P13 K、p-AKT及HIF-1α在胰腺癌中的表达及意义

目的 检测P13K、p-AKT及HIF-1α三种蛋白在胰腺癌组织中的表达并探讨其与临床病理因素的关系及三者之间的相关性.方法 采用免疫组织化学SP法检测43例胰腺癌组织、9例胰腺炎组织和8例正常胰腺组织中P13K、p-AKT及HIF.1a三种蛋白的表达.结果 P13K、p-AKT的阳性表达主要位于肿瘤细胞胞浆,HIF-1α的阳性表达主要位于细胞核或细胞浆.P13K、p-AKT及HIF-1α在胰腺癌组织中的阳性表达率分别为62.79%、67.44%和69.77%,三者均显著高于在正常胰腺组织和慢性胰腺炎组织中的表达,差异有统计学意义(P<0.01).P13K、p-AKT及HIF-1α的异常表达均与胰腺癌的淋巴结转移和TNM分期有关(P<0.05),与患者的性别、年龄、部位、分化程度和病理分型无关(P>0.05).P13K、p-AKT及HIF-1α三者间的表达呈正相关.结论 P13K、p-AKT及HIF-1α的表达在胰腺癌的生长、浸润转移中起重要作用,P13K-AKT信号通路激活可能促进HIF-1α的表达.     

siRNA沉默HIF-1α对胎肝基质细胞SDF-1α表达的影响

为了研究低氧诱导因子(hypoxia inducible factor-1alpha,HIF-1α)在干细胞增殖分化过程中的作用机制,构建了2个HIF-1α慢病毒siRNA干涉载体,并转染人胎儿肝脏基质细胞(fetal liver stromal cell,FLSC).根据绿色荧光蛋白的表达评估转染效率后进行流式细胞分选,获得高表达慢病毒干涉载体的细胞.实时荧光定量PCR和蛋白质印迹检测了转染细胞中HIF-1α基因的干涉效率,结果显示,与对照组相比,常氧下培养的细胞HIF-1α基因表达量仅为其相对表达量的18.8%和25.5%,干涉效率分别为81.2%和74.5%,低氧处理后的细胞HIF-1α相对表达量分别为对照组的21.2%和29.3%,干涉效率分别为78.8%和70.7%,均具有显著差异.蛋白质印迹结果显示,在蛋白质水平表达也明显受抑制,且重组干涉质粒pSicoR-HIF-1α1的干涉效应较强.RT-PCR、免疫荧光和ELISA法检测了沉默HIF-1α后胎肝基质细胞衍生因子1α(SDF-1α)在RNA和蛋白质水平的表达变化,干涉后细胞SDF-1α的表达明显减低.低氧条件下SDF-1α基因的调控作用有可能是通过低氧激活HIF-1α而诱导产生的,HIF-1α在干细胞增殖分化的分子调控机制中具重要作用.     

K-ras基因突变及表达与胰腺癌的关系

目的:探讨K-ras基因突变及蛋白表达对胰腺癌的诊断价值。方法:采用突变等位基因特异性扩增(PCR-MASA)检测31例胰腺癌和22例非胰腺癌石蜡包埋组织中K-ras基因12密码子点突变情况,并通过免疫组化法检测其K-ras蛋白的表达。结果:胰腺癌患者K-ras基因12密码子点突变率为80.6%(25/31),K-ras蛋白表达阳性率为87.1%(27/31);而非胰腺癌患者K-ras基因12密码子点突变率为27.3%(6/22),K-ras蛋白表达阳性率31.8%(7/22)。胰腺癌患者K-ras基因突变率及K-ras蛋白表达阳性率均明显高于非胰腺癌患者(P均0.05)。K-ras基因突变与其蛋白表达呈正相关(r=0.542,P0.05),而与胰腺癌患者的性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小、临床分期及分化程度等临床病理特征均无显著相关性(P均0.05)。结论:胰腺癌K-ras基因突变的发生率升高,且K-ras蛋白表达异常上调,二者可能有助于胰腺癌的诊断。     

