LGT蛋白质组阳性肿瘤患者免疫功能的观察报告--LGT系列论文之八

目的了解LGT(lostgoodwilltarget)蛋白质组阳性表达患者CD3 、CD4 、CD8 、CD4 /CD8 、T细胞和NK细胞的变化规律。方法对30例LGT蛋白质组阳性表达的肿瘤患者分别采用美国BD公司生产的流式细胞检测仪及提供的相应单克隆抗体检测患者空腹血清CD3 、CD4 、CD8 、CD4 /CD8 、T细胞和NK细胞并用美国赛费吉(Ciphergen)公司制造的蛋白质指纹仪及该公司提供的弱阳离子交换芯片(WCX2)按其操作方法(SELDI检测技术)配对检测肿瘤患者空腹血清中的蛋白质指纹,对有病情加重的患者均检查两次以上。以指纹图上质荷比(M/Z)为11100 H~11900 H之间出现一峰簇样(cluster)的指纹标志为LGT阳性诊断标准,并按蛋白质指纹LGT检测阳性次数分成二组。对二组内CD3 、CD4 、CD8 、CD4 /CD8 、T细胞和NK细胞与正常参考值之间进行统计学显著性检验。结果CD3 T细胞值在LGT蛋白质组持续阳性表达组是增高的,在另一组是无变化,二者之间有显著性差异,而CD8 T细胞在二组内同时增高,CD4 T细胞和NK细胞二组同时低下,无显著性差别。结论本研究提示肿瘤晚期可能存在有酪氨酸蛋白激酶修饰的细胞内信号传导,使之病情加重,而肿瘤早期则不明显。这是一种新的看法,应加强这个方面的研究。     

LGT蛋白质组阳性肿瘤患者免疫功能的观察报告——LGT系列论文之八

目的：了解LGT（lost goodwill target）蛋白质组阳性表达患者CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋、CD4^＋/CD8^＋、T细胞和NK细胞的变化规律.方法：对30例LGT蛋白质组阳性表达的肿瘤患者分别采用美国BD公司生产的流式细胞检测仪及提供的相应单克隆抗体检测患者空腹血清CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋、CD4^＋/CD8^＋、T细胞和NK细胞并用美国赛费吉（Ciphergen）公司制造的蛋白质指纹仪及该公司提供的弱阳离子交换芯片（WCX2）按其操作方法（SELDI检测技术）配对检测肿瘤患者空腹血清中的蛋白质指纹,对有病情加重的患者均检查两次以上.以指纹图上质荷比（M/Z）为11100＋H～11900＋H之间出现一峰簇样（cluster）的指纹标志为LGT阳性诊断标准,并按蛋白质指纹LGT检测阳性次数分成二组.对二组内CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋、CD4^＋/CD8^＋、T细胞和NK细胞与正常参考值之间进行统计学显著性检验.结果：CD3^＋T细胞值在LGT蛋白质组持续阳性表达组是增高的,在另一组是无变化,二者之间有显著性差异,而CD8^＋T细胞在二组内同时增高,CD4^＋T细胞和NK细胞二组同时低下,无显著性差别.结论：本研究提示肿瘤晚期可能存在有酪氨酸蛋白激酶修饰的细胞内信号传导,使之病情加重,而肿瘤早期则不明显.这是一种新的看法,应加强这个方面的研究.     

恶性肿瘤患者LGT指纹转阴前后的对比研究

目的:分析恶性肿瘤患者危重病人预警蛋白(Lost Goodwill Target,LGT)指纹由阳性向阴性转变后是否出现有意义的差异指纹.方法:应用CM10弱阳离子芯片结合表面增强飞行时间质谱(surface enhanced laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)技术检测10例恶性肿瘤患者(分析组)LGT指纹由阳性向阴性变异前后血清样本的蛋白质指纹谱,以质/核比(M/Z):11100+H～11900+H,出现丰度＞10%峰簇(cluster),视为LGT阳性,反之为阴性.另选择12例肿瘤患者,各取1份血清样本,间隔1wk检测1次,再选择5例肿瘤患者连续两天血清标本各1份,以此作为影响因素对照组.去除与对照组相同差异指纹后,寻找LGT转阴后差异蛋白质组指纹.结果:分析组中恶性肿瘤患者LGT指纹由阳性向阴性变异时,有17个蛋白质指纹差异有统计学意义(P＜0.05),对照组中有差异指纹44个,其中M/Z为1007、1057的指纹与分析组相同,将之剔除后,剩余了15个有统计学意义的差异蛋白质指纹,其中上调指纹的m/z(质/核比)值分别为12262、6933、7964、8069、1171、915和1232.下调指纹的m/z值分别为2740、2818、4089、8828、2932、3191、3261和801.结论:SELDI-TOF-MS技术检测恶性肿瘤患者血清捕获的m/z:12262、6933、7964、8069、1171、915和1232蛋白质指纹呈上调趋势,m/z:2740、2818、4089、8828、2932、3191、3261和801蛋白质指纹呈下调趋势,可视为恶性肿瘤患者LGT指纹由阳性向阴性转变后伴随的相关蛋白质组指纹图谱.     

