产碱菌麦芽四糖淀粉酶的纯化及性质

产碱菌(Alcaligenes sp．)537．1除去菌体的培养液经硫酸铵沉淀及DEAE-纤维素离子交换柱层析,得到了凝胶电泳均一的麦芽四糖淀粉酶。纯化了141倍,酶活力回收40.1％,比活力达3308U／mg。用浓度梯度PAGE和SDS—PAGE测定酶分子量分别为68000和66000,不具亚基。用PAG-1EF测定等电点为4．45。酶反应最适pH和温度分别为7.0和60C。在pH7—10范围内稳定,该酶半衰期为37C 12小时,50 C 1小时和62 C 6分钟。 麦芽四糖淀粉酶是糖蛋白,含有4％左右的糖,含有27．10％酸性氨基酸、11.08％碱性氨基酸和1．82％色氨酸。     

木霉β-1,3-葡聚糖酶的分离纯化

目的:对木霉菌株LE02所产β-1,3-葡聚糖酶的分离纯化方法进行研究。方法:粗酶液分别用硫酸铵、乙醇和丙酮进行沉淀,再用DEAE-Sepharose CL-6B离子交换层析进一步分离纯化,并用SDS-PAGE法测其分子量。结果:硫酸铵分段盐析法沉淀酶蛋白的效果优于乙醇和丙酮沉淀;盐析得到的酶蛋白经透析浓缩后,再经DEAE-Sepharose CL-6B层析分离,可得到单一酶蛋白,总酶活回收率达78.71%,比酶活达到689.9U/mg,提高了53.74倍,经SDS-PAGE法测得该β-1,3-葡聚糖酶的分子量为80.137kDa。结论:采用硫酸铵分段盐析和离子交换层析法可获得电泳纯的β-1,3-葡聚糖酶,且酶活回收率高。     

黑曲霉菊糖酶的纯化及性质

黑曲霉(Aspergillus niger)319发酵液经硫酸铵分级沉淀、DEAE-纤维素52离子交换层析和Sephadex G-100分子筛层析,得到了电泳纯的菊糖酶组分。提纯倍数为67,收率为25.5％。菊糖酶的最适pH为5.0,最适温度为60℃。此酶为单亚基蛋白,凝胶过滤法测得分子量为28000,含糖13.9％,用等电聚焦法测得等电点为5.4,该酶对温度有较高的稳定性,对pH的稳定范围较窄。Hg²⁺、Pb²⁺和Cu²⁺对该酶有强烈的抑制作用。此酶对菊糖有较强的底物专一性,产物为果糖,但它也可作用于蔗糖,I/S值为0.348。当以菊糖为底物时,K_m为6.25mmol/L,V_m为67.11 μmol·mg~(-1)·min~(-1)。     

鹿茸硫酸软骨素蛋白聚糖的分离纯化研究

报道了用DEAE-纤维素(DE-23)离子交换柱层析从鹿茸二杠中分离、纯化及鉴定硫酸软骨素的方法.首先用适量蒸馏水浸泡鹿茸二杠并将其捣碎,离心取沉淀用盐酸胍浸提,浸提液对尿素液透析后经DEAE-纤维素(DE-23)离子交换柱层析,吸附大量的硫酸软骨素;再用含盐尿素溶液梯度洗脱、分离后,经软骨素酶消化及琼脂糖凝胶电泳, 与硫酸软骨素标准品比较,证实得到的物质为纯的硫酸软骨素蛋白聚糖,其得率约为48.77%.该方法使硫酸软骨素分离纯化一步完成,大大简化了纯化步骤.     

菠菜叶片蔗糖磷酸合成酶的纯化

经硫酸铵分部沉淀,DEAE-纤维素(DE 52),Sepharose 6B和 AH—4B连续三次柱层析,得到纯化88倍电泳均一的菠菜叶片蔗糖磷酸合成酶。电泳分析该酶分子量为490 kD,是由八个分子量为60 kD的相同亚基组成的寡聚体,等电点为PI=4.l,其最适pH值为6.9。     

