啤酒酵母融合子QSB-Ⅺ_6遗传学和生理学特征的研究

利用生物工程技术获得了一株QSB－Ⅺ6啤酒酵母融合子,其发酵力、凝絮性均较双亲有提高,口味也明显改善,小试、中试、生产试验效果很好。为全面开发和利用该工程菌株,以啤酒酵母融合子QSB－Ⅺ6及其亲本LQ16和QSB7为对象,进行细胞体积测定,生物量测定,遗传型鉴定和DNA含量等测定,确定其主要遗传学和生理学特征,从而证实菌株QSB－Ⅺ6是融合子．     

啤酒酵母融合株QSB─Ⅺ_6的发酵试验

从选育构建的大量融合子中,得到了较好的、各具特色的近百株啤酒酵母菌株,在进行小型发酵试验及理化指标鉴定的基础上选出了由出发菌株ＬＱ(16)与ＱＳＢ7,得到的融合株ＱＳＢ-ＸＩ６,经六个批次的小试发酵与生产性能、理化指标的全面鉴定,证实一ＱＳＢ-ＸＩ6。是一株口味独特、发酵率高、凝絮性强兼具多种优良性状的啤酒酵母新菌株。     

产谷氨酸棒杆菌B9和T6—13的原生质体融合

棒杆菌Ｂ９和Ｔ６—１３两菌株经ＵＶ变处理得到Ｂ９—２（ＳｍＲ）和Ｔ６—１３—３（ＲｉｆＲ）两菌株,以此两菌株做为出发菌株。将对数前期的培养细胞经青霉素予处理及酶解制备原生质体,用４０％ＰＥＧ６０００为助融剂,进行原生质体融合。用间接法检出具有Ｓｍ、Ｒｉｆ抗性的融合子。融合频率为６．５５×１０－６－１．６４×１０－５,融合子双抗性稳定,产谷氨酸,经摇瓶实验筛选出一株产谷氨酸明显高于亲本的融合子ｆｕ３６。     

原生质体融合选育肌苷产生菌产氨短杆菌GMA—2802

以肌苷产生菌产氨短杆菌ＧＭＡ－２７２２（Ａｄｅ－、 Ｇｕａ－、ＶＢ１－、Ｒｉｆｒ）和 ＧＭＡ－２７７６（Ａｄｅ－、 Ｂｉｏｔｉｎ－、ＶＢ１－、Ｓｍｒ）为出发菌株,经原生质体融合,将目的标志加以组合,获得遗传性状稳定、摇瓶发酵６１ｈ,产肌苷２５．４ｇ／Ｌ的融合子 ＧＭＡ－２８０２（Ａｄｅ－、Ｇｕａ－、Ｂｉｏｔｉｎ－、ＶＢ１－、 Ｒｉｆｒ、Ｓｍｒ）。     

用ＰＣＲ—ＳＳＯ方法研究云南西部彝族ＨＬＡ—ＤＱＢ１基因的多态性

应用ＰＣＲ－ＳＳＯ基因分型技术,对我国云南西部地区３代内无血缘关系的７６个彝族健康个体进行了ＬＡ－ＤＱＢ１位点的基因分型。结果显示,在ＤＱＢ１的３８个等位基因中,观察到１３个等位基因,云南西彝族表现为ＤＱＢ１＊０３０１（３６．１８％－３６．８４％）最常见。其他频率大于５％的等位基因还有ＤＱＢ１＊０５０２（１０．５３％－１１．１８％）、ＤＱＢ１＊０４０１（９．２１％）、ＤＱＢ１＊０３０２（８．５５％－９．２１％）、ＤＱＢ１*0601(7．８９％）ＤＱＢ１＊０５０３１（６．５８％）、ＤＱＢ１＊０３０３２（５．９２％－６．５８％）。和其他１３个华人群体ＤＱＢ１等位基因的频率比较分析表明,总体上,云南西彝族和其他各华人群体间都存在很大的差异。显示其ＨＬＡ等位基因频率分布的民族独特性。     

