poly(dA:dT)促进体外培养的人绒毛组织AIM2炎性体活化

目的:在妊娠过程中,胎盘可能暴露于多种病原微生物,威胁胎儿正常生长发育。为探讨人胎盘绒毛组织是否表达AIM2炎性体成员基因以及人胎盘组织的AIM2炎性体的活化形式。方法:以THP-1细胞来源的RNA和蛋白作为阳性对照,分别应用RT-PCR和Western blot方法检测人早孕期胎盘绒毛组织中AIM2炎性体两个相关基因AIM2和ASC的表达。分离和体外培养人胎盘绒毛膜组织,并用不同浓度的poly(d A:d T)进行转染,处理24小时后,分别收集组织培养上清和蛋白裂解液,Western blot检测蛋白裂解液中caspase-1的活化,ELISA检测培养上清中IL-1β的分泌。结果:RT-PCR和Western blot结果均显示人早孕期胎盘绒毛组织组成性表达AIM2炎性体相关基因AIM2和ASC。同时,体外培养的人胎盘绒毛组织在转染5μg/m L poly(d A:d T)后,caspase-1剪切片段p10显著增多,培养上清中IL-1β分泌也显著增多(P0.01)。结论:人胎盘绒毛组织存在功能性的AIM2炎性体,能够被胞内双链DNA活化。     

野生雌性黄山短尾猴产后摄食胎盘新发现

摄食胎盘行为是哺乳动物分娩过程的组成部分之一,具有重要的生态学和生物学意义。野生哺乳动物的分娩大多发生在夜间,受光线和视线等观察条件的限制,很难直接观察到野生动物的分娩行为。2015年4月9日8点59分,我们在安徽黄山观察野生短尾猴 (Macaca thibetana) 鱼鳞坑A1群时,发现初次生产的雌性个体“头华玉 (THY)”分娩后摄食胎盘的行为,随即采用目标动物取样法记录了该个体摄食胎盘的行为过程。THY摄食胎盘包括舔舐、撕成片状、刮食和吞咽等过程,历时2小时29分钟,其中摄食胎盘有效时间长于63min,进程缓慢。与其他相关研究比较,初次生产的雌性短尾猴头华玉 (THY) 摄食胎盘具有花费时间长、社会交往多、警惕性高的特点。本研究是本课题组在安徽黄山研究短尾猴30年首次直接观察到产后摄食胎盘行为,为了解短尾猴的繁殖行为和非人灵长类的繁殖特性提供了难得基础资料。     

海带叶卷病类支原体的分离培养

从海带叶卷病的病组织中分离培养出类支原体,在主要由葡萄糖、猪肺、猪脑浸提液、鲜酵母浸液和马血清等组成的液体培养基中,转管培养已持续了半年余。     

静注人免疫球蛋白(pH4)除病毒过滤速度的提高

目的:通过调整静注免疫球蛋白(pH4)的生产工艺,以提高除病毒过滤的速度,使除病毒过滤成为静注免疫球蛋白(pH4)生产过程中去除病毒的实用技术。方法:对生产流程中15%乙醇沉淀(FⅠ+Ⅲ-2)步骤的工艺参数-pH、平衡液的pH和电导率进行了调整,应用新工艺和旧工艺各生产了三批制品,对其除病毒过滤的速度及纯度和外观进行了比较研究。结果:调整生产工艺后,生产出来的静注免疫球蛋白(pH4)制品比用旧工艺生产的制品纯度略有提高,产品外观也有一定的改善,除病毒过滤的平均速度提高了90.6%。结论:本方法显著提高了静注免疫球蛋白(pH4)除病毒过滤的速度,过滤时间缩短了将近一半。以前由于过滤的速度太慢以及每根滤芯可以过滤的制品量较少,而且除病毒滤芯比较昂贵,使除病毒过滤难以用于静注免疫球蛋白(pH4)的实际生产,而本方法通过调整生产工艺,较好地解决了这个问题,增加了除病毒过滤的实用性,还可以减少除病毒滤芯的用量,从而降低了生产成本。     

流感裂解疫苗生产中沙门菌和微生物限度的监控研究

通过对2008年流感裂解疫苗生产中的监控,结果显示,流感病毒接种鸡胚尿囊液中未检出沙门菌,除菌过滤前微生物限度均小于10CFU/ml、细菌内毒素均小于25EU/ml,纯化过程去除了99%的杂蛋白。表明生产中使用的健康鸡胚尿囊液是符合生物制品规程的要求,现行生产工艺对微生物限度和细菌内毒素的控制是有效的,现行纯化过程对病毒液的纯化是有效的。     

