人白介素6与其受体结合特定结构域的预测

借助人白介素6的核磁共振构象, 以人生长因子受体为模板同源模建的人白介素6受体空间构象, 通过表观静电势分析, 结合空间构象的互补性对人白介素6与其受体进行分子对接, 在分子力学优化、分子动力学动态模拟的基础上获得稳定的复合物结构, 从理论上预测人白介素6与其受体相互作用的结构域, 进一步确定影响人白介素6与其受体相互作用的特定位点, 为确定靶蛋白人白介素6的活性部位、利用计算机寻找和辅助设计新的拮抗剂提供理论依据.     

ZBTB40基因与中国汉族人群和美国高加索人群骨密度的关联研究

最近的全基因组关联研究发现ZBTB40(zinc finger and BTB domain containing 40)基因是一个潜在的调节骨密度的新基因,为了可靠地验证该基因与骨密度的关联关系,采用精细定位关联研究来检测ZBTB40基因内及其附近的SNPs与骨密度的关系.首先在中国样本(1 627个不相关的汉族样本)和美国样本(2 286个不相关高加索样本)中对ZBTB40基因的50个SNPs进行基因分型,然后采用Plink软件检测ZBTB40基因与腰椎和髋部骨密度的关联关系.证实了以前报道的SNPs rs7524102与腰椎和髋部骨密度的关联关系.另外还发现5个SNPs(rs10917209、rs6426748、rs4433361、rs3856183和rs7550872)与腰椎和髋部骨密度相关联.其中最显著的SNP是位于ZBTB40基因上游区域的rs6426748,其与腰椎骨密度的关联P值为9.82×10-4,多重检验校正后仍然显著.连锁不平衡分析表明rs6426748与rs10917209,rs7524102和rs7550872呈现高度连锁关系,位于长度为27 kb的单体型块内,因此ZBTB40基因的功能致病位点可能是rs6426748或该单体型块内某一未分型的SNP.     

钙敏感受体(CaSR)基因986、990多态性与尿石症的相关性研究

目的:探讨钙敏感受体(Ca SR)基因单核昔酸多态性与泌尿系结石的关系。方法:选取90例黑龙江地区的泌尿系结石患者及90例健康对照者外周血标本中的基因组DNA,采用PCR(聚合酶链反应)结合DNA测序,检测并分析Ca SR基因的单核苷酸多态性位点的分布。结果:泌尿系结石组和对照组Ca SR基因第986位、990位频率分布符合Hardy-Weinberg定律,其基因型分布频率在泌尿系结石患者和健康对照者中差异无统计学意义(P0.05),但在泌尿系结石患者组内Ca SR第990位GG纯合子和RG杂合子出现频率明显偏高,差异有统计学意义(P0.05)。结论:Ca SR基因第7外显子第986、990多态性位点与泌尿系结石的形成无直接相关性,但第7外显子第990位A/G单核苷酸多态性可能与泌尿系结石的形成密切相关。     

PHACTR3基因与中国汉族和美国高加索人群骨密度的关联研究

研究组前期的全基因组关联研究发现PHACTR3基因与骨折关联,为了检测该基因与骨密度的关联关系,采用精细定位关联研究来检测PHACTR3基因内及其附近的SNPs与骨密度的关系。首先在中国样本（1627个不相关的汉族样本）和美国样本（2286个不相关高加索样本）中对PHACTR3基因的140个SNPs进行基因分型,然后采用Plink软件检测PHACTR3基因与腰椎和髋部骨密度的关联关系。发现研究组以前报道的与骨折关联的SNPs rs1555364和rs6064822与腰椎和髋部骨密度关联（P=4．89×10^-2-1．26×10^-2）。另外还发现位于PHACTR3基因内含子中3个SNPs位点（rs6027138,rs1182531和rs1182532）与中国人群和白人腰椎骨密度均显著关联,将中国人与白人样本合并起来进行荟萃分析（Meta—analysis）,得到合并P值为1．40×10^-3到4．00×10^-4,另外发现rs6064820与髋部BMD相关联,合并P值为6．70×10^-3。本研究进一步证实了PHACTR3基因在骨密度变异中的作用,对骨质疏松发病机制的认识提供了新的理论依据。     

