细胞生物学网络课程的构建与实施评价

在现代教育技术的推动下,网络课程已经成为现代教育的新趋势,它不仅克服了传统课堂教学的不足,而且增添了很多新的手段和内容。该文介绍了细胞生物学网络课程建设的体系,主要是多媒体课件及录像、在线课程学习、教学文件及相关资源等四大模块,并且通过网络课程的具体实践,实现了细胞生物学课程的网络教育和多媒体教学以及＂网络互动＂的教学模式。网络课程在一定程度上解决了高校普遍存在的学时少内容多、教师少学生多的矛盾,给学生的自主学习和师生交流提供了一个良好的平台。细胞生物学网络课程实施后,受到了省内近十所高校专家的高度评价,学生对本门课程教学的满意度也达到了93%以上,并且学生考试成绩优秀者所占比例也较网络课程实施前有显著提高,取得了明显的教学效果。     

微流控技术在细胞生物学中的应用

微流控技术是在尺度为几个或上百微米的通道中操纵纳升或纳升以下流体的技术,作为一种全新的领域,它给化学合成、生物分析、光学和信息学带来了重大的影响。本文将综述微流控技术在细胞学等领域的应用,并对其发展前景进行展望。     

基于多元智能理论的细胞生物学实验教学评价

目前,细胞生物学实验教学评价体系存在的主要问题有:评价内容重知识轻能力、评价重心重结果而轻过程、评价方法重数量而轻质量、评价主体重教师而轻学生。为提高实验教学质量,本研究对该课程的教学评价体系进行了优化。构建了评价内容多元化、评价过程动态化、评价主体多元化的教学评价新体系,让学生在知识、能力和素质等方面得到协调发展。     

免疫学技术在细胞生物学教学中的应用

免疫学技术在细胞生物学理论与实验课程中具有重要的应用价值,两者的有机结合能使细胞生物学课程教学更丰富形象,有利于教学质量的提高。目前,免疫学技术普遍只停留于细胞生物学理论课本知识教授中,在对学生开展的细胞实验操作课程中应用较少。如能将免疫荧光标记、流式细胞术等相关技术引入到实验教程中,不仅能使细胞实验结果更形象生动,更能拓宽学生知识领域与实验技能,有利于其综合能力的培养。     

CD138免疫磁珠细胞分选的FISH技术在多发性骨髓瘤诊断中的应用

为了分析CD138免疫磁珠细胞分选的染色体荧光原位杂交(FISH)技术在提高多发性骨髓瘤(MM)细胞遗传学异常检测敏感性的作用。本研究选取我院收治的30例确诊MM的患者为研究对象,分离骨髓单个核细胞,应用探针组合,同时采用2种方法进行细胞遗传学检测:实验组采用CD138免疫磁珠分选浆细胞后行荧光原位杂交技术(MACS-FISH)检测;对照组直接荧光原位杂交技术(D-FISH)检测。结果:30例MM患者,实验组采用CD138 MACS-FISH检出率为83.3%,对照组D-FISH法细胞遗传异常检出率为46.7%,两组差异具有统计学意义(p<0.05)。研究结果表明:分析不同类型的细胞遗传异常,MACS-FISH法1q21检出率为46.7%,RB1检出率为50.0%,Ig H检出率为70.0%,P53检出率为20.0%;D-FISH法检出率分别为23.3%,30.0%、36.7%、10.0%。通过细胞核型分析,30例MM患者中,发现5例患者为异常核型,仅为16.7%,其中1例患者为单一结构异常,复杂异常核型患者为4例。我们的研究结论表明:进行CD138免疫磁珠分选浆细胞的FISH技术在多发性骨髓瘤诊断应用中可显著提高细胞遗传学异常检测敏感性,具有临床推广应用的价值。     

原子力显微技术在细胞生物学中的应用

对近年来原子力显微技术(AFM)在细胞生物学中的应用大致归纳为几个方面进行了简单介绍,还指出了细胞表面结构难于识别、细胞内部结构难以原位观察等AFM应用于细胞生物学中的难题,并提出了“形状探针”的概念以及超薄切片的思路以解决这些难题。AFM在细胞生物学中的应用研究还远远不足,需要更多的科学工作者加入其中。     

