组蛋白和核酸的1~H、(31)~P核磁共振研究

本文报道了组蛋白、DNA、聚核苷酸A和聚核苷酸U的~1H、~（31）P高分辨核磁共振研究新结果。 当组蛋白与DNA、聚核苷酸A或U相互作用后,核酸的质子峰变弱或消失。     

S_(180)肉瘤细胞对小鼠基因组DNA结构变化影响的核磁共振氢谱~1H—NMR研究

本实验利用核磁共振技术,对体内培养了腹水癌小鼠肝细胞基因组DNA的结构变化进行了测试,发现随致癌时间的延长,基因组DNA内胸腺嘧啶核苷酸周围的化学环境发生了定向的变化,造成DNA核磁共振氢谱中,部分胸腺嘧啶的甲基质子发生了化学位移,在′H-NMR图谱中1.9ppm峰Ⅰ减小,而2.6-2.7ppm区域的峰Ⅱ却明显增加,结果使双峰比(峰Ⅰ积分面积/峰Ⅱ积分面积)显著下降,本文为研究癌症发生和发展的遗传学机制提供了一个新的方法.     

S_(180)肉瘤细胞对小鼠基因组DNA结构变化影响的核磁共振氢谱~1H—NMR研究

本实验利用核磁共振技术,对体内培养了腹水癌小鼠肝细胞基因组DNA的结构变化进行了测试,发现随致癌时间的延长,基因组DNA内胸腺嘧啶核苷酸周围的化学环境发生了定向的变化,造成DNA核磁共振氢谱中,部分胸腺嘧啶的甲基质子发生了化学位移,在′H-NMR图谱中1.9ppm峰Ⅰ减小,而2.6-2.7ppm区域的峰Ⅱ却明显增加,结果使双峰比(峰Ⅰ积分面积/峰Ⅱ积分面积)显著下降,本文为研究癌症发生和发展的遗传学机制提供了一个新的方法.     

Oligo(dT)-纤维素与Oligo(U)-纤维素的合成及其应用

Oligo(dT)-纤维素与Oligo(U)-纤维素具有分离信使RNA(mRNA)的功能。这是由于大多数的mRNA 分子的3’-末端含有多聚腺嘌呤核苷酸的片段(亦有例外,如一类组蛋白的mRNA),在低温与高离子强度的条件下,此片段能与多聚脱氧胸腺嘧啶核苷酸或多聚尿嘧啶核苷酸形成互补的碱基配对,而核糖核蛋白体RNA(rRNA)与转移RNA(tRNA)缺少多聚腺嘌呤核苷酸的片段,不能被该树脂吸附,利用这一特性可将mRNA与其它RNA分离开来。     

一些天然产齐墩果烷型三萜化合物的~(13)C核磁共振谱

齐墩果烷型三萜是一类比较广布的化学成分,常以配糖体的形式存在于植物体中,有的并已证明具有种种的生理活性。近年,~(13)C核磁共振谱已逐渐成为这类化合物结构测定的重要手段。本文报告用26.23兆赫WH-90FT核磁共振波谱仪测定12个天然产齐墩果烷型三萜化合物的~(13)C核磁共振谱,对各碳的化学位移进行了指定,并试图讨论这些化合物的共振讯号与化学结构之间的相互关系。     

生物膜核磁共振新技术及类脂静态、动态结构研究的进展

生物膜的研究是当代生命科学研究的三大领域之一.目前,有关膜的静态结构已基本清楚,而对膜结构组分的动力学特征还了解不多.运用~1H、~2H、~(13)C和~(31)P核磁共振(NMR)技术,可以了解膜中类脂的动力学状态.七十年代中期以前,人们通过测量NMR波谱、峰宽、弛豫时间,对类脂的烃链长度与饱和程度、蛋白质和胆固醇的含量、水质子信号特征以及外加的抗菌素和局麻药物的作用进行探讨,并发展了癌细胞的检测技术.近年来,由于核磁共振仪的不断改善,计算     

海南捕鸟蛛毒素-I(HNTX-I)的~1H-NMR信号归属和二级结构分析(英文)