检测人老化胎盘组织中miR-182的表达

目的：通过检测miR-182在正常妊娠各期、老化胎盘组织中的表达,探讨miR-182在胎盘发育过程中的调控作用,并同时探讨miR-182与血管内皮生长因子（VEGF）蛋白表达的相关性,为寻找胎盘老化特别是胎盘提前老化发生机制提供依据。方法：采用实时荧光定量PCR方法检测42例标本（早孕绒毛和胎盘组织）中miR-182的表达情况。结果：miR-182在正常妊娠早孕绒毛组织、正常妊娠胎盘组织及老化胎盘组织中均表达。miR-182表达水平各个组间比较：早期与中期妊娠组、中期与晚期未足月妊娠组、晚期未足月与晚期足月妊娠组有显著差异（P〈0.05）;胎盘老化组与正常妊娠早期、中期、晚期未足月、晚期足月组有极显著差异（P〈0.01）;妊娠的早期、中期、晚期,miR-182的表达逐渐增多,老化胎盘组织中miR-182高水平表达。结论：miR-182与胎盘老化的发生高度相关,可能在胎盘老化机制中起重要的调控作用。     

钙化胎盘中纳米细菌的分离培养与鉴定

目的分离、培养与鉴定钙化胎盘中的纳米细菌,为进一步探讨纳米细菌致胎盘钙化的机制奠定基础。方法剖腹产手术收集25份钙化胎盘组织标本,通过脱矿、过滤、离心处理,用细胞培养的方法进行纳米细菌培养,观察其生长情况。运用透射电镜、扫描电镜观察培养物形态。结果 (1)培养3~4周后,对钙化组织培养标本进行观察,发现部分培养管底部出现紧贴管壁生长的白色沉淀物。(2)扫描电镜见纳米细菌为大颗粒成簇分布。(3)透射电镜可见纳米细菌为针状物的聚集体,大小不一。结论首次从钙化胎盘组织中分离培养鉴定出纳米细菌,表明其感染与胎盘钙化有关,需进一步研究其矿化机制以及所致钙化对后代的影响。     

胎盘发生中的表观遗传学

胚外组织尤其是胎盘的正常发生对于维持哺乳动物胎儿在子宫中的发育和生长是必须的。胎盘发生是一个复杂的基因表达调控的过程,近年来的研究表明表观遗传在该过程中也起着重要作用。表观遗传调控在胎盘发生过程的几个主要事件中发挥作用,包括表观遗传对滋养层细胞分化和发育的调控、印记基因对胎盘发生和营养转运的调控、胎盘中的X染色体失活,以及胎盘表观遗传调控异常所导致的妊娠相关疾病。     

鸡胚背根神经节培养法测定神经生长因子活性的条件优化

鸡胚背根神经节培养法是测定神经生长因子(NGF)和神经营养因子活性的重要方法。我们通过考察培养基、鸡血浆和鸡胚浸液的比例、背根神经节部位、培养时间等条件对NGF刺激神经节生长的影响,从而建立了一套检测NGF活性的优化条件。在含20％鸡血浆和15％鸡胚浸液的DMEM的培养基中,利用伊莎褐鸡胚腰部的背根神经节,在终浓度为30ng/ml的蛇毒NGF的刺激下,培养36h可以得到理想的实验结果。该条件重复性好、分辨率高、简单实用。     

氧瓶燃烧法制备~3H生物样品

在液闪技术中,样品的制备是很关键的一步。根据实验材料的性质,可供选择的方法很多。由于液闪的测量是在非极性溶剂中进行的,而要测定的生物样品又大多是亲水性物质,这就构成了液闪测量技术中的一对矛盾。为解决这一矛盾而提出的各种样品制备方法不外乎两大类型,一类是将样品分散悬浮在闪烁液中(悬浮法、乳化法),或沉淀吸附在滤纸片、玻璃纤维膜制成的盘片或其他固体支持物上(纸片法)的非均相测量;另一类是加入助溶剂或长脂肪链季胺类组织溶解剂,使样品与闪烁液互溶     

去整合素基质金属蛋白酶19抑制人正常胎盘来源滋养层细胞的侵润能力

去整合素基质金属蛋白酶19(ADAM-19)是新近发现的ADAMs家族成员,在胎盘组织中有较高水平的表达,但其在胎盘发生过程和滋养层细胞侵润中的功能还是未知的.我们以人正常胎盘来源的细胞滋养层细胞(NPC)为体外模型,利用基因转染、RT-PCR、蛋白质印迹、免疫组织化学及细胞侵润分析等手段,证实ADAM-19在人胎盘组织中有特异表达,存在于多种滋养层细胞中;转化生长因子β1(TGF-β1)可以显著上调NPC细胞中ADAM-19的表达,呈现剂量依赖性;过表达hADAM-19可使NPC细胞中MMP-9的mRNA和蛋白质表达下调,并降低细胞的侵润能力.研究结果表明,人滋养层细胞中存在ADAM-19表达的旁分泌调节机制,而ADAM-19在调节滋养层细胞侵润中发挥一定作用.这一结果为阐明ADAM-19在胎盘发生中的功能提供了新的科学资料.     