华丽曲霉Z58有机磷农药降解酶的纯化和性质

华丽曲霉(Aspergillus ornatus)Z58有机磷农药降解酶经硫酸铵分级沉淀、Sephadex G100凝胶过滤、DEAE52离子交换层析得到了分离纯化,用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)鉴定为单一组分。凝胶过滤法测得分子量为67 000,提纯倍数为34.2,收率为17.8%。该酶的最适反应温度45℃,最适反应pH72,对热较稳定,并且能在pH6～10范围保持活性。重金属Cu2+对该酶具有明显的促进作用,而SDS对酶具有抑制作用。此酶对所试的有机磷农药都有较好降解作用。     

嗜热脂肪芽孢杆菌β—半乳糖苷酶的性质

利用硫酸铵分级沉淀、离子交换层析(DEAE-22)、SephadexG-75凝胶过滤从嗜热脂肪芽孢杆菌胞内提纯得B半乳糖甘酶。研究表明,该酶最适表观反应曙度和最适PH分别为60OCT6.4D50OC该酶具有良好的热稳定性.碱金属和碱土金属盐对酶有激活作用,重金属Zn     

嗜热脂肪芽孢杆菌β-半乳糖苷酶的性质

利用硫酸铵分级沉淀、离子交换层析 (DEAE- 2 2 )、Sephadex G- 75凝胶过滤从嗜热脂肪芽孢杆菌胞内提纯得到 β-半乳糖苷酶。研究表明 ,该酶最适表观反应温度和最适 pH分别为 6 0℃和 6 .4。在 50℃该酶具有良好的热稳定性。碱金属和碱土金属盐对酶有激活作用 ,重金属 Zn²⁺、Fe³⁺、Cu²⁺抑制酶的活力。巯基保护剂能明显增强酶的活力 ,而巯基结合试剂强烈抑制酶的活性。该酶对 β-     

嗜热毛壳菌内切β-葡聚糖酶的分离纯化及特性

探讨了液体发酵嗜热毛壳菌(Chaetomium thermophile)产生的内切β葡聚糖酶的分离纯化及特性。粗酶液经硫酸铵分级沉淀、DEAE\|Sepharose Fast Flow阴离子层析、Pheny1\|Sepharose疏水层析、Sephacry1 S\|100分子筛层析等步骤便可获得凝胶电泳均一的内切β\|葡聚糖酶。经125%SDS\|PAGE和凝胶过滤层析法分别测得所分离纯化酶蛋白的分子量约为67.8kD和69.8kD。该酶反应的最适温度和pH分别为60℃和40～45在pH50条件下,该酶在60℃下稳定;70℃保温1h后,仍保留30%的活性;在80℃的半衰期为25min。金属离子对内切β\|葡聚糖酶的活性影响较大,其中Na+对酶有激活作用;Fe2+、Ag+、Cu2+、Ba2+、Zn2+等对酶有抑制作用。该酶对结晶纤维素没有水解能力。     

黑曲霉M89菊粉酶的提纯与性质

黑曲霉(Aspergillusniger）M89菊粉酶经硫酸铵分级盐析、SephadexG-200凝胶过滤、DEAE-纤维素离子交换层析、聚丙烯酞胺凝胶电泳（PAGE）制备分离,提纯到4个菊粉酶组分EⅠ、EⅡ、EⅢ和EⅣ。用SDS-PAGE测定分子量分别为102．6、97．9、61．2和36．5kD;用等电聚焦电泳测得其等电点分别为4．15、4．24、4．48和4．15。4个组分的最适反应温度均为55～60℃;EⅠ的最适pH为pH4．0,其余3个组分为pH4．5．各组分的热稳定性有一定差异,分子量越小的组分,热稳定性越好,55℃处理90min,EⅠ有一定的热失活,其余3个组分无活力丧失,4个组分都是外切酶。     

亚洲玉米螟免疫细胞中一种细胞粘附因子的研究

以亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis为试虫,发现血细胞裂解液被昆布多糖或低浓度钙离子激活后,能粘附浆细胞,使浆细胞伸展。昆布多糖处理的血细胞裂解液,经硫酸铵沉淀、羧甲基纤维素离子交换层析、ConA-Sepharose 4B亲合层析,提纯到一种细胞粘附因子。细胞粘附因子是分子量为64KD的蛋白质。以同样方法在血浆中纯化出一种分子量为390KD的蛋白质,推测其可能是血浆凝固原.经53%PercOll浓度梯度分离纯化了两类免疫细胞(颗粒细胞和浆细胞)。证明细胞粘附因子仅存在于颗粒细胞中。     

