脱血红素细胞色素c自发折叠的进一步验证

用胰蛋白酶水解结合聚丙烯酰胺凝胶电泳以及纳秒内源荧光衰减谱分析对鸡心脱血红素细胞色素ｃ在透析复性过程的自发折叠现象作进一步确定。结果显示随着透析复性时间的增加,鸡心脱血红素细胞色素ｃ对胰蛋白酶的水解敏感性逐渐下降,内源荧光寿命值增大,与此对应的马心脱血红素细胞色素ｃ没有发生变化。     

不同解折叠状态鸡心脱血红素细胞色素c分子的表面性质

脱血红素细胞色素ｃ的构象与其跨膜转运能力是密切相关的。鸡心脱血红素细胞色素ｃ具有较强的自发折叠的能力,在一定条件下可以得到不同解折叠状态的鸡心脱血红素细胞色素ｃ。本文利用疏水层析、与疏水探针１,８—ＡＮＳ的结合以及色氨酸与结合的ＡＮＳ之间的荧光共振能量转移,比较了不同解折叠状态的鸡心脱血红素细胞色素ｃ分子的表面性质。结果表明,部分折叠的鸡心脱血红素细胞色素ｃ分子获得了一种高度动态的结构,形成了动态的疏水核心;同时,它也具有较强的凝集倾向。这些性质与鸡心脱血红素细胞色素ｃ分子较强的自发折叠能力是一致的,为进一步分析鸡心脱血红素细胞色素ｃ分子的构象及其在跨膜转运过程中与脂的相互作用奠定了基础。     

脱血红素细胞色素c对DMPG膜的插入研究

气－液界面单分子层实验发现鸡心脱血红素细胞色素ｃ对ＤＭＰＧ单分子层表现出很强的插入能力,这种插入能力受亚相溶液离子强度的调节。通过傅里叶变换红外光谱对鸡心脱血红素细胞色素ｃ与ＤＭＰＧ脂质体的作用进行了进一步研究,对磷脂不同区域的红外光谱分析表明鸡心脱血红素细胞色素ｃ不仅与ＤＭＰＧ头部存在静电相互作用而且与其疏水部分也存在相互作用。     

鸡心脱辅基细胞色素c自发折叠的进一步研究

将野生型鸡心脱辅基细胞色素ｃ及其突变体Ｖ９２Ａ的１７位半胱氨酸残基突变为丝氨酸,再将表达纯化的Ｖ９２Ａ／Ｃ１７Ｓ和Ｗ／Ｃ１７Ｓ用荧光探针ＩＡＥＤＡＮＳ标记．通过测量ＡＥＤＡＮＳ－Ｃｙｓ－１４的荧光光谱、荧光寿命以及ＡＥＤＡＮＳ与Ｔｒｐ－５９之间的荧光共振能量转移效率、比较了Ｖ９２Ａ与野生型鸡心脱辅基细胞色素ｃ因折叠状态不同引起的Ｎ端构象状态及肽链间相互作用的差异．结果显示Ａｐｏ．ｃ无论在低盐浓度下的无规卷曲状态还是高盐浓度下的融球态,Ｖ９２Ａ都较野生型处于更松散的折叠状态,此外,在鸡心脱辅基细胞色素ｃ的自发折叠中Ｎ端肽段并不起主要作用     

不同折叠状态的Apocyt．C插膜后构象的研究

比较了不同折叠状态的鸡心脱血红素细胞色素ｃ（Ａｐｏｃｙｔ．ｃ）对大豆磷脂单分子层的插入能力和对酸性、中性磷脂单分子层的插入能力。不同折叠状态的Ａｐｏｃｙｔ．ｃ与大豆磷脂脂质体作用后的内源荧光发射谱提示它们各自在膜上的构象状态不同。与纯磷脂脂质体作用后的圆二色谱发现,溶液中折叠状态不同的鸡心Ａｐｏｃｙｔ．ｃ与膜作用后的构象也不同,溶液中处于无规心Ａｐｏｃｙｔ．ｃ与ＤＭＰＧ脂质体作用后的构象也呈α螺旋,但螺旋含量明显低于前者。折叠状态的鸡心Ａｐｏｃｙｔ．ｃ与ＤＭＰＣ作用后,其构象几乎没有变化。     

脱血红素细胞色素c的68~88肽段在插膜及与线粒体结合中具有关键作用

细胞色素c的前体蛋白——脱血红素细胞色素c是在细胞质中合成后运入线粒体的. 结合人工合成多肽及完整分子的缺失突变体探索了脱血红素细胞色素c跨膜转运中的关键肽段, 结果表明, 无论在单分子层插膜, 还是在与脂质体、线粒体的相互作用中, 脱血红素细胞色素c的68~88肽段都起着关键作用.     

