人前列腺生长因子的分离纯化及生物活性鉴定

从人良性增生前列腺组织中经硫酸铵沉淀和肝素－琼脂糖凝胶层析纯化出人前列腺生长因子（ｈＰＧＦ）,纯化倍数约１０００倍,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和等电聚焦电泳示分子量约为１７ｋＤ、等电点同标准ｂＦＧＦ,利用分离培养的人前列腺间质成纤维细胞进行活性鉴定,发现以１．３～１．７ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ洗脱部分为ｈＰＧＦ,活性最高,对间质成纤维细胞有显著刺激增殖作用。     

重组人粒细胞集落刺激因子的纯化

重组人粒细胞集落刺激因子（ｒｈＧ－ＣＳＦ）在工程菌ｐＣＧ－１／ｒｈＧ－ＣＳＦ／ＤＨ５ａ中以无活性的包涵体形式大量表达。经过菌体破碎分离包涵体、包涵体变性复性后,ｒｈＧ－ＣＳＦ的活性得到恢复。用离子交换和疏水层析纯化了ｒｈＧ－ＣＳＦ,比活性达１．５７×１０８ｕ／ｍｇ,纯度大于９８％。     

豆壳过氧化物酶的分离纯化及其性质研究

从豆壳抽提液经硫酸铵分级沉淀,ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０离子交换层析,ＣｏｎＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲合层析和Ｂｉｏ－ＧｅｌＰ－６０凝胶过滤,纯化了豆壳过氧化物酶（ｓｏｙｂｅａｎｈｕｌｐｅｒ－ｏｘｉｄａｓｅ,ＳｈＰ）．纯化酶的比活力为７０７７Ｕ／ｍｇ,在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上显示出一条蛋白质带．ＳｈＰ分子量为３８０００,等电点为３．９;ＳｈＰ为一含血红素的糖蛋白,含糖量为１８．７％,光谱学分析揭示,在４０６ｎｍ处有一典型的Ｓｏｒｅｔ带,在５１０ｎｍ和６４０ｎｍ处有特征吸收峰．酶反应的最适ｐＨ在４．０附近,最适温度为４５℃;在ｐＨ２．５～１２．０之间较稳定,７５℃,保温６０ｍｉｎ,酶活力残余６８％,ＳｈＰ是一种良好的耐酸碱、耐热过氧化物酶．动力学分析求得ＳｈＰ的表观Ｋｍ（愈创木酚）为１．６２ｍｍｏｌ／Ｌ,表现Ｋｍ（Ｈ２Ｏ２）为０．３４ｍｍｏｌ／Ｌ．在所测定的化学试剂中,Ｎ－３、ＣＮ－、Ｆｅ３＋、Ｆｅ２＋和Ｓｎ２＋对酶有较强烈的抑制作用,而重金属离子Ａｇ＋、Ｈｇ２＋、Ｐｂ２＋、Ｃｕ２＋、Ｃｒ３＋以及ＳＤＳ和ＥＤＴＡ对酶活力无显著影响     

粒细胞集落刺激因子(G-CSF)在大肠杆菌中的高效表达及快速纯化工艺的建立

基因工程重组人粒细胞集落刺激因子（ｒｈＧ－ＣＳＦ）主要用于癌症患者化疗后的粒细胞减少症．在正确克隆人Ｇ－ＣＳＦｃＤＮＡ的基础上,重点对Ｇ－ＣＳＦｃＤＮＡ的５′端进行了较为彻底的修饰,修饰后的基因插入ｐＢＶ２２０载体组建成功ｐＢＶ２２０／Ｇ－ＣＳＦ／２－１７４高效表达载体．表达后ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析其表达最高达５０％以上．根据Ｇ－ＣＳＦ表达形成包涵体这一特性,建立了一条简便、稳定,适用于大规模生产的分离纯化工艺流程．首先分离纯化包涵体,８ｍｏｌ／Ｌ尿素裂解包涵体,稀释复性蛋白,之后一步ＳＰ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ柱层析至均质．纯化的Ｇ－ＣＳＦ比活性达３．４×１０８Ｕ／ｍｇ蛋白,每升表达菌液回收的Ｇ－ＣＳＦ总活性达１．０６×１０１１Ｕ．纯化产物的Ｎ－端氨基酸序列分析表明,对甲硫氨酸的去除彻底,用于人体时可能具有较小的免疫原性和毒性     

