木耳属真菌rDNA特异性扩增片段的RFLP研究*

对木耳属8个种25个菌株的ITS和28SrDNA5’端两个区域分别进行了PCR扩增和限制酶切片段长度多态性（RFLP）研究。ITS－RFMP研究结果表明,HaeⅢ可将黑木耳与其它种区分开,MspⅠ可将盾形木耳、角质木耳、琥珀木耳和黑木耳4个种区分开,而供试的HaeⅢ、TaqⅠ、HinfⅠ和MaPⅠ这四种限制酶均不能将皱木耳、大木耳、网脉木耳及毛木耳4个种区分开,表明它们之间的亲缘关系较近;结果还表明,ITS—rDNA拷贝在毛木耳和琥珀木耳种内是异质性的,而在黑木耳种内是同质性的。285rDNA-RFLP研究结果表明,供试的4种限制酶中,仅MspⅠ可将盾形木耳和角质木耳区分开,而不能将其它种区分开,这显示了28SrDNA序列在木耳属不同种间的保守性。     

木耳属真菌rDNA特异性扩增片段的RFLP研究

对木耳属８个种２５个菌株的ＩＴＳ和２８Ｓ ｒＤＮＡ ５＇端两个区域分别进行了ＰＣＲ扩增和限制酶切片段长度多态性（ＲＦＬＰ）研究。ＩＴＳ－ＲＦＬＰ研究结果表明,ＨａｅⅢ可将黑木耳与其它种区分开,ＭｓｐⅠ可将盾形木耳、角质木耳、琥珀木耳和黑木耳４个种区分开,而供试的ＨａｅⅢ、ＴａｑⅠ、ＨｉｎｆⅠ和ＭａｐⅠ这四种限制酶均不能将皱木耳、大木耳、网脉木耳及毛木耳４个种区分开,表明它们之间的亲缘关系较近;结果     

侧耳属核rDNA转录间区扩增产物的限制性酶切分析

对侧耳属18个形态种52个菌株和蘑菇属、香茹属、亚侧耳属各1个菌株的核糖体DNA转录间区进行PCR特异性扩增后,用7种限制性内切酶进行酶切分析。结果表明,BamH I对所有的菌株均无酶切位点;Alu I,Hae III,Hinf I,Hha I,MspI可分别将52个菌株分为6,5,5,4,2,2组,且可将金顶侧耳与其它侧耳区分开。基于限制性酶切多态性构建的聚类图表明,在93%相似水平,可将所有的侧耳分为七组,第一组：糙皮侧耳、佛罗里达侧耳、美味侧耳、裂皮侧耳、黄白侧耳、哥伦比亚侧耳、灰白侧耳、白阿魏蘑、阿魏蘑及一些未定名的侧耳;第二组：刺芹侧耳;第三组：肺形侧耳和凤尾茹;第四组：具核侧耳;第五组：鲍鱼茹和囊盖侧耳;第六组：红平茹和桃红侧耳;第七组：金顶侧耳。聚类图结果进一步表明,金顶侧耳与其它侧耳的关系较双孢蘑菇和香茹与其它侧耳的关系要远。     

DNA分子标记在木耳属真菌中的应用研究进展

介绍了目前已在木耳属真菌中广泛应用的几种DNA分子标记技术(RFLP、RAPD、AFLP、ISSR、SRAP、SCAR、ITS、IGS),以及这些标记在木耳属真菌系统发育、分类研究、种间和种内鉴定、遗传多样性分析等方面的应用,并展望了这些标记技术在木耳属真菌中的应用前景。     

利用RAPD技术对木耳属菌株进行分类鉴定的研究

利用ＲＡＰＤ技术对木耳属不同种和种内不同菌株进行了分子鉴定。结果表明,在供试的２６个随机引物中,有１０个引物可扩增出清晰、稳定的ＤＮＡ带型,其中引物Ｓ４和Ｓ６与供试木耳属菌株的基因组ＤＮＡ结合位点少而保守,扩增图谱具有种的特异性,可用于种的快速准确鉴定;其综随机引物的扩增ＤＮＡ多态性较强,可用于种内不同菌株的鉴定;聚类分析表明,在７５％相似水平下,可将供试的木耳属菌株分成四大类,其中有三大类各代表     