C17S和H18D突变对鸡脱辅基细胞色素c跨线粒体膜输入的影响

体外转录鸡脱辅基细胞色素c(apocytochromec,简称apocyt.c)mRNA ,以之翻译apocyt.c并以3 5 S 甲硫氨酸标记 ,在纯化的鸡心线粒体上对它的跨膜转运与其经血红素加合酶催化转化为细胞色素c的关系进行了研究 .结果表明 ,即使在不利于形成细胞色素c的生化条件下鸡apocyt.c也能有效地输入线粒体 .为进一步证实apocyt.c的跨膜转运过程独立于转化为细胞色素c ,对apocyt.c的血红素结合位点进行基因的定点突变 ( 1 7位 :Cys→Ser;1 8位 :His→Asp) ,然后研究了 2个突变体apocyt.c的跨膜转运 .结果C1 7S和H1 8D都仍能有效地输入线粒体 ,但发现转运初速率已显著变慢     

磷脂酸(PA)-磷脂酰乙醇胺(PE)相互作用有利于脱血红素细胞色素c跨脂质体的运送

细胞色素c的前体 -脱血红素细胞色素c(Apocyt.c)在细胞质中核糖体合成 ,之后跨线粒体膜运送 ,在线粒体内、外膜间隙中经酶催化与血红素Heme结合形成成熟型的细胞色素c定位于线粒体内膜外侧     

利用正交法确定测定意大利蜜蜂幼虫细胞色素P4500-脱乙基活性最佳反应条件

荧光分光光度法检测意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica Spinal细胞色素P450 O-脱乙基活性方便快捷、较灵敏,以7-乙氧基香豆素为底物.通过测定其产物7-羟基香豆素的荧光变化来确定细胞色素P450 O-脱乙基的活性.在利用荧光分光光度法检测意大利蜜蜂幼虫细胞色素P450 O-脱乙基活性过程...     

细胞色素C和含心磷脂的人工脂膜相互作用

 本文报告以芘为荧光探剂,研究细胞色素C和含心磷脂的人工脂膜的相互作用。1.由于芘和细胞色素C的血红素团之间的能量转移,细胞色素C与心磷脂结合引起芘的单体荧光发射峰(395nm)强度下降。这种淬灭效应受脂膜的相行为影响,在液晶相时淬灭效应小于凝胶相;2.氧化态细胞色素C与还原态相比,对心磷脂结合的视和度稍高;3.在以芘的激发二聚体荧光峰(475nm)强度与单体荧光峰强度之比做为脂膜流动性的指标,发现还原态细胞色素C与含心磷脂脂膜结合后引起流动性增加的效应高于氧化态的结合。     

细胞色素P450的多样性

细胞色素Ｐ４５０的多样性＊邱星辉冷欣夫（中国科学院动物研究所,北京１０００８０）关键词细胞色素Ｐ４５０多样性细胞色素Ｐ４５０是一类以还原态与ＣＯ结合后在波长４５０ｎｍ处有吸收峰的含血红素的单链蛋白质［１～３］。它于１９５８年被发现以来,就引起了人们的...     

内源性CO对内皮素促大鼠主动脉平滑肌细胞增殖及MAPK活性的影响

血红素加氧酶（ｈｅｍｅ ｏｘｙｇｅｎａｓｅ,ＨＯ）是血红素分解代谢过程中的限速酶,它能使细胞内的血红素降解成胆绿素和一氧化碳（ｃａｒｂｏｎｍｏｎｏｘｉｄｅ,ＣＯ）,近来资料表明内源性一氧化碳对生理和病理状态下的血管张力有重要的调节作用,目前尚不不禁内源性ＨＯ／ＣＯ刘否参与平滑肌细胞增殖过程的调节,本实验在体内培养的大鼠主动脉平滑肌细胞模型上,用血色素加氧酶抑制剂卟啉锌－９（ｚｉｎｃ ｐｒｏｔｏｐｏ     

蛋白质跨线粒体膜运送的研究进展

线粒体拥有约1000种蛋白质,其中98％以上系由细胞核编码,在细胞质核糖体上以前体形式合成,之后再运至线粒体,经跨膜运送并分选定位于各部分。现对定位于外膜、基质和内膜的蛋白质的运送途径的研究进展作一扼要介绍。脱血红素细胞色素c是细胞色素c的前体,它不含导肽,对其转运的研究概况也作了评述。     

