ASPP2过表达可增强DRAM介导的自噬对HepG2细胞的促调亡作用

p53凋亡刺激蛋白2（apoptosis stimulating protein 2 of p53, ASPP2）能特异性地与p53蛋白结合并增强其促凋亡功能,进而发挥抗肿瘤作用.最近文献提示,自噬对肿瘤发生、发展及肿瘤细胞对抗肿瘤药物的反应都具有重要作用.在本研究中,甲基磺酸(MMS)处理HepG2细胞24 h后,用calcein AM/PI和M30染色检测细胞凋亡,可引起早期（M30免疫组化阳性）和晚期细胞凋亡（PI染色阳性）. 给HepG2细胞转染GFP-LC3质粒后,发现MMS处理24 h可引起自噬的发生. ASPP2腺病毒（rAd-ASPP2）感染HepG2细胞引起ASPP2过表达后,再用MMS处理24 h,能引起更明显的早期、晚期细胞凋亡和自噬. 荧光定量PCR检测发现,rAd-ASPP2诱导了更高的BCL-2相关X蛋白基因（BAX）和p53蛋白的目的基因p53诱导的自噬调节蛋白（p53-induced modulator of autophagy,DRAM）的表达. 但仅用rAd-ASPP2处理HepG2细胞不能引起自噬和凋亡.利用2条DRAM特异性的siRNA下调DRAM的表达,发现rAd-ASPP2引起的自噬被完全抑制, 早期和晚期凋亡均部分被抑制,同时BAX 的mRNA水平也明显下降. 以上结果说明,ASPP2可通过上调BAX和DRAM基因的转录而促进MMS引起的HepG2细胞凋亡; 另外,DRAM介导的自噬是ASPP2促进MMS引起的肿瘤细胞凋亡的机制之一. 该研究可为肝癌的基因治疗提供新的思路.     

ASPP2增强结肠癌HCT116细胞对奥沙利铂的化疗敏感性

为研究ASPP2对奥沙利铂诱导的结肠癌细胞系HCT116 p53+/+(野生型)凋亡及周期的影响.利用ASPP2（rAd-ASPP2）及p53腺病毒（rAd-p53）感染HCT116 p53+/+细胞,经奥沙利铂50 μmol/L诱导细胞凋亡及周期改变.Western印迹检测ASPP2及p53的表达水平;MTT法检测ASPP2腺病毒对奥沙利铂诱导的HCT116细胞活性的影响;Calcein/PI吸收试验检测细胞凋亡情况;流式细胞术分析细胞周期分布. 结果显示,ASPP2、p53共同过表达,或者ASPP2单独过表达均能增强奥沙利铂诱导的HCT116 p53+/+细胞增殖抑制,以及S期抑制并伴有细胞凋亡水平的升高;而无奥沙利铂诱导时,ASPP2对HCT116 p53+/+细胞的活性、细胞周期及细胞凋亡水平的影响无统计学意义. 上述结果表明,ASPP2能够增强奥沙利铂诱导HCT116 p53+/+细胞的增殖抑制、细胞周期抑制和细胞凋亡.     

ASPP2以p53非依赖形式促进自噬引起Hep3B细胞凋亡

p53凋亡刺激蛋白2（apoptosis stimulating protein 2 of p53, ASPP2）能特异性地与p53蛋白结合并增强其促凋亡的功能,进而发挥抗肿瘤作用. 本室前期研究发现,ASPP2可以通过p53-DRAM自噬途径诱导细胞凋亡. 在本研究中,利用ASPP2 腺病毒感染Hep3B细胞(p53缺陷型肝癌细胞系)并用甲基磺酸(MMS)处理后; Calcein AM/PI和M30染色检测细胞凋亡;GFP-LC3质粒转染细胞后检测自噬; 荧光定量PCR和免疫印迹检测自噬基因表达. 结果表明,ASPP2在p53缺陷的Hep3B细胞内可诱导发生凋亡;在MMS存在和缺失条件下, Adr-ASPP2均引起自噬体水平升高及自噬基因的表达增 加,且MMS协同Adr-ASPP2能使自噬水平增加; 进一步用VPS34 siRNA和DRAM siRNA抑 制自噬发现,细胞凋亡水平下降, 说明由Adr-ASPP2诱发经损伤相关自噬调节蛋白（ DRAM）介导的自噬参与了肝癌细胞系凋亡的发生. 综上结果表明,ASPP2可以通过非p53依赖的DRAM介导自噬,并促进肝癌细胞凋亡. 该研究可为肝癌的基因治疗提供新的思路.     

