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本研究通过反转录从丙肝病人血清中克隆了丙型肝炎病毒(HCV)C33c基因,通过DNA合成法又分别合成了编码HCV核心抗原基因,NS4抗原及NS5抗原部分抗原决定簇的基因,利用基因工程手段,在大肠杆菌中表达了含有上述四种抗原的融合蛋白。该融合蛋白具有良好的抗原性和特异性,以该融合蛋白为抗原制备的抗-HCVELIS试剂检测了中国药品生物制品检定所198份标准血清时,其阳性,阴性符合分别达97%和98% 相似文献
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丙型肝炎病毒 (HCV)是引起非甲非乙型肝炎的主要病原因子。被HCV感染的病例中 ,超过 5 0 %以上会引起持续性感染、慢性肝炎 ,最终可能引起肝硬化和肝细胞癌[1] 。HCV严重威胁人类健康 ,但目前对丙肝患者尚缺乏有效的治疗手段 ,因此 ,严格把好血源关 ,提高对丙肝患者检出的灵敏度 ,是阻止丙肝血源传播的有效手段。丙型肝炎病毒基因组为单股正链RNA ,核苷酸长约 9.5kb ,仅含一个开放阅读框 ,翻译成一个大的聚蛋白前体 ,由宿主细胞信号肽酶和病毒蛋白酶加工成多个成熟蛋白。其中非结构蛋白NS3分子量为 70kD ,有丝氨酸蛋白酶… 相似文献
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HCV NS5A基因表达及其在血清学检测中的应用评估 总被引:4,自引:2,他引:4
Full-length NS5A gene of the hepatitis C virus was amplified by PCR using plasmid pBAC25 containing HCV nonstructural gene as template. The amplified fragment (about 1.34 kb) was cloned into plasmid pQE32, and the recombinant plasmid pQENS5A was expressed in JM109 strain. The NS5A protein was purified by NiSO4 metal chelating resin, and characterized by Western-blot. Its antigenecity was determined by ELISA. The positive detection rate of anti-NS5A was 75% (69/92) in ninety-two clinic sera. The positive rate of anti-NS5A was 82.5% (33/40) in fourty positive standand sera, and the negative rate of anti-NS5A was 100% (40/40) in fourty negative standand sera. The results showed that the Full-length NS5A proteinn had the higher sensitivity and specificity in the detection of HCV antibody in sera, we suggested that NS5A protein was a useful antigen for blood screening. 相似文献
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本文对宜昌市的2999名献血员,594名自然人群的血清进行了抗-HCV、HCVRNA检测,结果表明,献血员中抗-HCV阳性23例,阳性率为0.77%。其中宜昌、巴东分别为0.73%和0.76%,沙市为0.83%。地区、性别、城乡之间抗-HCV阳性率无显著性差异(p>0.05)。参照以往文献报导,此阳性率比国内报导的低,与国际的相一致。594名自然人群抗-HCV结果均为阴性,献血员与自然人群之间抗-HCV阳性率差异显著(p<0.05)。20例抗-HCV阳性者中检出HCV RNA阳性6例,占30%(6/20),占受检献血员的0.20%(6/2999),比武汉(0.80%)低4倍,地区之间无显著差异(p>0.05)。由此初步确认:宜昌市献血员中丙型病毒性肝炎感染低于国内某些大中城市、宜昌市(含七县二市)巴东县、沙市市是丙型病毒性肝炎低感染区。但存在无症状病毒血症携带者传染源。 相似文献
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人丙型肝炎病毒 (HCV)感染可引起丙型肝炎、肝硬化和肝细胞癌[1] 。丙型肝炎病毒是单股正链RNA病毒 ,基因组约长 9.5kb ,仅有一个开放阅读框 ,编码一个大的聚蛋白前体 ,由宿主蛋白酶和病毒编码的蛋白酶加工成多个成熟蛋白。非结构蛋白NS5A分子量为 56kD/ 58kD。目前对NS5A蛋白的功能尚不清楚 ,NS5A蛋白可降低干扰素治疗效果[2 ] ;NS5A蛋白含核定位序列 ,因此人们推测它在HCVRNA复制过程中可能起一定的作用[3~ 4 ] 。本研究在大肠杆菌中表达全长NS5A蛋白 ,提纯后NS5A蛋白能与大多数丙肝阳性血清起强烈… 相似文献
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抗HBV与HCV免疫乳的实验免疫研究 总被引:2,自引:0,他引:2
确定重组HBV表面抗原和HCV核心抗原对奶牛的最适免疫剂量、免疫次数及间隔时间,观察牛奶中抗HBV与抗HCV的效价与消长规律。表达HBV表面抗原和HCV核心抗原的重组菌经IPTG诱导后,目的蛋白以包涵体形式存在。放大发酵工艺,菌体发酵密度达40g/L,目的蛋白表达量为26%~30%。将包涵体变性、复性后,测定蛋白含量,并用SDS-PAGE鉴定。采用不同的剂量和不同的抗原处理方法免疫奶山羊和奶牛,检测HBV抗体、HCV抗体、干扰素与白介素等细胞因子。免疫奶山羊羊奶中的HBV抗体效价最高为1:80,HCV抗体效价最高为1:20;6个月后,HBV抗体效价无明显下降,HCV抗体效价下降明显。对奶牛5个批次的免疫结果显示,免疫次数应多于3次,免疫剂量以每头牛300μg为宜,间隔时间以1个月为宜。免疫牛奶中HBV抗体的阳性率约为66.0%,抗体效价最高为1:160;HCV抗体阳性率约为17.0%,维持时间较短;孕牛比旺奶牛产生抗体的效价高。免疫牛奶中检测到了干扰素和白介素等细胞免疫活性因子。 相似文献
