蛋氨酸脑啡肽（MEK）抗B型流感病毒感染作用的研究

研究MEK抗B型流感病毒感染的作用。采用MDCK细胞和9～10日龄鸡胚,按不同的顺序加入不同剂量MEK和B型流感病毒,共培养72 h后做血凝实验。所有加入B型流感病毒的MDCK细胞均培养出病毒,HA滴度为1：64。在鸡胚尿囊腔中,先注入MEK孵育24 h后,再注入B型流感病毒的鸡胚也培养出病毒,HA滴度为1：6.8,与病毒对照组比较P〈0.01,有统计学意义。实验结果未见MEK直接抗B型流感病毒感染MDCK细胞株的作用,但可见MEK抗B型流感病毒感染鸡胚的作用。     

甲型流感病毒核糖核蛋白的提纯及其部分理化性质的研究

用Triton x-100和DOC裂解、Sephadex G200柱层析和密度梯度超离心方法,首次从流感病毒感染的鸡胚尿囊膜中提纯了甲型流感病毒RNP。经蛋白质和核酸含量测定、补体结台试验、免疫双扩散及SDS—PAGF鉴定,所提纯的RNP与从病毒中提取的RNP相同。并测出粤防77—38毒株RNP的等电点为4.6,沉降系数为56．1 S。     

甲型流感病毒多肽放射免疫测定的研究I．应用Sephadex G-200凝胶柱层析提纯甲型流感病毒

鸡胚尿囊液中所含的甲型流感病毒经鸡红细胞吸附洗脱法部分纯化后,用蒸馏水透析沉淀浓缩,再通过Sephadex G一200凝胶柱层析纯化。提纯的流感病毒经电镜和聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,以及对其结构多肽组成的分析和分离提纯,证明其纯度符合生物化学和免疫化学研究的要求。     

甲3型流感病毒在小白鼠肺部的繁殖

甲,型流感病毒与DEAE-D溶液同时接种鼠肺后,再用DEAE-D溶液进行鼻腔刺激,继续传若干代后,病毒很快呈现对鸡红血球有凝集作用,并使动物死亡。血凝滴度和小白鼠LD40滴度分别达1：64和5．0—6．0。用鸡胚病毒的抗血清进行抑制时,抑制滴度与鸡胚病毒相似,但是不被甲。型和仙台病毒的抗血清所抑制。 用原毒株的灭活疫苗免疫小白鼠,然后用鼠肺病毒加DEAE—D攻击,疫苗表现高的保获效价(用正常尿囊液接种作为对照)。本文讨论了利用DBAE—D刺激所获得的鼠肺病毒进行抗流感病毒的药物筛选。     

仙苔病毒诱导细胞融合效力的研究

用瓦克(Walker)256-大白鼠未分化腺癌细胞和鸡红血球二种细胞来研究仙苔病毒诱导细胞融合的效力、与鸡胚尿囊液,病毒的血凝单位(HAU),病毒的不同稀释度、病毒在鸡胚中繁殖的时间,分布于不同密度梯度离心带的病毒颗粒,及病毒毒种的关系;并比较了不同细胞系统对仙苔病毒融合效力的影响,提出了融合因子存在于病毒颗粒本身,而不似存在于尿囊液中。文中从细胞融合这一角度,认为同一病毒毒种繁殖出来的子代是不同质的,有高融合效力的和低融合效力的病毒颗粒。HAu不能反映各种不同融合效力病毒颗粒的含量,因而其与融合效力不直接相关。病毒在鸡胚中繁殖的时间及毒种的质量,影响病毒子代的融合效力。病毒的不同稀释度和不同细胞系统影响病毒的融合效力,但这种影响不是绝对的,而是相对。     