新的抑癌基因ASPP对p53作用的研究进展

p53是一个肿瘤抑制蛋白,它是通过调节相关基因表达,诱导细胞凋亡。p53诱导细胞凋亡的机制多年来一直不太清楚,而最近发现的ASPP(apoptosis stimulating protein of p53)蛋白家族对p53诱导细胞凋亡的机制研究有了新的进展。本文就此作一综述。     

iASPP--抑癌基因家族中的癌基因

ASPP1和ASPP2是新发现的能特异性地刺激p53细胞凋亡功能的分子,是抑癌基因家族新成员。最近又发现了这个家族的第三个成员iASPP,与前两个成员ASPP1和ASPP2的抑癌功能不同,iASPP能抑制ASPP激活p53凋亡能力的作用,因此被称为是一种新的癌基因。在肿瘤细胞中已发现存在着高表达的iASPP,因此通过抑制iASPP来恢复肿瘤细胞中p53的抑癌功能有可能成为一种新的肿瘤治疗的手段。     

多功能蛋白ASPP2在肿瘤发生发展中的作用

恶性肿瘤的发生发展是一个多因素、多步骤参与的复杂过程,临床上肿瘤治疗存在复发率高且易耐药等现象,寻找肿瘤易转移、易复发及耐药的干预靶点对恶性肿瘤的诊断和治疗意义重大。多功能蛋白p53促凋亡刺激蛋白2 (ASPP2)是一种单倍体不足肿瘤抑制因子,自被发现以来其在肿瘤中的作用备受关注。ASPP2在多种恶性肿瘤中的表达均明显下调,且其下调水平与肿瘤晚期及不良预后相关,表明其在肿瘤发生发展中扮演重要角色。本文主要综述ASPP2在肿瘤转移、耐药和代谢等方面的研究进展,为以ASPP2为治疗靶点的研究提供理论依据。     

新的抑癌基因家族--ASPP

P53是重要的抑癌基因之一的产物，其在抑制肿瘤功能的重要方面是诱导凋亡的能力。但多年来P53诱导凋亡的机制还不清楚，最近发现的ASPP蛋白较好的解释了这个问题，ASPP蛋白能和P53结合形成复合物，再作用于原凋亡基因的启动子区域，从而诱导细胞凋亡的发生，ASPP表达水平的改变能影响P53与DNA结合的能力，进而控制细胞是进入凋亡还是进入停滞的途径，影响P53诱导肿瘤抑制的效应。     

SOX11结合p53并上调其转录活性

目的:研究SOX11对p53转录活性的影响,并检测二者的体外相互作用。方法:在H1299(p53缺失)和H460(含野生型p53)2种细胞中分别过表达SOX11和p53,用双萤光素酶方法测定p53的转录活性;用大肠杆菌DH5α表达GST和GST-p53融合蛋白并将其纯化,用GST pull-down实验检测SOX11与p53在体外是否存在相互作用。结果:萤光素酶实验结果表明,在H1299和H460细胞中,过表达SOX11分别能促进外源p53和内源p53的转录活性;GST pull-down实验表明SOX11能在体外与p53发生相互作用。结论:SOX11能在体外与p53发生相互作用并促进p53的转录活性,为进一步研究p53的功能提供了新的线索。     

穿心莲内酯恢复突变型p53野生型功能的作用及机制研究

目的 p53是人体内重要的肿瘤抑制因子,但在人类肿瘤中因高频突变而失去抑癌功能。突变型p53 (mutant p53,mutp53)可促进肿瘤的发生、发展和转移。由于在肿瘤细胞中通常有较高表达,mutp53已成为区别于正常细胞的一个特异性抗肿瘤靶点。本研究旨在探索穿心莲内酯的抗肿瘤作用机制,为寻找靶向mutp53的抗肿瘤化合物提供理论依据。方法 构建可以快速筛选具有恢复mutp53下游转录因子的荧光素酶系统,观察穿心莲内酯对H1299-p53 R273H-PUMAluciferase和H1299-p53R175H-PUMA-luciferase细胞中PUMA基因的表达情况;采用免疫荧光实验,检测穿心莲内酯对HT29(R273H)和SK-BR-3 (R175H)细胞中mutp53的表达影响;采用免疫印迹实验进一步观察穿心莲内酯恢复了mutp53肿瘤细胞中p53下游靶蛋白PUMA、p21、Noxa的表达;随后采用MTT和流式细胞分析,检测穿心莲内酯对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响;此外,还通过si RNA敲低Hsp70表达后,研究穿心莲内酯对mutp53下游基因的重激活作用。结果 穿心莲内酯可以...     

