竹叶青蛇毒血小板聚集剂的分离纯化及生化特性

经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５凝胶过滤和ＦＰＬＣＭｏｎｏＱ阴离子交换柱层析及Ｓｕｐｅｒｏｓｅ－１２凝胶过滤,从竹叶青蛇的蛇毒中纯化到一个能诱导人血小板聚集的均一组分．经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳测定其分子量为６８０００左右．等电点为４．３．测定了它的氨基酸组成,对它活化血小板的作用机理进行了初步研究,结果表明它是一种强的血小板激动剂．     

竹叶青蛇毒凝集素的分离纯化及特性研究

利用亲和层析的方法从竹叶青蛇的蛇毒中分离纯化到一种新的凝集素。这种凝集素是半乳糖的,其糖结合活性依赖于钙离子;还可使兔红细胞凝集。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ的结果表明,在生理条件下这种凝集素是不均一的,包含单体、二体、三体和四体。其中主要是二体。单体分子量为２０ｋｄ。此凝集素的等电点为８．５。Ｎ端２０个氨基酸的序列已经测定,与响尾蛇毒凝集素的同源性很高,两者的半胱氨酸的位置相同。     

竹叶青蛇毒磷脂酶A2的分离纯化和性质研究

竹叶青蛇毒磷脂酶Ａ_２的分离纯化和性质研究冯波,吴卫甲,钱嵘,王克夷,周元聪（中国科学院上海生物化学研究所,２０００３１）关键词竹叶青蛇毒,磷脂酶Ａ_２;血小板聚集磷脂酶Ａ。在哺乳动物胰脏和蛇毒毒液中含量较丰富,其中蛇毒磷脂酶Ａ。除能水解甘油磷脂的第二...     

蛇毒血小板聚集抑制剂的研究进展

蛇毒血小板聚集抑制剂的研究进展孙林光综述管锦霞审校（广州医学院广州蛇毒研究所广州,５１０１８２）血小板是血液中最小的、具有多种功能的细胞,它在生理性止血以及血栓形成、动脉粥样硬化等病理过程中起着重要的作用［１］。蛇毒中广泛存在抑制血小板聚集的活性组分...     

广东眼镜王蛇毒酸性磷脂酶A2的分离纯化及抗血小板聚集作用

目的 研究眼镜王蛇毒中酸性磷酸脂酶Ａ２对血小板的作用。方法 采用ＣＭ－Ｓｅｐｈａｄｅｓｘ Ｃ－２５Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－７５,ＤＥＡＥ－Ｓｅｐ「ｈａｄｅｘＡ－２５,Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－７５多步柱层析法,聚丙烯酰胺产胶电泳,酸性磷脂酶Ａ２酶活性测定;血小板聚集实验。累进要从粗中分离纯化出一酸性磷脂酶Ａ２单体,分子量为１４ＫＤ;等电点ＰＩ３．８;ＰＬＡ２比值２０μｍｏｌ．ｍｇ＾－１．ｍｉｎ＾－１;小     

浙江产蝮蛇蛇毒对血小板聚集的影响

浙江产蝮蛇蛇毒的分离参照涂光俦(1979)的方法。浙江产蝮蛇蛇毒经DEAE-Sephadex A-50柱层析分离后得到14个蛋白峰,各峰的蛋白含量见表1。将收集的各峰经适当稀释后取0.2ml进行酶活力测定,除磷脂A酶活力按吴新陆、陈远聪(1981)方法测定外,其他酶活力测定如前文(云南省动物研究所,1976),然后做各峰对血小板聚集功能的影响,参照阮长耿等(1983)的方法,所用诱导剂的浓度为ADP(2μM),AA(100μg/ml)以及PAF(3×10~(-7)M),用这三种诱导剂诱导键康人对血小板产生不可逆性聚集,聚集强度分别为75％,75％和70％。粗毒在最终浓度为250μg/ml时能完全抑制上述三种诱导剂所致的血小板聚集。     

蕲蛇蛇毒抗凝血因子的分离纯化与特性

目的 寻找蕲蛇蛇毒中的抗凝血因子。方法 利用硫酸铵沉降、阴离子交换层析、阳离子交换层析及高效液相色谱层析,从蕲蛇蛇毒中分离纯化到一个抗凝血因子。结果 纯化的这一组份在PAGE、SDS—PAGE上均呈单一区带,分子量约为25．4kD,由两条分子量分别为15．0kD和16．0kD的肽链通过二硫键连接在一起。这一组份在体外显著地延长血浆复钙时间和凝血酶原时间,但不延长牛凝血酶时间,也不具有磷脂酶A2活性、纤溶活性和出血活性。结论 蕲蛇蛇毒中舍右一种新的抗凝血因子。     