恶性肿瘤患者LGT指纹阴转阳的对比分析

目的:分析恶性肿瘤危重病人预警蛋白(LGT-Lost Goodwill Target)指纹由阴性向阳性转变后是否出现有意义的差异指纹.方法:应用CM10弱阳离子芯片结合表面增强飞行时间质谱(Surface Enhanced Laser Desorption/Ionization Time of Flight MassSpectrometry,SELDI-TOF-MS)技术检测21例恶性肿瘤患者(分析组)LGT指纹由阴性向阳性变异前后的血清蛋白质指纹谱,以质/核比(M/Z):11100+H～11900+H,出现丰度>10%峰簇(cluster),视为LGT阳性,反之为阴性.另选择12例肿瘤患者各1份血清样本,间隔一周检测一次,再选择5例肿瘤患者取连续两天血清标本各1份进行检测,以此作为影响因素对照组.去除与对照组相同差异指纹后,比较LGT阳性向阴性转变后差异蛋白质组指纹有无显著性.结果:分析组中恶性肿瘤患者LGT指纹由阴性向阳性变异时,有18个蛋白质指纹差异有统计学意义(P<0.05),对照组中有差异指纹44个,其中M/Z为1005、1008的指纹与分析组相同,将之剔除后,剩余了16个有统计学意义的差异蛋白质指纹,其中上调指纹的m/z(质/核比)值分别为6626、2889、6429、8866、3452、1259、3052、3699、8531、757、1146和8765.下调指纹的m/z值分别为17650、7979、778和1006.结论:SEL-DI-TOF-MS技术检测恶性肿瘤患者血清捕获的m/z:6626、2889、6429、8866、3452、1259、3052、3699、8531、757、1146和8765蛋白质指纹呈上调趋势,m/z:17650、7979、778和1006蛋白质指纹呈下调趋势,可视为恶性肿瘤LGT指纹阴转阳的差异蛋白质.     

恶性肿瘤患者病情恶化前后与持续稳定时蛋白质指纹的比较分析

目的:比较分析恶性肿瘤患者病情恶化前后与持续稳定时的蛋白质指纹.方法:选择应用CM10弱阳离子芯片结合表面增强飞行时间质谱(surface enhanced laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)技术检测的107例经手术治疗,且LGT指纹(指血清中出现质核比(M/Z):11000+H～12000+H的蛋白质指纹,设定为LGT阳性指纹,反之为阴性)在手术前为阴性的恶性肿瘤患者,随访1年,根据随访后LGT指纹仍为阴性组(95人)A组,和由阴性转变为阳性组(12人)B组.其中A组第1次检测结果设为A1组,第2次检测结果设为A2组;B组第1次检测结果设为B1组,第2次检测结果设为B2组.采用Protein Chip 3.2.0和Biomarker Wizard 3.1软件比较各组间有无差异指纹.结果:A1组-A2组:M/Z:2073、4116、2901、1558、4052、2048、1401、1298、1509、2888指纹上调,M/Z:3568、10050、2600、4629、9287、14822指纹下调;A1组-B1组:M/Z:8972、8460及8767指纹上调,M/Z:3192、3155、4326、4281、4381、3304、5448及2942指纹下调;A2组-B1组:M/Z:15851、15534、8460指纹上调,M/Z:3285、3304、3346、4178、3192、3266、951、5167、3930、4271、4052、4961、4259及2681指纹下调;B1组-B2组:M/Z:11648、11873、11489、11532及11405指纹上调,M/Z:8767指纹下调;A1组-B2组:M/Z:11618、11405、11648、11489、11532和11744指纹上调,无表达下调的指纹;A2组-B2组:M/Z:11489、11648、11405、11532、11318及11873指纹上调,无表达下调的指纹.结论:恶性肿瘤患者其LGT蛋白质指纹在疾病初期及持续稳定期均呈阴性时,LGT阳性表达是病情恶化的主要标识.本研究中,血清蛋白质指纹M/Z:8767上调和下调所表达的意义是不同的,尤其是在动态观察下,从有到消失及从无到出现,代表病情演变的两个不同结果,其意义仍需进一步研究证实.M/Z:8460蛋白质指纹表达上调,M/Z:3192、3304表达下调,可视为预示日后病情发生进展的蛋白质指纹.     

表面增强激光解吸离子化技术稳定性的分析

目的:表面增强激光解吸离子化(surface enhanced laser desorption/ionization,SELDI)技术的重复性和稳定性进行分析.方法:将17名患者分成A、B两组,A组12名肿瘤患者清晨空腹血,离心后分成两份:一份立即行SELDI技术检测,另一份-80℃保存一周后再行检测;B组5名肿瘤患者连续两天各采血一次,并于采血当天行SELDI技术检测.所捕获的指纹经Biomarker Wiz-ard3.1、ProteinChip 3.2和Biomarker Pattern软件分析有无差异指纹.结果:两种采样方法都发现了差异指纹,其中有部分差异指纹在两种采样方法的检测中都出现,所有差异指纹M/Z(质荷比)由731到1167.结论:SELDI技术的确存在有重复性差、系统不稳定因素,但都发生在M/Z小分子量位段,对大位段数据分析未发现有明显影响.     