L—山梨糖脱氢酶的纯化及性质的研究

从５Ｌ罐发酵Ｌ－山梨糖的Ｇｌｕｃｏｎｉｂａｃｔｅｒ ｏｘｙｄａｎｓ ＳＣＢ３２９和Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ ＳＣＢ９３３混合菌株中差速离心收集ＳＣＢ３２９菌体,破碎,离心获得无细胞抽提液,硫酸铵分级沉淀蛋白后依次经ＤＥＡＥ Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ５２和Ｑ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＦＦ柱层析分得到了Ｌ－册梨糖脱氢酶（ＳＤＨ）,它能将Ｌ－册梨糖脱氢氧化为Ｌ－册梨酮,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳测     

昆虫谷胱甘肽S-转移酶分离纯化的新方法

谷胱甘肽Ｓ－转移酶（ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅＳ－ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｓ,ＧＳＴ）是一类具有多种生理功能的同功酶．从蜡螟幼虫（Ｇａｌｅｒｉａｍｅｌｏｎｅｌａ）的提取液中分离纯化谷胱甘肽Ｓ－转移酶的基本方法如下：首先将冷冻的蜡螟幼虫在磷酸缓冲液中匀桨,经１００００ｇ和１０００００ｇ分级离心;取上清液通过ＱＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－２５离子交换柱层析除去部分色素和杂蛋白;然后采用谷胱甘肽－琼脂糖凝胶亲和层析（ＧＳＨ－ＱＴ４）,四溴酚酞二磺酸盐－琼脂糖凝胶亲和层析（ＢＳＰ－ＱＴ４）,铜离子－琼脂糖凝胶螯合层析（Ｃｕ２＋－ＱＴ４）及ＰＢＥ９４－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（ＰＢＥ９４）聚焦层析等层析技术进一步分离纯化．将上述方法获得的色谱峰以ＣＤＮＢ和ＤＣＮＢ为底物检测生物活性．具有生物活性部分的蛋白质,通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定其分子量．实验结果表明,采用ＧＳＨ－ＱＴ４亲和层析法获得的活性峰,在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ图谱上呈现出两条带,分子量为２４ｋＤ,２４．５ｋＤ左右;Ｃｕ２＋－ＱＴ６螯合层析法分离的活性峰,呈现出一条带,分子量为２４ｋＤ左右;ＰＢＥ９４－聚焦层析法分离获得三个活性峰：第一色谱峰,呈现出一条带,分子量为２３ｋＤ左右     

啤酒酵母融合株QSB-Ⅺ6的发酵试验

从选育构建的大量融合子中,得到了较好的、各具特色的近百株啤酒酵母菌株,在进行小型发酵试验及理化指标鉴定的基础上选出了由出发菌株LQ16与QSB7得到的融合株QSB-Ⅺ6,经六个批次的小试发酵与生产性能、理化指标的全面鉴定,证实QSB-Ⅺ6是一株口味独特、发酵率高、凝絮性强兼具多种优良性状的啤酒酵母新菌株.     

L-山梨糖脱氢酶的纯化及性质的研究

从５Ｌ罐发酵Ｌ－山梨糖的Ｇｌｕｃｏｎｏｂａｃｔｅｒ　ＳＣＢ３２９和Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ　ＳＣＢ９３３混合菌株中差速离心收集ＳＣＢ３２９菌体,破碎,离心获得无细胞抽提液,硫酸铵分级沉淀蛋白后依次经ＤＥＡＥＣｅｌｌｕｌｏｓｅ ５２和Ｑ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＦＦ柱层析分离得到了Ｌ－山梨糖脱氢酶（ＳＤＨ）,它能将Ｌ－山梨糖脱氢氧化为Ｌ－山梨酮,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳测得分子量约为６０ＫＤ。动力学性研究表明它为一个典型的Ｍｉｃｈａｅｌｉｓ－Ｍｅｎｔｅｎ氏酶,对Ｌ－山     