海南岛木耳属的研究

子实体单生,鲜时坚韧的胶质,不透光,耳状,1-2×2.5-3.5cm,厚2-3.1mm,基部发达,呈黄褐色,不孕面有短柔毛和许多短的裂缝,栗褐色,干时棕黑色;子实层有粗条状隆起密集的结节,紫红色,干后紫黑色。柔毛层:毛长30-80(-100)μm,粗4-5.5μm,无色到褐黄色,不成簇,具狭窄的腔,顶园,易截断,基部明显膨大或再突然收缩成细而长的根状;致密层:20-50μm     

幽门螺杆菌的RFLP分型的研究

建立敏感度高、重复性好的基因分型方法,对探讨幽门螺杆菌（ＨＰ）感染的传染源、传播途径及复发原因具有重要意义。本文综合介绍了ＨＰ的限制性酶切片段长度多态性（ＲＦＬＰ）分型方法的类型、原理、优缺点及取得的主要进展。研究表明,ＨＰ感染的复发主要是由于同一菌株的复发,而不是新菌株的重新感染。     

食线虫真菌28S rDNA PCR扩增片段的RFLPs分析

本文对16个食线虫真菌（节丛孢属,隔指孢属和单顶孢属）菌株和3个其他相关丝孢菌（顶辐孢属和单端孢属）菌株的28S rDNA片段进行了扩增,并用限制性内切酶Sau3 A,I,Msp I,RsaIand HaeⅢ对PCR产物进行了消化,采用UPGMA法对PCR产物的限制性图谱特征进行了聚类分析。结果表明,捕食性真菌的聚类群与捕食器官类型相对应,顶辐孢属和单端孢属与捕食性真菌的遗传距离较远。该结果与rDNA的ITS区间,5．8S和18S的序列分析结果一致。     

侧耳属核rDNA转录间区扩增产物的限制性酶切分析

对侧耳属18个形态种52个菌株和蘑菇属、香菇属、亚侧耳属各1个菌株的核糖体DNA转录间区进行PCR特异性扩增后,用7种限制性内切酶进行酶切分析。结果表明,BamHⅠ对所有的菌株均无酶切位点;AluⅠ, Hae Ⅲ,HinfⅠ, TaqⅠ, HhaⅠ, MspⅠ可分别将52个菌株分为6, 5, 5, 4, 2, 2组,且可将金顶侧耳与其它侧耳区分开。基于限制性酶切多态性构建的聚类图表明,在93%相似水平,可将所有的侧耳分为七组,第一组:糙皮侧耳、佛罗里达侧耳、美味侧耳、裂皮侧耳、黄白侧耳、哥伦比亚侧耳、灰白侧耳、白阿魏蘑、阿魏蘑及一些未定名的侧耳;第二组:刺芹侧耳;第三组:肺形侧耳和凤尾菇;第四组:具核侧耳;第五组:鲍鱼菇和囊盖侧耳;第六组:红平菇和桃红侧耳;第七组:金顶侧耳。聚类图结果进一步表明,金顶侧耳与其它侧耳的关系较双孢蘑菇和香菇与其它侧耳的关系要远。     

节丛孢属rDNA ITS区RFLPs分析

利用PCR朢FLP方法对捕食线虫真菌节丛孢属进行了系统发育研究。以ITS1和ITS4为引物对该属10种12个菌株的核糖体DNA转录间区（ITS）进行了PCR扩增,4种内切酶（AluI、HaeIII、HpaII、TaqI）酶切。结果表明该属的ITS区长度没有明显差异,其长度范围在658～705之间,酶切图谱能体现不同种间的多态性,根据4种内切酶酶切结果,利用UPGMA法构建的节丛孢属分子系统树,基本体现了属内不同种间的亲缘关系,从分子水平证明了节丛孢属形态分类上的合理性,同时对该属属征的扩大提出疑议。     

PCR产物的RFLP分析在黄芪亚族（豆科）系统学研究中的应用初探

用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）将豆科黄芪亚族７属９种及甘草亚族１属１种植物叶绿体基因组中ｎｄｈＦ和ｐｓｂＡ基因中一段约３．１ｋｂ的ＤＮＡ扩增出来,并摸索出一最佳的ＰＣＲ条件,使得此条带得以特异性扩增,可直接用于限制性内切酶水解。通过对此扩增片段的限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）的初步分析,认为利用ＰＣＲ扩增出的ＤＮＡ进行ＲＦＬＰ分析来探讨植物的系统进化问题在中国现行条件下大有潜力,其方法简单易行,结果     

