抗玉米素核苷的单克隆抗体制备及内源玉米素核苷的酶联免疫吸附测定

通过二次成功的细胞融合,共获得三株分泌抗玉米素核苷(ZR)单克隆抗体的稳定杂交瘤系F_2E_6、F_3G_6和F_1B_9。其中F_2E_6分泌的单抗属IgG_1、F_3G_6、F_1B_9分泌的单抗均属IgM。以F_2E_6、F_3G_6单抗为基础的ELISA对ZR的检测灵敏度为0.05pmol(—18pg),线性检测范围为0.05—50pmol。除玉米素(Z)外,F_2E_6、F_3G_6单抗与IPA、6-BA、KT和腺苷几种ZR类似物的交叉反应值都小于0.18％。用ELISA测定F_2E_6单抗与ZR反应的亲和常数为2.36±0.99×10~(-8)M。本文还报道了包埋抗原的ELISA在植物内源细胞分裂素测定中的应用,并用此方法测定了黄化玉米(Zea mays L.)幼苗中ZR的含量。     

酶联免疫吸附测定法

酶联免疫吸附测定法（ELISA）是一种灵敏度、特异性和精度都十分优良的测定方法。在诊断、疾病监控以及研究用途方面得到了广泛的运用。现在还在对其进行开发，以简化工序，提高灵敏度。此讲由SRL公司试药部的原田弘智对其进行讲解。[编者按]     

抗体夹心酶联免疫吸附法测定重组溶葡萄球菌酶研究

用重组溶葡萄球菌酶免疫家兔获得抗血清,经亲和层析纯化后用HRP标记,以双向免疫扩散法确定抗血清效价,以Westernblot鉴定抗体的特异性,建立双抗夹心法标准曲线,鉴定其最小检出限、精确度、回收率。实验显示多克隆抗体能与溶葡萄球菌酶特异性结合,双抗夹心ELISA法检测抗原的最小检出限为0·98ng/mL,标准曲线在0·98~500ng/mL范围内线性良好。3份同批样本分别重复6次测定,平均批内变异系数为6·4%;3份不同批样本分别重复6次测定,平均批间变异系数为6·5%。血清中加入已知量的标准抗原,测得平均回收率为98·6%。此法检测重组溶葡萄球菌酶的可测范围广,灵敏度和精密度高,变异系数较小。结果证实建立的检测血清中重组溶葡萄球菌酶含量的双抗夹心酶联免疫吸附测定法(Enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)灵敏、准确、可靠。     

专一识别水杨酸的单克隆抗体的制备及应用

首次报道了专一识别水杨酸（salicylic acid,SA)的单克隆抗体的制备。该抗体源于以5－氨基水杨酸（5－ASA）的5位氨基为偶联位点,血蓝蛋白（KLH）为载体合成的SA－NH－CH2－NH－KLH免疫原。它对SA和5－ASA具有高亲和力。用该抗体建立了定量测定SA的直接酶联免疫吸附测定法（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA),其检测范围为0.02-20nmol。利用该SA ELISA,研究了黄瓜9Cucumis sativus L.)叶片接种丁香假单胞菌（Pseudomonas syringae pv.syringae van Hall)后1－32h之间游离态SA含量的动态变化,发现其变化趋势呈双峰曲线。     

单克隆抗体酶联免疫吸附法检测尿标本中人巨细胞病毒抗原

本文运用抗人巨细胞病毒(HCMV)包膜20KD或/和130KD结构蛋白的单克隆抗体分别建立了4类酶联免疫吸附试验(ELISA)夹心法,共对44人份临床尿标本进行HCMV抗原检测。方法的敏感度可高达10.3—32.8ng HCMV抗原/ml尿,与尿标本中的HSV-Ⅰ、HSV-Ⅱ和EBV抗原无交叉反应,重复性良好,与病毒分离比较,敏感性和特异性在71—83％和88—100％之间;与核酸杂交比较,敏感性和特异性也可分别高达60—100％和83.3—100％。混合使用多种单克隆抗体作为包被抗体会得到较好的技术参数。上述结果提示运用单克隆抗体ELISA将有助于一般临床实验室对HCMV感染的快速诊断。     

