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1.
PCR和Southern Blot检测土拉弗氏菌气溶胶 总被引:2,自引:0,他引:2
为提高检测土拉弗氏菌的特异性和敏感性,建立了土拉菌PCR及核酸杂交检测方法。运用平板计数、多聚酶链反应对土拉菌气溶胶稳定性进行了比较,结果表明PCR具有较高灵敏度,并且在采样后3小时PCR就可以得出定性结果,而平板计数则需要3~7天。采用PCR法合成了土拉菌376-bp探针,分别对细菌菌液、568-bpPCR产物和气溶胶样品进行杂交,结果表明菌悬液直接杂交可检出105CFU左右的细菌,检测PCR产物可达40pg。PCR和Southern印迹相结合有利于细菌的分离鉴定 相似文献
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昆虫核酸分子系统学研究进展 总被引:6,自引:0,他引:6
本文从研究对象、方法、类群、内容等方面综述了近十年来昆虫核酸分子系统学研究进展概况。文中首先介绍了RFLPA、探针杂交及DNA指纹、PCR与RAPD-PCR、顺序分析方法及应用情况,列举了在双翅目、膜翅目、同翅目、直翅目等目昆虫中的研究进展,并从居群遗传结构、分类学研究、系统发育和分子进化4个方面总结了昆虫核酸分子系统学的研究内容和主要成果,最后指出RAPD-PCR与RFLP联合用于测序是近期昆虫分子系统学上最有应用价值的方法。 相似文献
3.
核酸扩增技术在感染常规诊断中的作用已被确认,技术不仅包括多聚酶链反应(PCR),而且也包括连接酶链反应(LCR),自我持续序列复制(3SR),扩增探针和Qβ复制酶。本文综述了LCR在衣原体检测中的应用,并与其它方法进行了比较,以助于了解LCR技术在衣原体诊断中的应用优势。 相似文献
4.
本文研究了由嗜肺军团杆菌的巨噬细胞感染性增效子(mip)基因设计的一对引物,用PCR扩增嗜肺军团杆菌3、5、7、8血清型的4个标准菌株的特异DNA序列,研究了用该引物扩增BAL液中嗜肺军团菌特异DNA序列的方法、灵敏度及特异性。结果表明:用上述引物扩增嗜肺军团菌4个标准菌株的DNA,均可得到207bp的特异扩增产物,BAL液中的军团菌经离心及裂解液裂解后,可直接进行DNA扩增,当BAL与液中军团菌量为2×103CFU/ml时,即可检测出特异扩增带(电泳法),除军团菌外,其它受试细菌均无此特异性扩增,用本法对42例临床非典型肺炎患者的BAL液进行嗜肺军团菌的检测,在42份嗜肺军团菌培养均为阴性的BAL液中,其中一例PCR检测军团菌为阳性。本研究提示:用PCR检测BAL液中的军团菌是可行的,并有快速、灵敏、特异之忧点。 相似文献
5.
原位杂交和原位PCR技术在鱼类基因定位中的应用 总被引:5,自引:0,他引:5
染色体原位杂交( in situ hybridization, ISH)是基因物理定位的主要方法之一,它根据核酸分子碱基互补配对的原理,将标记的外源核酸探针与染色体上变性处理后的单链DNA互补配对,再经检测而将靶顺序在染色体上的位置显示出来。 原位PCR技术是将原位杂交与PCR技术有机的结合,在原位扩增目的DNA片段,并在原位检测其扩增产物,因而兼有PCR及原位杂交技术二者的优越性:既可以同时获得组织及细胞的形态结构信息与分子信息,进行定性、定位分析,又具有比原位杂交更好的敏感性与专一性。 染色体原位… 相似文献
6.
