竹叶青蛇毒血小板聚集剂的分离纯化及生化特性

经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５凝胶过滤和ＦＰＬＣＭｏｎｏＱ阴离子交换柱层析及Ｓｕｐｅｒｏｓｅ－１２凝胶过滤,从竹叶青蛇的蛇毒中纯化到一个能诱导人血小板聚集的均一组分．经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳测定其分子量为６８０００左右．等电点为４．３．测定了它的氨基酸组成,对它活化血小板的作用机理进行了初步研究,结果表明它是一种强的血小板激动剂．     

栝楼种子中一种新型小分子核糖体失活蛋白——S—tric …

通过硫酸铵分级沉淀、ＣＭ－５２阳离子交换层析、Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ Ｓ－１００凝胶过滤和ＦＰＬＣ Ｍｏｎｏ－Ｓ离子交换层析等步骤,从栝楼种子中分离到一种核糖体失活蛋白－－Ｓ－ｔｒｉｃｈｏｋｉｒｉｎ,经１５％ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定分子量为８ｋＤ左右,１３．５％聚丙烯酰胺凝胶酸性电泳结果显示其等电点在ｐＨ９．５左右。通过对大鼠肝核糖体作用的研究,表明Ｓ－ｔｒｉ－ｃｈｏｋｉｒｉｎ属于ＲＮＡ Ｎ－糖苷酶催化型     

重组葡激酶的分离纯化

在构建出高表达,高活性的葡激酶工程菌株的基础上,对表达产物进行了分离纯化研究。经离子交换纯化后,纯度达８５％－９０％,回收率为５０％－６０％,经凝胶过滤后,纯度达９９％以上,回收率为６０％,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定,相对分子质量为１５．５＊１０＾３,比活为１．０＊１０＾５,Ｎ端氨基酸序列与献报道的相符。     

海芋胰蛋白酶抑制剂的分离纯化及性质研究

利用亲和层析和分子筛凝胶过滤等技术,从海芋根茎中分离纯化到一种胰蛋白酶抑制剂,简称ＡＭＴＩ。经ＰＡＧＥ、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ鉴定均显示单一条带,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定,其分子量为２２０００,经等电聚焦（ＩＥＦ）测定,其等电点为６．２。根据对胰蛋白酶的抑制比可知该抑制剂为单头抑制剂,其抑制活性在６０℃和ｐＨ５￣１１范围内保持稳定。     

圆弧青霉碱性脂肪酶的分离纯化的特性

圆弧青霉突变株ＰＧ３７发酵液经离心、硫酸铵盐析、疏水层析、阴离子交换层析和凝胶过滤分离纯化得到了比活性为每毫克蛋白质５２００ｕ的碱性脂肪酶,纯化倍数１６．５,得率３３．２％,在聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）和ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电脉（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）上均呈现单一 白质条带。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和凝胶过滤分别测得酶的分子量为２７．５ｋＤ和２９．ｋＤ,表明该酶以单体形式存在。Ｎ末端１０个氨基酸的序列测     

重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子包涵体提取、复性和纯化的研究

由基因工程大肠杆菌表达的重组人粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ｒｈＧＭ－ＣＳＦ）以包涵体的形式存在于细胞中,通过破菌、洗涤获得包涵体,再经过溶解、凝胶过滤、复性、疏水和离子交换柱导析得到了均一的产品,经高压液相和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳测定纯度均大于９８％,ｒｈＧＭ－ＣＳＦ的比活为３．２×１０＾７ＩＵ／ｍｇ,纯化获得的ｒｈＧＭ－ＣＳＦ为一酸性蛋白,等电点约为５．２,ＮＨ２－末端有２０个氨基酸序列测定结果     

林生山黧豆谷氨酸脱羧酶的分离纯化及部分性质的研究

以林生山黧豆为材料,利用硫酸铵分段盐析,丙酮沉淀,ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ离子交换柱层析,ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ３００凝胶过滤柱层析及ＦＰＬ－ＭｏｎｏＱ柱层析技术,以聚酰胺薄膜层析荧光定量法为酶活力检测手段,分离纯化了谷氨酰羧酶,达到电泳银染纯,纯化后的林生山黧豆谷氨酸脱羧酶活力达３７５．０９Ｕ．ｍｇ＾－１,纯化保数３８．２倍,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定,其亚基分子量为７０ｋＤ,经工ＰＡＧＥ确定     

