金标银染免疫渗滤法检测土拉弗朗西斯菌

目的:建立金标银染免疫渗滤法检测土拉弗朗西斯菌(土拉菌)的方法,评价其灵敏度、特异性、重复性及其应用。方法:以小鼠抗土拉菌脂多糖单克隆抗体作为捕获抗体包被硝酸纤维素膜、兔抗土拉菌多克隆抗体作为检测抗体标记胶体金,通过金标银染技术放大检测信号,建立金标银染免疫渗滤法检测土拉弗朗西斯菌体系;评价该方法的灵敏度、特异性和重复性;以经荧光定量PCR定量的土拉弗朗西斯菌为检测对象,比较金标银染免疫渗滤法和免疫层析法。结果:金标银染免疫渗滤法检测土拉弗朗西斯菌的最小检出量为1.0×103 CFU/mL,灵敏度高于免疫层析法;检测大肠杆菌、炭疽芽孢杆菌、布鲁菌和鼠疫耶尔森菌的结果均为阴性;密封保存的检测卡80 d内重复性良好,100 d后反应强度略有降低。结论:金标银染免疫渗滤法检测土拉弗朗西斯菌敏感性高、特异性强、重复性好,且方便快捷,不需要仪器设备,可作为快速检测土拉弗朗西斯菌的首选方法。     

四联活菌苗气雾免疫研究——Ⅲ.炭疽、布氏、鼠疫、土拉活菌苗联合气雾免疫家兔血清抗体测定及炭疽菌苗的保护力试验

一、炭疽活菌苗单价气雾或与布氏、鼠疫、土拉联合气雾一次吸入免疫均能产生较好的免疫力,每只动物剂量3亿,攻击80个绝对致死量可保护70-100%。二、应用炭疽乳胶抗原测定免疫血清抗体水平,可见动物保护在70-100%时,其血清几何平均滴度为1：12-1：18之间。在四联气雾免疫中,不论是血清抗体的产生还是对强毒菌的攻击,都与单价结果相近,看不出有干扰现象。三、应用炭疽、鼠疫乳胶抗原,布氏、土拉菌体染色抗原测定血清抗体,结果表明上述四种菌苗免疫后六天半数以上动物产生抗体,十二天内可达100%阳转。四、用炭疽、鼠疫乳胶抗原在免疫前测定动物自然抗体,全部为阴性,免疫后血清滴度达到1：5者,玻片全血凝集即为阳性。玻政策全血凝集具有特民、敏感、简易、快速等特点,可作为炭疽、鼠疫活菌苗免疫后效果观察的辅助方法。     

改良炭疽菌苗开发中克隆的保护性效力和进展

<正>以往的研究致力于开发更安全、有效的人用炭疽菌苗,已经证明无论化学菌苗或活菌苗必须含有一种或几种毒素成份方可保护活芽胞攻击。我们近期的研究致力于∶畜苗炭疽杆菌Sterne株Aro_突变株,产保护性抗原(PA)的重组活菌苗,和含PA,PA片段和新佐剂配方的非活菌苗。 炭疽杆菌Aro—1和Aro—2 用四环素抗性转座子Tn916致突变,使炭疽杆菌链霉素抗体、产毒素、无荚膜株UM23—1产生两个独立的Aro~-突变株,此二株Aro~-突变株的生长需要几种芳香族复合物,命名为Aro—1、Aro~-—2,它们对小鼠和豚鼠比UM23—1株毒力弱,但用其免疫小鼠和豚鼠,对强毒炭疽杆菌芽胞致死量非肠道攻击提供明显保护。当体外无四环素培养时,两种Aro~-突变株回变到亲本表型。     

无细胞百日咳菌苗的纯制和特性

<正> 引言 百日咳菌苗传统的形态,由杀死的百日咳杆菌组成,亦即它是全细胞菌苗。这种菌苗包含有对促进保护性应答不需要的成份,而且这些成份可能对副反应起作用。在日本,自1973年一直从事由百日咳杆菌分离其有效因子,并尽可能多的除去不需要的成份。一些保护性抗原已在百日咳杆菌培养物的上清液中被证实,并曾尝试发展一种由一或两种这些抗原组成的菌苗。含有两种主要保护性抗原即由百日咳杆菌培养物上清液中分离出的百日咳毒素(PT)和丝状血凝素(FHA)的精制百日咳菌苗(无细胞百日咳菌苗),自1981年已应用于日本.     