心肌梗死大鼠钙敏感受体表达与心肌细胞凋亡的变化

目的:观察大鼠急性心肌梗死后不同时间心肌钙敏感受体(CaSR)的表达和心肌细胞凋亡的变化情况。方法:健康Wistar大鼠随机分为假手术组(Sham)和心肌梗死(AMI)组,通过结扎左侧冠状动脉前降支的方法,建立大鼠心肌梗死模型,分别在手术后1、2、4周(每组成功存活n=5)检测心脏形态学和血流动力学的改变,检测心肌组织中CaSRmRNA和蛋白的表达,以及Bax、Bcl-2、caspase-3和caspase-9蛋白的表达,检测血清中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)活性和肌钙蛋白(cTnT)水平,观察心肌细胞凋亡情况。结果:和Sham组相比,随着心肌梗死的发展,AMI组大鼠心肌组织CaSR的mRNA和蛋白的表达、细胞凋亡指数均明显增加(P<0.05),心肌细胞超微结构损伤严重;左心室收缩压(LVSP)、左心室内压最大上升速率(+dp/dtmax)(mmHg/s)和最大下降速率(-dp/dtmax)(mmHg/s)减少,左心室舒张末期压(LVEDP)明显增大(P<0.05);AMI组血清cTnT水平、CK和LDH活性均升高(P<0.05),随着心肌梗死的发展,cTnT水平和CK活性逐渐降低,LDH变化不明显。心肌组织中促凋亡相关蛋白Bax、caspase-3、caspase-9表达增多,抑制凋亡的相关蛋白(或因子)Bcl-2表达减少(P<0.05)。结论:随着AMI的发展,AMI组大鼠心肌组织中CaSR的mRNA和蛋白的表达增多,细胞凋亡数增加,表明CaSR参与了心肌梗死的发展,其机制可能与促进细胞凋亡有关。     

钙敏感受体在骨代谢中的研究进展

钙敏感受体感受细胞外的钙离子水平,调控一系列激素的释放以维持机体的钙稳态。钙稳态的调节过程与骨代谢相偶联,钙敏感受体通过直接或间接对破骨和成骨细胞的调控,动员或者抑制骨钙入血。虽然钙敏感受体已被证实调控骨代谢,但是详尽的调控机制仍在不断探究中。目前认为细胞外的高钙水平会激活钙敏感受体,抑制甲状旁腺激素分泌并促进降钙素释放,进而破骨细胞被抑制,成骨细胞动员,增加了骨质合成。本文就近年来关于钙敏感受体调控骨代谢的研究进展作一综述,为促进钙敏感受体及相关作用因子治疗骨代谢疾病的研究提供参考。     

钙敏感受体基因多态性E942K通过Ca2+和ERK1/2通路促进胃癌细胞增殖

本研究旨在探究钙敏感受体(calcium-sensing receptor, CaSR)的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNP)E942K对胃癌细胞增殖的影响及其机制。对46例胃癌患者和50例正常对照进行基因型检测。应用CaSR E942K突变质粒和野生型质粒转染SGC-7901和HEK-293构建细胞模型,采用CCK8和细胞克隆形成实验检测E942K突变对细胞增殖能力的影响,用钙显影成像技术检测E942K突变对钙信号的影响,并采用Western blot检测E942K突变后下游信号通路关键蛋白ERK1/2和β-catenin磷酸化水平的变化。结果显示,胃癌患者CaSR E942K的突变率显著高于正常对照(P 0.05)。CaSR E942K突变显著提高了SGC-7901胃癌细胞及HEK-293细胞的增殖能力、细胞内钙信号以及ERK1/2的磷酸化,却不影响β-catenin的磷酸化。以上结果提示,CaSR的E942K突变可能通过增强细胞内钙信号和ERK1/2磷酸化,最终促进了胃癌细胞的增殖,这些结果对胃癌的诊断和靶向治疗具有潜在的临床意义。     

