水稻巯基蛋白酶抑制剂的分子修饰与其对稻瘟病菌的抑制作用

水稻巯基蛋白酶抑制剂（ＣＰＩ）经用二硫苏糖醇,对氯汞苯甲酸和碘乙酸修饰后,对木瓜蛋白酶的抑制活性并无改变;用Ｎ－乙基顺丁烯二酰亚胺与ＣＰＩ反应,可以测出ＣＰＩ分子内有１９个巯基被修饰,被修饰后,抑制活性仍无改变,表明水稻ＣＰＩ的抑制活性不需要巯基参与;应用Ｎ－溴代丁二酰亚胺与ＣＰＩ反应,可测出ＣＰＩ分子内有２个Ｔｒｐ被修饰,修饰后,抑制活性全部丧失,表明Ｔｒｐ是保持抑制活性所必需的基团。水稻巯基蛋白酶抑制剂和丝氨酸蛋白酶抑制剂对稻瘟病菌丝体的生长均有抑制作用,但后者的抑制作用比前者更强,若将两种抑制剂混合使用,则对稻瘟病菌丝体的抑制作用非常强烈;当抑制剂加入量达７２μｇ时,即可产生明显的抑制作用。     

红花菜豆（矮生红花变种）凝集素分子的色氨酸残基修饰与其活性的关系

用各种化学试剂修饰红花菜豆凝集素分子,测定与其活性相关的氨基酸残基,经ＮＢＳ修饰表明ＰＣＬ具有８个Ｔｒｐ残基,其中４个暴露于分子表面,此４个Ｔｒｐ残基被修饰后,ＰＬＣ的凝血活性完全丧失,比较ＰＣＬ修饰前后的ＣＤ光谱表明修饰不改变其二级结构。修饰Ｔｙｒ,Ａｒｇ,Ｈｉｓ残基和游离氨基及羧基不影响ＰＣＬ的血凝活性,巯基也不是血凝活性所必需,但是ＰＣＬ分子中二硫键被还的,或被ＣＮＢｒ分解为两个片断则使蛋白     

野花生豆凝集素的化学修饰与荧光光谱研究

野花生豆凝集素（ＣＭＬ）经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００测得分子量为１０３．ＯｋＤ．用对二甲基氨基苯甲醛（ＤＡＢ）为显色剂,测得每个ＣＭＬ分子含有５．９个色氨酸残基．在ｐＨ５．１,含８ｍｏｌ／Ｌ脲的醋酸缓冲液中,Ｎ－溴代丁二酰亚胺（ＮＢＳ）可修饰ＣＭＬ分子中的５．６个色氨酸（Ｔｒｐ）残基,同时使ＣＭＬ的凝血活性完全丧失．用焦碳酸二乙酯（ＤＥＰＣ）和Ｎ－乙酰顺丁烯酰胺（ＮＥＭ）分别修饰ＣＭＬ的组氨酸残基和半胱氨酸巯基后,ＣＭＬ的活性均无变化．ＣＭＬ在天然状态下荧光发射峰位于３３６ｎｍ处,用ＣＭＬ的专一性抑制糖Ｎ－乙酰半乳糖胺研究色氨酸的微环境,发现Ｎ－乙酰半乳糖胺可以淬灭ＣＭＬ中８８％的色氨酸残基萤光,Ｓｔｅｒｎ－Ｖｏｌｍｅｒ常数Ｋ＝１．７３Ｌ／ｍｏｌ．同时发现Ｎ－乙酰半乳糖胺能够保护ＣＭＬ,避免ＮＢＳ对ＣＭＬ的修饰作用,表明色氨酸可能是ＣＭＬ维待活性所必需,并直接参与和专一性抑制糖的结合,其微环境较为疏水．     

水稻巯基蛋白酶抑制剂的纯化及其性质研究

水稻的糠皮和胚经生理盐水浸取、离心后的上清液加热至８０℃处理１０ｍｉｎ,离心获得的上清液调ｐＨ至８．０,得到沉淀。沉淀溶解于０．０１ｍｏｌ／ＬＨＣｌ,经透析冷冻干燥得水稻巯基蛋白酶抑制剂（ＣＰＩ）粗品;粗品再经ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ柱线性离子梯度洗脱和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００柱分子筛层析,即可获得在ＰＡＧＥ、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和ＨＰＬＣ上均为单一蛋白带的ＣＰＩ样品。经上述步骤,ＣＰＩ可被纯化５８倍。经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定其分子量均为１２０００,Ｎ末端氨基酸为Ｐｒｏ,等电点５．６．水稻ＣＰＩ经１００℃处理１０ｍｉｎ后,其抑制活性无任何变化,在ｐＨ２．０～９．０之间,活性也不发生改变,但ｐＨ在９．０以上,其活性逐渐下降,水稻ＣＰＩ对木瓜蛋白酶是一种高亲和性的抑制剂,它对木瓜蛋白酶和无花果蛋白酶有强抑制作用,对菠萝蛋白酶仅有弱抑制作用,但对胰蛋白酶则全无抑制作用;其抑制类型属竞争性抑制剂类型,Ｋ＿ｉ值约３．５×１０￣（－８）ｍｏｌ／Ｌ对木瓜蛋白酶的抑制摩尔比约为１：１。     