菠菜铁型超氧化物歧化酶的纯化及性质

用聚丙烯胺梯度凝胶电泳法检测出菠菜ＳＯＤ同工酶谱带中含３条Ｆｅ－ＳＯＤ活性带,菠菜叶Ｆｅ－ＳＯＤ粗提取液经硫酸铵分部沉淀,ＤＥＡＥ－纤维素－Ａ５２和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００柱层析,纯化出单一的Ｆｅ－ＳＯＤ活性带,纯化酶的分子量为４２．６ｋＤ,亚基分子量为２１ｋＤ。对金属元素的分析表明,该酶每分子含２．６个Ｆｅ原子,该酶紫外区最大吸收峰为２７８ｎｍ,等电点为４．６,氨基酸组成和其它来源的Ｆｅ－ＳＯ     

人主动脉硫酸乙酰肝素蛋白聚糖对培养的人血管壁细胞生长的作用

通过培养的人主动脉平滑肌细胞（ｈＡＳＭＣ）及脐静脉内皮细胞（ｈＵＶＥＣ）,应用３Ｈ－ＴｄＲ参入、Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析、逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）、放射免疫分析（ＲＩＡ）、和紫外比色法等技术观察了人主动脉中硫酸乙酰肝素蛋白聚糖（ＨＳＰＧ）对ｈＡＳＭＣ和ｈＵＶＥＣＤＮＡ合成的作用及对血小板源生长因子（ＰＤＧＦ）、ＰＤＧＦ受体、转化生长因子β（ＴＧＦ－β）、内皮素－１（ＥＴ－１）或碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）基因表达和肾素－血管紧张系统（ＲＡＳ）的影响,结果显示,ＨＳＰＧ明显抑制培养的ｈＡＳＭＣ基础的ＤＮＡ合成（ｃｐｍ值为：１０３８５±３２６３ｖｓ,２５５４１±６４２１,Ｐ＜０．０１）及外源性ＰＤＧＦ诱导的ＤＮＡ合成（ｃｐｍ值为：９８７８±１９４７ｖｓ．１３４８１±４４ｌ０,Ｐ＜０．０５）;抑制ＰＤＧＦＡ链、ＴＧＦ－Ｂｐ和ＥＴ－１ｍＲＮＡ表达,提高ＰＤＧＦａ和β受体ｍＲＮＡ的表达;显著降低ｈＡＳＭＣ培养液中血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）的浓度和血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）的活性,推测ＨＳＰＧ抑制ＰＤＧＦＡ链、ＴＧＦ－β及ＥＴ－１ｍＲＮＡ表达,降低ＡＣＥ活性及ＡｎｇⅡ浓度是其抑制ｈＡＳＭＣ增殖的重要机     

菜豆幼苗EPSP合成酶的分离纯化和它的部分性质

利用硫酸铵分级沉淀,Ｓｅｐｈｅｄｅｘ Ｇ－５０凝胶柱层析,ＦＰＬＣ Ｍｏｎｏ－Ｑ和磷酸纤维素离子层析法从菜豆幼苗中分离提纯了ＥＰＳＰ合成酶。该酶被纯化２９６１．６倍,比活性达到６２１９．４ｎｍｏｌｍｇ＾－１蛋白ｍｉｎ＾－１。该酶分子量经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测为５１ｋＤ,等电点为ｐＨ５．７,酶促反应最适ｐＨ７．５,最适温度４５℃。６．２μｍｏｌ／Ｌ的除草剂草甘膦能抑制ＥＰＳＰ合成酶活性的５０％。     