钙敏感受体通过JNK途径参与内毒素心肌损伤*

目的: 观察内毒素所致的心肌损伤中,钙敏感受体(CaSR)对c-Jun氨基末端激酶 (JNK)途径的影响。方法: 腹腔注射内毒素(5 mg/kg)制作新生大鼠内毒素心肌损伤模型,Wistar新生大鼠随机分为6组:对照组、内毒素组、CaSR激动剂组、CaSR抑制剂组、JNK抑制剂组、CaSR抑制剂+JNK抑制剂组。HE染色观察心肌形态, 测定血清乳酸脱氢酶(LDH)含量,PCR检测IL-6的mRNA表达,Western blot检测CaSR及JNK的蛋白表达。结果: 与对照组相比,内毒素组心肌损伤加重,LDH含量、IL-6的mRNA表达、CaSR和JNK的蛋白表达均明显增加(P＜0.05)。与内毒素组比较,CaSR激动剂组心肌损伤加重,LDH含量、IL-6的mRNA表达、CaSR和JNK的蛋白表达增加(P＜0.05); CaSR抑制剂组心肌损伤减轻,LDH含量、CaSR和JNK的蛋白表达减少(P＜0.05);JNK抑制剂组心肌损伤进一步减轻,LDH含量、IL-6的mRNA表达、CaSR和JNK的蛋白表达均减少(P＜0.05);CaSR抑制剂+JNK抑制剂组心肌损伤明显减轻,LDH含量、IL-6的mRNA表达、CaSR和JNK的蛋白表达进一步减少(P＜0.05)。结论: CaSR可能通过JNK途径参与内毒素所致的心肌损伤。     

动脉粥样硬化大鼠心肌梗死时钙敏感受体表达的变化及其作用机制

目的:探讨动脉粥样硬化大鼠心肌梗死时钙敏感受体表达的变化及其作用机制。方法:Wistar大鼠随机分为4组:正常对照组(Control);异丙肾上腺组(ISO);动脉硬化组(AS);动脉硬化+异丙肾上腺素组(AS/ISO)。采用腹腔注射VD3和高脂饮食及大剂量异丙肾上腺素(ISO 200 mg/kg)皮下注射复制大鼠在体动脉粥样硬化心肌梗死模型,应用RT-PCR测定心肌组织中Ca SR、Bax、Bcl-2和caspase-3 m RNA的表达变化;TUNEL染色观察心肌细胞凋亡情况;光镜观察心肌形态学变化;紫外分光法检测血清肌酸激酶(CK)、电化学免疫发光法检测肌钙蛋白T(c Tn T)水平。结果:与正常组比较,ISO组CK活性、c Tn T水平以及Ca SR、Bax和caspase-3的表达均增加,同时Bcl-2表达减少,心肌细胞损伤严重,AS/ISO的心肌损伤进一步加重。结论:Ca SR的表达增多参与了动脉硬化大鼠心肌梗死的发生,其机制可能与促进心肌细胞凋亡有关。     

人白介素6受体基因在痘苗病毒载体系统中的表达

人ＩＬ－６受体是一个在各种细胞上广泛表达的跨膜糖蛋白分子,是ＩＬ－６发挥细胞效应所必需的。本文通过将ＩＬ－６ＲｃＤＮＡ重组到痘苗病毒的ＴＫ基因中构建成重组痘苗病毒ＶＩＬ６Ｒ。细胞原位杂交和ＡＰＡＡＰ染色结果表明,感染ＶＩＬ６Ｒ后的Ｖｅｒｏ细胞中,ＩＬ－６Ｒ在ｍＲＮＡ和蛋白水平上均呈现较强的表达。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析所表达的分子量为８０ｋＤ,表明所表达的产物是糖基化的。ＩＬ－６结合试验表明,表达的膜ＩＬ－６Ｒ能够结合ｒＩＬ－６,说明它是有功能的。利用ＶＩＬ６Ｒ免疫小鼠后,能够刺激较强的抗体产生。从而为进一步研究ＩＬ－６Ｒ的信号传导和构效关系提供了基础。     

The Human Calcium-Sensing Receptor and Interleukin-6 Genes are Associated with Bone Mineral Density in Chinese

Calcium sensing receptor (CASR) is a central factor involved in calcium metabolism. Interleukin-6 (IL-6) is a pleiotropic cytokine that plays an important role in osteoclast differentiation. Thus, both CASR and IL-6 are important in bone and mineral metabolism and are prominent candidate genes for osteoporosis. The study aimed to test association and/or linkage between the CASR and IL-6 genes with bone mineral density (BMD) variation in a Chinese population. A cytosine-adenine (CA)_n repeat polymorphism in the CASR gene and the IL-6 gene was genotyped, respectively, in 1 263 subjects from 402 Chinese nuclear families. Employing tests implemented in the program QTDT (quantitative transmission disequilibrium tests), a significant total association of the CASR (CA)₁₂ allele (P = 0.006) and (CA)₁₈ allele (P = 0.02) with BMD at the femoral neck was found. For the IL-6 gene, significant within-family associations were found between the (CA)₁₄ allele and BMD at the total hip (P = 0.021), the femoral neck (P = 0.041), and the intertrochanteric region (P = 0.029). A significant linkage was also observed between IL-6 CA repeat polymorphism and BMD at the spine (P = 0.001). The results suggest that the CASR gene and the IL-6 gene may have effects on BMD variation in Chinese.     