原位PCR技术及其应用 总被引:2,自引:0,他引:2
原位PCR技术是通过在染色体上或组织细胞内对靶核酸序列进行原位扩增,用原位杂交技术检测,从而对靶核酸进行定性,定位和定量分析的研究方法,原位PCR大大提高了原位杂交技术的灵敏度,在分子生物学基础理论和临床医学研究方面展示了美好的应用前景。 相似文献
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军团菌分子生物学的研究进展 总被引:1,自引:0,他引:1
国外学者使用分子克隆的方法研究了嗜肺军团菌超氧化物歧化酶、外毒素、细胞溶素、蛋白酶、溶血素、recA基因和致病基因分子,以及嗜肺军团菌的质粒转移和抗原表达,制备了基因探针,检测了耶氏菌限制性片段长度多态性(RFLP)分型,建立了米克戴德军团菌的基因库。 相似文献
9.
用聚合酶链反应(PCR)技术,制备了轮状病毒第9基因部分片段的地高辛标记的cDNA探针。DNA-RNA斑点杂交表明该探针具有轮状病毒A组的特异性,可检出10pgHRV-RNA。实验中选择了粪便标本提取核酸后点膜和粪便上清直接点膜进行斑点杂交,两种方法的结果一致;、同时将斑点杂交法与PAGE法的结果进行了比较。实验结果表明用PCR技术直接制备地高辛素标记的cDNA探针具有方便、快速、标记率高、特异性 相似文献
10.
应用PCR技术扩增出HBVDNAC基因片段并与pAT153质粒重组,转化到E.coliRRI中,经体内扩增,提纯,用光生物素标记,制备了C基因的重组质粒探针。该探针检测灵敏度在Southern印迹中达1pg,在点印迹中为5pg。用此探针以Southern印迹方式配合PCR技术检测乙肝病人血清中的HBVDNA,在53例PCR产物电泳检测阴性的样品中,Southern杂交又检出18例阳性。 相似文献
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应用本实验建立的三组套式PCR(PCR1、2、3)和一组以前报道的套式PCR(PCR4),对59份外周血淋巴细胞(PBL)DNA样品进行了恶性卡他病毒核酸序列的检测。这些样品来自51只羊,以及与羊接触而发病的6头牛和2只鹿。除PCR4外,其它三组PCR都能扩增现有4个角马型MCFV分离株。有6只羊在4组PCR中都呈阴性,其余53份样品经PCR4检测均呈阳性。PCR1只有从45只羊体检出MCFVDN 相似文献
12.
PCR制备地高辛素标记的探针检测轮状病毒核酸 总被引:2,自引:0,他引:2
用聚合酶链反应(PCR)技术,制备了轮状病毒第9基因部分片段的地高辛标记的cDNA探针。DNA-RNA斑点杂交表明该探针具有轮状病毒A组的特异性,可检出10pgHRV-RNA。实验中选择了粪便标本提取核酸后点膜和粪便上清直接点膜进行斑点杂交,两种方法的结果一致;同时将斑点杂交法与PAGE法的结果进行了比较。实验结果表明用PCR技术直接制备地高辛索标记的cDNA探针具有方便、快速、标记率高、特异性强的特点,具有一定的应用前景。 相似文献
13.
一种新的免疫—PCR系统的建立和应用研究 总被引:3,自引:1,他引:2
把PCR技术作为指示系统引入免疫检测中,建立了免疫-PCR技术。在本研究中,以PEI作交联剂,首次成功地将特异性抗体直接与DNA交联,构建了三种Ab-DNA基因探针,组成新的免疫-PCR检测系统。此三种特异性Ab-NDA探针可用于检测三种相应抗原。检测HSA抗原的最低含量可达10^-18mg/ml,灵敏度比ELISA高10^6倍。 相似文献
14.
PCR和生物素探针对HFRSV的检测和分型的探讨 总被引:2,自引:0,他引:2
分析比较肾综合征出血热病毒(HFRSV)76/118株和R_(22)株的核苷酸序列,根据引物设计原则及检测分型的目的,设计并合成了3对引物。1对引物取于两毒株间的高同源区段,作为共同引物和外引物;另两对引物取于两毒株间的低同源区段,分别作为野鼠型引物、家鼠型引物和内引物。建立了DNA聚合酶链反应(PCR)和NestPCR方法,并用NcstPCR合成了两种型特异的生物素探针。PCR检测76/118、A_9、陈、R_2、R_225个毒株,用外引物时均扩增出1条约300bp的条带;用内引物的野鼠型引物时,除R_(22)株之外,其余4株均扩增出1条约70bp的条带。斑点杂交试验证实了PCR检测分型的准确性。NestPCR和生物素探针斑点杂交试验可以测出1-10bg的目的cDNA。 相似文献
15.