人肝癌细胞的IGF—BP1分子特性及内源性蛋白酶对其降解的研究

用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳、高效液相色谱（ＨＰＬＣ）、质谱等方法,研究了人肝癌细胞（ＨｅｐＧ２）分泌的胰岛素样生长因子结合蛋白－１（＾３５Ｓ－ＩＧＦ－ＢＰ１）的分子结构、特性,及其被内源性蛋白酶降解的特点,＾３５Ｓ－ＩＧＦ－ＢＰ１的经抗体免疫沉淀、生化分离,纯化为均一体,其分子是由多个亚构成的蛋白质,分子量约为２７ｋＤ;细胞ＵＭＲ、ＨｅｐＧ２、Ｈ３５ＢＲＬ３Ａ分泌的蛋白酶能将＾３５Ｓ－ＩＧＦ－ＢＰ１催     

湖南尖吻蝮蛇毒两个出血毒素的纯化和理化性质

经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５凝胶过滤,ＱＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０和ＣＭ－ＳｅｐｈａｄｅｘＣ－２５离子交换层析的步骤,从湖南产尖吻蝮（Ｄｉｅｎａｇｋｉｓｔｒｏｄｏｎａｃｕｔｕｓ）蛇毒中纯化出两个出血毒素（ＤａＨＴ－１和ＤａＨＴ－２）．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得分子量均为２３．５ｋＤ,ＩＥＦ－ＰＡＧＥ测得等电点分别为５．６和５．２,两者具有相似的氨基酸组成,其中酸性氨基酸（Ａｓｘ,Ｇｌｘ）分别占２３％和２４％,ＤａＨＴ－１和ＤａＨＴ－２的最小出血剂量（ＭＨＤ）分别为０．５μｇ和０．８μｇ。都具蛋白水解酶活性,无对ＴＡＭＥ,ＢＡＥＥ的水解活性和ＰＬＡ２酶活性．两者的蛋白水解酶活力与出血活性并非正相关．ＤａＨＴ－１和ＤａＨＴ－２的最适温度分别为３５℃和４０℃,最适ｐＨ为６－９,对热均不稳定,温度高于６０℃活性完全丧失。金属离子的分析显示每摩尔毒素蛋白约含０．５ｍｏｌ的Ｚｎ,１ｍｏｌ的Ｃａ,较多的Ｎａ、Ｋ、Ｍｇ,不含Ｃｏ。     

抗吗啡活性肽的分离纯化及一级结构测定

报道了一种新的具有抗吗啡镇痛活性的肽的分离纯化,并进行部分一级结构测定．狗脑先经醋酸提取,冷冻成干粉,然后上ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０和Ｓ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦ．Ｆ柱,最后经ＲＰ－ＨＰＬＣ纯化,鉴定纯度后,测定其抗吗啡镇痛活性,通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ法测得其分子量为８．９ｋＤ．氨基酸序列分析测得该肽的Ｎ端序列为：Ｖ－Ｉ－Ｓ－Ｖ－Ａ－Ｄ－Ｗ－Ｔ－Ｑ－Ｉ－Ｆ－Ｔ－Ｍ－Ｒ－Ｙ－Ｆ－Ｉ－Ｔ－Ｇ－Ｙ－Ｈ－Ｑ－Ｄ－Ｙ－Ｘ－Ｇ－Ｌ－Ｈ－Ｉ－Ｇ．经部分一级结构同源序列检索,未见与此有同源的蛋白质的报道,暂命名该肽为ＣＣ４肽     

人PSP94全长cDNA的获得及PSP94-TNF~Δ融合蛋白的构建

利用ＲＴ－ＰＣＲ从人肥大前列腺组织钓取９４个氨基酸的人前列腺分泌蛋白（ＰＳＰ９４）全长ｃＤＮＡ,序列分析结果与文献报道的完全一致．将ＰＳＰ９４成熟肽与人ＴＮＦα衍生物（ＴＮＦΔ）通过Ｌｉｎｋｅｒ－ＳＡＰＧＴＰ在基因水平上融合成５′ＰＳＰ９４－ＴＮＦΔ,融合基因ＤＮＡ序列分析结果与设计的相符合．５′ＰＳＰ９４－ＴＮＦΔ在大肠杆菌中表达产物分子量约为３１ｋＤ,表达量约占菌体总蛋白量的３５％．以Ｌ９２９细胞和人前列腺癌细胞株ＰＣ－３为靶细胞进行细胞毒分析结果表明,５′ＰＳＰ９４－ＴＮＦΔ融合蛋白既具有ＴＮＦ的细胞毒活性,又具有对前列腺癌细胞ＰＣ－３的杀伤作用     