酵母表面展示-酶联免疫吸附测定法的建立

以表面展示人源蛋白酶体α亚基6蛋白的重组酵母细胞,结合酶联吸附免疫原理检测技术,以表面展示有人源蛋白酶体α亚基6(proteasome subunit alpha6,PSα6)的重组酵母细胞及其对应的单克隆抗体3D7D12D为研究对象,建立酵母酶联免疫吸附(yeast-ELISA)检测技术,应用于检测小鼠单克隆抗体及单抗效价.应用该方法最佳酵母浓度为0.50A600;测得单抗效价为1∶5×105,与常规ELISA效价接近;交叉试验和阻断试验表明该方法特异性强;同时该方法可用于检测抗血清.结果表明,yeast-ELISA可直接应用于检测单抗,测得效价与常规抗原包被间接ELISA具有良好一致性,特异性好,无交叉反应性.     

酶联免疫吸附法的新进展

ELISA (酶联免疫吸附法)试验近两年来的进展情况可分为5部分:a.抗原包被技术,b.提高 ELISA 的灵敏度,c.提高 ELISA 的特异性,d.ELISA 的实验设计与理论,e.ELISA 的应用.从中可以看出 ELISA 的进展趋势.     

用单克隆抗体结合酶联免疫吸附试验检测云杉卷叶蛾幼虫体内的核多角体病毒

在ELISA间接法中,应用单克隆抗体检测感染云杉卷叶蛾核型多角体病毒(Choristoneura fumiferana nuclear polyhedrosis virus,CfNPV)的云杉卷叶蛾幼虫体内多角体蛋白和病毒粒子。三龄幼虫喂饲表层涂有CfNPV的人工饲料(2×10~5PIB/cm~2)后6小时,即可在幼虫抽提液中检出多角体蛋白抗原(每条幼虫含0.14μg)和病毒粒子抗原(每条幼虫含0.32μg),随后此两种抗原量逐渐增加,直至第5天。而用染色涂片镜检法,则在添食病毒后3天才可观察到有少量多角体,病虫的病症需5～6天后才出现。因此,本法是一种快速、特异和敏感的检测杆状病毒的方法,其敏感度为1ml含10ng提纯的病毒粒子或多角体蛋白都能被检测出来。     

酶联免疫吸附测定中固相化方法概述

酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)是一项应用广泛的固相酶免疫测定技术。抗原或抗体等反应物的固相化在ELISA检测系统中有着十分重要的作用,可直接影响检测结果。应用稳定性好、固相化物质变性率低及固定效率高的ELISA操作体系,可显著提高检测分析的灵敏性、特异性和可靠性。现就ELISA技术中不同固相介质和固相化方法作一概述。     

抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体的制备及特性

用杂交瘤技术制备了5株产生抗黄曲霉毒紊B₁单克隆抗体的杂交瘤细胞株。对其中之一AFB1－2H8进行了较系统的研究。AFB1一2H8属IgC3。纯化腹水抗体效价约5×10⁶。ELISA检测标准毒素的线性范围为0．5～50ng／ml。最低检出量为0．01ng／ml。该单抗与参试的其它黄曲霉代谢物的交叉反应系数为0～0．21,该抗体有较大的应用价值。     

酶联免疫吸附检测法的应用研究进展

酶联免疫吸附检测法(ELISA)由于具有灵敏、特异、简单、快速及易于自动化操作等优点而得到了快速发展,并且被广泛应用于多个领域.本文对ELISA检测法应用现状及优缺点进行综述,为今后ELISA检测法的更为广阔的应用与发展提供参考.     