嗜热真菌 Thermomyces lanuginosus热稳定a—淀粉酶的纯化及特性

嗜热真菌Thermomyces lanuginosus在液体培养基中于50℃静止培养14d,培养液经硫酸铵分级沉淀、DEAE-Toyopearl离子交换层析、Butyl-Toyopearl疏水层析、SephacrylS-300分子筛层析和FPLC MonoQ离子交换层析,得到了凝胶电泳均一的淀粉酶。纯酶与淀粉反应不同时间后,用碘色反应法和DNS法测定淀粉和还原糖量,结果显示淀粉量在开始时迅速下降,但还原糖的量却增加很慢;产物经TLC层析分析为麦芽糖和少量葡萄糖。由此说明它为α-淀粉酶。用SDS-PAGE和Sephacryl S-300分子筛层析测定分子量为56000,不具亚基。酶反应最适温度和pH分别为65℃和4.5～5.0。在pH4.6条件下,酶在50℃是稳定的;60℃保温1h,仍保留94％的原酶活性;酶在70℃的半衰期为10min。钙离子对酶有激活作用。酶对糖原和糊精有一定的水解能力。     

丝孢菌Monodictys asperospera (Cooke & Massee) Ellis漆酶的分离纯化及其酶学性质

本研究首次发现Monodictyx asperospera(Cooke&Massee)Ellis具有较好的产漆酶能力.粗酶液经硫酸铵盐析、DEAE-纤维素层析及丙烯葡聚糖凝胶S-300层析纯化,纯化倍数为8.1,回收率为5.7%.漆酶分子量约为77kD,最适反应温度为55℃,最适反应pH6.0,以丁香醛连氮为底物时Km为0.163mm0l/L,Vmax为0.194 mmol(L·min),含糖量为18.14%,Cu2+对漆酶有明显抑制作用.     

应用QAE Zetaprep盘层析法从少量标本中提纯单克隆抗体

用QAE Zetaprep盘(LKB公司提供)层析法(简称QAE Z-P法)纯化抗-乙型肝炎病毒表面抗原(抗-HBsAg)亚型决定簇杂交瘤细胞株产生的McAb,与传统应用的DEAE纤维素柱层析法比较(两种方法纯化的McAb均用RIA和ID法测定其抗体滴度,Folin酚法测定蛋白含量),结果,采用QAE法纯化,整个过程只需50分钟左右,而且样品不需先经盐析处理,层析后出现两个蛋白峰,第一峰为IgG,免疫扩散试验中出现一条清晰的IgG沉淀线;第二峰为杂蛋白,无拖尾现象。用传统的DEAE-52层析法纯     

嗜热真菌Thermomyces lanuginosus A236热稳足葡萄糖淀粉酶的纯化及其特性

嗜热真菌Thermomyces lanuginosus A2a6在液体培养基中50℃下静止培养14天,粗提酶液经硫酸铵分级沉淀、DEAE-Toyopearl离子交换层析、Butyl-Toyopearl疏水层析、Sephacryl S100凝胶过滤和FPLC Mono Q离子交换层析,得到了凝胶电泳均质的葡萄糖淀粉酶。酶促反应产物经TLC分析为葡萄糖,证明纯化的酶为葡萄糖淀粉酶(EC 3．2．1.3)。SDS-PAGE测定其分子量为72,000,不具亚基,pI为4．0,富含val和Leu。酶反应最适温度和pH分别为70℃和5．0。在pH5．0条件下,酶在60℃保温lh,仍具有原酶活性。酶活性在70℃和80℃的半衰期分别为20min和6min, Ca²⁺对酶有激活作用,Fe³⁺、Al³⁺、Hg²⁺等金属离子对酶活力有一定的抑制作用。纯酶碳水化合物含量为12．4％。纯酶可水解可溶性淀粉,直链淀粉、支链淀粉．糊精、糖原、麦芽三糖和麦芽糖,其中可溶性淀粉为最适底物。     