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王理富 《微生物学免疫学进展》1997,25(4):60-63
概述了检测组织中HCV核酸与蛋白的各种方法以及HCV在肝脏定位分布的特点,并总结了检测组织中的HCV在丙型肝炎病变、肝细胞肝癌、HCV抗病毒治疗效果和HCV致病机理等方面研究的应用。 相似文献
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双峰驼IgG亚型包含IgG1、IgG2和IgG3,其中IgG2和IgG3为重链抗体,在结构上与IgG1存在显著差异。为获取双峰驼血清中的IgG1、IgG2和IgG3,并分析其抗原特异性和抗体特异性,本文交替使用Protein A和Protein G亲和层析柱,对其分离纯化,并通过聚丙烯酰胺凝胶电泳进行鉴定;之后分别制备兔抗双峰驼IgG1、IgG2和IgG3的多克隆抗体,通过ELISA对制备的多克隆抗体的效价进行测定;最后应用Western blot评估这三个亚型多克隆抗体的特异性,进而对双峰驼血清中IgG1、IgG2和IgG3的抗原特异性进行分析。结果表明,应用Protein A和Protein G亲和层析柱成功分离纯化出双峰驼血清中的IgG1、IgG2和IgG3;并制备兔抗双峰驼IgG1、IgG2和IgG3的多克隆抗体效价均在1∶10000以上,并且所获得的多克隆抗体分别与IgG1、IgG2和IgG3之间均存在交叉反应,但兔抗双峰驼IgG1多克隆抗体较其它两个亚型多克隆抗体特异性低。结果证明,双峰驼IgG1、IgG2和IgG3均具有良好的免疫原性,三者结构虽存在显著差异,但其抗原特性类似。 相似文献
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为获得可溶性高纯度HIV-1中国株CN54PolP51抗原,将携带CN54polp51基因的重组质粒pTHioHisA51转化大肠杆菌BL21codonplus-RIL,用IPTG进行诱导表达。用Chelating SepharoseFF-Ni亲和层析柱及DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析柱纯化目的蛋白,采用透析复性法得到可溶性抗原,Western blotting检测目的蛋白。用纯化的P51抗原蛋白标记辣根过氧化物酶及包被酶标板进行双抗原夹心法ELISA检测。结果显示P51以包涵体的形式表达,表达量占菌体总蛋白的50%,经两步层析和透析复性,目的蛋白纯度大于95%。Western blotting和双抗原夹心法ELISA检测均显示了良好的灵敏度和特异性。本研究可以为HIV-1疫苗研究和开发检测试剂提供支持。 相似文献
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Charles R. Harrington Denise M. O'Hara Peter E. Reynolds 《FEMS microbiology letters》1989,65(1-2):143-147
The additional penicillin-binding protein (PBP) 2' that is important in determining intrinsic resistance in methicillin-resistant strains of Staphylococcus aureus (MRSA) has been purified by affinity chromatography using monoclonal antibodies. Monoclonal antibody 1/423.10.351 reacted in ELISA with detergent extracts of membranes from resistant organisms, but not in immunoblots with PBP 2' separated by SDS-PAGE. Immunoprecipitation experiments showed that antibody 1/423.10.351 reacted with PBP 2' in detergent extracts. The latter antibody, covalently coupled to protein A-Sepharose through the Fc region, served as an affinity matrix to purify PBP 2'. The PBP was detected in immunoblots using a second monoclonal antibody, 2/401.43. Conjugation of this antibody with alkaline phosphatase afforded more rapid detection of PBP 2' for the immunological detection of PBP 2' both in affinity-purified fractions and in resistant strains. 相似文献
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周丛藻类及其在水质净化中的应用 总被引:3,自引:0,他引:3
周丛藻类广泛存在于自然界水体中,具有生物量大、生态功能强、水质响应灵敏等特征.周丛藻类通过吸收代谢利用、吸附和络合等过程去除水体污染物质,用于水质净化,具有耐污能力强,N、P去除效果好,藻类细胞回收利用价值高等优点,推广应用前景广阔.近年开发的藻丛刷系统、周丛藻类 生物膜系统和周丛藻类水产养殖系统等已经成功用于畜禽水产养殖废水、生活污水处理.而周丛藻类的生存规律、对污染物浓度的生理响应机理和污染物质吸收利用的分子生物学机制仍有待进一步研究. 相似文献