地衣芽孢杆菌β—甘露聚糖酶的纯化及其性质的研究

地衣芽孢杆菌１Ｂａｃｉｕｕｓ Ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）ＢＬ－３０６产生的胞外β－甘露聚糖酶经硫酸铵分级盐析,ＤＥＡＥ－纤维素柱层析。Ｓｅｐｈａｄｅｘ－Ｇ１００柱凝胶过滤和ＤＥＡＥ－纤维素柱再层析分离纯化,得到ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）均一样品。用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得纯化后β－甘露聚糖酶分子量为２６０００道尔顿。用凝胶等电聚焦电泳（ＰＡＧＥＩＥＦ）测得等电点ＰＩ为５．０。该酶     

尖吻蝮蛇毒中类似于神经营养性因子物质的纯化及特性

分别利用离了交换,凝胶过滤及ｍｏｎｏＳ多步层析,从尖吻蝮蛇提纯到一个类似于神经营养因子的蛋白质。通过胶胶过滤测定其分子量为２６ｋＤ,由两个亚基 共价相互作用相连接在一直等电聚集显示其等电点为７．８。．它的生物活力与小鼠２．５ＳＮＧＦ相当,在１－１００μｇ／Ｌ的浓度范围内维持ＰＣ１２细胞在无血清培养基中的存活。同时,它还可以诱导ＰＣ１２细胞转变为类似于交感神经元的表型 。     

棉花凝集素的纯化及性质研究

抗枯萎、抗黄萎病的棉种的浸取液,经硫酸铵分级,纤维素柱、亲和层析后,再经分子筛过滤,获得在ＰＡＧＥ、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ或ＨＰＬＣ柱上均呈现单一蛋白带的棉花凝集素。该凝集素只凝集兔红细胞,对人Ａ、Ｂ或Ｏ型血细胞均不凝集,其凝集活性可被半乳糖或猪甲状腺球蛋白等所抑制。棉花凝集素在６５℃加热５ ｍ ｉｎ,即丧失全部凝集活性;它的凝集活性强烈地依赖于Ｃａ２＋ ;Ｍｎ２＋ 对活性也有促进作用,Ｍｇ２＋ 则无作用。经凝胶过滤或ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定,凝集素的分子量为６３０００,Ｎ－末端氨基酸为Ｖａｌ。凝集素含有１．５％ 的中性糖,是一种促有丝分裂原,细胞转化率为５０．３％ 。     

甘薯叶片蔗糖酶的分离纯化及其部分性质

纯化酶经聚丙烯酰胺凝胶电泳显示单一蛋白带,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示一条蛋自带,其亚基分子量为３９．８ｋＤ。用ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００凝胶过滤测得全酶的分子量为７９．４ｋＤ,该酶由两个相同亚基组成。其表观Ｋｍ为１２ｍｍｏｌ／Ｌ,Ｖｍａｘ为９９．５ｍｇ还原糖ｍｇ－１ｐｒｏｔｅｉｎｈ－１。     

甘薯叶片蔗糖酶的分离纯化及其部分性质

纯化酶经聚丙烯酰胺凝胶电泳显示单一蛋白带,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示一条蛋白带,其亚基分子量为３９．８ｋＤ。用Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ Ｓ－２００凝胶过滤测得全酶的分子量为７９．４ｋＤ,该酶由两个相同亚基组成。其表观Ｋｍ为１２ｍｍｏｌ／Ｌ,Ｖｍａｘ为９９．５ｍｇ还原糖ｍｇ＾－１ｐｒｏｔｅｉｎ ｈ＾－１。     

人肝谷胱甘肽过氧化物酶纯化及性质研究

经硫酸铵分级沉淀,离子交换层析和凝胶过滤等步骤,从人肝中获得了ＰＡＧＥ单一条带的谷胱甘肽过氧化物酶,比活提高１２０倍,得率为２５％。凝胶过滤法测得分子量为９０９８０,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定亚基分子量为２２４２３．原子吸收法测得每分子酶含有四个硒原子。等电聚焦显示该酶等电点为５．０．酶活力的最适ｐＨ为８．５,最适温度为３７℃。动力学实验提示该酶作用机理属于乒乓机制型。     

