木耳属真菌rDNA特异性扩增片段的RFLP研究*

对木耳属8个种25个菌株的ITS和28SrDNA5’端两个区域分别进行了PCR扩增和限制酶切片段长度多态性（RFLP）研究。ITS－RFMP研究结果表明,HaeⅢ可将黑木耳与其它种区分开,MspⅠ可将盾形木耳、角质木耳、琥珀木耳和黑木耳4个种区分开,而供试的HaeⅢ、TaqⅠ、HinfⅠ和MaPⅠ这四种限制酶均不能将皱木耳、大木耳、网脉木耳及毛木耳4个种区分开,表明它们之间的亲缘关系较近;结果还表明,ITS—rDNA拷贝在毛木耳和琥珀木耳种内是异质性的,而在黑木耳种内是同质性的。285rDNA-RFLP研究结果表明,供试的4种限制酶中,仅MspⅠ可将盾形木耳和角质木耳区分开,而不能将其它种区分开,这显示了28SrDNA序列在木耳属不同种间的保守性。     

木耳属真菌rDNA特异性扩增片段的RFLP研究

对木耳属８个种２５个菌株的ＩＴＳ和２８Ｓ ｒＤＮＡ ５＇端两个区域分别进行了ＰＣＲ扩增和限制酶切片段长度多态性（ＲＦＬＰ）研究。ＩＴＳ－ＲＦＬＰ研究结果表明,ＨａｅⅢ可将黑木耳与其它种区分开,ＭｓｐⅠ可将盾形木耳、角质木耳、琥珀木耳和黑木耳４个种区分开,而供试的ＨａｅⅢ、ＴａｑⅠ、ＨｉｎｆⅠ和ＭａｐⅠ这四种限制酶均不能将皱木耳、大木耳、网脉木耳及毛木耳４个种区分开,表明它们之间的亲缘关系较近;结果     

利用RAPD标记构建木耳属种间关系的研究

摘 要: 利用RAPD标记以银耳属的2个种为外类群研究了木耳属8个种的分子系统发育关系。根据UPGMA 构建的树状图结果表明木耳属(Auricularia)和银耳属(Tremella)分别为单一的分类单元。木耳属的8个种被分成3个明显不同的组,第一组包括盾形木耳(A.peltata Lloyd)和角质木耳(A.cornea Spreng.),第二组包括所有供试的黑木耳(A.auricula Underw.),第三组包括皱木耳(A.delicata Henn.)、琥珀木耳(A.fuscosuccinea Farl.)、毛木耳(A.polytricha Sacc.)、大木耳(A.maxima Y. R. Guo)和网膜木耳(A.reticulata L. J. Li)五个形态种。种间发育关系表明角质木耳和毛木耳应是两个不同的种而非同种异名,子实体横切面中髓层的有无并不表明不同种间亲缘关系的远近。     

利用RAPD标记构建木耳属种间关系的研究

利用RAPD标记以银耳属的2个种为外类群研究了木耳属8个种的分子系统发育关系,根据UPGMA构建的树状图结果表明木耳属（Auricularia)和银耳属（Tremella)分别为单一的分类单元,木耳属的8个种被分成3个明显不同的组,第一组包括循形木耳（A.peltata Lloyd)和角质木耳（A.cornes Spreng.),第二组包括所有供试的黑木耳（A.auricula Underw.),第三组包括皱木耳（A.delicata Henn.)、琥珀木耳（A.fuscosuccinea Farl.)、毛木耳（A.polytricha Sacc.)、大木耳（A.maximaY.R.Guo)和网膜木耳（A.reticulataL.J.Li)五个形态种,种间发育关系表明角质木耳和毛木耳应是两个不同的种而非同种异名,子实体横切面中髓层的有无并不表明不同种间亲缘关系的远近。     