细胞色素f在光合膜上功能的初步探讨

用阳离子一竭尽的菠菜叶绿体膜作为实验材料,比较研究了胰蛋白酶消化的叶绿体膜和非消化的叶绿体膜的四阶导数吸收光谱、细胞色素f的还原减氧化差异光谱和电子传递速率的变化,试图探索细胞色素f在光合膜上的功能.主要结果于下:(1)胰蛋白酶消化引起叶绿体膜四阶导数吸收光谱位于554nm吸收峰(CYT.f的特征吸收峰)下降和细胞色素含量的明显减少.说明胰蛋白酶损伤细胞色素f.(2)胰蛋白酶消化对叶绿体膜从DCIPH_2到甲基紫精的非循环式电子传递速率没有影响,而对PMS存在下的甲基紫精光还原速率有明显的刺激作用.说明胰蛋白酶损伤与循环式电子流有关的细胞色素f.根据试验结果的分析.我们推测,在光合膜上可能存在两种类型的细胞色素f.一种可能与循环式电子流有关.另一种可能与非循环式电子流有关.     

MMP9-PEX的原核表达、纯化与复性研究

目的 对人基质蛋白酶9（matrix metalloproteinase,MMP9）C端血红素结合蛋白样结构域（hemopexin domain,PEX）的原核表达条件、透析复性条件进行优化,以获得高表达的活性蛋白.方法 将构建好的原核表达载体PET-his-MMP9-PEX转化至大肠埃希菌菌株BL21（DE-3）,异丙基β-D硫代半乳糖苷（IPTG）诱导后产生包涵体蛋白,探讨不同IPTG浓度、不同诱导时间、不同菌液密度值对目的 蛋白表达产量的影响;盐酸胍裂解包涵体,采用NI-NTA进行纯化,对纯化蛋白的透析复性条件进行优化;采用明胶酶谱的方法检测MMP9-PEX的活性.结果 经纯化透析复性后蛋白的纯度在95%以上,复性回收率为36.86%.结论 本研究优化了MMP9-PEX的原核表达、透析复性条件,获得了有活性的MMP9-PEX蛋白,为进一步研究MMP9-PEX的功能提供了实验基础.     

盐酸胍诱导的α淀粉酶去折叠与再折叠

利用蛋白质内源荧光和酶活性两种信号以及荧光偏振,ＨＰＬＣ和停流等方法研究了盐酸胍诱导的α淀粉酶去折叠与重折叠的平衡转变和动力学。实验结果表明α淀粉酶去折叠与重折叠是两个不同的过程;变性与复性过程中可能伴有聚集体生成;去折叠与重折叠均为双相过程,重折叠大约始于２秒之后。     

脱血红素细胞色素c与膜结合及插膜时的构象研究

应用特殊的单分子层样品制备技术,分别制备了与中性、酸性磷脂膜结合的和完全插膜的鸡心脱血红素细胞色素c样品,并运用圆二色谱(CD)、表面衰减全反射Fourier变换红外光谱(ATR-FTIR)对膜上蛋白的构象进行了鉴定.研究结果表明,蛋白在与膜结合及插入阶段的构象是不同的,膜界面性质的不同也会对蛋白的构象产生不同的诱导,在酸性磷脂DSPG膜表面,该蛋白是以α螺旋和β折叠混合的构象形式结合;而在中性磷脂DSPC膜表面是以β折叠为主的构象形式结合.插入 DOPG单分子层内时则是 α螺旋为主的构象形式.     

蛋白质跨线粒体膜的运送

线粒体约含１０００种左右蛋白质,其中９８％以上系由细胞核编码,在细胞质核酸体上以前体形式合成之后再运至线粒体并选分定位于各部分,现对定位于基持和内膜的蛋白质的运送途径研究的新进展作一扼要介绍,脱血红素细胞色素ｃ是细胞色素ｃ的前体,它既不含导肽,在线粒体外膜迄今也未发现共受体,对其转运的研究概况也作了评述。     

海岛棉(Gossypium barbadense)DNA的提纯

介绍一种从棉花(Gossypium barbadense)种子中分离天然状、大分子和高纯度DNA的方法。首先,用有机溶剂(醇、醚和酮)抽提除去脂肪、类脂、棉毒素及其它色素,然后,用胰蛋白酶(Trypsin)和去垢剂(SDS)进行处理脱蛋白;最后,用4％珠状琼脂糖凝胶(Sepharose4B Gel)柱层析分离纯化DNA:此方法简便、有效,一般适用于含大量内源多酚类化合物、色素和类脂植物材料中DNA的抽提和纯化。     

未培养厌氧甲烷氧化古菌来源细胞色素c的异源表达优化

细胞色素c是一类在生物体内广泛存在的血红素蛋白,由亚铁血红素和细胞色素c前体组成,在生物电子学、生物医药以及污染物降解等领域具有很大的潜在应用价值.然而,细胞色素c很难通过异源表达而大量获取.对于未培养厌氧甲烷氧化古菌来源的细胞色素c (CytC4),目前尚无成功表达和功能研究.本研究首先通过在CytC4的N端分别引入...