危重病人预警蛋白质组指纹表达与无效化疗的相关性研究

目的:探索无效化疗与危重病人预警蛋白质组(LGT)指纹的相关性。方法:取昆明小鼠30只,平均体重19-22g,建立小鼠S180肉瘤动物模型,随机分为A(n=10)、B(n=5)、C(n=10)、D(n=5)四组,A组腹腔注射顺铂2.6mg/kg/d×4天,C组腹腔注射顺铂2.6mg/kg/d×8天,于用药结束后4天处死小鼠,B组和D组分别为肿瘤对照组(B组与A组处死小鼠时间相同,D组与C组处死时间相同,同时摘眼球取血进行SELDI(表面增强飞行时间质谱)技术检测,并计算瘤重。比较A组与B组、C组与D组之间肿瘤瘤重有无差异,并根据化疗后肿瘤与对照组比有无缩小分成化疗有效和无效组,比较二组之间LGT蛋白质组指纹出现率有无差异。结果:①模型鼠肿瘤瘤重与LGT蛋白质组指纹的出现率呈正相关,相关系数rs=1.00,P<0.01。A组瘤重与B组相比无统计学差异(P>0.05),C组瘤重明显高于D组,有统计学差异(P<0.05)。②各组LGT蛋白质组指纹的出现率分别为:A组:55.6% B组:50% C组:22.2% D组:80%。A组的LGT蛋白质组指纹出现率高于C组,相比有统计学差异(P<0.05)。结论:无效化疗可造成模型鼠肿瘤的增大和LGT蛋白质组指纹出现率的增高,表明肿瘤增大是造成肿瘤模型小鼠死亡的重要原因。     

尿样在SELDI技术中的优化研究

目的:建立表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF/MS)技术检测尿液样本的方法。方法:采用SELDI技术及弱阳离子交换表面蛋白芯片(CM10)对糖尿病病例组和正常对照组的尿液样本进行分析,从尿液标本的采集、样品保存、上样浓度的控制、实验仪器的内外校准、实验结果重复性验证与分析等方面进行实验条件的优化。结果:反复冻融3次以上的样品经SELDI检测的出峰数量和峰强度情况较差;以1:1或1:2的浓度作倍比稀释后的样本经芯片检测得到的蛋白峰强度和蛋白数量最优;对两组样本重复检测3次,蛋白丰度的平均变异系数(CV值)分别为0.121和0.095;两组样本共检测到202个蛋白峰,其中差异表达蛋白29个,在肝纤维化组中表达上调13个,表达下调16个。结论:初步建立了SELDI技术检测尿液样本的方法,提高了SELDI技术检测尿液样本的质量。     

尿样在SELDI技术中的优化研究

目的：建立表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱（SELDI．TOF／MS）技术检测尿液样本的方法。方法：采用SELDI技术及弱阳离子交换表面蛋白芯片（CM10）对糖尿病病例组和正常对照组的尿液样本进行分析,从尿液标本的采集、样品保存、上样浓度的控制、实验仪器的内外校准、实验结果重复性验证与分析等方面进行实验条件的优化。结果：反复冻融3次以上的样品经SELDI检测的出峰数量和峰强度情况较差;以1：1或1：2的浓度作倍比稀释后的样本经芯片检测得到的蛋白峰强度和蛋白数量最优;对两组样本重复检测3次,蛋白丰度的平均变异系数（CV值）分别为0．121和0．095;两组样本共检测到202个蛋白峰,其中差异表达蛋白29个,在肝纤维化组中表达上调13个,表达下调16个。结论：初步建立了SELDI技术检测尿液样本的方法,提高了SELDI技术检测尿液样本的质量。     

分枝杆菌特征性蛋白的筛选

目的研究分枝杆菌蛋白表达,筛选分枝杆菌特征性蛋白,为分枝杆菌的快速鉴定奠定基础。方法选取分枝杆菌标准菌株,提取细菌蛋白,干化学法测蛋白浓度,应用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱技术（SELDI-TOF-Ms）检测分枝杆菌蛋白表达,和非分枝杆菌蛋白指纹图谱比较,筛选分枝杆菌特征性蛋白。重复测定20次分枝杆菌蛋白标本,评价SELDI检测分枝杆菌蛋白分子量的重复性。结果耻垢分枝杆菌ATCC 14468有约20个蛋白峰,结核分枝杆菌ATCC 25177、土地分枝杆菌ATCC 15755、胞内分枝杆菌ATCC 13950、耻垢分枝杆菌ATCC 607有近40个蛋白峰。与非分枝杆菌蛋白指纹图谱相比,4个蛋白峰为分枝杆菌所特有。SELDI重复检测20次分枝杆菌蛋白标本显示同一蛋白峰的分子量变异系数≤0．05％。结论分枝杆菌有其特征性蛋白峰,可能有助于分枝杆菌的快速鉴定。