抗嗜肺军团菌血清8型单克隆抗体的制备及双抗体夹心酶联免疫吸附试验检测法的建立

目的：制备针对嗜肺军团茵血清8型的单克隆抗体,并建立双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）检测方法。方法：用甲醛灭活的嗜肺军团菌血清8型菌免疫BALB／c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗嗜肺军团菌血清8型单克隆抗体,建立双抗夹心ELISA检测方法。结果：研制出8株能特异性分泌抗嗜肺军团菌血清8型单克隆抗体的杂交瘤细胞株,Ig类型分别为IgM（2株）、IgG,（1株）和IgG,（5株）;利用IgG1型单抗6G10与6C7配对,建立了双抗夹心ELISA检测方法,该方法的最低检出浓度为2．6×10^5cfu／mL,除与金黄色葡萄球菌有微弱的交叉反应外,与14株其他血清型嗜肺军团菌、17株非嗜肺军团菌及11株非军团菌均无交叉反应,具有较高的特异性。结论：制备了具有高特异性和亲和力的抗嗜肺军团菌血清8型单克隆抗体,并建立了双抗夹心EUSA检测方法。     

球形芽孢杆菌Ts-1灭蚊毒蛋白的酶联免疫吸附测定

通过Sephadex G—200柱层析纯化得到球形芽孢杆菌Ts-1毒蛋白,其中主要是42Da和43kDa两种毒蛋白。用此毒蛋白免疫家兔获得抗血清。利用ELlSA双抗体夹心法比较测定了三种灭蚊球形芽孢杆菌(Bacillus sphaericus)高毒株和两种无毒株,证明ELlSA具有很强的特异性。ELISA测定球形芽孢杆菌Ta-1纯化毒蛋白,最低可检值为1．56 x 10-5mg／ml。球形芽孢杆菌Ts—1发酵液的最低可检度为1：16000倍稀释。ELISA测定12和24小时发酵培养的Ts—1样品处理液中毒蛋白的含量,分别为0．049mg／ml和0．22mg／ml,毒蛋白含量相差4.59倍。而相应的生物测定LC50。值分别为0．71 ppm和0．154 ppm,毒力相差4.61倍。 ELISA与生物测定方法结果吻合。     

酶联免疫吸附试验定量检测血清肝素酶方法的建立及应用

目的：建立一种简便、微创的血清肝素酶酶联免疫吸附（ELISA）定量检测方法,并对肿瘤患者和正常人血清肝素酶进行比较,初步探讨血清肝素酶水平与肿瘤发生、发展的关系。方法：选择鼠抗人肝素酶单克隆抗体和兔抗人肝素酶多克隆抗体,建立双抗夹心ELISA检测方法,并利用此方法检测健康献血者和肿瘤患者血清中的肝素酶水平。结果：组内数据稳定,可重复;肿瘤患者血清中肝素酶D450nm值高于健康献血者。结论：所建立的血清肝素酶ELISA检测方法灵敏、高效,可用于肿瘤的辅助诊断。     

完整弓形虫P35重组蛋白IgM-酶联免疫吸附测定法检测弓形虫急性感染

为利用重组的完整弓形虫表面抗原P35 GST蛋白对弓形虫感染进行血清学诊断 ,构建了可表达P35 GST的JM10 9细胞株 .采用亲和层析对融合蛋白进行分离和纯化 ,用SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和蛋白质印迹 (Westernblot)分析所表达的蛋白质 ,并用纯化的重组蛋白进行IgM 酶联免疫吸附测定法 (IgM ELISA)检测不同病人血清中的抗 P35抗体 .SDS PAGE分析发现P35 GST重组蛋白的大小约 6 0ku ,为一亲水性蛋白 ,蛋白质印迹分析表明该蛋白与弓形虫阳性感染病人的血清有特异性反应 .利用P35 GST为抗原 ,对 6 0例血清进行IgM ELISA分析 ,发现P35 GST可明显区分近期感染和既往感染 ,在弓形虫的诊断上有很大的应用前景 .     