孕酮对缺氧缺血新生鼠脑皮质HIF-1α表达的影响

目的:探讨孕酮(PROG)对缺氧缺血性新生鼠脑组织中低氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响。方法:7日龄SD大鼠80只随机分成4组(n=10):正常对照组,假手术组,缺氧缺血组和孕酮组,动物造模成功24 h后处死动物,应用RT-PCR和免疫组织化学方法观察各组新生鼠大脑皮质中HIF-1α表达的变化。结果:孕酮组HIF-1αmRNA及HIF-1α蛋白表达均明显高于其他三组(P<0.01)。结论:孕酮对新生鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用可能与其上调HIF-1α的表达有关。     

P-gp、MRP1、GST-π与新疆维吾尔族宫颈癌新辅助化疗疗效的 相关性研究

目的:探讨新疆维吾尔族宫颈癌新辅助化疗前后P-gp、MRPI和GST-π的表达及其与化疗疗效的关系。方法:运用S-P法分别检测维吾尔族妇女宫颈鳞癌组织22例新辅助化疗前后及正常宫颈组织20例P-gP、MRPI和GST-π的表达水平。结果:①新疆维吾尔族正常宫颈、初治宫颈癌组织中P-gp的阳性表达率分别为10%、40.9%;MRP1的阳性表达率分别为15%、31.8%;GST-π的阳性表达率分别为45%、9.01%。P-gp和GST-π在各组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)MRP1差异无统计学意义(P>0.05)。②NACT后宫颈癌组织中P-pg阳性表达显著上升(P<0.05),有统计学意义。NACT后宫颈癌组织中MRP1、GST-π阳性表达上升但差异无统计学意义(P>0.05)。③新疆维吾尔族妇女新辅助化疗前宫颈鳞癌组织中P-gp、MRP1及GST-π表达阴性和阳性患者NACT有效率无显著性差异(P>0.05)。结论:P-pg、MRP1、GST-π无法作为化疗敏感性指标预测维吾尔族宫颈鳞癌新辅助化疗疗效。     

大黄鱼HIF-1α基因的克隆鉴定与表达分析

为研究低氧诱导因子1α(Hypoxia-inducible factor-1α, HIF-1α)在鱼类免疫应答中的作用,研究克隆得到了大黄鱼(Larimichthys crocea)HIF-1α基因(LcHIF-1α)的cDNA序列,其开放阅读框全长2256个核苷酸,编码一个751个氨基酸的蛋白。通过氨基酸序列比对发现, LcHIF-1α蛋白具有5个典型的功能结构域,包括1个helix-loophelix(HLH)结构域, 2个PAS结构域, 1个DNA结合结构域(HIF-1)和1个羧基端反式激活结构域(HIF-1a_CTAD)。系统进化分析显示, LcHIF-1α和其他硬骨鱼类HIF-1α聚成一支,与两栖类、鸟类和哺乳类HIF-1α的亲缘关系相对较远。序列分析结果表明, LcHIF-1α具有保守的特征结构域,预示着其功能可能与哺乳动物HIF-1α类似。荧光定量PCR结果显示, LcHIF-1α在所检测的健康大黄鱼各个组织中都有表达,在溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)感染后,大黄鱼脾脏和头肾组织中的LcHIF-1α表达水平显著上调,达到峰值时分别...     

HIF-1α和eNOS基因多态性与个体低氧训练效果的关联性研究

目的：拟从基因多态性角度探索人类个体低氧训练效果差异性的分子生物学机制。方法：选取41名健康受试者在模拟海拔2500m高度进行4周“高住-高练-低训”（低氧暴露10h／d,3次70％VO2max低氧训练／周,共4周）,观察低氧诱导因子-1α基因（HIF-1α）C1772T多态性、内皮型一氧化氮合酶基因（eNOS）第4内含子27bp（4b／a）可变数目重复性多态性（VNTR）与低氧训练期间最大摄氧量（VO2max）、血红蛋白（Hb）、红细胞数（RBC）及血氧饱和度（SpaO2）等生理指标变化的关联性。结果：携带CT基因型和CT＋ba复合基因型的受试者,4周低氧训练后△VO2max显著增加（P〈0．05）,CT基因型受试者低氧训练前、后△RBC,△Hb无显著性差异,但较其它基因型相比,表现出升高趋势;CT基因型与ba基因型受试者在低氧定量负荷实验中,SpaO2表现出高于其它基因型的趋势,但无显著性差异。结论：HIF-1α基因C1772T多态性及eNOS基因4b／a多态性可能与低氧训练效果及低氧环境下适应能力的个体差异性有关,CT基因型及CF5ba复合基因在低氧适应能力上具有一定的优势。     