油菜内生细菌16S核糖体DNA的RFLP分析

植物内生细菌定殖在植物组织内部但不引起明显的病害症状。从健康油菜植株的不同器官中分离到大量内生细菌,这些细菌菌落形态存在明显的差异,表明油菜组织中存在大量内生细菌,且类群丰富。分离到的122株内生细菌根据菌落形态可以划分为35类;利用细菌通用引物对16S核糖体DNA进行扩增, 获得约15 kb片段,分别用内切酶HaeⅢ和MspⅠ对扩增产物进行限制性酶切,产生不同的酶切图谱,根据酶切图谱聚类分析结果,所有供试菌株被归为39类,这一结果从遗传上显示油菜内生细菌类群的多样性。两种方法归类结果比较发现菌落特征所反映的信息量有限,只能作为初步的参考指标,核糖体DNA的限制性片段长度多态性分析快速、准确,可以作为油菜内生细菌多样性分析的一种有效方法     

木耳属二新种*

本文报道了在西沙群岛采集的木耳属二新种,命名为西沙木耳和网脉木耳,并附汉文和拉丁文描述。此外,还讨论了新种与近似种之间的区别。     

小克银汉霉核糖体DNA PCR扩增产物的限制性片段长度多型性(英文)

应用一对寡核苷酸引物ITS1与ITS4对核DNAG＋C百分数小于30％的小克银汉霉（Cunninghamella）属的核糖体DNA（rDNA）内转录间区（YTS）进行了扩增。测试的属于10个种和变种的22株菌都得到了扩增产物。在同属不同种之间扩增的ITS片段长度有巨大差别。据此可分为三组。这三组所含分类群数及其DNA长度分别为;第一组4种1变种,小于764碱基对（bp）;第二组2种,765～824bp;第三组2种1变种,大于825bp。所研究的许多种中,特别是第三组,单凭其PCR产物的长度就能区分开来。但在第一、二组就需借助限制性内切酶的分析才能予以区分。我们选用了RsaI,TaqI;Tru9I,和HinfI4种限制性内切酶,对所有扩增产物进行了限制性片段长度多型性（RFLPs）的分析。在雅致小克银汉霉（Celegans）、巴西玉蕊小克银汉霉（Cbertholletiae）、和布拉氏霉（Cblakesleeana）各种的限制性酶切图谱,种内非常一致而种与种之间有差别。反之,在某些种其限制性酶切图谱不仅种间互不相同,在种内不同株之间也出现1～3种酶切图型的差异。在这种情况下,只能综合各种资料才能将它们区分开来。本研究肯定了PCR－RFLP在区分小克银汉霉种和变种上的意义,并发现种内个体的差异。这在我们后来所进行的序列分析研究中得到了进一步的证实。     

木耳属二新种

本文报道了在西沙群岛采集的木耳属二新种,命名为西沙木耳和网脉木耳,并附汉文和拉丁文描述。此外,还讨论了新种与近似种之间的区别。     

38株维氏气单胞菌分离株的AFLP基因分型研究

试验通过人工设计合成的通用接头以及与接头序列相匹配的专用引物, 对38株维氏气单胞菌分离株和1株维氏气单胞菌标准菌株进行AFLP基因分型研究。结果显示, 采用5对引物使39株维氏气单胞菌扩增出1080条可见条带, 片段长度在50-1000 bp之间, 其中多态性条带727条, 平均每对引物组合产生154条多态性条带, 平均多态性检出率为66.7%。按UPGMA方法对条带进行聚类分析, 建立聚类分支树状图, 将39株维氏气单胞菌分为9个基因型, 其中第四类群基因Ⅳ型包含了14株菌株, 约占总菌数的35.9%, 分布在5个不同的地区, 推测其可能是引起斑点叉尾 发病的主要流行性基因型。不同地区分离的维氏气单胞菌具有地域性差异, 而同一地区分离株既存在相同基因型现象, 也存在基因型多样性现象。       

糖单孢菌16S rDNA的PCR-RFLP分析

ＰＣＲ－ＲＦＬＰ分析适用于种和种间水平的多相分类研究。文章对ＰＣＲ－ＲＦＬＰ方法应用于糖单孢菌属分类有具体方法进行了探讨;报道了一组适于糖单孢菌属ＰＣＲ－ＰＦＬＰ分析的限制性内切酶,并用这组酶对６株糖单孢菌属分离株进行了研究,进一步探讨了实验菌株在该属的分类地位。同时指出了ＰＣＲ－ＲＦＬＰ方法应用中应注意的问题。