核糖体蛋白参与调控p53诱导活化的分子机制

核转录因子p53是重要的肿瘤抑制因子,具有DNA损伤修复、促细胞凋亡、促细胞分化及增殖抑制等功能,并通过调控细胞周期行进和促进细胞凋亡发挥肿瘤抑制功能。原癌蛋白MDM2为p53的E3泛素化连接酶,MDM2－p53信号轴的功能异常与多种恶性肿瘤的发生发展相关。核糖体蛋白（RP）是蛋白质合成反应的关键调节蛋白,其功能失常与多种疾病相关。近年来的研究发现,RP能通过调节MDM2－p53信号轴在p53相关性肿瘤调控中发挥重要作用。我们根据目前的研究进展,对RP－MDM2－D53信号轴进行简要综述。     

促凋亡基因p53AIP1的研究进展

p53AIPl基因是近年发现的促凋亡基因,在p53依赖性的凋亡通路中起重要作用。p53AIPl介导线粒体凋亡途径,其表达依赖于p53蛋白的Ser^46的磷酸化。p53AIPl可直接促进凋亡,其促凋亡作用可能强于p53本身,并对p53抗性的肿瘤细胞也有作用。因此,对p53AIPl的深入研究可能会为对p53基因治疗有抗性的肿瘤患者带来新的希望。     

HPV16 E6通过阻碍ING4对p53作用而抑制细胞凋亡的实验研究

通过HPV16 E6干扰ING4对p53作用的实验研究,探讨HPV16 E6新的致癌机制。采用转染及免疫共沉淀实验证明HPV16 E6阻碍ING4和p53结合及其诱导的p53蛋白乙酰化的作用;将表达p53、ING4和p53报告基因与HPV16 E6或其突变体的质粒共转染p53蛋白阴性的SaoS2细胞系,荧光素酶报告基因检测HPV16 E6抑制ING4对p53基因在转录水平的影响;并采用细胞集落形成实验检测HPV16 E6对ING4所诱导p53途径所致细胞凋亡的抑制。HPV16 E6阻碍ING4和p53结合及其诱导的p53蛋白Lys-382的乙酰化;HPV16 E6减弱ING4在转录水平对p53基因的调控,HPV16 E6抑制ING4诱导的p53途径介导的细胞凋亡,且所有这些作用不依赖p53蛋白的降解。HPV16 E6阻碍ING4对p53的作用而抑制细胞凋亡可能是其引起癌变的途径之一。     

细胞凋亡中p53转录依赖与非依赖性调控

p53介导由胞内压力诱导的细胞凋亡等多种细胞应答.传统上认为, p53主要在细胞核内作为转录因子调控多种促凋亡靶基因的表达, 从而发挥其促凋亡功能.而最新的研究表明, p53也能直接在细胞质中发挥其促凋亡作用, 并且该过程不依赖于其核内的转录活性.此外, 在特定的刺激下, p53的转录依赖性(细胞核内)与转录非依赖性(细胞质内)促凋亡作用存在着偶联和协同机制, 从而有效的决定细胞在生存与死亡间进行选择.现对近年来关于细胞凋亡中p53转录依赖性和转录非依赖性调控及它们之间的偶联机制的研究进行综述.     

ASSP在非小细胞肺癌中的表达及与预后关系

目的:研究ASPP蛋白在非小细胞肺癌中的表达情况,探讨其表达与患者预后之间的关系。方法:选取于我院就诊的86例非小细胞肺癌患者,病理学诊断癌症分型及分期,对所有患者进行随访,并用免疫组化法检测患者组织切片中ASPP2、i ASPP和p53的表达,SPSS软件分析ASPP2、i ASPP表达水平与患者预后的关系。结果:NSCLCⅢ期的患者中ASPP2阳性表达的中位生存期大于阴性患者,i ASPP阴性表达患者的中位生存期大于阳性患者(P0.05);p53野生型Ⅲ期患者ASPP2阳性表达者的中位生存期显著大于阴性表达患者,Ⅰ、Ⅲ期i ASPP阴性表达患者的中位生存期显著大于阳性表达患者义(P0.05)。p53突变型患者Ⅲ期iASPP阴性表达患者的中位生存期显著大于阳性表达患者(P0.05)。ASPP2和i ASPP蛋白的表达水平和治疗方式均为影响患者预后的因素(P0.05)。结论:ASPP2的阳性表达和i ASPP的阴性表达是NSCLC的保护因素,可在一定程度上预测患者的生存期。     