低氧及低氧预处理时心肌细胞HIF-1α与凋亡相关蛋白表达的变化

目的:观察低氧时心肌细胞HIF-1α表达变化与凋亡相关蛋白表达关系.方法:采用体外心肌细胞培养的方法,将原代培养4～6 d的大鼠乳鼠心肌细胞随机分为对照组、低氧组与低氧预处理组.低氧预处理组在低氧培养箱中通入1%O2、5%CO2、94%N2的低氧混合气体,每天低氧12 h,低氧5 d,第6 d与急性低氧组一同放入0%O2、5%CO2、95%N2的低氧培养箱中进行低氧暴露.低氧48 h后,通过Western blot方法分别检测心肌细胞中HIF-1α、Bcl-2、P53及Bax的表达变化.结果:常氧时细胞不表达HIF-1α,低氧可增加HIF-1的表达,低氧预处理后,能降低HIF-1α的表达.低氧时,Bax的表达变化大致与此相同.p53在低氧时的变化也与其相同,但低氧预处理后似乎没有明显的改变.Bcl-2在低氧时表达下降,低氧预处理后可增加其表达.结论:HIF-1α的表达可协同Bcl-2家族凋亡相关蛋白的表达,在低氧导致的心肌细胞凋亡中发挥重要作用.     

NF-κB和HIF-1在宫颈上皮内瘤变和鳞癌中表达的意义

目的:初步探索NF-κB和HIF-1在宫颈上皮内瘤变和宫颈鳞癌中的表达及临床病理学意义.方法:以宫颈上皮内瘤变和宫颈鳞癌病例为研究对象,应用免疫组织化学方法检测NF-κB和HIF-1的表达情况并分析其表达在宫颈癌变中的意义.结果:NF-κB在正常宫颈上皮、CIN I、CINII、CINIII、鳞癌的阳性表达率分别为16%,36%,44%,68%,72%.总体比较存在显著性差异x2=21.636,p＜0.01.组间两两比较显示正常上皮与CINⅢ和鳞癌有显著性差异.HIF-1а在正常宫颈上皮、CIN Ⅰ、CIN Ⅱ、CINⅢ、鳞癌的阳性表达率分别为12%,20%,40%,68%,76%.总体比较存在显著性差异X2=32.733,p＜0.01.组间两两比较显示正常上皮与CINⅢ(x2=16.333 p＜0.001)和鳞癌(x2=20.779 p＜0.001)有显著性差异.结论:NF.K B和HIF-l与宫颈鳞癌的发生有关,可能作为早期诊断的标志物.     

缺氧诱导因子1α、血管内皮生长因子和成纤维细胞生长因子在胰腺癌中的表达及意义

目的：研究胰腺癌组织中缺氧诱导因子1alpha（Hypoxia-inducible factor-1alpha,HIF-1α）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）和成纤维细胞生长因子（fibroblast growth factor,FGF）的表达并探讨其意义。方法：Western blot法检测22例胰腺癌及癌旁组织中HIF-1α、VEGF和FGF蛋白的表达,分析HIF-1α与VEGF、FGF之间的相关性以及与性别、年龄、肿瘤大小、淋巴结转移和TNM分期之间的关系。结果：HIF-1α、VEGF和FGF在胰腺癌组织中的蛋白表达水平明显高于胰腺癌周组织（P〈0.01）,HIF-1α与VEGF、FGF之间的表达具有显著相关性（P〈0.01）。HIF-1α的表达与胰腺癌的TNM分期、肿瘤大小和淋巴结转移有关（P〈0.01）,VEGF和FGF的表达与胰腺癌的肿瘤大小和淋巴结转移有关（P〈0.05）。结论：HIF-1α可以上调VEGF和FGF的表达,在胰腺癌的发生、发展中起着重要作用。     