两种PCR方法对木耳属菌株的遗传多样性评价

应用ERIC和RAPD两种PCR方法对木耳属3种29个菌株进行遗传鉴别,其中ERIC方法是首次运用于食用菌的研究领域。在相似系数75％的水平上,ERIC和RAPD分别将供试菌株分为9组和6组。由ERIC所得的聚类图可将黑木耳和毛木耳两个种区分开,而RAPD则不能完全区分两个种,但两种方法得到了一个相似的结果,即琥珀木耳与黑木耳的亲缘关系极其相近。Southern杂交实验进一步证明了ERIC所得到的29个菌株的同源性关系。分析表明,RAPD方法主要在种的水平上进行鉴别,而ERIC则可以在菌株水平上进行鉴别,结果与菌株栽培性状更为一致。研究结果表明ERIC-PCR是一种比RAPD更快捷可靠的分子标记方法,可以替代RAPD应用于木耳属的遗传多样性及遗传分类的研究。     

侧耳属核rDNA转录间区扩增产物的限制性酶切分析

对侧耳属18个形态种52个菌株和蘑菇属、香菇属、亚侧耳属各1个菌株的核糖体DNA转录间区进行PCR特异性扩增后,用7种限制性内切酶进行酶切分析。结果表明,BamHⅠ对所有的菌株均无酶切位点;AluⅠ, Hae Ⅲ,HinfⅠ, TaqⅠ, HhaⅠ, MspⅠ可分别将52个菌株分为6, 5, 5, 4, 2, 2组,且可将金顶侧耳与其它侧耳区分开。基于限制性酶切多态性构建的聚类图表明,在93%相似水平,可将所有的侧耳分为七组,第一组:糙皮侧耳、佛罗里达侧耳、美味侧耳、裂皮侧耳、黄白侧耳、哥伦比亚侧耳、灰白侧耳、白阿魏蘑、阿魏蘑及一些未定名的侧耳;第二组:刺芹侧耳;第三组:肺形侧耳和凤尾菇;第四组:具核侧耳;第五组:鲍鱼菇和囊盖侧耳;第六组:红平菇和桃红侧耳;第七组:金顶侧耳。聚类图结果进一步表明,金顶侧耳与其它侧耳的关系较双孢蘑菇和香菇与其它侧耳的关系要远。     

草木樨属根瘤菌的16S rDNA-RFLP分析

采用16S rDNA-RFLP分析方法对草木樨属根瘤菌进行了遗传多样性及系统分类研究。结果表明,3种限制性内切酶(HaeⅢ、HinfⅠ、MspⅠ)对所有供试菌株的酶切图谱类型组合只有2种。类型I的代表菌株CC-NWSX0003-1与豌豆根瘤菌(R.leguminosarum)的模式菌株USDA2370的序列相似性达到99.8%,在分类地位上属于根瘤菌属(Rhizobium)分支;类型Ⅱ的代表菌株CCNWGS0006与草木樨中华根瘤菌(Sinorhizobium meliloti)的16S rDNA相似性为100%,属于中华根瘤菌属(Sinorhizobium)分支。     

川中丘陵地区大豆根瘤菌遗传多样性与系统发育关系

【目的】研究分离自川中丘陵地区大豆根瘤菌的遗传多样性和系统发育。【方法】采用16S rDNA PCR-RFLP和16S rRNA基因、glnII、共生基因(nodC)系统发育分析的方法进行研究。【结果】供试未知菌的16S rDNA用4种限制性内切酶(HaeⅢ、HinfⅠ、MspⅠ及TaqⅠ)酶切后获得5种16S遗传图谱类型。16S rDNA PCR-RFLP结果表明,所有供试菌株在83%水平分为慢生根瘤菌属(Bradyrhizobium)和中华根瘤菌属(Sinonrhizobium)两大类群,而75%的菌株为中华根瘤菌。6个代表菌株的16S rDNA、glnII和nodC三个位点基因的系统发育结果基本一致,4株与S.fredii USDA205T相似度最高;有2株分别与B.yuanmingense CCBAU10071T、B.diazoefficiens USDA110T相似度最高。4个Sinonrhizobium代表菌株16S rDNA、glnII序列相似度分别为98.3%-99.9%、98.2%-100%,但它们的nodC基因序列完全相同。【结论】川中丘陵地区大豆根瘤菌具有较丰富的遗传多样性,S.fredii为优势种。     