北京地区汉族妇女雌激素受体基因XbaI多态性与骨密度和体重指数的关系

为探讨北京地区汉族妇女雌激素受体（ER）基因XbaI多态性与骨密度的关系,采用双能X线吸收仪检测腰椎、股骨及前臂骨密度;采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）法,对179例北京地区汉族妇女ER基因XbaI多态性进行分析。北京地区汉族妇女ER基因XX、Xx和xx基因型频率分布为0.302、0.464和0.234,绝经前与绝经后妇女XbaI型基因频率分布有明显差异,绝经后妇女腰椎骨密度（0.836±0.18）g/cm²明显低于绝经前妇女（1.038±0.14);绝经后妇女骨质疏松症的发病率为54%。ER基因XbaI基因型频率分布有明显的种族差异并受绝经影响,ER基因XbaI基因型与骨密度无明显相关性。与体重和BMI有明显相关性。     

绝经后健康妇女甲状旁腺激素基因多态性与骨密度的关系

利用限制性片段长度多态性分析（RFLP）研究北京地区绝经后妇女甲状旁腺激素（PTH）基因多态性与骨密度的关系。筛选健康、无亲缘关系的绝经后妇女185例, 应用双能X射线骨密度仪（DEXA）检测腰椎等部位的骨密度,用PCR-RFLP方法检测绝经后妇女的PTH基因型。绝经后健康妇女中bb、Bb、BB三种基因型的分布频率分别为7.56%、28.11%和64.32%。方差分析显示前臂部位骨密度与PTH基因相关。除华氏三角区外,BB基因型各部位的骨密度值均高于Bb、bb基因型。Logistic回归分析结果显示,bb基因型组骨质疏松与正常妇女存在显著差异（P＜0.001）。 PTH基因中B基因型可能对维持骨量具有一定的作用。     

α2-HS 糖蛋白基因与中国人群的髋部骨大小的相关性研究

骨大小是一种独立于骨密度（BMD）的骨质疏松性骨折的重要风险因子。由于其高遗传率,充分了解控制骨大小的遗传因素有很重要的临床意义。文章研究目的为检测中国人群中α2-HS糖蛋白基因（AHSG）多态性和腰椎及髋部骨大小变异之间的关联。我们总共征集了来自中国401个核心家庭（包括父母亲及至少一个女儿）的1260个研究样本,并且分型了AHSG基因第7个外显子的Sac Ⅰ位点多态性。该位点核苷酸的替换（C→G）引起第238号丝氨酸被苏氨酸取代,因此可能对基因功能有影响。在任何骨骼位点,没有发现显著的群体分层。发现-HSG基因SacⅠ位点多态性和转子间（P=0．019）以及全髋的（P=0．035）骨大小呈显著性相关。该多态性位点能分别解释转子间和全髋3．74％和3．16％的骨大小变异。连锁分析没有检测到显著性结果,可能的主要原因是样本中同胞对的数目较少,统计效力较低,以及SacⅠ位点多态相对于微卫星标记对连锁分析提供的信息量少。结果表明,月HSG基因多态性可能和中国人群中髋部骨大小变异有关。     

羊骨酶解发酵液钙鳌合物对骨质疏松大鼠骨密度和骨代谢生化指标的影响

目的探讨羊骨酶解发酵液钙螯合物（SBEF-Ca）对雌激素缺乏造成的骨质疏松的防治作用。方法 40只3.5月龄的Sprague-Dawley大鼠,按体重随机分为正常组（假手术＋蒸馏水）、模型对照组（去卵巢＋蒸馏水）和高、中、低3个剂量组（去卵巢＋SBEF-Ca）。术后12 d,持续灌胃11周后,测定股骨密度、长度以及血清中反映骨代谢的主要生化指标。结果模型对照组大鼠股骨密度和长度显著减小,各剂量组均可扭转这种减小趋势并使股骨密度和长度维持在正常组水平,其中高剂量组的股骨密度显著大于中、低剂量组;各剂量组的股骨长度差异不显著;所有大鼠的血Ca、血P水平差异无显著性;模型对照组的血清碱性磷酸酶（ALP）、骨钙素（BGP）水平明显升高,而各剂量组的ALP、BGP水平与正常组差异不显著,且高剂量组ALP水平显著低于中、低剂量组,中、高剂量组的BGP水平（P〉0.05）显著低于低剂量组。结论低、中、高剂量的SBEF-Ca对绝经后骨质疏松症有预防作用。     