普通脱硫弧菌D-2氢化酶的提纯与性质

从全国土壤腐蚀网站长辛店分离纯化到－株氢化酶活性较高的菌株D-2。经鉴定为普通脱硫弧菌(Desulfovibrio vulgaris)。该菌氢化酶主要位于菌体的周质空间。 用pH9．0的0．1mmol／L Tris—EDTA缓冲液将酶洗脱,经硫酸铵沉淀、DEAE-纤维素和sepbadex G-150柱层析纯化,酶活力达到205μmolH2·min-1·mg蛋白-1,得率为17．6％,纯化33．1倍。经SDS—PAGE和梯度-PAGE测定,该酶为一条肽链,分子量49 000道尔顿。该酶吸收光谱具有铁硫蛋白特征．Ε400nm和8 280Nm分别为34．8mM-1·cm-1和120mM-1·cm-1,每个酶分子含有12个铁原子和11个硫原子。N-溴代丁二酰胺完全抑制酶活力,Hg2+件的抑制率也达54％,但该酶对巯基封闭性试剂具有抗性。     

普通脱硫弧菌D-2氢化酶的提纯与性质

从全国土壤腐蚀网站长辛店分离纯化到－株氢化酶活性较高的菌株D-2。经鉴定为普通脱硫弧菌(Desulfovibrio vulgaris)。该菌氢化酶主要位于菌体的周质空间。 用pH9．0的0．1mmol／L Tris—EDTA缓冲液将酶洗脱,经硫酸铵沉淀、DEAE-纤维素和sepbadex G-150柱层析纯化,酶活力达到205μmolH2·min-1·mg蛋白-1,得率为17．6％,纯化33．1倍。经SDS—PAGE和梯度-PAGE测定,该酶为一条肽链,分子量49 000道尔顿。该酶吸收光谱具有铁硫蛋白特征．Ε400nm和8 280Nm分别为34．8mM-1·cm-1和120mM-1·cm-1,每个酶分子含有12个铁原子和11个硫原子。N-溴代丁二酰胺完全抑制酶活力,Hg2+件的抑制率也达54％,但该酶对巯基封闭性试剂具有抗性。     

蓖麻β-半乳糖苷酶的纯化及其基本性质

蓖麻籽黄化苗中存在高活性β-半乳糖苷酶。经硫酸铵分级分离、DEAE-纤维素离子交換层析、Sephadex G-100、CM-Sephadex和DEAE-Sephadex层析纯化。活性收率为6.4％,纯化倍数达107倍。纯化了的酶经聚丙烯酰胺凝胶电泳显示单一蛋白带,SDS-PAGE显示两条蛋白带,其相应分子量分别为3.25×10~4和2.94×10~4。用Sephadex G-200分子筛层析法测得分子量为6.7×10~4。综合上述结果推测该酶是由两个不同的亚基构成。以邻硝基苯酚-β-半乳糖苷为底物测得该酶的表观Km为5.9×10~(-3)mol/L。最适pH和最适温度分别为4.5和50℃。酸碱稳定区域在pH4.6—7.5之间。不同浓度缓冲液以及不同种类缓冲液、不同金属离子对酶活性影响均进行了讨论。     

烟碱脱氢酶的纯化及性质研究

通过硫酸铵沉淀、离子交换层析和凝胶过滤等方法对节杆菌(ArthrobacterZ3)所产烟碱脱氢酶进行了纯化,该酶经SDS-PAGE电泳检测为一条带,分子量约为120kDa。该酶活力的最适温度为40℃,在pH5.5-8.0范围内稳定,最适pH约为7.0;对烟碱作用的Km值为7.694×10-4mol/L;Mn2 、Co2 是酶的激活剂,而Cu2 是酶的抑制剂。     

枯草杆菌BS-98分泌的抗真菌蛋白的分离纯化及其部分性质的研究

拮抗菌（Bacillussubtilis）BS-98菌株在BPY液体培养基中产生的蛋白质经硫酸铵分级盐析、SephsdexG-100柱层析、DEAE-纤维素柱层析和SephadexG－100柱再层析后,分离纯化得到的抗菌蛋白在电泳中显现出三条带。经初步纯化的抗菌蛋白对热稳定,对蛋白酶部分敏感。抑菌谱测定表明,抗菌蛋白对芦笋茎枯病菌、小麦赤霉病菌、棉花枯萎病菌、棉花黄萎病菌、灰霉菌、立枯丝核菌等病原真菌及黄瓜角斑病菌都具有强烈的抑制作用。