满山香水煎液对流行性感冒病毒的抑制效果观察

一、满山香水煎液75％浓度,在鸡胚内对流感病毒亚．洲甲型赣防71-5株、京科68一1株(60EID50感染量)均有较明显的抑制作用。 二、“毒一药”或“药一毒”,虽感染和注药先后不同(相隔60分钟),其抑制效果无显著差异。 三、鸡胚尿襄腔感染病毒,60分钟后,经卵黄襄注药,对流感病毒赣防71-5株,京科68-1株也均有抑制作用。 四、阴性尿液经鸡胚尿囊腔盲传两代后,除个别血凝转阳外,大部分仍为阴性,药液在鸡胚内的抑毒作用比较显著。     

随机引物PCR扩增鸡胚致死孤儿病毒DNA的研究

在电镜下观察鸭病毒性肝炎病毒鸡胚尿囊液种毒时,另看到一大小为70—80nm,无囊膜,20面体对称的病毒颗粒。为了解该污染病毒,作者挑选了4条随机引物对此未知病毒分别进行反转录PCR和直接PCR扩增,结果共扩增出3条基因片段,经测序(一个反应)后分析与禽腺病毒1型——鸡胚致死孤儿病毒基因组部分序列同源性分别高达99．5％、99．6％和99．5％。从而得知鸭病毒性肝炎病毒鸡胚尿囊液种毒受到了鸡胚致死孤儿病毒的严重污染。     

区带超速离心提纯流感病毒的初步探讨

在制备灭活流感疫苗中,采用两次蔗糖速率区带超离心从流感病毒感染的鸡胚尿液中提纯流感病毒是较简便、实用的方法,根据流感病毒分子特性设计了超离梯度并采用适当试验条件,获得了大量提纯流感病毒的初步结果。经血凝、电镜、蔗糖浓度、浮力密度等检验证明此方法是可行的。     

流行性感冒灭活疫苗的研制

将流感病毒接种于鸡胚尿囊腔培养,收集鸡胚尿囊液及羊水,经甲醛灭活后,采用蔗糖速率区带超离心的方法进行提纯经脱糖、紫外照射后,按照《ＷＨＯ生物制品规程》的要求,试制出含有Ａ１型、Ａ３型和Ｂ型流感病毒的流行性感冒Ⅲ价灭活疫苗     

2015-2020年大连市流感病毒分离鉴定情况分析

目的 对2015-2020年大连市流感病毒分离鉴定情况进行对比分析,为大连市流感防控工作提供参考。方法 采集大连市2家国家级流感监测哨点医院的流感样病例咽拭子样本,用MDCK细胞和鸡胚分别进行病毒分离培养,并采用HA试验和HI试验对分离的病毒滴度和型别进行鉴定。结果 2015-2020年共分离培养流感病毒核酸检测阳性的咽拭子1 055份,其中MDCK细胞分离出流感病毒501株,鸡胚分离出流感病毒72株,总体病毒分离率54.31%。MDCK细胞分离出A(H1N1)、A(H3N2)、B(Victoria)和B(Yamagata)型病毒,鸡胚对A(H3N2)型病毒不敏感,但可以分离出A(H1N1)、B(Victoria)和B(Yamagata)型病毒。每年的优势毒株虽不同,但分离流感病毒的月份均在流行季内,与北方流行形势一致。结论 MDCK细胞与鸡胚的流感病毒分离率不同。大连市每年流感流行的优势株和流行程度虽不同,但流行程度处于相对平稳状态。     