蛇毒蛋白C激活物的初步研究

目的：研究蝮蛇毒蛋白Ｃ激活物的分离纯化与理化性质。方法：经ＤＥ５２－纤维素、ＣＭ－Ｓｐｈａｄｅｘ Ｃ－５０、Ｇ－７５柱层析,从安徽芜湖产蝮蛇（Ａｇｋｉｓｔｒｏｄｏｎ ｈａｌｙｓ）蛇毒中纯化一种均一的蛋白Ｃ激活物（ＰＣＡ）。结果：ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定分子量约为１５５０００Ｄａ,ＩＥＦ－ＰＡＧＥ测定等电点为４．８。它能使人血浆的ＫＰＴＴ明显延长,显示出强烈的抗凝活性。通过中和试验与显色肽定量实验表明,     

表达新城疫病毒F48E8株融合蛋白基因的重组鸡痘病毒及其免？…

将将城疫病毒（ＮＤＶ）Ｆ４８Ｅ８株融合蛋白基因导入鸡痘病毒（ＦＰＶ）插入载体ｐＥＧＦ１１７５－１的Ｐ７．５启动子下游,得到转移载体ｐＦＧ１１７５－１重组质粒。采用脂质体转染技术,将该质粒转染ＦＰＶ２８２Ｅ株感染的鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）。,经过多次蓝斑筛选纯化,获稳定的重组病毒ｒＦＰＶ－ＮＤＦ。间接免疫荧光试验表明,ｒＦＰＶ－ＮＤＦ感染的ＣＥＦ中表达了ＮＤＶ的融合蛋白。用ｒＦＰＶ－ＮＤＦ免疫的ＳＦ     

神经营养因子GDNF编码顺序的克隆及表达产物的纯化

根据基因库中的顺序,设计了胶质细胞源神经营养因子（ＧＤＮＦ）基因的ＰＣＲ引物,以此从人基因组ＤＮＡ中扩增并克隆了ＧＤＮＦ的编码序列,经ＤＮＡ测序确认后,该片段克隆到表达质粒ｐＥＴ－３ａ中,转化大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）．培养的重组菌经ＩＰＴＧ诱导,在Ｔ７启动子调控下表达出ｈＧＤＮＦ蛋白．经电泳分析表明ＧＤＮＦ主要存在于细菌包涵体中．从培养菌中制备包涵体,经充分洗涤,溶解于含８ｍｏｌ／Ｌ尿素的变性缓冲液中．经ＳＰ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ柱层析分离,梯度洗脱,以１５％ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检查含ＧＤＮＦ的部分．将含单体ＧＤＮＦ部分进行复性,再次用ＳＰ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ离子柱分离同源二体ＧＤＮＦ．最后经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ制备电泳纯化,纯度大于９５％．经Ｎ端测序表明序列正确．经测定,每升培养菌可得约１０ｍｇ纯化的ＧＤＮＦ．     

林生山黧豆谷氨酸脱羧酶的分离纯化及部分性质的研究

以林生山黧豆为材料,利用硫酸铵分段盐析,丙酮沉淀,ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ离子交换柱层析,ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ３００凝胶过滤柱层析及ＦＰＬ－ＭｏｎｏＱ柱层析技术,以聚酰胺薄膜层析荧光定量法为酶活力检测手段,分离纯化了谷氨酰羧酶,达到电泳银染纯,纯化后的林生山黧豆谷氨酸脱羧酶活力达３７５．０９Ｕ．ｍｇ＾－１,纯化保数３８．２倍,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定,其亚基分子量为７０ｋＤ,经工ＰＡＧＥ确定     

人胚肺成纤维细胞株纤连蛋白结构域N—糖链结构研究

本文应用明胶、肝素亲和层析二步法首先纯化了人胚肺成纤维细胞培养液的纤连蛋白（Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ,Ｆｎ）,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鉴定为一条带,然后用胰糜蛋白酶消化纯化的Ｆｎ所获得的酶解液,经分离分别得到明胶结合片段和肝素结合片段,再应用凝集素－ＨＲＰ染色的Ｗｅｓｔｅｒｎ转移电泳法研究糖链结构,结果证实：１．Ｆｎ中明胶结合片段（４４ｋｄ）中含有二天线和多天线复杂型糖链,并接有平分型ＧｌｃＮＡｃ糖基、核     