NF-κ B和HIF-1在宫颈上皮内瘤变和鳞癌中表达的意义

目的：初步探索NF-κB和HIF-1在宫颈上皮内瘤变和宫颈鳞癌中的表达及临床病理学意义。方法：以宫颈上皮内瘤变和宫颈鳞癌病例为研究对象,应用免疫组织化学方法检测NF-κB和HIF-1的表达情况并分析其表达在宫颈癌变中的意义。结果：NF-κB在正常宫颈上皮、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、鳞癌的阳性表达率分别为16%,36%,44%,68%,72%。总体比较存在显著性差异x2=21.636,p〈0.01。组间两两比较显示正常上皮与CINⅢ和鳞癌有显著性差异。HIF-1α在正常宫颈上皮、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、鳞癌的阳性表达率分别为12%,20%,40%,68%,76%。总体比较存在显著性差异x2=32.733,p〈0.01。组间两两比较显示正常上皮与CINⅢ（x2=16.333 p〈0.001）和鳞癌（x2=20.779 p〈0.001）有显著性差异。结论：NF-κB和HIF-1与宫颈鳞癌的发生有关,可能作为早期诊断的标志物。     

新疆维、汉P-gp、MRP1、GST-π与宫颈癌新辅助化疗疗效的相关性研究

目的：探讨新疆维吾尔族及汉族宫颈癌新辅助化疗前后P-gp、MRPI和GST-∏的表达及其与化疗疗效的关系。方法：运用S-P法检测分别检测维吾尔族妇女宫颈鳞癌组织22例和非宫颈鳞癌组织20例,汉族妇女宫颈鳞癌组织30例和非宫颈鳞癌组织30例,新辅助化疗前后P-gP、MRPI和GST-π的表达水平。结果：①新疆维吾尔族正常宫颈、初治宫颈癌组织中P-gp的阳性表达率分别为10%、72.7%;MRP1的阳性表达率分别为20%、40.9%;GST-π的阳性表达率分别为45%、90.9%。P-gp、和MRP1在各组间比较差异均有统计学意义（P〈0.05）,GST-π差异无统计学意义（P〉0.05）。②新疆汉族正常宫颈、初治宫颈癌组织中P-gp的阳性表达率分别为10%、56.7%;GST-π的阳性表达率分别为20%、60%,MRP1的阳性表达率分别为40%、86.7%。P-gp、GST-π和MRP1在各组间比较差异均有统计学意义（P〈0.05）。③在新疆维吾尔族妇女宫颈鳞癌组织中：NACT后宫颈癌组织中GST-π阳性表达显著上升（P〈0.05）,有统计学意义。NACT后宫颈癌组织中P-pg、MRP1阳性表达差异无统计学意义（P〉0.05）。④在新疆汉族妇女宫颈鳞癌组织中：NACT后宫颈癌组织中P-pg、GST-π阳性表达显著上升（P〈0.05）;有统计学意义。NACT后宫颈癌组织中MRP1阳性表达上升但差异无统计学意义（P〉0.05）。⑤新疆维吾尔族妇女化疗前宫颈鳞癌组织中MRP1及GST-π表达阴性和阳性患者NACT有效率无显著性差异（p〉0.05）,P-gp表达阴性患者NACT有效率显著高于P-gp表达阳性患者NACT有效率（p〈0.05）;⑥汉族化疗前宫颈鳞癌组织中P-gp、GST-π表达阴性患者NACT有效率显著高于P-gp、GST-π表达阳性患者NACT有效率（p〈0.05）;化疗前宫颈鳞癌MRP1表达阴性和阳性患者NACT有效率无显著性差异（p〉0.05）。结论：P-pg和GST-π可作为预测汉族宫颈鳞癌化疗敏感性指标。P-pg可作为预测维吾尔族宫颈鳞癌化疗敏感性指标。     