海南捕鸟蛛毒素-I(HNTX-I)是从海南捕鸟蛛(Ornithoctonus hainana)的粗毒中纯化的一种新型神经毒素。应用二维1H-NMR.技术研究HNTX-I的溶液结构特点,通过分析水和重水中的DOF-COSY、TOCSY和NOESY谱,识别出HNTX-I全部33个氨基酸残基自旋体系;通过NOESY谱中的dαN、dβN、dNN和Dαδ联系完成了序列专一的谱峰归属,从而确认了HNTX-I所有的主链质子和大于96％的侧链质子的化学位移。并通过分析3JNH-CaH耦合常数、序列间的NOE联系以及慢氢交换质子等,确定HNTX-I的二级结构主要是由三股反平行的β-折迭组成(Lys7-Cys9,Tyr20-Asn23和Trp28-Val31),这些结构特点与已经探明结构的其它蜘蛛毒素的基本相同。这些结果为完全解析HNTX-I的溶液三维结构奠定了基础。     

酵母丙氨酸转移核糖核酸中十三核苷酸(23～35)类似物(CpGpCpGpCpUpCpCpCpUpUpIpGp)的合成

本文报道了利用酶促合成的方法(RNase N_1和T_4 RNA连接酶)合成了酵母丙氨酸转移核糖核酸分子中第23位到第35位的十三核苷酸的类似物CpGpCpGpCpUpCpCpCpUpUpIp-Gp(天然酵母丙氨酸tRNA中第26位是m_2~2G)。CpGpCpG是由CpG>p和CpG经RNase N_1酶催化合成的,产率为20%。十三核苷酸CpGpCpGpCpUpCpCpCpUpUpIpGp的合成是由T_4 RNA连接酶催化CpGpCpG与pCpUpCpCpCpUpUpIpGp之间的连接反应实现的,产率为80%。产物经双向电泳层析分析为一点,用蛇毒磷酸二酯酶部分酶解后的双向图谱分析证明十三核苷酸的核苷酸排列顺序正确。     

《生物工程讲座》名词解释(Ⅰ-Ⅳ讲)

1.bp碱基对。DNA长度的单位。1000bp=1kb。 2.kp千碱基对。参见bp。 3.A,G,T,C DNA双链上四种脱氧核苷酸(或其碱基)的符号,A为脱氧腺嘌呤核苷酸,G为脱氧鸟便嘌呤核苷酸,T为脱氧胸腺嘧啶核苷酸,C为脱氧胞嘧啶核苷酸。在双链上。A恒与T配对,G恒与C配对。在RNA链上,四种核苷酸的符号为A,G,u,c,相应为腺嘌呤核苷酸,鸟便嘌呤核苷酸,尿嘧啶核苷酸和胞嘧啶核苷酸。     

~(60)Co-γ辐照对中国仓鼠卵巢成纤维细胞DNA和组蛋白合成的影响

本文介绍了~(60)Co-γ辐照对同步的和非同步的CHO细胞的DNA合成和组蛋白合成关系的影响的研究,用~3H-胸腺嘧啶核苷和~(14)C-丙氨酸双标记,未经辐照的和经4Gy～60Gy ~(60)Co-γ辐照的CHO细胞,通过~3H和~(14)C的参入来估价DNA和组蛋白的合成,并用聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定辐照前后组蛋白各组分的变化情况,实验表明: 1)、在4～60Gy剂量范内,无论是同步的还是非同步的CHO细胞其DNA合成和组蛋白合成都受到不同程度的抑制。2)、在辐照后1—3小时,DNA合成和组蛋白合成都受到不同程度的抑制,但辐照后4小时,DNA合成被进一步抑制而组蛋白的合成却逐渐恢复正常,到辐照后48小时组蛋白的合成几乎接近对照水平。3)、16Gy ~(60)Co-γ辐照后8小时,非同步的CHO细胞的DNA合成被抑制的情况比G_1期CHO细胞更为严重。4)、16Gy ~(60)Co-γ辐照S期细胞,在辐照后1—24小时中DNA合成被明显抑制的同时,组蛋白的合成也受到相应的抑制。5)、从未经辐照的和经6、16和60Gy~(60)Co-γ辐照的CHO细胞分别提取全组蛋白,进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,从电泳图谱的变化清楚地看到组蛋白H_1和H_3受辐照影响大于组蛋白H_4和H_(2B)+H_(2A),因此我们推测DNA合成和组蛋白H_1和H_3的关系较之组蛋白H_4和H_(2A)+H_(2B)更为密切。     

黄花(Hemerocallis citrina Baroni)根中一个新蒽醌的分离和结构研究

从百合科植物黄花(Hemerocallis citrina Baroni)根的乙醇提取物中分到一个新的蒽醌化合物,命名为黄花蒽醌(hemerocal),此外还分离到4个已知蒽醌:大黄酚、美决明子素甲醚、美决明子素和芦荟大黄素。用红外光谱、紫外光谱、~1H 核磁共振谱和质谱等物理方法推定了黄花蒽醌的化学结构为2,8-二羟基-1-甲氧基-3-羟甲基-9,10-蒽醌。以美决明子素为原料通过乙酰化,溴化等反应合成了黄花蒽醌的三乙酰化合物,从而确证了它的结构。此外,还研究了黄花蒽醌的~(13)C 核磁共振谱,初步决定了各个碳原子的归属。     