地衣芽孢杆菌β—甘露聚糖酶的纯化及其性质的研究

地衣芽孢杆菌１Ｂａｃｉｕｕｓ Ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）ＢＬ－３０６产生的胞外β－甘露聚糖酶经硫酸铵分级盐析,ＤＥＡＥ－纤维素柱层析。Ｓｅｐｈａｄｅｘ－Ｇ１００柱凝胶过滤和ＤＥＡＥ－纤维素柱再层析分离纯化,得到ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）均一样品。用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得纯化后β－甘露聚糖酶分子量为２６０００道尔顿。用凝胶等电聚焦电泳（ＰＡＧＥＩＥＦ）测得等电点ＰＩ为５．０。该酶     

猪C1q的分离纯化与鉴定

猪Ｃ１ｑ由猪血清通过ＰＥＧ沉淀优球蛋白、低离子强度透析沉淀、ＩｇＧ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４８亲和层析、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００凝胶层析等步骤分离纯化,每３００ｍｌ血清可制得９．８ｍｇＣ１ｑ,产率为４６．７％。纯化的猪Ｃ１ｑ在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上显示出三条染色带,分别在２９、２６、２２ｋＤ处,薄层扫描结果表明纯度达９１％;纯化的Ｃ１ｑ保持了较高活性,终浓度为４μｇ／ｍｌ时仍可使致敏的绵羊红细胞出现明显的凝集现象。猪Ｃ１ｑ－ＥＬＩＳＡ结果表明,动物Ｃ１ｑ代替人Ｃ１ｑ应用于临床检测是可行的。     

山豆根木葡聚糖的研究

研究了山豆根中一种木葡聚糖的结构．用１ｍｏｌ／ＬＮａＯＨ提取,ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－２５离子交换柱层析,Ｆｅｈｌｉｎｇ试剂分级得到山豆根木葡聚糖组分ＳＳｂ－１ＦＡ,用完全酸水解,甲基化分析,部分酸水解,三氧化铬氧化和１Ｈ,１３ＣＮＭＲ等方法对其结构进行研究．结果表明：ＳＳｂ－１ＦＡ的分子量为２．６×１０４,比旋光度［α］２０Ｄ＝＋１０．９°（ｃ０．２２,Ｈ２Ｏ）,由Ｌ－Ｆｕｃ,Ｄ－Ｘｙｌ,Ｄ－Ｇａｌ和Ｄ－Ｇｌｃ组成,摩尔比为：２．９２９．９７．５５９．８．ＳＳｂ－１ＦＡ由１→４连接的β－Ｄ－Ｇｌｃ残基构成主链,分枝有α－Ｄ－Ｘｙｌ（１→,β－Ｄ－Ｇａｌ（１→２）α－Ｄ－Ｘｙｌ（１→等类型,部分非还原末端由Ｌ－Ｆｕｃ（１→构成．     

人胚肺成纤维细胞株纤连蛋白结构域N─糖链结构研究

本文应用明胶、肝素亲和层析二步法首先纯化了人胚肺成纤维细胞培养液的纤连蛋白（Ｆｉｂｒｏｎｅｏｔｈｅ,Ｆｎ）,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鉴定为一条带,然后用胰糜蛋白酶消化纯化的Ｆｎ所获得的酶解波,经分离分别得到明胶结合片段和肝素结合片段,再应用凝集素－ＨＲＰ染色的Ｗｅｓｔｅｎ转移电泳法研究糖链结构,结果证实：１．Ｆｎ中明胶结合片段（４４ｋｄ）中含有二天线和多天线复杂型糖链,并接有平分型ｇｌｃＮＡｃ糖基、核心力Ｆｕｃ。２肝素结合片段（３０ｋｄ）只含有二天线复杂型糖链,不含平分型ＧｌｃＮＡｃ糖基及核心Ｆｕｃ．