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为了研制百日咳抗体酶联检测试剂盒以调查吉林省2~8岁儿童百日咳、白喉及破伤风抗体水平。采用百日咳菌液经硫酸铵盐析、PBS溶液浸提及蔗糖密度梯度离心提取的PT和FHA作为包被抗原,辣根过氧化物酶(HRP)标记羊抗人IgG,作为抗体制备ELISA试剂盒。并经敏感性、特异性、重复性试验考查该试剂盒质量。结果显示,试剂盒敏感性可达0.0036 IU/m l;重复性较好,CV<4%。试剂盒置于37℃3d敏感性无明显变化。吉林省2~8岁儿童白喉、破伤风的抗体水平较高,百日咳的抗体水平相对较低。此方法制备的百日咳抗体酶联检测试剂盒的质量符合要求,可应用于临床检验与流行病学监测。 相似文献
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经高速离心从正常人乳中获得人乳汁颗粒膜(HMFGM),产量约0.4g/L。经进一步破碎、脱脂及sepharose CL-4B柱纯化,获得含MUC1粘蛋白的组分,并经SDS—PAGE、Western—blot及ELISA鉴定后,免疫家兔制备多抗。结果表明,进一步凝胶过滤获得MUC1粘蛋白,行SDS—PAGE后经希夫试剂和考马斯亮蓝染色呈单一条带,表观相对分子质量大干205000。Western—blot及ELISA结果表明可与MUC1特异性抗体结合。制备获得的多抗经ELISA测定效价为1:64000~1:128000。表明建立了MUC1粘蛋白的纯化方法,获得的MUC1粘蛋白及其抗体可进一步用于MUC1检测及其功能的研究。 相似文献
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制备一种精确的破伤风抗体定量试剂,用于人源破伤风抗体的定量及人群破伤风抗体水平的测定。以人源破伤风免疫球蛋白国家标准品建立定量反应曲线,经系统优化后建立双抗原夹心法定量检测系统。定量反应曲线显示,抗体浓度在10~120m IU/m l之间,相关系数r=0.9993。精密度(CV)≤7%。实际应用验证,未经(TTC)免疫的献血员中,具有保护性抗体水平(0.01 IU/m l)的比例只占12.2%。经3针(TTC)免疫后,抗体水平均大于0.01 IU/m l,经动物体内中和试验法(NT)定量的3批破伤风免疫球蛋白,用制备的酶联免疫破伤风抗体定量试剂测定,其回收率分别为109%、98%和93%。结论,该试剂可用于破伤风抗体的精确定量。 相似文献
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Development and application of thermo-sensitive immunomicrospheres for antibody purification 总被引:1,自引:0,他引:1
The latex particles composed of poly(styrene/N-isopropylacrylamide/glycidyl methacrylate) [P(St/NIPAM/GMA)] and poly(styrene/N-isopropylacrylamide/methacrylic acid) [P(St/NIPAM/MAA)] were prepared by emulsifier-free emulsion polymerization. These latex particles with submicrometer size showed the thermosensitivity originated from the thermo-sensitive nature of NIPAM. That is, the minimum NaCI concentration for flocculation of these latex particles [critical flocculation concentration (CFC)] decreased significantly with increasing temperature and reached constant values at above the critical temperature [critical flocculation temperature (CFT)]. At a certain NaCl concentration, the thermo-sensitive latex particles were flocculated by raising temperature, and conversely, the flocculated thermo-sensitive latex particles were completely dispersed by lowering temperature. Bovine serum albumin (BSA) was covalently immobilized onto the P(St/NIPAM/GMA) and P(St/NIPAM/MMA) latex particles with high efficiency. The BSA-immobilized P(St/NIPAM/GMA) and P(St/NIPAM/MAA) latex particles (immunomicrospheres) showed the similar dependencies of CFC on temperature to the bare latex particles. These thermo-sensitive immunomicrospheres were successfully used for the immunoaffinity purification of anti-BSA antibodies from antiserum. (c) 1994 John Wiley & Sons, Inc. 相似文献