伤寒Vi多糖菌苗预防接种后三年抗体效价的持久性观察

<正> 在尼泊尔和南非德兰士瓦东部,采用随机抽样、双盲法并设对照区的试验,最近报告了纯化Vi多糖菌苗预防伤寒的效果。推测由接种菌苗而诱导的血清Vi抗体,其保护力至少可持续1～1 1/2年。 本文报告的是在马里兰、图尔斯大学和智利空军新兵的志愿者中,接种Vi菌苗刺激Vi抗体有效增长情况的研究,并对马里兰大学已接种学生随访36     

全细胞百日咳菌苗与含凝集原的无细胞菌苗的第二期现场试验

<正>由英国“应用微生物学及研究中心”研制的无细胞百日咳菌苗,含有凝集原2及3,百日咳毒素和丝状血凝素。188名婴儿进入一项随机的双盲试验,以联合白喉及破伤风类毒素的无细胞或全细胞菌苗按3、5及8～10个月的间隔进行接种。两组的局部反应相以,但在接种无细胞菌苗后,具有全身反应的婴儿显著地少于全细胞菌苗。对无细胞菌苗凝集原和毒素组分的抗体平均对致滴度高于全细胞菌苗。接种第三剂菌苗后一年,无细胞组抗体的持久性亦较好。     

厌氧棒状杆菌与双歧杆菌抗小鼠腹水瘤活性的比较

厌氧棒状杆菌和双歧杆菌分别制成死菌苗,在相同实验条件下观察两菌对小鼠腹水瘤的抗瘤效果。结果显示,两种菌苗均有显著的抗瘤活性,而厌氧棒状杆菌抗瘤作用更强于双歧杆菌,特别在延长观察期尤为显著。应用两菌苗后,脾指数均有不同程度升高,未见明显毒性作用。     

结合菌苗的免疫学特征

<正>细菌多糖(PS)菌苗在小于18月龄的婴儿和患有免疫缺陷的成年人中不能产生抗体保护,而这类人群却最易遭受包胶菌的侵袭。另外,在健康人群中,多糖菌苗也难以诱导恒定的、增强的和高滴度的抗体反应,也不能启动IgG记忆应答。为了增强PS抗原的免疫原性,发展了多糖——蛋白结合菌苗。     

百日咳毒素的生物学活性

<正> 1.前言1947年Greenberg和Fleming与1948年Parfentjer和Goodline的观察研究,标志着百日咳菌苗生物学活性研究的开始。Green-berg和Fleming发现,百日咳菌苗能增强抗原产生抗体;而Parfentjer和Goodline报导百日咳菌苗处理过的小鼠对组织胺的敏感性增强。不久,又发现菌苗可增进小鼠对过敏症、五羟色胺、组织胺和五羟色胺的结合物、内毒素以及许多其它休克增强因子的敏     

胸膜肺炎放线杆菌毒素apxIVA基因的克隆与表达及间接ELISA方法的建立

参照APP血清 1型apxIVA基因序列合成了一对特异性引物 ,从本实验室分离鉴定的胸膜肺炎放线杆菌 (APP)血清 2型中扩增了apxIVA基因 5′端 2445bp的片段。将该片段克隆到原核表达载体pET-28b的T7启动子下游 ,与 6×HisTag融合 ,再转化大肠杆菌BL21(DE3) ,在IPTG的诱导下表达大小约 90kD的蛋白。表达产物以包涵体的形式存在 ,且能与APP标准阳性血清发生特异性反应。将包涵体变性和复性后包被酶标板建立了间接ELISA方法 (ApxIVA-ELISA) ,特异性良好。用ApxIVA-ELISA检测猪胸膜肺炎三价 (1、2和 7型 )灭活菌苗和基因工程类毒素菌苗免疫猪血清抗体均为阴性 ,而 1、2、7型APP活菌感染动物的血清抗体均为阳性。实验证明 ,ApxIVA-ELISA不仅可以用于检测所有血清型APP的抗体 ,而且还可以用于APP自然感染猪和灭活菌苗免疫猪的鉴别诊断。     

百日咳杆菌丝状血凝素和淋巴细胞增多促进因子在小鼠中的保护活性

<正>百日咳是一种人类呼吸道疾病。使用全菌百日咳菌苗已有效地控制该病。然而,仍然需要一种含必要保护性抗原和反应原较少的菌苗。向改良菌苗方向进军的重要步骤,包括分离和鉴定百日咳杆菌的毒性成份和保护性抗原。     

