四种提取芸芥基因组DNA方法的比较

以芸芥为材料 ,分别用CTAB法、SDS法、尿素法、NaOH法四种方法对芸芥基因组DNA进行了提取 ;并用紫外光分光光度计法、琼脂糖电泳法和RAPD分析法对所提取的DNA进行检测 ,将它们在DNA的产量、质量和耗时、耗费等方面的优缺点进行比较 ,以便在实际工作中根据不同的试验条件选取最合适的提取方法。通过四种方法的比较 ,研究认为尿素法是芸芥基因组DNA的最佳提取方法。     

木霉菌对芸芥生长相关生理指标的影响

芸芥(Eruca sativa)是当今我国蔬菜市场中一种颇具开发价值的新特芳香蔬菜。为了研制促进芸芥生长和提高品质的生防木霉菌剂,本研究以芸芥为试材,在大田条件下,采用本实验室分离鉴定的哈茨木霉T8进行浸种和浇根处理,分析木霉菌对一个生长季内连续栽培三茬30 d龄芸芥的生长相关生理指标的影响。结果表明,施用木霉菌能显著提高芸芥的生物量,改善其光合特性,增强其防御酶活性和脯氨酸含量,提高其产量和营养价值。     

芸芥自交亲和性变异的初步研究

为了判断芸芥(Eruca sativa)自交亲和性的变异情况, 采用套袋自交、剥蕾自交和开放授粉3种方法, 对来源于中国、伊朗和巴基斯坦的52份芸芥的自交亲和指数及相对亲和指数进行了统计分析。结果表明: (1) 芸芥为高度自交不亲和植物, 其不同品种(系)中存在自交亲和基因; (2) 芸芥不同品种间自交亲和性存在广泛的变异, 品种间自交亲和指数介于0-4.98之间, 品种内不同个体间自交亲和性也存在广泛的变异; (3) 参试材料分为4种类型, 即高自交亲和、自交亲和、自交不亲和(0<自交亲和指数<1.00)及高自交不亲和; (4) 芸芥自交亲和性因生态类型而异, 西南地区的材料自交亲和性最高, 西北地区次之, 华北地区最低。总之, 芸芥为一种高度自交不亲和植物, 其自交亲和性状存在广泛的变异, 共有4种变异类型。     

芸芥体细胞胚胎发生及植株再生体系的建立

以芸芥子叶为外植体,诱导芸芥体细胞胚胎发生并建立植株再生体系.结果表明:基因型及植物生长调节剂对芸芥体细胞胚胎发生均有一定的影响,其中以含有1.0mg·L-12,4-D的MS培养基诱导芸芥体细胞胚胎发生的效果最优.在MS 0.2mg·L-12,4-D培养基上,胚性愈伤组织可大量增殖.对芸芥体细胞胚胎成熟的研究表明,体胚在N6培养基上成熟最佳,且45.2%的成熟体胚可在1/2MS 0.1mg·L-1IBA培养基上萌发生长.     

白菜游离小孢子培养、胚胎发生和植株再生

在植物育种应用方面,游离小孢子离体培养方法较花药培养具有更广阔的应用前景、它不仅能大大提高单倍体产量,而且还可以比较方便地用于诱变、突变体离体选择和基因工程。该方法最初是在茄科植物毛叶曼陀罗(Datura innoxia)上发展起来的、后又在烟草、矮牵牛、马铃薯等茄科植物上获得成功。80年代初以来,这一方法先后在十字花科芸属的甘蓝型油菜(Brassica napus)、埃塞俄比亚芥(B.carrinata)、黑芥(B.igra)、大白菜(B.campestris spp.     