幽门螺杆菌尿素酶的纯化及其特性

本文利用Ｓｅｐｈａｃｒｙ１ Ｓ－２００和Ｑ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ两步层析,从ＨＰ蒸馏水浸液中提取纯化尿素酶,并对其特性进行了测定,证明ＨＰ尿素酶各含一个６６ｋＤ和２９．５ｋＤ的亚单位,并以６个分子聚合成６２５ｋＤ大分子蛋白,有很好的抗原性,并显示特异的血清学反应。用ＨＰ超声浸液抗原和尿素酶,加入２μｇ霍乱毒素粘膜佐剂,给ＳＰＦ ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠口服免疫,可使８０％小鼠抵抗ＨＰ活菌的攻击,证明尿素酶是一种抗ＨＰ的保护性抗原。     

甲基单胞菌Methylomonas sp.GYJ3中甲烷单加氧酶羟基化酶组分…

从Ｍｅｔｈ ｙｌｏｍｏｎａｓ ｓｐ．ＧＹＪ３菌株中经ＤＮＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣｌ－６Ｂ阴离子交换层析和ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ３００凝胶层析分离出纯化出甲烷加氧酶羟基酶组分,经ＨＰＬＣ分析,纯度大于９０％,分子量为２４０ｋＤ,纯化们数为３．９,比活为２２５ｎｍｏｌ环氧丙烷每分钟毫克蛋白,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ表明,羟基化酶由三个亚基组成,亚基分子量为５６、４３、２７ｋＤ．ＩＣＰＡＥＳ测定羟基化酶的Ｆｅ     

利用RAPD技术检测香菇双—单杂交后代

利用ＲＡＰＤ技术对香菇６个双单杂交菌株及其两个双核体基因组ＤＮＡ进行了检测,结果显示：１－３号杂交菌株之间的相似系数为０．８９３－０．９６２,它们与其亲本Ｓ之间的相似系数为０．８４２－０．８５９;４－６号杂交菌株之间的相似系数０．８５７－０．９２５,与其亲本ＳＳＯ１之间相似系数为０．７０８－０．９０２;表明杂交菌株与其双核体亲本基因组具有较大差异,杂交菌株之间存在着不同程度差异,６个杂交菌株是真正     

人白介素6受体功能区片段在E．coli中的表达

通过ＤＮＡ体外重组技术,以ｐＥＴ－３ｂ为表达载体,构建了重组表达质粒ｐＥＴ－６Ｒ（Ｂ）和ＰＥＴ－６Ｒ（Ｂ）４,分别编码２８ｋＤ的ｈＩＬ－６Ｒ配基结合区片段及其５３ｋＤ的二联体蛋白,并为酶切分析和ＤＮＡ序列分析所证实。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析表明,含有重组表达质粒的菌株可分别表达出２８ｋＤ的蛋白ｒＩＬ６Ｒ－２８和５３ｋＤ的ｒＩＬ６Ｒ－５３。重组蛋白分别占菌体总蛋白的４５％和２９％左右。重组蛋白主要以包涵体形式存在,Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹表明重组蛋白具有ＩＬ－６Ｒ的抗原性。     

链霉菌S01菌株几丁质醇对植物病原真菌的拮抗作用

纯化后的链霉菌Ｓ０１菌株几丁质酶用环柱法在ＰＤＡ平板上对杨树腐烂病菌、葡萄孢菌（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｓｐ．ＡＳ３．２６１６）、黄瓜黑腥病菌、辣椒疫病菌、棉花黄萎病菌、立枯丝核菌等植物病原真菌及产黄青霉、啤酒酵母的生长具有明显的抑制作用。在６株植物病原真菌的液体培养物中加入几丁质酶后,菌丝出现扭曲变形、细胞质聚集、外溢等异常现象。在高渗缓冲液中,经几丁质酶处理后,啤酒酵母、葡萄孢菌和产黄青霉的细胞壁受     

人白介素6受体功能区片段在E.coli中的表达

通过ＤＮＡ体外重组技术,以ｐＥＴ－３ｂ为表达载体,构建了重组表达质粒ｐＥＴ－６Ｒ（Ｂ）和ＰＥＴ－６Ｒ（Ｂ）４,分别编码２８ｋＤ和ｈＩＬ－６Ｒ配基结合区片段及其５３ｋＤ的二联体蛋白,并为酶切分析和ＤＮＡ序列分析所证实,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析表明,含有重组表达质粒的菌株可分别表达出２８ｋＤ的蛋白ｒＩＬ６Ｒ－２８和５３ｋＤ的ｒＩＬ６Ｒ－５３重组蛋白分别占菌体总蛋白的４５％和２９％左右,重组蛋白主要包涵体形     