荧光漂白恢复技术在细胞生物学中的应用

荧光漂白恢复(FPR)技术已发展成为定量测定细胞膜分子的流动性的方法之一。本文着重介绍了FPR技术应用于测定细胞膜中和细胞质内分子的运动,这些测定将有助于研究活细胞中膜分子的运动方式、功能及其相互关系。     

基于荧光激活细胞分选技术的超高通量酶活性筛选方法及其应用

基于荧光激活细胞分选(FACS)技术的超高通量酶活性筛选方法是新出现的一类高通量筛选技术.它利用流式细胞仪高灵敏度、高通量的特点,能以极高的速度(108/天)对大容量酶基因文库进行筛选.FACS筛选技术的出现突破了常规筛选方法低效、耗时、费力等瓶颈问题,极大地提升了人类对大容量基因文库的探索能力,因此在新酶基因筛选、酶活性检测、酶定向进化等领域有广泛的应用潜力.综述了FACS超高通量酶活性筛选方法的最新研究进展,着重介绍了其在酶定向进化中的应用.     

香菇的细胞生物学

引言香菇是真菌界担子菌门担子菌纲伞菌目侧耳科香菇属,学名为Lentinus edodes(Berkeleg)Singer.由于它美味可口芳香,自宋朝以来,我国就开始人工栽培,迄今已有800多年的历史,但由于我国重栽培轻研究,致使我国当前的香菇研究水平及经济效益落后于日本几十年.随着科学的发展,人们了解到担孢子的形成过程及机理,观察列了香     

一个用于转染细胞分选的双顺反子载体的构建及其应用

为简化转染细胞的分选过程,构建了一个含有细胞表面标志 CD34 基因的双顺反子载体 p3.1-IRES-CD34. 利用来源于脑心肌炎病毒 (EMCV) 的内部核糖体进入位点 (IRES) ,实现目的基因与 CD34 基因的共同表达 . 将绿色荧光蛋白 (EGFP) 作为目的基因插入载体的多克隆位点,然后转染 NIH-3T3 细胞,通过免疫磁珠分选 (MACS) 方法来分选细胞 . 结果表明：对于转染细胞,均可实现快速分选 ( 瞬时转染细胞约 48 h ,稳定转染 10~15 天 ) ,并且获得较高纯度 (95% 以上 ) 的表达目的基因细胞 .     

Three specific antigens to isolate endothelial progenitor cells from human liposuction material

Background aimsHuman endothelial progenitor cells (EPC) play an important role in regenerative medicine and contribute to neovascularization on vessel injury. They are usually enriched from peripheral blood, cord blood and bone marrow. In human fat tissue, EPC are rare and their isolation remains a challenge.MethodsFat tissue was prepared by collagenase digestion, and the expression of specific marker proteins was evaluated by flow cytometry in the stromal vascular fraction (SVF). For enrichment, magnetic cell sorting was performed with the use of CD133 microbeads and EPC were cultured until colonies appeared. A second purification was performed with CD34; additional isolation steps were performed with the use of a combination of CD34 and CD31 microbeads. Enriched cells were investigated by flow cytometry for the expression of endothelial specific markers, by Matrigel assay and by the uptake of acetylated low-density lipoprotein.ResultsThe expression pattern confirmed the heterogeneous nature of the SVF, with rare numbers of CD133+ detectable. EPC gained from the SVF by magnetic enrichment showed cobblestone morphology of outgrowth endothelial cells and expressed the specific markers CD31, CD144, vascular endothelial growth factor (VEGF)R2, CD146, CD73 and CD105. Functional integrity was confirmed by uptake of acetylated low-density lipoprotein and the formation of tube-like structures on Matrigel.ConclusionsRare EPC can be enriched from human fat tissue by magnetic cell sorting with the use of a combination of microbeads directed against CD133, an early EPC marker, CD34, a stem cell marker, and CD31, a typical marker for endothelial cells. In culture, they differentiate into EC and hence could have the potential to contribute to neovascularization in regenerative medicine.     