H~+诱导心磷脂的六角形Ⅱ相和H~+的跨膜转运

本文报告H~ 能诱导心磷脂由双层排列转变为六角形Ⅱ相.含心磷脂的多层脂囊泡的~(31)P中核磁共振谱显示高场峰低场肩的双层排列特点,当pH降到2时,~(31)P核磁共振谱表现为低场峰高场肩的六角形Ⅱ相特点,表明H~ 对心磷脂多形性转变的诱导作用.用oxonol-V作为探剂.H~ 可使结合在人工脂膜上的oxonl-V的吸收峰红移和光吸收增加,表明心磷脂的六角形Ⅱ相在人工脂膜上具有H~ 的载体特性,易化H~ 的跨膜转运.     

关于谷氨酸棒状杆菌变异株赖氨酸发酵~(13)C核磁共振的研究

<正> ~(13)C核磁共振[NMR]光谱学可应用于谷氨酸棒状杆菌ATCC 21543(一株产生赖氨酸的变异株)赖氨酸生物合成的研究上。此菌株培养在含有[1-~(13)C]葡萄糖或[6-~(13)C]葡萄糖作为唯一碳源的培养基中,并测定其培养液的~(13)C NMR光谱。用~(13)C标记的L-赖氨酸图可由细菌的假设代谢途径得以圆满的解释。对从标记过的基质释放出~(13)CO_2的固定作用和发酵中进行的三     

双链核糖核酸免疫化学研究 Ⅰ.双链多聚[I]:多聚[C]的抗原性

用国产多聚肌苷酸和多聚胞嘧啶核苷酸(简称多聚[I]:多聚[C])制备成双链核糖核酸特异性抗血清,用环状沉淀和~3H标记的番茄花叶病毒双链核糖核酸测得抗血清效价分别为1:128和1:6400。用免疫琼脂双扩散、对流免疫电泳和放射免疫测定可测定出多聚[I]:多聚[C]的最低浓度分别为391ng、12.2/ng和10pg/ml抗血清和酵母、TMV、PVX 的单链核糖核酸、小牛胸腺DNA不反应。试验证明用国产多聚[I]:多聚[C]制备的抗血清,可有效地用干双链核糖核酸的免疫化学鉴定。由于在免疫双扩散和对流免疫电泳中抗血清能和微量双链核糖核酸反应并产生可见沉淀线,从而有可能利用这两种简便灵敏的方法测定病毒的双链RNA,单链RNA病毒的RF型RNA,以及双链RNA真菌病毒的筛选。     

~(60)Coγ-线对人血淋巴细胞DNA和RNA合成能力的影响

T例人血在体外接受~(60)Coγ-_线照射后进行培养,用~3H-胸腺嘧啶核苷(~3H-TdR)和~(14)C-尿嘧啶核苷(~(14)C-UR)作掺入实验,以反映DNA和RNA的合成能力。应用滤膜法收获细胞,液体闪烁计数器测定双标记样品,发现γ-线对DNA和RNA合成的影响有一定规律,即随照射剂量的增加,~3H和~(14)C掺入的放射性呈指数下降。经统计处理分别得到照射剂量和~3H-TdR、~(14)C-UR掺入的放射性计数的对数值两变量间的直线迥归方程。10拉德的照射导致~3H—TdR和~(14)C-UR掺入的放射性计数显著性减少,RNA比DNA合成受抑更明显。     

鼠肝色氨酸吡咯酶诱导生成机制的研究 Ⅲ.酶的诱导过程中~(32)P快速标记RNA的变化

本实验观察到在大鼠肝色氨酸吡咯酶的激素和底物诱导过程中都有~(32)P快速标记RNA的出现,它们在氢可地松诱导2小时和在色氨酸诱导3.5小时的比放射性较对照RNA者分别增加100%和60%左右。~(32)P长期标记高聚RNA的变化与快速标记RNA者显然不同,在激素诱导4～6小时和在底物诱导10小时的比放射性始有增高。激素和底物诱导后不同时间提取的~(32)P快速标记RNA的放射性动态变化与其相应RNA诱导TP活性的动态变化呈平行关系,而从~(32)P长期标记活性最高时提取的高聚RNA刺激TP的活力与正常鼠肝RNA刺激TP的活力无显著差别,激素和底物诱导过程中~(32)P快速标记RNA的生成为放线菌素K_2所抑制。去肾上腺大鼠底物诱导2小时和3.5小时也出现~(32)P快速标记RNA,其生成也为放线菌素K_2所抑制。自去肾上腺大鼠底物诱导3.5小时提取的RNA对TP的诱导活性高于相应的正常鼠肝RNA。以上结果说明,在TP的激素和底物诱导过程中所生成的具有体内诱导TP功能的高聚RNA,可能是一种“特异的mRNA”。     