N-乙酰半胱氨酸体外对流感病毒H1N1的抑制作用

目的探讨N-乙酰半胱氨酸（N—acetylcysteine,NAC）在体外对流感病毒H1N1的抑制作用。方法采用MTT法、鸡胚接种法和免疫荧光法,观察NAC对流感病毒HlM的抑制作用。采用血球凝集试验、神经氨酸酶活性抑制试验和透射电镜负染技术,初步探讨NAC对流感病毒HlM的抑制机制。结果NAC在MDCK细胞上的最大无毒剂量是6．25mg／mL;流感病毒H1Nl在MDCK细胞上的半数致死感染浓度（TCID-50）为1012-2.25／100μ;在三种作用途径下（治疗性给药、预防性给药和直接灭活后给药）,NAC明显抑制了流感病毒HlNl对MDCK细胞的感染,细胞存活率分别为91．88％、93．21％、94．67％,在对照组,流感病毒H1N1感染后的细胞存活率为28．32％,两者相比差异有统计学意义（P〈0．05）;免疫荧光结果显示,与病毒对照组形成的强特异性荧光相比,三种作用途径感染MDCK细胞后的特异性荧光明显减弱;鸡胚培养法的结果显示,NAC明显抑制了流感病毒H1N1在鸡胚内的增殖,实验组血凝效价低于1：2,对照组血凝效价为1：1024;神经氨酸酶活性抑制试验和透射电镜的结果显示,NAC能够明显抑制流感病毒川N1的神经氨酸酶活性,对流感病毒H1N1的病毒体结构也有明显的破坏作用。结论NAC在体外对流感病毒川N1有明显的抑制作用,其抑制机制可能与NAC对流感病毒血凝素和神经氨酸酶活性抑制及病毒体的直接破坏有关。     

病毒拮抗干扰素的作用

1957年,英国细菌学家Alick lsaacs与瑞士微生物学家Jean Lindenmann将经热灭活(后来用紫外灭活)的流感病毒处理鸡胚尿囊绒毛膜,再用活的流感病毒攻击,发现绒毛膜不能被活病毒感染,进一步从细胞培养上清液中提纯了一种蛋白质,将此蛋白加入新鲜的绒毛膜后同样呈现拮抗病毒感染的现象,他们将此现象称为"干扰(interference)",将此蛋白则称为"干扰素(interferon)"[1],由此拉开了干扰素时代的序幕.     

H1N1亚型猪流感病毒的拯救

利用8质粒拯救系统成功拯救出了猪流感病毒毒株A/Swine/TianJin/01/2004(H1N1)(A/S/TJ/04)。将猪流感病毒8个基因节段经RT-PCR合成cDNA后, 分别克隆到RNA聚合酶I/II双向表达载体PHW2000中, 构建成8个重组质粒。用8个重组质粒共转染COS-1细胞, 30 h后加入TPCK-胰酶至终浓度0.5 mg/mL。共转染48小时后收获COS-1细胞及其上清, 经尿囊腔接种9日龄SPF鸡胚。收获死亡鸡胚尿囊液并继续用SPF鸡胚传3代, 得到有感染性的病毒。经血凝、血凝抑制验、测序分析、电镜观察等均证实了A/S/TJ/04猪流感病毒的成功拯救。这是目前国内首次报道拯救出H1N1亚型猪流感病毒, 为进一步研究猪流感病毒基因组结构与功能的关系、流感跨种传播的机制以及构建新型猪流感疫苗株奠定了基础。     

H1N1亚型猪流感病毒的拯救

利用8质粒拯救系统成功拯救出了猪流感病毒毒株A/Swine/TianJin/01/2004(H1N1)(A/S/TJ/04)。将猪流感病毒8个基因节段经RT-PCR合成cDNA后, 分别克隆到RNA聚合酶I/II双向表达载体PHW2000中, 构建成8个重组质粒。用8个重组质粒共转染COS-1细胞, 30 h后加入TPCK-胰酶至终浓度0.5 mg/mL。共转染48小时后收获COS-1细胞及其上清, 经尿囊腔接种9日龄SPF鸡胚。收获死亡鸡胚尿囊液并继续用SPF鸡胚传3代, 得到有感染性的病毒。经血凝、血凝抑制验、测序分析、电镜观察等均证实了A/S/TJ/04猪流感病毒的成功拯救。这是目前国内首次报道拯救出H1N1亚型猪流感病毒, 为进一步研究猪流感病毒基因组结构与功能的关系、流感跨种传播的机制以及构建新型猪流感疫苗株奠定了基础。     