Association between VDR Apal Polymorphism and Hip Bone Mineral Density Can Be Modified by Body Mass Index:A Study on Postmenopausal Chinese Women

Osteoporosis is a major public health problem for old people.Genetic factors are considered tobe major contributors to the pathogenesis of postmenopausal osteoporosis.The vitamin D receptor(VDR)gene is a prominent candidate gene for the regulation of postmenopausal bone mass;however,despite exten-sive studies,controversy remains regarding its association with postmenopausal body mineral density(BMD)variation.In this study,a total of 260 healthy postmenopausal Chinese women were genotyped at the VDRApaI locus using polymerase chain reaction(PCR)-restriction fragment length polymorphism (RFLP).Rawhip BMD was significantly associated with VDR ApaI polymorphism with and without adjusting for age(P=0.015 and 0.040,respectively).This genetic effect can explain 3.32% of hip BMD variation.However,the significant association vanished after correcting for both age and body mass index(BMI)(P=0.169).Inaddition,we observed a significant association between VDR ApaI polymorphism with unadjusted BMI(P=0.042)or BMI adjusted for age(P=0.049).The raw hip BMD was also found to be significantly corre-lated with BMI(r=0.517,P=0.0001),with BMI explaining 26.35% of the variation of hip BMD.All of thesefacts prompt us to conclude that the significant association between the VDR ApaI genotype and hip BMDmay be modified by BMI in postmenopausal Chinese women.Our findings may partially explain the earlierinconsistent association results concerning the VDR gene and BMD,and highlight the importance of incorpo-rating covariates such as BMI into osteoporosis association studies.     

老年男性血清脂联素与骨密度的关系

目的：研究老年男性血清脂联素与骨密度和骨转化指标之间的关系。方法：对165例男性老年患者采用双能量X线吸收测量仪测定骨密度、肌肉及脂肪量,同时测定患者血清脂联素、骨碱性磷酸酶、甲状旁腺素、25羟维生素D和I型胶原β羧基端肽水平。结果：165例年龄超过58岁男性患者（平均年龄69.4±6.4岁,体重指数24.9±3.1 kg/m2）,脂联素与股骨颈骨密度相关系数为-0.31（P〈0.05）、与全髋骨密度相关系数为-0.23（P〈0.05）,年龄、BMI和脂肪量校正后,脂联素仅与股骨颈骨密度有显著相关（r=-0.25,P〈0.05）;脂联素与骨碱性磷酸酶正相关（r=0.28,P〈0.01）,混杂因素校正后,相关仍具有显著性（r=0.19,P〈0.05）;脂联素与I型胶原β羧基端肽呈正相关（r=0.15,P〈0.05）。结论：老年男性血清脂联素与股骨颈骨密度和骨ALP密切相关。     

重组人骨保护素对激素性股骨头坏死患者骨密度及髋关节Harris评分 的影响

目的:探讨重组人骨保护素对于激素性股骨头坏死患者的骨密度和髋关节Harris评分的影响。方法:选取我院骨科已经确诊的110例激素性股骨头坏死患者,随机分为对照组(给予仙灵骨葆胶囊)和观察组(给予仙灵骨葆胶囊和重组人骨保护素),连续治疗4周,检测并比较两组患者治疗前后的骨密度、髋关节Harris评分、血清抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、Ⅱ型胶原羧基端端肽(CTX-Ⅱ)水平以及复发率变化。结果:与对照组相比较,观察组患者腰椎骨和股骨近端的骨密度较高平(P0.05);髋关节Harris评分总有效率(92.73%)显著高于对照组(76.36%)(P0.05)。两组血清TRAP及CTX-Ⅱ水平显著低于治疗前,且试验组血清TRAP及CTX-Ⅱ水平显著低于对照组(P0.05),与对照组相比,观察组复发率较低(P0.05)。结论:重组人骨保护素能够抑制骨吸收,提高骨密度和强度,改善髋关节功能,有望成为激素性股骨头坏死的新型治疗方法。