竹花叶病毒卫星RNA编码P20蛋白的同型和异型相互作用

竹花叶病毒卫星RNA(satBaMV)是一个长度为836个核苷酸(不包括polyA)的单链正义RNA分子,可编码一20ku的卫星蛋白(P20).satBaMV的复制和包被需依赖竹花叶病毒(BaMV).P20是核酸结合蛋白,能促进satBaMV在寄主植物的长距离移动.利用细菌双杂交系统(BTH)和pull-downassays研究了P20自身、P20与BaMV蛋白以及BaMV蛋白之间的相互作用.研究表明:P20自身的相互作用是最强的;P20与甲基转移酶(MET)和衣壳蛋白(CP)之间有明显的相互作用;三基因连锁蛋白之间亦存在强的相互作用;CP与三基因连锁蛋白之间有明显的相互作用.删减分析表明,位于P20N端包括RNA结合位点在内的15个氨基酸是P20自身相互作用所必需的.N端缺失可导致P20间相互作用消失.P20的β折叠结构也是P20间相互作用所必需.此外,P20与烟草细胞色素C还原酶和β微管蛋白之间有较强的相互作用.BaMV蛋白与P20之间的同型和异型相互作用对BaMV及其卫星RNA在寄主植物中的移动起重要作用.     

磁共振波谱分析(三)

几种元素磁共振波谱分析的实验研究 目前设备的条件可对多种元素进行MRS,且发展很快,现简单介绍如后。 1.磷~31(~31P)的MRS:小狗活体脑部磷~31磁共振波谱图与小狗脑组织提出物的高分辨率波谱相比,发现ATP的三个磷酸盐峰:α、β和γ,ADP的α、β峰与ATP的α、γ峰相重叠。ADP浓度较低,因此正常组织中,~31P磁共振波谱分     

利用核磁共振(~(31)P-NMR)测定b型流感嗜血杆菌荚膜多糖中磷含量的新方法研究

目的:利用~(31)P-NMR核磁共振定量法(QNMR)测定b型流感嗜血杆菌(Hib)荚膜多糖中的磷含量,建立QNMR的质控方法。方法:采用Bruker AVANCEⅡ400核磁共振谱仪,以六甲基磷酰三胺为内标,采集一维定量~(31)PNMR谱对不同浓度的磷酸二氢钾进行定量分析,采用传统方法验证该新方法的精密度及准确度,并对2种方法进行比较研究。结果:QNMR定量结果相对标准偏差(RSD)均小于1.7%,相对误差为2.1%～3%,不同浓度样品回收率为97.0%～98.1%;传统的化学法定量结果 RSD为1.2%～3.2%,相对误差为5%～7%,不同浓度样品回收率为93.0%～94.9%;2种方法检测的3批Hib荚膜多糖中磷含量无明显差别,均符合《中国药典》三部(2010版)规定的68～90 mg/g。结论:~(31)P-NMR定量方法操作简单,耗时短,重现性好,精密度和准确度高,且不破坏多糖成分,可应用于细菌荚膜多糖质量控制的磷定量。     

酵母双杂交筛选与果蝇C(2)M相互作用的蛋白

同源染色体联会时形成的联会复合体(Synaptonemal complex, SC)是由减数分裂前期Ⅰ多种蛋白质聚集而成的超级复合结构。生殖细胞特异性的核蛋白C(2)M(Crossover suppressor on 2 of Manheim)在染色体上高度聚集可以诱导SC的形成。本文采用酵母双杂交方法,利用C(2)M的诱饵表达载体筛选果蝇cDNA文库,共发现40个可能与C(2)M相互作用的蛋白,包括多种DNA及组蛋白结合蛋白、ATPase、转录调节因子。从筛选的结果中,选取wech和Psf1基因构建了转基因果蝇,并在生殖细胞中进行了基因沉默,结果显示联会复合体的消失受到延迟。上述结果表明Wech和Psf1蛋白可能与C(2)M形成复合物,共同参与联会复合体的形成或其稳定性的维持。