干扰素

1957年,Isaacs等在研究流感病毒的干扰现象时,将灭活的流感病毒与鸡胚绒毛尿囊膜块一同培养,再用活的流感病毒攻击,发现病毒繁殖被抑制。说明灭活的流感病毒作用于细胞后,细胞产生了一种干扰病毒繁殖的物质,当时称此物质为干扰素。     

核糖体失活蛋白体内外抗病毒的实验研究

核糖体失活蛋白是一类广泛存在于高等植物细胞内的能抑制核糖体功能的植物蛋白。建立了从苦瓜籽中提纯核糖体失活蛋白的方法,蛋白质电泳结果显示提取液中含有一定量的核糖体失活蛋白。在鸡胚成纤维细胞和鸡胚上进行核糖体灭活蛋白体内外抗马立克病病毒、新城疫病毒和鸡痘病毒试验,结果均表明核糖体灭活蛋白对3种病毒有一定的抑制作用。     

退热1号口服液抗4种病毒的实验研究

采用病变抑制法和血凝试验在鸡胚和2种细胞培养上测定了中成药退热1号口服液对4种病毒的抑制作用。试验结果表明,退热1号口服液在浓度为1:2(原液浓度为每100毫升含生药量245克)以下时,对鸡胚和细胞无毒性作用。浓度在1:4—1:32时,对流感病毒、呼吸道合胞病毒和巨细胞病毒有较强的抑制作用,但对腺病毒无抑制作用。     

冷适应减毒B型流感病毒疫苗候选株的制备及鉴定

以冷适应、温度敏感、减毒的B/Ann Arbor/1/66流感病毒株作为重配病毒骨架,对其6个内部基因片段进行了全基因合成,同时人工引入9个氨基酸突变．构建了8个基因的拯救载体,经测序获得序列准确的拯救质粒,命名为：pAB121-PB1, pAB122-PB2, pAB123-PA, pAB124-HA, pAB125-NP, pAB126-NA, pAB127-M和pAB128-NS．在成功拯救冷适应A型流感病毒的基础上,利用反向遗传学技术成功获救了具有感染性的重配B型流感病毒株,命名为rMDV-B．该重配病毒株以B/Ann Arbor/1/66为病毒骨架,其中HA和NA来源于2006～2007年当年流行株B/Malaysia/2506/2004．rMDV-B在鸡胚尿囊液和MDCK细胞中的HA效价可达1∶64～1∶512．实验结果暗示：从单一供体病毒株可以产生有效的减毒活B型流感病毒疫苗候选株,能够为将来人用流感疫苗的设计提供可借鉴的模型．     

随机引物PCR扩增鸡胚致死孤儿病毒DNA的研究

在电镜下观察鸭病毒性肝炎病毒鸡胚尿囊液种毒时,另看到一大小为70~80nm,无囊膜,20面体对称的病毒颗粒.为了解该污染病毒,作者挑选了4条随机引物对此未知病毒分别进行反转录PCR和直接PCR扩增,结果共扩增出3条基因片段,经测序(一个反应)后分析与禽腺病毒1型--鸡胚致死孤儿病毒基因组部分序列同源性分别高达99.5%、99.6%和99.5%.从而得知鸭病毒性肝炎病毒鸡胚尿囊液种毒受到了鸡胚致死孤儿病毒的严重污染.     

H3N2v疫苗病毒的鸡胚适应性突变能提高病毒收量,而又不失去抗原性和免疫原性

<正>最近发现的人畜共患H3N2型变异甲型流感病毒(H3N2v)已导致有记录的343例与猪接触相关的人类感染。需要研制针对病毒的有效疫苗,这些病毒可能获得了在人群中的遗传稳定性。然而,从人体中分离的病毒在鸡胚中不能良好复制,这构成了基于鸡胚的疫苗生产的障碍。为了解决这个问题,我们想得到表面蛋白的鸡胚适应性突变以在保留免