短尾蝮蛇毒磷脂酶A2的分离纯化及抗血小板聚集作用

目的研究短尾蝮蛇毒磷脂酶A2的分离纯化及其抗血小板聚集作用。方法磷脂酶A2的分离纯化采用CM-SephadexC-25、DEAE-SepharoseCL-6B、SephacrylS-200、SephadexG-75柱层析法,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定其蛋白分子质量,以磷脂酶Az测定方法测定其酶活性,用比浊法测定其对二磷酸腺苷（ADP）引起的血小板聚集的影响。结果从短尾蝮蛇毒中纯化所得磷脂酶A2的相对分子质量为16．0×10^3（非还原）、17．6×10^3（还原）,它具有磷脂酶A2活性,能明显抑制ADP引起的血小板聚集并呈剂量-效应关系。结论此方法成功地从短尾蝮蛇毒中分离纯化出磷脂酶A2,并能抑制血小板聚集。     

血小板聚集的药理性解聚

在进行中的不可逆聚集的富血小板血浆(PRP)中,加入不同浓度的解聚剂,测定其解聚程度。以一系列作用机制不同的血小板解聚剂对ADP、胶原、花生四烯酸、U_(46619)(血栓素A_2类似物)、PAF所诱发的血小板聚集的拮抗作用的结果显示,血小板聚集作用得以维持是一个复杂的过程,涉及多种机制的参与,并和促聚剂种类有关。维持ADP诱发的聚集,需要外源性Ca~(2 )及细胞内Ca~(2 )的动员。PAF U_(46619)和花生四烯酸诱发的聚集作用的维持也需要细胞内钙的动员。但是胶原诱发的聚集作用的维持,有除Ca~(2 )、ADP以外的其他途径。维持持续的聚集并不依赖于血小板TXA_2(血栓素A_2)的持续合成,钙调节蛋白在血小板的持续聚集中起重要作用。钙调蛋白抑制剂都是有效的血小板解聚剂。各种血小板解聚剂的拮抗效果取决于(1) 采用促聚剂的种类、(2) 加入解聚剂时血小板聚集的时相、(3) 解聚剂的种类。     

四种圆斑蝰蛇蛇毒对血小板聚集抑制作用的比较研究

对四种不同来源的RVV对ADP、Col和Ris诱导的血小板聚集抑制作用进行比较研究。RVV-B,RVVS和RVV-Styp对三种诱导剂的血小板聚集均有抑制作用,而RVV-T虽有ADP和Col抑制作用,但缺乏对Ris的抑制活性。预先与RVV孵育的血小板经洗涤后重新悬浮于自身PPP中,与RVV-StyP孵育的血小板完全恢复对Ris的凝集反应,而与RVV-B和RVV-S孵育的血小板仅部分恢复其反应。上述结果表明,在RVV中可能含有二种不同的血小板聚集抑制活性,而其抑制机理可能牵涉到血小板、血浆等因素。     

白唇竹叶青蛇毒5’-核苷酸酶的分离纯化及性质

用DEAE-SephadexA-25、Sephadex-G-100和CM-SephadexC-50三步柱层析分离法,从白唇竹叶青(Trimeresurus albolabris)蛇毒中分离纯化出具有5'-核苷酸酶活性的组分.SDS-聚内烯酰胺凝胶电泳测定其分子量为48.03kDa,HPLC柱层析图谱为单一峰.该组分是一个糖蛋白,以一磷酸腺苷(AMP)为底物时,其酶活力为330.33 μg Pi/(min·mg);而以二磷酸腺苷(ADP)为底物时,其酶活力为123.56μg Pi/(min·mg).金属离子zn2 、Fe3 和Cu2 对5'-核苷酸酶活性有显著的抑制作用,EDTA可完全抑制其酶活性.该酶的最适pH为9,最适温度为50℃.该组分还具有抑制由ADP诱导的血小板聚集的生物功能.     