Isolation and characterization of the CD133+ precursors from the ventricular zone of human fetal brain by magnetic affinity cell sorting

A fast and effective method to enrich large number of neural precursors from the ventricular zone of human fetus by magnetic affinity cell sorting (MACS) is reported. After incubation with phycoerythrin (PE)-conjugated anti-CD133 antibodies and anti-PE magnetic beads followed by one cycle of MACS, CD133(+) cells were harvested at 85% purity as confirmed by flow-cytometry and immunocytochemistry. In contrast to CD133(-) cells, these CD133(+) cells initiated primary and secondary neurospheres in culture, and the progeny of sorted cells could be differentiated into both neurons and glia, indicating that these highly enriched cells are capable of self-renewal and multi-lineage potential.     

Continuous dielectrophoretic separation of cell mixtures

Use of stream-centered dielectrophoresis (1–4) produced continuous separations on three cell mixtures (1)Chlorella vulgaris withNetrium digitus, (2)Ankistrodesmus falcatus withStaurastrum gracile, and (3)Saccharomyces cerevisiae withNetrium digitus. Maximal separations were obtained for these mixtures of live cells at 100 kHz, 600 kHz, and 2.0 MHz, respectively. The technique was restricted to a frequency range of 0.01–32 MHz, and to suspensions of low conductivity in which microorganisms such as these algae and yeast are tolerant. Extension, however, to cellular organisms requiring higher osmolarity is readily feasible through the use of nonionic solutes such as sucrose, mannose, glycine, etc.     

大鼠大脑微血管片段的分离纯化及鉴定

目的:分离大鼠大脑微血管并纯化去除完整的神经细胞,用于克隆血脑屏障上的特异表达基因.方法:采用液相合成法制备粒径200～500 nm的铁氧体磁珠,经两侧颈内动脉插管注入大鼠大脑半球.采用机械分离和酶消化相结合的方法解离脑组织,用筛网滤去组织块和大血管,再在磁场下分选标记磁珠的微血管片段,并从形态学、分子生物学和生物活性角度鉴定获得的脑微血管片段.结果:扫描电镜下没有发现微血管周围存在完整的神经细胞,但在部分区域有胶质的终足包裹.全脑组织微管相关蛋白2a、谷氨酰胺合成酶和CD31的RT-PCR产物均在相应位置出现阳性条带,分离纯化的脑微血管仅CD31阳性.微血管片段内皮细胞摄取的Rh123荧光强度显著低于传代培养的微血管内皮细胞荧光强度.结论:采用本方法可以获得高纯度的、不附带完整神经细胞的脑微血管片段.     

单细胞技术进展及其在植物研究中的应用

多细胞生物体的生存依赖于不同类型细胞特异性的功能分工,不同类型的细胞尽管基因组相同,但有其独特的发育过程和应对环境变化的能力。生物学的一大挑战就是揭示基因如何在正确的位置、正确的时间表达到正确的水平,最近出现了很多通过细胞类型特异性方法研究单细胞组学的工具,这些新技术使我们能通过空前分辨率,理解多细胞生物体内不同类型的单个细胞基因表达特点及其适应环境变化的机制。单细胞样品的获取一直是单细胞研究的一大技术瓶颈,因此本文将以如何获得起始材料为重点,探讨单细胞研究的样品标记、单细胞分离及获取、组学数据分析和结果验证等技术方法及其在植物研究中的应用。     

Interleukin-17F attenuates H2O2-induced cell cycle arrest

Interleukin IL-17F was expressed in colon epithelial cells and showed multiple functions in colon tumorigenesis. However, the role of IL-17F in colon cancer cell cycle progression remains unclear. In this study, we analyzed the effects of IL-17F on oxidant-induced cell cycle shift in human colon cancer cells. IL-17F overexpressing and wildtype HCT116 cells were challenged with H₂O₂. Cell cycle distribution analysis showed IL-17F attenuated H₂O₂-induced G2/M phase arrest by inhibiting S to G2/M transition. We further checked expression levels of two critical cell cycle regulators p21 and p27. The results showed that IL-17F could inhibit H₂O₂ induced p27 up-regulation. Meanwhile, IL-17F could increase the phosphorylation of p38 after H₂O₂ treatment. The regulations of p27 level and p38 activity may contribute to the impaired G2/M phase arrest by IL-17F. Taken together, our findings extend IL-17F as an important factor in colon cancer development and provide new insight into the signaling pathway.