阿特拉津高灵敏酶联免疫吸附检测法的建立

目的：建立高灵敏度的阿特拉津酶联免疫吸附检测法。方法：将间接竞争ELISA进行条件优化以提高检测灵敏度,包括包被抗原与一抗的最佳工作浓度筛选、选择一抗的最佳稀释度对包被抗原进行细化筛选、不同有机溶剂对竞争结合反应的影响、酶标二抗稀释度筛选等。用建立的酶联免疫检测法检测实际样品,再与高效液相色谱法（HPLC）检测进行比较。结果：利用优化后条件建立了阿特拉津间接竞争ELISA检测曲线,标准曲线的相关系数R²=0.9958,相关性较好。另由此标准曲线可得LOD （最低检出限）为1.972 ng/ml。用于检测实际样品,回收率在80%-120%之间。当添加样品浓度为（0~6） ng/ml时,该法的检测灵敏度高于HPLC。结论：新建立的阿特拉津ELISA特异性好、精密度高,可代替大型仪器用于阿特拉津实际样品检测。     

间接酶联免疫吸附试验快速检测无毒唐菖蒲试管苗

本文利用间接酶联免疫吸附试验检测了从北京地区栽种的唐菖蒲上分离到的一株病毒的提纯制品和唐菖蒲试管苗的病叶粗提液。用提纯的病毒免疫家兔,抗血清的滴度为1：62500。提纯病毒的最适包被浓度为2．5μg/ml。能检测提纯病毒的最低浓度为4ng／ml。侵染性试验检测提纯病毒的最低浓度为30Ⅱg／mI。在间接酶联免疫吸附试验中,该病毒与烟草花叶病毒普通株有血清学相关性。     

一种定性比较抗体相对亲和力的酶联免疫吸附测定方法

目的:建立一种简便的对抗体相对亲和力进行定性比较的酶联免疫吸附测定(ELISA)方法,以便快速、简便地从大量抗体突变体中挑选高亲和力突变体。方法:将待测抗体倍比稀释后用直接ELISA方法进行定量,同时用相同浓度抗体作为一抗与抗原进行间接ELISA反应,以前者吸光度值为横轴、后者吸光度值为纵轴绘制散点图,通过拟和后的曲线判断抗体亲和力高低,并通过BIA-core法对该方法的准确性进行验证。结果:通过该方法获得的抗体亲和力高低情况与经测定抗体亲和力得出的结果一致。结论:该ELISA方法是一种简便可行、准确有效的抗体亲和力定性比较方法,可以应用于不同抗体的亲和力成熟比较研究。     

抗茉莉酸甲酯单抗制备及小麦和黑麦草颖花中茉莉酸含量的测定

本文报道了识别茉莉酸甲酯(MeJA)的单克隆抗体的制备.该抗体源于以茉莉酸的C-1位羧基为偶联位点,钥孔(虫戚)血蓝蛋白为载体合成的免疫原.该抗体对甲酯化茉莉酸的识别力明显强于对茉莉酸(JA)的;JA分子中戊烯侧链的完整性对该抗体的识别力有很大影响.于该侧链的C-9和C-10位加氢(形成Dihydro-JA),或除去C-12(形成JAS-25),都会大幅度降低该抗体的结合活性.该抗体对亚麻酸、南瓜酸、冠毒素及Theobroxide均无识别力.用该抗体建立了定量检测JA的固相抗体型酶联免疫吸附定量测定法,检测范围为2.06-500 pmol MeJA.并探查了小麦及黑麦草开颖前后颖花的JA含量.发现随着开颖时间的临近,JA含量显著升高;颖花开放时达到最大值,随后急剧下降.     

应用酶联免疫吸附技术(ELISA)鉴定根瘤菌血清型和测定大田接种回收率

本文采用酶联免疫吸附技术测定了我国根瘤菌株与引进菌株NC92的血清型异同和大田接种花生后的结瘤比率,并比较了限定培养基和YMA培养基培养制备的抗原-抗体反应。结果指出,NC92酶标记抗体与其相对应的NC92菌株抗原起专性反应,不与供试的我国根瘤菌株抗原起反应;NC92菌株大田接种三个花生品种后的结瘸比率与不接种比较,达到极显著水准(P<0.01),不同花生品种间也达到显著水准(P<0.05),证明酶联免疫吸附技术用于根瘤菌血清型鉴定及其大田接种回收率测定是可行的。两种不同制备来源的NC92抗体和酶标记抗体