斑蝥素酸镁对人肝癌细胞SMMC-7721裸鼠皮下移植瘤凋亡的影响

建立人肝癌细胞SMMC-7721裸鼠皮下移植瘤模型,实验组每只裸鼠瘤周注射斑蝥素酸镁6.26×10-5mmol,对照组给予相同容积的无菌生理盐水瘤周注射。给药22 d后,观察斑蝥素酸镁对皮下移植瘤增殖的影响,并在此基础上,利用HE染色观察药物对人肝癌裸鼠皮下移植瘤组织形态学特征的影响。实验发现斑蝥素酸镁组移植瘤细胞体积变小、胞浆固缩、嗜酸性变,细胞核固缩、碎裂。透射电镜观察人肝癌裸鼠皮下移植瘤组织超微结构的改变,镜下见斑蝥素酸镁组移植瘤细胞核膜基本消失、核染色质聚集成团等改变。免疫组化二步法检测人肝癌裸鼠皮下移植瘤组织中bcl-2、bax的表达水平,结果显示斑蝥素酸镁组瘤组织中bcl-2的表达低于生理盐水组,而bax的表达高于生理盐水组(P0.05)。本实验提示斑蝥素酸镁能明显抑制人肝癌裸鼠皮下移植瘤的增殖,并能诱导移植瘤细胞发生凋亡,其机制可能与上调bax和下调bcl-2表达有关。     

新疆维、汉P-gp、MRP1、GST-π与宫颈癌新辅助化疗疗效的相关性研究*

目的:探讨新疆维吾尔族及汉族宫颈癌新辅助化疗前后P-gp、MRPI和GST-∏的表达及其与化疗疗效的关系。方法:运用S-P法检测分别检测维吾尔族妇女宫颈鳞癌组织22例和非宫颈鳞癌组织20例,汉族妇女宫颈鳞癌组织30例和非宫颈鳞癌组织30例,新辅助化疗前后P-gP、MRPI和GST-π的表达水平。结果:①新疆维吾尔族正常宫颈、初治宫颈癌组织中P-gp的阳性表达率分别为10%、72.7%;MRP1的阳性表达率分别为20%、40.9%;GST-π的阳性表达率分别为45%、90.9%。P-gp、和MRP1在各组间比较差异均有统计学意义(P<0.05),GST-π差异无统计学意义(P>0.05)。②新疆汉族正常宫颈、初治宫颈癌组织中P-gp的阳性表达率分别为10%、56.7%;GST-π的阳性表达率分别为20%、60%,MRP1的阳性表达率分别为40%、86.7%。P-gp、GST-π和MRP1在各组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。③在新疆维吾尔族妇女宫颈鳞癌组织中:NACT后宫颈癌组织中GST-π阳性表达显著上升(P<0.05),有统计学意义。NACT后宫颈癌组织中P-pg、MRP1阳性表达差异无统计学意义...     

CYB5D2对乳腺癌皮下移植瘤模型大鼠肿瘤生长的影响

[目的]研究CYB5D2对乳腺癌皮下移植瘤模型大鼠肿瘤生长的影响。[方法]通过乳腺癌MCF-7细胞系建立乳腺癌裸鼠皮下移植瘤动物模型。将含有CYB5D2表达的质粒稳定转染MCF-7细胞,多点注射,将稳定转染的细胞注入裸鼠皮下,作为观察组,同时设置shRNA-CYB5D2阴性质粒为阴性对照组,PBS为空白对照组。测量各组大鼠肿瘤体积及质量;裸鼠转移瘤模型建立成功后处死小鼠,qRT-CPR法检测肿瘤组织内CYB5D2 mRNA表达水平;Western Blot法检测各组裸鼠转移瘤组织内上皮细胞间质转化(EMT)标志表白表达情况,酶联免疫吸附法检测裸鼠转移瘤细胞上清液中MMP-2及MMP-9水平。[结果]观察组转移瘤平均体积及质量显著低于阴性组与空白组(P<0.05),阴性组与空白组裸鼠转移瘤体积及质量无明显差异(P>0.05)。提取试验小鼠肿瘤组织总RNA,qRT-CPR法检测提示观察组肿瘤组织内CYB5D2 mRNA表达量显著高于阴性组及空白对照组(P<0.05),而阴性组与空白组间差异无显著性差异(P>0.05);Western Blot法检测结果显示,观察组转移瘤组织内E-cadherin、β-catenin蛋白表达水平显著高于与阴性组及空白组(P<0.05),而N-cadherin及Snail蛋白表达显著低于与阴性组及空白组(P<0.05)。阴性组与空白组转移瘤组织内E-cadherin、β-catenin、N-cadherin及Snail蛋白表达无显著性差异(P>0.05);观察组裸鼠转移瘤细胞上清液中MMP-2及MMP-9水平显著低于与阴性组及空白组(P<0.05),而阴性组与对照组MMP-2及MMP-9水平无显著性差异(P>0.05)。[结论]上调CYB5D2基因可有效抑制乳腺癌皮下移植模型大鼠瘤体生长,推测上调CYB5D2基因可能通过下调N-cadherin、Snail、MMP2及MMP9,上调E-cadherin、β-catenin,逆转EMT,发挥抗肿瘤功效。     