miR-19a在正常妊娠及重度子痫前期患者胎盘中的表达

目的：通过检测正常妊娠及重度子痫前期患者胎盘组织中miR-19a的表达,探讨其与子痫前期发病的关系。方法：收集10例重度子痫前期患者胎盘组织（实验组）和10例正常产妇胎盘组织（对照组）,应用荧光实时定量PCR（Real Time PCR）的方法检测两组miR-19a的表达差异。结果：重度子痫前期患者胎盘组织中miR-19a表达升高（P〈0.05）。结论：子痫前期患者胎盘组织中存在差异表达的miRNA,miR-19a在胎盘组织中的高表达可能与子痫前期的发病有关。     

高剂量LH—RH对妊娠早期人滋养层组织蛋白分泌的影响

本研究分析了妊娠早期不同周龄人胎盘绒毛滋养层组织培液中蛋白含量的变化。可知6、7、8、10周组织培养液,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法,测得12种主要蛋白质,此12种蛋白的相对百分含量不同,其中有三种是随周龄增加而增加;有一种是随周龄增加而减少;另有七种蛋白在6周后,它们的百分含量维持在稳定状态;仅有一种蛋白从6周至10周几乎一直保持在稳定水平。有可能这些蛋白质在妊娠过程中起着不同生理作用,所以在不同周龄中的合成量亦有变化。本研究同时证明高剂量LH-RH对胎盘绒毛滋养层组织中分子量大约为50,000和6,000左右的蛋白有抑制作用。由此,讨论了这两种蛋白的消失是否与LH-RH终止妊娠的作用有密切关系。     

藻源污染物特性对高藻水微滤处理过程中膜污染的影响

采用不同生长时期的藻细胞、藻源型有机物(AOM)及原藻液进行过滤实验,研究不同生长时期的藻源污染物对膜污染的影响特性及机制。利用UMFI法分析不同生长时期的藻细胞、AOM及原藻液的污染程度;采用CRITIC分析法定量分析了不同生长时期的AOM和藻细胞在混合过滤过程中对膜污染的贡献率,同时采用混合污染堵塞模型分析了不同生长时期的原藻液不同过滤阶段的主要污染堵塞类型。结果表明, 3个生长时期的藻细胞及AOM的膜污染程度均为对数期最轻;值得注意的是,在原藻液过滤过程中藻细胞及AOM的膜污染贡献率随着生长时期的不同而有所变化,其中AOM的污染权重随着生长时期的延长不断减小,而藻细胞的污染权重随着生长时期的延长不断增大。不同生长时期的原藻液过滤过程中均呈现两段式污染堵塞类型,并且后段均为滤饼堵塞。研究不仅阐明了藻源型污染物特性对微滤处理高藻水膜污染的影响机制,同时也为改善膜污染的技术开发提供参考。     

miR-19a 在正常妊娠及重度子痫前期患者胎盘中的表达

目的:通过检测正常妊娠及重度子痫前期患者胎盘组织中miR-19a的表达,探讨其与子痫前期发病的关系。方法:收集10例重度子痫前期患者胎盘组织(实验组)和10例正常产妇胎盘组织(对照组),应用荧光实时定量PCR(Real Time PCR)的方法检测两组miR-19a的表达差异。结果:重度子痫前期患者胎盘组织中miR-19a表达升高(P<0.05)。结论:子痫前期患者胎盘组织中存在差异表达的miRNA,miR-19a在胎盘组织中的高表达可能与子痫前期的发病有关。     

栀子蓝色素的发酵及分离纯化工艺的研究

以宇佐美曲霉AS3．758为发酵菌株、栀子黄废液为原料,以液态发酵方式生产栀子蓝色素,通过正交试验法优选栀子蓝色素的最佳工艺条件。结果为：培养温度为29％、发酵液pH为6．5、发酵培养时间为36h,发酵结束后经水解、过滤,滤液中加入谷氨酸钠,反应后得栀子蓝色素液,转化率达98．43％。色素液经D301离子交换树脂吸附,再用1.0mol／L盐酸洗脱,洗脱液经低温干燥得到的栀子蓝色素,色价E1cm ^1%（590nm）达55．6。     