拟南芥属的系统位置：种皮及分子证据

拟南芥属（Arabidopsis（L.）Heynhold）拥有现代分子生物学研究的模式植物拟南芥（A.thaliana（L.）Heynhold）,但其属的系统位置及与近缘属关系争议较大。根据对拟南芥属及其相关属种的种皮微形态观察,结合测定分析各属种叶绿体DNA的trnL内含子和trnL-F基因间隔区序列,结果表明,拟南芥属的近缘属种包括荠属（Capsella Medic.）、亚麻荠属（Camelina（L.）Crantz）、须弥芥属（Crucihimalaya Al-Shehbaz et al.）、无苞芥属（Olimarabidopsis Al-Shehbaz et al.）、旗杆芥属（Turritis L.）、南芥属（Arabis L.）和糖芥属（Erysimum Kitagawa）。     

十字花科植物线粒体DNA的提取和纯化

以十字花科植物芸芥 Eruca sativa 、白菜型油菜 Brassica rapa 和甘蓝型油菜 Brassica napus :武39- 1、武4 3- 1、武5 0 - 2为试材,在蔗糖衬垫法分离纯化m t DNA方法优点的基础上,通过4组不同离心力配比,采用差速离心法、改变缓冲液A的成分以及增加缓冲液的用量,建立了一种简便提取十字花科植物mt DNA方法.研究结果表明:分离细胞破碎组织的离心力、分离线粒体的离心力以及纯化线粒体时的离心力分别为10 0 0 g、2 0 0 0 0 g、180 0 0 g时可分离到高产量的线粒体,且在缓冲液A 蔗糖0 .5 m ol·L- 1 ,Tris- Cl5 0 mm ol·L- 1 ,EDTA5 m mol·L- 1 ,BSA 0 .1% ,PVP 0 .5 % ,0 .1%β-巯基乙醇,p H=7.5 中加入0 .5 % PVP可提高mt DNA的产量,经DNA电泳检测、RAPD扩增证明此方法得到的mt DNA可完全达到RAPD标记和其它分子生物学研究的要求.     

从植物细胞核分离大分子量核DNA

研究了从植物中分离百万碱基对级大分子量核DNA的方法。该方法利用差速离心分离植物细胞核,经低熔点琼脂糖块或低熔点琼脂糖微珠包埋,蛋白酶K原位裂解后制备大分子量核DNA。结果表明,选择不同生长时期的材料和不同的包埋细胞核方式对大分子量核DNA的制备有很大的影响,由黄化苗或幼嫩的绿叶为材料分离细胞核,进行胶块包埋是制备大分子量核DNA的最佳条件。利用该法获得的DNA分子量在200kb－5．7Mb之间,主要集中在2．2～5．7Mb之间;每一胶块DNAE量为18～20μg。与包埋原生质体制备大分子量核DNA的方法相比,该方法获得的DNA纯度较高,去除了大部分细胞器DNA的污染;易于被限制性内切酶部分和完全消化,其消化结果具可重复性。该方法操作简单、适用植物种类广泛,用该方法从水稻（OryzasativaL．）、苹果（MaluspumilaMill．）、大豆（Glycinemax（L．）Merr．）、玉米（ZeamaysL．）等多种植物材料中成功地制备了大分子量核DNA。该方法制备的核DNA适用于植物的脉冲交变电泳基因组分析和构建人工细菌染色体文库和人工酵母染色体文库。     

盐芥（Arabidopsi salsuginea）cDNA文库的随机测序

实验以盐生植物盐芥为材料,提取经盐处理的盐芥总RNA,分离mRNA后,构建cDNA文库。从cDNA文库中随机挑取克隆进行测序。结果共测得53个表达序列标记（EST）,有37个EST（69．8％）,与拟南芥的基因在多肽水平上有较高同源性;21个EST（39．6％）的功能未知。     

重楼属植物DNA提取的方法研究

为了获得重楼属植物高质量的DNA,以研磨、冻融和细胞溶胀破膜的原理设计了一种DNA提取的方法并与CTAB法和高盐法比较。结果显示该方法提取的重楼属植物DNA纯度（A260/A280=1.792-1.852;A260/A230=2.052-2.267）,产率（6.12-12.84mg/g）较其他两种方法高,降解少,节省药品。所提出的DNA能用于RAPD分析和ITS测序。