HIF-1α、VEGF在慢支及COPD大鼠肺组织的表达及意义

目的:研究HIF-1α、VEGF在COPD及慢支大鼠肺组织的表达情况及意义。方法:采用烟熏法制作慢支及COPD模型,应用免疫组化法检测肺组织中HIF-1α、VEGF的表达。结果:慢支组及COPD组HIF-1α、VEGF在大鼠肺组织中的表达均较正常组增加(P<0.05);HIF-1α、VEGF在COPD组与慢支组大鼠肺组织中的表达差异无显著性(P>0.05);直线相关分析显示,模型组HIF-1α与VEGF的表达呈正相关。结论:慢支组及COPD组大鼠肺组织中HIF-1α、VEGF的表达增加,二者参与气道炎症及结构的重塑。     

HIF-1α的表达在肝移植后肝癌复发与转移中的意义

目的:探讨肝癌组织中低氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达与肝癌行肝移植治疗后肿瘤复发与转移之间的关系.方法:选择肝癌行全肝移植患者45例,应用免疫组化方法检测其切除的肝癌组织、癌旁组织中HIF-1α的表达,分析其表达与移植后肝癌复发与转移之间的关系和意义.结果:肝癌组织中HIF-1α阳性表达率明显高于癌旁组织(X<'2>=6.39,P<0.01).HIF-1α在肝癌组织中的表达与肿瘤直径、TNM分期、有无淋巴结转移、有无门静脉癌栓及肿瘤播散灶密切相关(P<0.01).复发转移组和未复发转移组HIF-1α阳性表达率比较,差异存在显著性(X<'2>=8.46,P<0.01).Cox回归多因素分析表明HIF-1α高表达是影响肝癌患者肝移植后肿瘤复发和转移的独立预后因素(P<0.01).结论:HIF-1α蛋白有望成为一个预测肝癌患者肝移植后复发和转移的重要指标.     

胰腺癌中CDK1的表达与预后的生物信息学分析

为探讨胰腺癌的发病机制并为胰腺癌的防治提供生物信息学依据,用GEO2R在线工具分析GSE16515中胰腺癌患者肿瘤组织和相应正常组织的差异表达基因(differentially expressed genes, DEGs),通过DAVID数据库对DEGs进行GO分析和KEGG通路富集分析,然后通过STRING数据库构建蛋白质相互作用(protein-protein interaction, PPI)网络,用Cytoscape软件进行关键基因(hub基因)筛选和功能模块分析,并在GEPIA数据库对hub基因进行验证,用CCLE数据库检测靶基因在胰腺癌组织及细胞系中的表达水平。分析结果显示胰腺癌中筛选出的376个DEGs主要涉及细胞周期、p53信号通路、蛋白质消化吸收、ECM-受体相互作用、PI3K-Akt信号通路、血小板激活信号通路。GEPIA数据库验证结果显示10个hub基因均在胰腺癌组织中高表达,其中8个hub基因与胰腺癌患者的不良预后有关。CCLE数据库检测结果显示周期蛋白依赖性激酶1 (cyclin-dependent kinase 1, CDK1)在胰腺癌组织和细胞中均有较高的表达水平。本研究结果表明CDK1可能与胰腺癌的发生发展最为相关,为进一步探究胰腺癌的发病机制提供了生物信息学依据。     