紫色非硫细菌Rhodocista属一新分离株的鉴定及其系统学研究

从污水处理厂分离到一株紫色非硫细菌３－ｐ,该菌株具避光性,能形成孢囊,具片层状光合内膜,在波长７９８ｎｍ处的吸收峰很低,需硫胺素和维生素Ｂ１２作生长因子。该菌株可以琥珀酸为碳源,最佳生长温度为３４℃～４１℃,体内未发现Ｒ体结构,醌类的主要成分是Ｑ－９。对菌株３－ｐ的１６Ｓ ｒＲＮＡ基因的分子系统学分析结果表明,菌株３－ｐ与世纪红蒌菌（Ｒｈｏｄｏｃｉｓｔａ ｃｅｎｔｅｎａｒｉａ）关系最近,相似性为９     

NMT在大肠杆菌中的His6融合表达及其纯化研究

将啤酒酵母ＮＭＴ基因以Ｎ端融合６个组氨酸的形式在Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）中进行了ＩＰＴＧ诱导的表达研究。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析确定有与Ｈｉｓ。－ｒＮＭＴ理论分子量一致的诱导表达条带,其表达量占全菌蛋白的１０％左右;表达产物性质分析表明Ｈｉｓ－ｒＮＭＴ主要以可溶形式存在。在此基础上不受利用固定化金属离子配体亲和层析一步纯化目的蛋白,纯度可达９５％以上。体外标脾性是Ｈｉｓ６－ｒＮＭＴ具有与成熟ＮＭ     

慈菇（Sagittaria safittifolia）α—半乳糖苷酶的纯化与性质

以对硝基苯糖苷基为底物,测定了慈菇的１２种糖苷酶,其中α－甘露糖苷酶,α－和β－半乳糖苷酶活力较高,经硫酸铵分级沉淀,ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１５０分子筛层析,ＣｏｎＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析,ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ离子交换层析,从慈菇抽提液纯化了α－半乳糖苷酶,纯化酶的比活提高１０７２倍,活力回收１５．６％,在圆盘聚丙烯酰胺凝胶电泳和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上均显示了１条蛋白质带,在     

一种东亚钳蝎碱性神经毒素的纯化和初步晶体学研究

经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０和ＳＰ－ＳｅｐｈａｄｅｘＣ－２５两次柱层析,从河南淅川马氏钳蝎毒素中分得一种碱性神经毒素ＢｍＫＭＩ８。等电聚聚焦和ＳＤＳ电泳显示单一组分,其ＰＩ为９．１,Ｍｒ为７１００,毒性测试结果表明,该组分对小白鼠有较强的毒性,对昆虫也有一定的毒性。已获得该毒素的两种晶全型的大单晶,并测定其空间群为Ｐ２１２１２１,晶胞参数为：ＢｍＫＭＩ８－Ａ：ａ＝３６．７Ａ,ｂ＝２６．６Ａ,ｃ＝５２     

真菌还原Cr（VI）的研究

从不同来源的样品中分离筛选出几株抗Ｃｒ（ＶＩ）的真菌,他们能在含３００￣５００ｍｇ／ＬＫ２Ｃｒ２Ｏ７的蔗糖合成培养基中生长,其中ＢＳ－１菌株抗Ｋ２Ｃｒ２Ｏ７达９００ｍｇ／Ｌ．ＢＳ－１等４株真菌在含２００ｍｇ／Ｌ Ｋ２Ｃｒ２Ｏ７的培养基中生长４￣６ｄ后,培养液中的Ｃｒ（ＶＩ）已全部消失。这些真菌经鉴定为青霉菌ＢＳ－１和ＢＳ－３,黑曲霉ＢＲ－４和黄曲霉ＢＸ－１。经紫外可见光扫描及化学分析证实,高毒的Ｃ