CGCG 5’),将B1/B3的扩增产物874bp片段酶切成193bp和681bp片段,而MBCS菌株的PCR产物不被酶切;第二种方法用198位突变密码子作为3’末端碱基设计2个等位基因特异性寡核苷酸引物(ASO)用于“nested”PCR或直接从基因组DNA扩增。通过PCR扩增和ThaI酶切能直接检测油菜菌核病菌的MBCHR和MBCS菌株,所得结果与传统菌落直径法相吻合。     

草酸青霉BZH-2002果胶酶固体发酵条件研究

对草酸青霉菌(Penixillium oxalicum)BZH-2002菌株固体发酵果胶酶的主要影响因子温度、初始pH值、含水量及接种量进行了实验探讨,确定了最佳培养条件：温度为30℃,初始pH值为4．8,固体培养基含水量控制在30～35ml/10g甜菜渣,接种量3～4%。同时对该菌株固体发酵提取液中果胶酶的酶学特性进行了初步研究,结果表明,该酶最适反应温度和pH分别为55℃和pH4．8,在40℃温度下和pH3．5～5．5范围内,酶活性较稳定。     

草酸青霉对含钾矿物风化及钾溶出的影响

【目的】探讨含钾硅酸盐矿物在草酸青霉(Penicillium oxalicum)作用下的风化及钾溶出情况。【方法】利用等离子体发射光谱、X-射线能谱、X-射线光电子能谱分析了3种常见含钾硅酸盐矿物(钾长石、白云母和黑云母)在草酸青霉作用后浸出液和矿物表面元素含量的变化;通过X-射线衍射分析矿物晶相结构的变化;采用共聚焦激光扫描显微镜表征了草酸青霉在矿物表面形成的生物膜;测量了培养液中不同碳源与氮源组分对草酸青霉解钾的影响。【结果】草酸青霉对结构稳定的钾长石和白云母风化速率较低,相比而言黑云母容易被风化并释放可溶性钾元素;草酸青霉在矿物表面形成了网状结构的生物膜,有利于微环境的生成及有机酸在其内的富集,促进微环境内钾的释放,强化微生物对矿物的风化作用;草酸青霉对多种碳源及氮源都表现出较好的适用性。【结论】草酸青霉是一种能够促进多种含钾矿物风化和钾溶出的真菌,在堆肥和生物肥料领域具有广泛的应用前景。     

微生物诱导子对青霉PT95菌株菌核生物量和类胡萝卜素产率的影响

菌核是许多丝状真菌形成的一种休眠体.我们从土壤中分离到一株经鉴定属于Penicillium thomii series的PT95青霉菌株,该菌株能在固态培养基上形成大量坚硬的砂粒状的菌核(直径约300μn).PT95菌株的菌核与众不同之处在于可以积累以β-胡萝卜素为主的类胡萝卜素[1].菌核的形成,除了遗传因素外,还受多种因素影响,例如生长环境中的温度、水势( Water potential)、有机物成分等[2-4].Hawker [5]认为对真菌的营养生长( Vegetative growth)有利的物质也对菌核生长有利.我们在以前的研究中也证实了合适的氮、碳源以及植物油的补充有利于提高PT95的菌核生物量[6].然而,菌核生物量的提高,只解决了一半问题.如果在得到大量菌核的同时,菌核中积累的类胡萝卜素含量也提高了,这才能保证PT95菌株类胡萝卜素产率的提高.     

草酸青霉的植物多糖降解酶基因表达调控的研究进展

植物生物质是地球上最丰富的可再生资源,对其生物炼制可生产高附加值的生物基产品。生物炼制需要使用植物多糖降解酶(plant-polysaccharide-degrading enzymes,PPDEs),如纤维素酶、木聚糖酶和生淀粉酶。丝状真菌草酸青霉(Penicillium oxalicum)能分泌完整的具有高活力的植物多糖降解酶,但其产量低限制了大规模生产及应用。草酸青霉中植物多糖降解酶的生物合成受到多种调控因子包括转录因子的严格调控。本文主要介绍在以植物生物质甘蔗渣和木薯生淀粉为原料的生物炼制中,涉及的一些关键微生物方面的问题,如从高产植物多糖降解酶的真菌菌株的筛选、育种,到草酸青霉植物多糖降解酶合成及其基因表达的调控基因的鉴定,以及酶产量提高的工程菌株的构建等,为丝状真菌资源的开发与利用提供理论指导。     

菌核菌生长和产生草酸的营养和环境条件研究

本研究探讨了培养基种类、酸碱度、温度对菌核菌(Sclerotinia sclerotiorum)菌丝生长(MG)和草酸累积(OA)的影响及MG和OA之间的动态变化过程。正交试验中,碳源为:琥珀酸钠-葡萄糖、蔗糖-马铃薯汁液和蔗糖的三种培养基中,OA量依次递减且差异显著。MG和OA成负相关关系。培养基的pH值是影响OA的一个主要因子,本试验中pH6最适合菌丝产草酸,而pH5最适合菌丝生长。23℃下OA和MG大于26℃下OA和MG。OA和MG的动态变化过程试验表明,不同培养基的草酸累积速率和最终     

盾壳霉在油菜菌核病菌生物防治中的应用

油菜核病菌(Sclerotiniasclerotiorum)是一种世界性病原菌,其分布广、危害大、难根治。盾壳霉(Coniothyriumminitans)是该病原菌的破坏性寄生真菌,可以有效、专一地降低病原菌菌核的形成与萌发,在该病原菌的生物防治方面具有较大的应用潜力。从油菜核盘菌的致病过程与特点、盾壳霉的生长特性、盾壳霉和油菜核盘菌间相互作用的规律及途径等几个方面阐述了盾壳霉对油菜核盘菌的生防特性,讨论了盾壳霉在生产实践中的应用潜力及存在问题,并提出了一些解决问题的可能途径及需要进一步研究的内容与方向 。     

草酸青霉中一个膨胀因子基因POX06047的遗传分析

纤维素由于大量纤维素链间氢键的存在形成了很难被纤维素酶降解的微晶纤维素.膨胀因子通过破坏纤维素链间的氢键使纤维素酶能更好地接近和降解底物.草酸青霉(Penicillium oxalicum)HP7-1的基因组中注释为膨胀因子基因有4个,分别为POX01524、POX06047,POX07832和POX08485.其中P...