缺氧缺糖诱导心肌细胞损伤中Notch信号对HIF-α及自噬相关基因Beclin1,LC3Ⅰ,LC3Ⅱ表达的影响

目的:探讨在缺氧缺糖诱导心肌细胞损伤的模型中Notch信号对低氧诱导因子(HIF-1α)及自噬相关的基因Beclin1,LC3Ⅰ,LC3Ⅱ的影响。方法:利用低氧培养箱与低糖DMEM培养基建立缺氧缺糖细胞(OGD)模型,细胞分为正常对照组,缺氧缺糖组(OGD group),缺氧缺糖+NC siRNA组(OGD+NC siRNA group),缺氧缺糖+Notch1 siRNA组(OGD+Notch1 siRNA group),缺氧缺糖+HIF-1αsiRNA组(OGD+HIF-1αsiRNA group),利用Western blot检测Notch1 siRNA与HIF-1αsiRNA的干预效果;利用Western blot检测Notch1 siRNA对模型细胞中HIF-1α表达的影响;利用CCK-8实验检测Notch1 siRNA与HIF-1αsiRNA对心肌细胞活性的影响;利用Western blot检测Notch1 siRNA与HIF-1αsiRNA对自噬相关的基因Beclin1,LC3Ⅰ,LC3Ⅱ的影响。结果:HIF-1αsiRNA可有效敲低模型心肌细胞HIF-1α的表达,而Notch1 siRNA可有效敲低模型心肌细胞中Notch1与HIF-1α的表达;Notch1 siRNA与HIF-1αsiRNA可降低缺氧缺糖细胞模型中心肌细胞的活性,且二者的作用之间没有统计学差异(P>0.05);Western blot结果显示Notch1 siRNA与HIF-1αsiRNA可降低模型细胞中自噬相关的基因Beclin1,LC3Ⅰ,LC3Ⅱ的表达,降低LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比率。结论:Notch1通过正向调节模型细胞HIF-1α的表达,进而提高缺氧缺糖诱导的自噬,发挥对心肌的保护作用。     

神经胶质瘤中PTEN、Ki-67和HIF-1α的表达及临床意义

目的:抑癌基因PTEN、癌基因Ki-67及HIF-1α对多种人类肿瘤的恶性进展均起重要的调控作用。本研究主要探讨PTEN、Ki-67及HIF-1α在人脑胶质瘤中的表达及临床意义,为胶质瘤患者预后的判定、分子病理学的诊断、基因靶向的治疗奠定理论基础。方法:在83例原发性人脑胶质瘤组织样本中,通过免疫组化的方法检测PTEN、Ki-67及HIF-1α的表达情况,并分析其表达相互间及其表达与肿瘤恶性级别之间的相关性。结果:在正常脑组织中,PTEN的表达均为阳性,Ki-67的表达均为阴性,10%(1/10)的样本HIF-1α的表达为阳性。在胶质细胞瘤中,PTEN的表达显著降低(P=0.001),而Ki-67(P0.001)和HIF-1α(P=0.001)的表达明显增高。随肿瘤恶性级别的增高,PTEN的表达呈降低趋势(P0.001),而Ki-67和HIF-1α的表达呈升高趋势(两者P均0.001)。相关性分析表明,PTEN的表达与Ki-67和HIF-1α的表达呈负相关(r值分别为-0.289和-0.304;P值分别为0.008和0.005),Ki-67的表达与HIF-1α的表达呈正相关(r=0.833;P0.001)。结论:胶质瘤组织缺乏抑癌基因PTEN蛋白的表达,而高度表达癌基因Ki-67和HIF-1α。抑癌基因PTEN表达减少或失活,癌基因Ki-67和HIF-1α的过表达对胶质瘤恶性进展可能起到至关重要的作用。PTEN、Ki-67和HIF-1α蛋白的联合检测对胶质瘤恶性程度和预后的判定有十分重要的临床意义。