苦参碱对鼻咽癌细胞凋亡及凋亡相关基因p53 的表达研究

目的：探讨苦参碱对体外培养的人鼻咽癌细胞增殖、凋亡及凋亡相关基因p53 mRNA 和蛋白表达的影响,初步探讨苦参碱 诱导人鼻咽癌细胞凋亡的可能机制。方法：采用MTT 法检测不同浓度苦参碱（0、0.25、0.5、1、1.5、2 mg/ml）对CNE1、CNE2 细胞增 殖的影响;采用荧光定量PCR 法检测这些浓度的苦参碱处理48 h后CNE2 细胞p53 mRNA的变化; Western Blot 检测其蛋白的 变化情况。结果：MTT结果显示苦参碱具有抑制CNE1、CNE2 细胞体外增殖作用,其抑制率存在浓度、时间依赖性。荧光定量 PCR及Western Blot 检测结果显示,苦参碱抑制CNE2细胞p53 mRNA 和蛋白的表达,且亦呈浓度依赖性。结论：苦参碱抑制 CNE2 细胞的增殖,诱导细胞凋亡,呈现浓度、时间依赖性,其作用与抑制CNE2 细胞中p53 基因和蛋白的表达密切相关。     

苦参碱对鼻咽癌细胞凋亡及凋亡相关基因p53的表达研究

目的：探讨苦参碱对体外培养的人鼻咽癌细胞增殖、凋亡及凋亡相关基因p53 mRNA和蛋白表达的影响,初步探讨苦参碱诱导人鼻咽癌细胞凋亡的可能机制。方法：采用MTT法检测不同浓度苦参碱（0、0.25、0.5、1、1.5、2 mg/ml）对CNE1、CNE2细胞增殖的影响;采用荧光定量PCR法检测这些浓度的苦参碱处理48 h后CNE2细胞p53 mRNA的变化;Western Blot检测其蛋白的变化情况。结果：MTT结果显示苦参碱具有抑制CNE1、CNE2细胞体外增殖作用,其抑制率存在浓度、时间依赖性。荧光定量PCR及Western Blot检测结果显示,苦参碱抑制CNE2细胞p53 mRNA和蛋白的表达,且亦呈浓度依赖性。结论：苦参碱抑制CNE2细胞的增殖,诱导细胞凋亡,呈现浓度、时间依赖性,其作用与抑制CNE2细胞中p53基因和蛋白的表达密切相关。     

p53对乳腺癌耐药蛋白基因的转录调控

乳腺癌耐药蛋白（breast cancer resistance protein,BCRP）是ATP结合盒转运蛋白超家族成员之一,其通过主动外排化疗药物如米托蒽醌、托泊替康和甲氨蝶呤,进而介导肿瘤化疗耐受. 最近有研究发现,在野生型p53（wild type p53, wt-p53）低表达的乳腺癌细胞系MCF-7中,外源性wt-p53通过抑制核转录因子-κB （nuclear factor-κB, NF-κB）的活性进而抑制BCRP的表达,但其详细的分子机制有待进一步阐明. 本研究选用p53缺失的骨肉瘤细胞系Saos-2,通过瞬时转染技术发现,wt-p53可以激活BCRP的表达,而突变型p53的激活作用消失;报告基因试验显示,wt-p53可以上调BCRP启动子活性;通过生物信息学软件MatInspector对BCRP启动子区进行预测,未发现p53结合元件;同时,通过转染IκB抑制Saos-2细胞中NF-κB的活性后发现,Saos-2细胞中NF-κB活性越低,p53对BCRP启动子的激活作用越弱甚至完全消失. 上述结果提示,p53对Saos-2细胞中BCRP的激活作用是NF-κB依赖性的.     

p53基因及其功能研究进展

p53基因是一种肿瘤抑制基因,野生型p53对细胞周期和细胞凋亡起重要作用。其编码的蛋白P53相对分子质量为53×103,可刺激Cipt基因产生相对分子质量为21×103的蛋白,该蛋白可以抑制促使细胞通过细胞周期进入有丝分裂的酶的活性,进而抑制细胞生长表达而调控细胞生长,对于预防和治疗胆管癌、肝癌、胃癌等疾病有重要作用。我们在此简要阐述国内外对p53基因及其编码产物的结构、作用机制、检测、功能等方面的研究进展。     

沙眼衣原体抑制宿主细胞凋亡机制的研究进展

沙眼衣原体是一类具有独特发育周期的革兰阴性病原体,能够引起人类多种疾病。沙眼衣原体感染的宿主细胞能够抵抗多种凋亡刺激,并且通过抑制宿主细胞凋亡从而完成自身的复制与发育。其抗凋亡机制可能与其参与调节宿主细胞MAPK信号途径、抑制线粒体细胞色素c的释放、上调凋亡抑制蛋白IAPs和降解促凋亡蛋白等多种机制有关。最新研究发现沙眼衣原体可以通过HDM2/MDM2与p53相互作用,促进p53蛋白水解,抑制细胞凋亡,从而导致持续性感染。