铜绿假单胞菌菌苗预防白色念珠菌感染的实验研究

目的利用铜绿假单胞菌菌苗探索阻断白色念珠菌感染的影响。方法家兔耳皮内注射白色念珠菌,进行活菌攻击,建立动物感染模型。观察用铜绿假单胞菌菌苗免疫的家兔状况;用试管凝集法测定家免的抗体效价;采用小白鼠体内吞噬法测定免疫组和空白对照组巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数,以得出铜绿假单胞菌菌苗的免疫性。结果观察发现：与对照组比较,铜绿假单胞菌菌苗免疫组抗体效价,巨噬细胞的吞噬能力明显提高;注射区局部感染及全身症状明显减轻;肾脏感染灶减少,病理切片显示病情较轻。结论铜绿假单胞菌菌苗能够减轻注射区局部感染及全身症状,对肾脏的播散性白色念珠菌感染具有一定的阻断作用。     

美国卫生研究院食品药品管理署生物制品局细菌部主任罗宾斯教授在京学术讲座综述(续一)

<正>百日咳菌苗 百日咳菌苗是第二次世界大战后发展起来的一种用福马林杀菌的全菌体菌苗。在美国使用实践中,用小鼠作保护力试验,用凝集反应测定免疫小孩中的凝集抗体;但是菌苗如何产生保护?百日咳又是如何致病?免疫成分是什么?如何说明人得到免疫?人体免疫情况是血清抗体还是分泌抗体?是否是细胞免疫?我们都不太清楚、百日咳菌相的变化有3～4种,第一相菌也是在变动的,在培养基上有时变为3或4相。现在谈几个     

新无细胞百日咳菌苗的展望

<正>发展一种与目前使用的全菌体百日咳菌苗有根本区别的改进的新百日咳菌苗,临床试验要证明待选的菌苗必须是安全和有效的。由于我们对百日咳感染或百日咳菌苗接种后产生的保护性免疫基础尚不知道,所以,不可能用特异的抗体应答作为直接检测免疫力的指标。但是,我们不能不证明待选菌苗必须保护易感人群免得疾病。肯定的     

绿脓杆菌MSHA菌毛株菌苗对反复发作性尿路感染的治疗及其机制研究

采用绿脓杆菌ＭＳＨＡ菌毛株菌苗（ＰＡ－ＭＳＨＡ菌苗）治疗了４０例使用抗生素无效的ＲＵＴＩ,取得了满意的疗效,有效率９５％（３８／４０）,治愈率９２．５％（３７／４０）。对其中１８例进行了治疗前后血清抗ＭＳＨＡ菌毛株抗体效价和外周血Ｔ淋巴细胞亚群测定。疗后患者血清中抗ＭＳＨＡ菌毛株抗体效价较疗前增高８～６４倍;同时外周血Ｔ淋巴细胞亚群的比例得到了改善,ＣＤ３＾＋和ＣＤ４＾＋Ｔ细胞的百分率显著提高（Ｐ〈０．０１）,而ＣＤ８＾＋Ｔ细胞的百分率则显著下降（Ｐ〈０．００１）。治疗过程未见明显的副作用。研究表明：ＰＡ－ＭＳＨＡ菌苗对反复发作性尿路感染治愈率高,安全可靠,患者的免疫低下状态得到改善,且对多种病原菌（包括革兰阴性杆菌及其Ｌ型、金黄色葡萄球菌及其Ｌ型）所致的ＲＵＴＩ效果都很好。     

O139霍乱灭活全菌体菌苗免疫后人群抗体水平测定

Ｏ１３９霍乱弧菌经甲醛灭活制备而成的全菌体菌苗在广西田阳县进行临床考核。每组５０名中学生经肌肉途径接种４５亿菌和９０亿菌两种剂量,一个月后８０％接种者血清中杀弧菌抗体升高,最高可达１∶１６０,免疫后３个月开始缓慢下降,但仍有６８－７２％接种者抗体效价在１∶２０以上。高剂量组半数接种者的杀弧菌抗体可维持存在６个月。血清中凝集抗体升高明显,但３个月后下降也明显。与对照组Ｏ１菌苗相比,两种抗体水平升高与下降趋势一致。采用ＥＬＩＳＡ法测定抗毒抗体,Ｏ１３９菌苗组与Ｏ１菌苗组结果相似,均有一定上升。上述结果提示Ｏ１３９霍乱灭活菌苗可作为短效应急菌苗使用     