食线虫真菌28S rDNA PCR扩增片段的RFLPs分析

本文对16个食线虫真菌（节丛孢属,隔指孢属和单顶孢属）菌株和3个其他相关丝孢菌（顶辐孢属和单端孢属）菌株的28S rDNA片段进行了扩增,并用限制性内切酶Sau3 A,I,Msp I,RsaIand HaeⅢ对PCR产物进行了消化,采用UPGMA法对PCR产物的限制性图谱特征进行了聚类分析。结果表明,捕食性真菌的聚类群与捕食器官类型相对应,顶辐孢属和单端孢属与捕食性真菌的遗传距离较远。该结果与rDNA的ITS区间,5．8S和18S的序列分析结果一致。     

ARDRA对植物根瘤内共生放线菌Frankia多样性的研究

应用原核生物16SrDNA特异性引物rD1和fD1,通过ARDRA（amplified ribosomal DNA restriction analysis）法直接扩增自中国云南、东北地区赤杨属3种植物和沙棘属1种植物根瘤内FrankiaDNA,得到一长约1500bp的扩增产物,选用两种内切酶HaeⅢ、AfaⅠ联合对扩增产物进行酶切,得到稳定的酶切图谱,将所测48个感染赤杨的Frankia样本区分为3个不同的组,所测43个感染沙棘的Frankia样本区分为3个不同的组,显示根瘤内Frankia存在丰富的遗传多样性。     

ERIC技术在紫木耳亲缘关系鉴定上的应用研究

为了研究紫木耳与黑木耳和毛木耳之间的亲缘关系,利用ERIC分子标记、Southern杂交技术和形态学分类法,对紫木耳、黑木耳和毛木耳三者进行了详细的研究。在相似性系数为75%的水平上,由ERIC所得的聚类图将7个菌株分为2组,即黑木耳自成一组,毛木耳和紫木耳为一组,两者相似性系数为77%。Southern杂交实验证明毛木耳和紫木耳之间存在较高的同源性。子实体的形态学特征表明紫木耳与毛木耳的亲缘关系较之黑木耳更为密切,同时进一步说明ERIC分子标记是准确可信的。本研究探讨了紫木耳的分类地位,认为在基因组进化上,紫木耳与毛木耳的关系较之黑木耳更为密切。     

木耳和毛木耳的极性研究

从木耳(Auricularia auricula)和毛木耳(A.polytricha)的同一子实体弹射、分离30个单孢子并发育成单核菌丝体,各自分成3组,以10×10方式进行单核体两两配对。取两配对单核体交结处菌丝体块到新的平板上继续发育并插入无菌的盖玻片让其菌丝爬上。后利用双苯并咪唑(Hoechst 33258)染色,在萤光显微镜下逐块检查配对后菌丝体细胞中核的数目。如果出现双核,再加以检查锁状联合以验证,则为配对亲和。不亲和者仍为单核。根据配对行为进行不亲和因子分配决定其交配型。检测结果表明,木耳和毛木耳担孢子的性别是由一对遗传因子A.a所控制。属典型性二极性(bipolar)异宗结合。     

木耳和毛木耳的极性研究*

从木耳(Auricularia auricula)和毛木耳(A.polytricha)的同一子实体弹射、分离30个单孢子并发育成单核菌丝体,各自分成3组,以10×10方式进行单核体两两配对。取两配对单核体交结处菌丝体块到新的平板上继续发育并插入无菌的盖玻片让其菌丝爬上。后利用双苯并咪唑(Hoechst 33258)染色,在萤光显微镜下逐块检查配对后菌丝体细胞中核的数目。如果出现双核,再加以检查锁状联合以验证,则为配对亲和。不亲和者仍为单核。根据配对行为进行不亲和因子分配决定其交配型。检测结果表明,木耳和毛木耳担孢子的性别是由一对遗传因子A.a所控制。属典型性二极性(bipolar)异宗结合。     