糖原合成激酶3β与乙肝病毒胎盘组织感染的关系

目的:初步探讨糖原合成激酶3β(GSK3β)与乙肝病毒胎盘组织感染关系,为进一步研究乙肝病毒在宫内感染中的作用机制奠定基础。方法:选择2011年-2012年在哈尔滨医科大学附属第二医院妇产科剖宫产结束妊娠的乙肝表面抗原阳性(HBsAg+)孕妇60例(实验组),正常妊娠孕妇的胎盘组织20例(对照组)。于分娩前留取孕妇肘静脉血,分娩时留取脐血及胎盘组织。采用ELISA法检测实验组静脉血及脐带血的乙肝五项与HBV-DNA定量;采用免疫组化方法,检测各实验组中HBsAg的表达及分布;检测实验组与对照组GSK3β的分布及表达情况;采用TUNEL法检测实验组及对照组细胞凋亡情况。结果:60例HBsAg(+)产妇中,37例脐带血HBsAg阳性,12例脐带血HBV-DNA阳性;实验组胎盘组织中均检测出HBsAg、GSK3β蛋白表达,且随着血清HBV-DNA滴度增高,HBsAg与GSK3β的表达均呈增高趋势(P0.05);实验组和对照组的胎盘组织中均可检测出凋亡细胞,实验组的凋亡程度低于对照组,随HBV-DNA滴度增高,凋亡呈下降趋势(P0.05)。结论:在乙肝病毒的垂直传播过程,HBsAg可能通过GSK3β抑制胎盘细胞凋亡,影响正常胎盘组织的屏障功能,可能是造成宫内感染的相关机制。     

废糖液诱杀地老虎和粘虫的效果

利用糖液诱杀地老虎、粘虫,已在全国范围内普温推广,且效果良好。但根据预测预报试行办法中统一要求;诱杀地老虎和粘虫所需的糖液,每5日加半量,每10日换一次。我们以往在进行此项工作中,换去的糖液(称废糖液)全部倒掉,未曾充分利用起来,特别在糖类尚不能满足供应的情况下,实为可惜。为了充分利用废糖液,我们曾进行了一些试验,效果良好,现予以整理,供参考。 试验方法 (一)废糖液的处理分二种:一种是将废糖液用双层纱布过滤2—3次,除去杂质和蛾类残体,入锅内熬煑30—40分钟,在熬煑过程中仍须继续除去表面黑色杂质,待全锅呈泡沫状,再用慢火熬煑5—10分钟     

超声波法提取短毛柽柳中总黄酮

目的：测定短毛柽柳中的总黄酮含量并确定其提取条件。方法：在提取过程中通过单因素实验分析了料液比、超声时间、乙醇浓度及超声温度等主要因素对提取率的影响。在此基础上通过正交设计法进行实验,优化短毛柽柳黄酮提取工艺条件。结果：短毛柽柳总黄酮的最佳提取工艺条件为料液比为1∶15,超声处理时间为40min,乙醇浓度为45%,超声温度50℃。根据实验测得的短毛柽柳总黄酮平均得率为33.675mg/g,含量为22.75%。结论：实验结果可靠、方法简便、省时且无污染,是提取短毛柽柳中黄酮化合物的有效途径。     

Cyclin B1和p21在妊娠期高血压产妇胎盘组织中的表达及其临床意义

目的:观察CyclinB1和p21在妊娠期高血压产妇胎盘组织中的表达并探讨其临床意义.方法:采用免疫组化MaxVision法检测正常胎盘组织(20例)、妊娠期高血压胎盘组织(30例)、轻度子痫前期胎盘组织(30例)和重度子痫前期(30例)产妇胎盘组织中的cyclin B1和p21蛋白表达,并分析其与妊娠期高血压病情严重程度的相关性.结果:妊娠期高血压、轻度子痈前期、重度子痈前期胎盘组织中cyclinB1蛋白的表达均显著低于正常胎盘组织,差异均有统计学意义(P＜0.05),妊娠期高血压、轻度子痈前期、重度子痈前期胎盘组织中p21蛋白表达均显著高于正常胎盘组织,差异有统计学意义(P＜0.05).妊娠期高血压患者病情的严重程度与其胎盘组织中cyclinB1的蛋白表达呈显著负相关(r=0.641,P=0.000);而与其胎盘组织中p21蛋白的表达呈显著正相关(r=0.635,P=0.000).结论:Cyclin B1蛋白的表达下调和p21蛋白的表达上调可能参与了妊娠期高血压的发生发展,且二者在胎盘组织中的表达水平与妊娠期高血压病情的严重程度显著相关.