胸膜肺炎放线杆菌毒素apxⅣA基因的克隆与表达及间接ELISA方法的建立

参照APP血清1型apxⅣA基因序列合成了一对特异性引物,从本实验室分离鉴定的胸膜肺炎放线杆菌(APP)血清2型中扩增了apxⅣA基因5'端2445bp的片段.将该片段克隆到原核表达载体pET-28b的T7启动子下游,与6×His Tag融合,再转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG的诱导下表达大小约90kD的蛋白.表达产物以包涵体的形式存在,且能与APP标准阳性血清发生特异性反应.将包涵体变性和复性后包被酶标板建立了间接ELISA方法(ApxⅣA-ELISA),特异性良好.用ApxⅣA-ELISA检测猪胸膜肺炎三价(1、2和7型)灭活菌苗和基因工程类毒素菌苗免疫猪血清抗体均为阴性,而1、2、7型APP活菌感染动物的血清抗体均为阳性.实验证明,ApxⅣA-ELISA不仅可以用于检测所有血清型APP的抗体,而且还可以用于APP自然感染猪和灭活菌苗免疫猪的鉴别诊断.     

不同施肥处理对茶树根际微生物群落结构的影响

为探究不同施肥处理对茶树根际微生物的影响,于2016年1月在苏州某茶园设置3个实验组:CF(传统化肥)、CF+BF (传统化肥+菌肥)、CK (对照),采用荧光定量PCR和扩增子高通量测序分别测定细菌的生物量和物种组成。实验数据表明:茶树根际优势细菌为厚壁菌门、变形菌门、放线菌门、酸杆菌门和拟杆菌门,平均相对丰度分别为33.51%、29.47%、12.18%、7.53%和5.68%;施用传统化肥后土壤中细菌含量显著增加(p<0.05),达(7.37±1.23)×10~9 copies/g;CF+BF组与CK组没有显著差异;施肥组(CF, CF+BF)中细菌的物种数、辛普森多样性、香浓多样性和谱系多样性均显著低于对照组;CF组中芽孢八叠球菌属和CF+BF组中Chitinophagaceae含量显著增加,而两组中Ellin329含量显著低于对照组。本研究揭示了施肥方式与土壤细菌群落结构的关系,为合理施肥提供了理论依据。     

厌氧棒菌菌苗(CP)对小鼠移植癌的抗癌效应及脾激活试验研究

厌氧棒杆菌(下简称棒菌)的抗癌效应近年来引起广泛注意。不少学者的动物实验证明,厌氧棒杆菌单独使用或与化疗、放疗并用都有独特的抗癌效应,有人已开始试用于临床抗癌治疗,得到较好效果。其抗癌机理尚不十分清楚。有报导说,小棒菌的灭活菌苗具有激活网状内皮系统,增强吞噬活性,提高抗感染、抗肿瘤、刺激B细胞增生、促进抗体形成等功能。为了观察小棒菌(CP)的抗癌活性及其抗癌机理,我们于1978—1979年曾进行厌氧棒菌菌苗对小鼠移植黑色素瘤和S—180肤水癌的抗癌效应及脾激活试验研     

土拉弗朗西斯菌两种不同长度的外膜蛋白FopA抗原和抗体的制备

目的:根据外膜蛋白 FopA 的序列信息,建立土拉弗朗西斯菌 FopA蛋白全长(FopA-L)和部分(FopA-S)的特异性抗原的 BL21 表达系统,获得高活性的重组 FopA-L、FopA-S蛋白并制备相应的多克隆抗体,为土拉菌的监测、诊断和治疗提供依据。方法:通过 pET100 质粒构建FopA-L及FopA-S的表达载体,转化大肠杆菌BL21细胞并诱导表达FopA-L及FopA-S蛋白,螯合镍离子次氨基三乙酸(Ni-NTA)亲合层析纯化FopA蛋白,用重组蛋白免疫大耳白兔制备多克隆抗体,通过 ELISA、Western 印迹、胶体金免疫层析技术等方法进行检测。结果:构建了FopA-L及FopA-S的表达载体,获得相应的高表达目的蛋白 BL21 细胞株,用表达的蛋白为抗原成功制备了 FopA特异性的抗体,效价皆在1 ∶100000以上且特异性良好。结论:FopA-S与FopA-L两种抗原和相应抗体的制备为建立土拉菌快速检测方法奠定了基础。