具有抗血小板聚集功能的新型葡激酶突变体的表达、纯化及性质

[目的]为解决溶栓后再栓塞问题,构建N-端含RGD(Arg-Gly-Asp)序列的葡激酶双功能突变体.研究突变体的表达和纯化,并进行性质分析.[方法]将突变后的葡激酶突变体序列连入pBV220质粒,转化大肠杆菌BL21进行表达.阳离子交换、凝胶过滤和阴离子交换三步层析法纯化表达产物,采用溶圈法对纯化产物进行生物学活性测定,并测定纯化产物对血小板聚集的抑制效应.[结果]PAGE扫描结果显示,葡激酶突变体蛋白在大肠杆菌BL21中的表达量约占菌体蛋白总量的40%～50%;三步层析纯化后,HPLC测定其纯度可达95%.酪蛋白凝胶板溶圈法测得其比活性分别为10.8×104和11.0×104HU/mg,与野生型葡激酶活性相当;且具有明显的抗血小板聚集活性,血小板聚集仪测定其血小板聚集抑制率分别为10.72%和19.71%,明显高于野生型葡激酶血小板聚集抑制率.本实验利用pBV220载体高效表达了葡激酶突变体基因,得到了高纯度、高活性的突变体蛋白,为葡激酶生产产业化和临床应用奠定了良好的基础.     

白唇竹叶青蛇毒5′-核苷酸酶的分离纯化及性质

DEAE-SephadexA-25、Sephadex-G-100和CM-SephadexC-50三步柱层析分离法,从白唇竹叶青（Trimeresurus albolabris）蛇毒中分离纯化出具有5′-核苷酸酶活性的组分。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定其分子量为48.03 kDa,HPLC柱层析图谱为单一峰。该组分是一个糖蛋白,以一磷酸腺苷（AMP）为底物时,其酶活力为330.33 μg Pi/（min·mg）;而以二磷酸腺苷（ADP）为底物时,其酶活力为123.56 μg Pi/（min·mg）。金属离子Zn²⁺、Fe³⁺和Cu²⁺对5′-核苷酸酶活性有显著的抑制作用,EDTA可完全抑制其酶活性。该酶的最适pH为9,最适温度为50℃。该组分还具有抑制由ADP诱导的血小板聚集的生物功能。     

绞股蓝对人体血小板聚集功能及微循环的影响

绞股蓝[Gynostemma Pentaphyl lum(Thunb)Makino]为葫芦科绞股蓝属多年生草质藤本植物湖北郧阳地区有广泛分布,质量较上乘,含有人体必需的微量元素如锌、硒、钙、铁等.1983年日木常松等先后对绞股蓝进行了一系列化学研究,从中分离得出许多种皂甙及多糖,可视为原人参醇或     

昆虫抗冻蛋白的分离纯化及特性分析

昆虫抗冻蛋白具有很高的热滞活性,可保护机体免受结冰引起的伤害。昆虫抗冻蛋白的分离纯化多采用凝胶过滤层析、离子交换层析及HPLC等技术,已用于鱼类抗冻蛋白纯化的冰亲和纯化(IAP)技术也可考虑应用于昆虫抗冻蛋白的分离提纯。昆虫抗冻蛋白具有高活性,规则的一级结构及类似的冰晶结合表面等特性。     

五步蛇蛇毒的分离纯化及综合利用

五步蛇蛇毒冻干粉经过SephadexG-75分子筛层析,使纤溶酶和类凝血酶初步分离;DEAE阴离子交换层析对2种酶进一步分离纯化,分别得到了纤溶酶和类凝血酶。2种酶在HPLC图谱上均呈单一峰,在SDS-PAGE图谱上均为单一条带,纤溶酶分子量大约为24．1kDa,类凝血酶分子量大约为14．4kDa,与以往报道相符。酶的总活力回收率大大提高,纤溶酶的活力回收率达23．9％,类凝血酶的活力回收率达34．5％。实现了对蛇毒的综合利用,为进一步开发利用蛇毒探索了一条有效的途径。     

长白山白眉蝮蛇蛇毒酸性PLA_2质谱鉴定及其对血小板聚集的抑制作用

通过对纯化得到的长白山白眉蝮蛇蛇毒磷脂酶A2（ABUSV-PLA2）进行胶内胰蛋白酶酶解,产生的肽段经高效液相色谱-电喷雾串联质谱（HPLC-nESI-MS/MS）进行序列测定,蛋白鉴定采用SequestBioworks软件完成。ABUSV-PLA2与其它蛇毒来源PLA2的氨基酸序列比对表明：ABUSV-PLA2是一种新的蛇毒酸性磷脂酶A2。以ADP诱导的人血小板聚集实验结果表明：ABUSV-PLA2对ADP诱导的血小板聚集有轻微的解凝效应,但具有显著拮抗血小板的聚集作用,并呈现明显的剂量-效应关系,IC50为356nmol/L。     

猪血小板外廓蛋白（profilin）的分离纯化和鉴定

本文合成了一种聚脯氨酸亲和层析凝胶,并用这种凝胶纯化了猪血小板外廓蛋白。纯化的外廓蛋白在ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳中呈单一蛋白带,分子量１４ｋＤ;在体外能显著抑制肌动蛋白聚合。