Comparison of ITS RFLP patterns of Gracilaria (Rhodophyceae, Gracilariales) populations from Chile and New Zealand and an examination of interfertility of Chilean morphotypes

Restriction fragment length polymorphism (RFLP) patterns of the internal transcribed spacer (ITS) of the nuclear ribosomal cistron and crossability trials were used to characterize four morphotypes of Gracilaria from Lenga, Isla Santa María and Maullín, Chile, and two morphotypes from sites in New Zealand. PCR products from all Chilean morphotypes resulted in a major single band of ca. 1198 bp. ITS-RFLP profiles generated with the restriction enzymes Cla I, Hae III, Pst I, Hha I, Rsa I and Taq I, were identical in all cases. All crosses within, as well as between, morphotypes resulted in cystocarp differentiation, with the production of viable carpospores. Based upon these data, it is concluded that the four morphotypes from Chile correspond to a single species, G. chilensis, and that the ITS-RFLP pattern is a useful marker to predict genetic relatedness at the specific level in Gracilaria. A comparison of the ITS-RFLP patterns of the Chilean morphotypes with the patterns of two samples of G. chilensis from New Zealand revealed that the sample from Scorching Bay, Wellington, fits the Chilean ITS-RFLP patterns. The population from Blockhouse Bay, Auckland, appears to correspond to another species. This revised version was published online in July 2006 with corrections to the Cover Date.     

木耳属种间杂交技术研究 Ⅰ.木耳菌丝原生质体的形成与再生

本文比较了不同酶液、渗透压稳定剂、酶解温室及菌丝培养基成份等因素对木耳属(Auricularia)中木耳(Auricularia auricula)和毛木耳(Auricularia polytricha)菌丝释放原生质体的作用及影响。用0.5%纤维素酶加0.5%蜗牛酶的混合酶液,以0.6M的MgSO_4为稳定剂,在34℃下可自两种菌丝体获得大量原生质体。对原生质体再生条件的研究表明,纤维二糖和菌丝体培养物浸提物对再生有明显促进作用,再生率达20%左右。本文还用VBL型荧光增白剂观察了菌丝脱壁以及原生质体细胞壁再生的过程。     

Identification of Saccharomyces sensu stricto and Torulaspora yeasts by PCR ribotyping

18S rDNA + ITS1 and 25S rDNA PCR products covering more than 95% of the nuclear ribosomal DNA repeat unit of 28 Saccharomyces sensu stricto and Torulaspora yeasts and their anamorph forms were digested with Hae III, Msp I, Hinf I and Cfo I. Using combinations of two restriction enzymes, specific ribotyping patterns of six species were found. PCR ribotyping offers a convenient tool for quick identification of yeast isolates, but specificity of ribotyping patterns should be checked with a larger number of strains to avoid misidentification because of lack of variation within different taxa or because of strain-specific ribotyping patterns of species type strains.     

食线虫真菌28S rDNA PCR扩增片段的RFLPs分析

本文对16个食线虫真菌(节丛孢属、隔指孢属和单顶孢属)菌株和3个其他相关丝孢菌(顶辐孢属和单端孢属)菌株的28S rDNA 片段进行了扩增, 并用限制性内切酶Sau3A I, Msp I, Rsa I and Hae III对PCR产物进行了消化。采用UPGMA法对 PCR 产物的限制性图谱特征进行了聚类分析。结果表明,捕食性真菌的聚类群与捕食器官类型相对应,顶辐孢属和单端孢属与捕食性真菌的遗传距离较远。该结果与rDNA 的ITS区间、5.8S和18S的序列分析结果一致。