军团菌属(Legionela)自1971年确定以来,现已有39个成员。军团菌属主要分布于供水系统中,如空调冷却塔水和浴池淋浴水中。我们曾于1994年从北京某宾馆冷却塔水中分离出一株可疑军团菌,但因缺乏标准抗血清而未能定种。由于核酸分析技术和细菌鉴定观念上进步,使我们能根据16SrDNA序列比较推测细菌间进化关系,并进而对未知细菌进行鉴定和检测。我们用以16SrDNA为靶序列的PCR和测定鉴定,确定了该分离株为橡树岭军团菌(L.oakridgensis)。 相似文献
16.
张文卿 《微生物学免疫学进展》1995,23(1):55-59
本文综述了细小病毒B19感染检测方法的研究进展。病毒分离目前仍处于实验研究阶段;电镜及免疫组化法检测阳性率不高,限制了其使用;血清学方法多用重组抗原进行,血清中病毒特异性IgM阳性可做为近期感染的指标,但由于与风疹病毒的交叉反应,该方法与病毒DNA检测结合使用结果更为可靠;核酸杂交法敏感性高,可用于常规诊断和流行病学调查,但易出现假阳性,特别是同位素探针,敌目前多倾向于用非放射性标记探针;PCR法 相似文献
17.
应用PCR技术扩增出HBV DNA C基因片段并与pAT153质粒重组,转化到E.coli RRI中,经体内扩增,提纯,用光生物系标记,制备了C基因的重组质粒探针。该探检测灵敏度在Southern印迹中达1pg,在点印迹中为5pg。用此探针以Southern印迹方式配合PCR技术检测乙肝病人血清中的HBV DNA,在53例PCR产物电泳检测阴性的样品中,Southern杂交又检出18例阳性。 相似文献
18.
用微孔板杂交技术检测聚合酶链反应(PCR)扩增产和提将PCR技术和类似ELISA的技术结合起来的一种方法,它使PCR的敏感性提高100倍,通过探针杂交使其更具特异性,并可通过酶联检测系统使结果客观化,同时又具有简便、快速的特点,在基础和临床应用上前景看好。 相似文献
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用日本血吸虫部分cDNA表达质粒文库免疫小鼠产生的保护性效果 总被引:2,自引:0,他引:2
寻找保护性效果更好的抗原分子一直是抗血吸虫病疫苗研发领域的热点和难点。国内外筛选日本血吸虫 (Schisto somajaponicum)保护性抗原分子采取的主要策略有 2种 :一是通过构建血吸虫某一生活史cDNA文库 ,采用探针 (核酸或抗体 )从文库或文库表达产物中筛选出特异性抗原基因 ,再逐一评估其保护性效果。该策略的主要缺陷是筛选操作费时费力 ,且效率不高。另一途径则是根据已知的曼氏血吸虫或其它种 (株 )保护性抗原基因序列 ,通过PCR或核酸探针等技术筛选与之同源的相应抗原分子 ,这一方法 (尤其是PCR方法 )尽… 相似文献
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用聚合酶链反应检测产蛋下降综合症病毒核酸的研究 总被引:6,自引:0,他引:6
根据对EDS-DNA重组质粒pTEZP3和pTEZP28的核酸序列分析结果,设计了两对引物,它们均能从EDS-DNA上扩增出一个特异片段,其长度分别为238bp和209bp。经比较,PCR比血球凝集试验至少灵敏200倍,比核酸杂交试验灵敏千万倍,对100份自然发病鸡的肛拭子,血液和软壳蛋样品的检测结果表明;PCR的阳性出率远高于酸杂交试验,并用病毒分离方法证实了PCR对野外病料的检出结果是可信的。 相似文献