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限制性内切酶SCaI适用于多种质粒载体,尤其是融合蛋白表达载体,pGEX系统,因它具有二个SCaI酶切位点,因此用SCaI酶解图谱鉴定以pGEX系统为载体的重组子甚为便捷。简便碱裂解法提取重组DNA省时,省耗。本文探讨了SCaI对用常规和简便两种碱裂解法提取的重组DNA的酶解效率。结果表明:(1)简便碱裂解法抽提的重组DNA,用EcoRI、EcoRV、PstI、BamHI等限制性内切酶酶解,可以获 相似文献
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从河南省西峡晚白垩世的一枚奇特恐龙蛋化石提取DNA,经过^32P同位素标记和电泳分析,发现蛋腔内絮状物样品中有DNA片断存在,其分子量在几十至1000bp之间,且大多在400bp以下,用18SrDNA特异引物和恐龙蛋DNA片断为模板,进行PCR扩增。克隆PCR产物并进行序列分析和同源性比较,发现该序列与鸟类、两栖类、爬行类及人类等18SrDNA有75% ̄81%的同源性,与已知原核生物没有明显同源性 相似文献
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利用酸性异硫氰酸胍-酚-氯仿一步法从人胚胎组织中提取总RNA,经Oligo(dT)纤维柱分离纯化出mRNA。用逆转录与聚合酶链反应相结合的RT-PCR法,扩增出人类胰岛素生长因子Ⅱ的cDNA片段,在限制性内切酶SmaI存在的连接体系中,将扩增出的cDNA片段克隆进PUC12的SmaI位点处。经限制性内切酶EcoRI,SalI,Eco47Ⅲ酶切鉴定其方向。以重组质粒的双链DNA为模板,用末端终止法测 相似文献
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制备基因组DNAPCR模板一般都比较费工费时 ,研究人员尝试用微波炉提取真核生物基因组DNA ,然后做PCR扩增取得了较好的效果[1 ,2 ] 。本文描述了一个利用微波炉快速制备酵母质粒和基因组DNAPCR模板的程序 ,具有良好的重复性。1 材料与方法1.1 材料酿酒酵母菌种 1c163 6darg11,ura 3为比利时OrianeSoetens馈赠。酵母载体pYX13 3从美国康乃尔大学曹维国处获得 ,并由此构建了粗糙脉孢霉arg 13cDNA的酵母表达载体pYXA5。培养基为SD或YPD固体培养基。1.2 酵母质粒提取[3]取 1.5ml… 相似文献
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用RT-PCR方法快速克隆了Wistar大鼠脑神经元特异性烯醇化酶(NSE)的cDNA,将此包括编码全长NSE433个氨基醚的DNA片段重组入pUC质粒,并用PCR方法测定了全部顺序,经重复实验,发现Wistar大鼠与Forss-Petter报导的SD大鼠NSE基因顺序,有两外单碱基的差别,其中一个涉及氨基酸的改变。同时还对RNA的提取及长片段DNA的RT-PCR扩增进行了方法学的探讨。 相似文献
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大鼠脑神经元特异性烯醇化酶基因的cDNA克隆及序列分析 总被引:4,自引:0,他引:4
用RT-PCR方法快速克隆了Wistar大鼠脑神经元特异性烯醇化酶的cDNA,将此包括编码全长NSE433个氨基酸的DNA片段重组入pUC质粒,并用PCR方法测定了全部顺序,经重复实验,发现Wistar大鼠与Forss-Petter报导的SD大鼠NSE基因顺序,有两处单碱基的差别,其中一个涉及氨基酸的改变,同时还对RNA的提取及长片段DNA的RT-PCR扩增进行了方法学的探讨。 相似文献
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双裂解法提取血清HBV DNA技术的建立 总被引:1,自引:1,他引:0
为进行PCR实验建立了一种两步裂解血清HBV提取其DNA的方法。该法首先用SDS及蛋白酶消化裂解病毒,随后再进行碱裂解,操作较酚提取法大为简化,而PCR实验进行的两法的灵敏性比较,说明双裂解法至少不低于酚法。 相似文献
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RAPD分析用的犁DNA提取方法 总被引:31,自引:2,他引:31
RAPD分析用的梨DNA提取方法胡春根郝玉邓秀新史永忠(华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室,武汉430070)DNAExtractionMethodforRAPDAnalysisinPearsHUChungenHAOYuDENGXiuxinSHI... 相似文献