人肝谷胱甘肽过氧化物酶纯化及性质研究

经硫酸铵分级沉淀,离子交换层折和凝胶过滤等步骤,从人肝中获得了ＰＡＧＥ单一条带的谷胱甘肽过氧化物酶,比活提高１２０倍,得率为２５％。凝胶过滤法测得分子量为９０９０８０,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定亚基分子量为２２４２３,原子吸收法测得每分子酶含有四个硒原子,等电聚焦显示该酶等电点为５．０。酶活力的最适ＰＨ为８．５,最适温度为３７℃,动力学实验提示该酶作用机理属于乒乓机制型。     

海枣曲霉木聚糖酶的纯化及末端序列研究

海枣曲霉麸曲经水浸提、硫酸铵盐析、凝胶过滤、离子交换层析及ＨＰＬＣ分子排阻层析制备了ＰＡＧＥ,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、ＰＡＧＥ酶谱及ＨＰＬＣ纯的木聚糖酶。     

高压快速柱分离纯化牛血球超氧化物歧化酶的研究

以牛血球为材料,经溶血等处理和丙酮沉淀,获得牛血球超氧化物歧化酶粗品。此粗酶可以通过ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ和ＣＭ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ快速柱层析,获得超氧化物歧化酶纯品。纯化的酶比活可达１３５００ｕ／ｍｇ,经ＰＡＧＥ、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和快速蛋白液相色谱（ＦＰＬＣ）检测,结果表明,纯化酶是均一的Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００凝胶过滤测得该酶分子量为３１,８００,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得亚基分子量为１５     

韭菜线粒体锰超氧化物歧化酶纯化及性质研究

经硫酸铵沉淀、ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｃｅｌ层析和Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２００凝胶过滤,将韭菜线粒体ＳＯＤ纯化到均一程度。从６０００ｇ韭菜叶片线粒体中纯化得到２．５ｍｇ酶,酶比活力达１２００Ｕ／ｍｇ蛋白。该酶对ＫＣＮ和Ｈ２Ｏ２都不敏感,热稳定性弱 外光区吸收峰在２８０ｎｍ,凝胶过滤法测得其分子量为８２００Ｄ,ＳＯＳ－ＰＡＧＥ法测定其亚基分子量的２２０００Ｄ,ＤＮＳ法测得其Ｎ－末端氨基酸为缬氨酸。上述结     

镉诱导蚯蚓金属硫蛋白的分离纯化及其溶液构象的研究

镉诱导蚯蚓匀浆液经热沉淀,乙醇沉淀后,经凝胶过滤ＳｅｐｈａｃｒｙＳ－２００柱层析,得三个镉结合蛋白峰,分子量依次为４０,１７及９ｋＤ。这三个组份再分别经ＤＥＡＥＳｅｐｈａｒｏｓｅ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗ柱层析,分别得三、三、二个镉结合蛋白峰。根据光谱学特征、巯基含量及氨基酸组成等分析,认为凝胶过滤第二峰为金属硫蛋白（ＭＴ）,其经ＤＥＡＥ柱层析所得三个峰为ＭＴ三个亚型。对蚯蚓ＭＴ三个亚型在不同ＰＨ条件下     

油麻藤种子中凝集素的纯化及性质的研究

中药常春油麻藤种子中含有Ａ型血专一性的凝集素（ＭＳＬ）。该凝集素可经盐析、离子交换及凝胶过滤进行纯化,当其浓度为０．４９μｇ／ｍｌ时就能凝集人Ａ型血细胞,对人类Ｂ、Ｏ型及兔红细胞无作用。Ｇａｌ,ＧａｌＮＡｃ和胃粘蛋白对ＭＳＬ的凝血活性有强抑制作用。ＭＳＬ含中性糖５．７％,凝胶过滤测得分子量为１３１８００,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得分子量为６６０００和３３０００,表明ＭＳＬ可能由两个不同亚基组成。ＭＳＬ还     

韭菜叶绿体超氧化物歧化酶纯化及性质研究

经硫酸铵沉淀、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００凝胶过滤和ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｃｅｌ层析３个步骤将韭菜叶绿体ＳＯＤ纯化到均一程度。鉴定该酶是Ｃｕ．Ｚｎ－ＳＯＤ,测得其分子量约３２０００Ｄ,亚基分子量约为１６２００Ｄ,Ｎ－末端氨基酸为Ａｌａ。该酶在紫外与可见光区的吸收峰分别在２６５ｎｍ和６７５ｎｍ。实验表明该酶热稳定性良好。