红花菜豆(矮生红花变种)凝集素分子的色氨酸残基修饰与其活性的关系

用各种化学试剂修饰红花菜豆（Ｐｈａｓｅｏｌｕｓｃｏｃｃｉｎｅｕｓｖａｒｒｕｂｒｏｎａｎｕｓ,Ｂｅｒｒｙ）凝集素（简称ＰＣＬ）分子,测定与其活性相关的氨基酸残基．经ＮＢＳ修饰表明ＰＣＬ具有８个Ｔｒｐ残基,其中４个暴露于分子表面,此４个Ｔｒｐ残基被修饰后,ＰＣＬ的凝血活性完全丧失．比较ＰＣＬ修饰前后的ＣＤ光谱表明修饰不改变其二级结构。修饰Ｔｙｒ,Ａｒｇ,Ｈｉｓ残基和游离氨基及羧基不影响ＰＣＬ的血凝活性．巯基也不是血凝活性所必需,但是ＰＣＬ分子中的二硫键被还原,或被ＣＮＢｒ分解为两个片断则使蛋白质丧失血凝活性,提示分子的完整结构对ＰＣＬ的血凝活力是重要的     

野花生豆凝集素的化学修饰与荧光光谱研究

野花生豆凝集素（ＣＭＬ）经Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２００测得分子量为１０３．Ｏ ｋＤ。用对二甲基氨基苯甲醛（ＤＡＢ）为显色剂,测得每个ＣＭＬ分子含有５．９个色氨酸残基。在ｐＨ５．１,含８ｍｏｌ／Ｌ脲的醋酸缓冲中,Ｎ－溴代丁二酰亚胺（ＮＢＳ）可修饰ＣＭＬ分子中的５．６个色氨酸（Ｔｒｐ）残基,同时使ＣＭＬ的凝血活性完全丧失。用焦碳酸二乙酯（ＤＥＰＣ）和Ｎ－乙酰顺丁烯酰胺（ＮＥＭ）分别修饰ＣＭＬ的组氨酸残     

岩豆凝集素分子修饰与圆二色性的关系研究

天然态岩豆凝集素（ＭＤＬ）远紫外圆二色性（ＣＤ）谱显示２１６ｎｍ处单一负峰,是一种高β－折叠构象凝集素;近紫外ＣＤ谱呈现２８２ｎｍ处负峰和２６０～２７５ｎｍ及２９５ｎｍ处的负肩,经Ｎ－乙基顺丁烯二酰亚胺（ＮＥＭＩ）和对氯汞苯甲酸（ＰＣＭＢ）修饰ＭＤＬ的巯基,其近紫外ＣＤ谱未发生变化,远紫外ＣＤ谱仅发生细微变化,ＭＤＬ凝集活性保持不变;ＰＣＭＢ过量时,ＣＤ谱呈现典型的无规卷曲谱形,ＭＤＬ完全丧失凝集活性,去除ＰＣＭＢ后,活性又全部恢复．二硫苏糖醇（ＤＤＴ）修饰ＭＤＬ的二硫键并用碘乙酸（ＩＣＨ２ＣＯＯＨ）保护巯基,ＭＤＬ远紫外ＣＤ谱２１６ｎｍ处的负峰红移至２２５ｎｍ,且显著减小;同时,近紫外ＣＤ谱２８２ｎｍ处负峰几乎消失,两负肩分别保持完整,分子中α－螺旋降低,无规卷曲增加较多,ＭＤＬ凝集活性未发生变化．用Ｎ－溴代丁二酰亚胺（ＮＢＳ）修饰ＭＤＬ分子中的色氨酸,导致２１６ｎｍ负峰蓝移至２０８ｎｍ且变小,分子中无规卷曲和α－螺旋增加,β折叠减少,近紫外ＣＤ谱２９５ｎｍ负肩消失,２８２ｎｍ负峰红移至２８７ｎｍ,ＭＤＬ凝集活性完全丧失．     

白茯苓凝集素的荧光光谱研究

白茯苓凝集素（ＳＬＬ）分子中含有４个色氨酸（Ｔｒｐ）残基,ＮＢＳ修饰测得这４个Ｔｒｐ残基位于分子表面。ＳＬＬ在天然状态下荧光发射峰位于３３５ｎｍ处,离子强度和温度对其荧光光谱均无明显的影响。ＮＢＳ修饰后的ＳＬＬ失去凝血活性,相应荧光光谱的强度减弱,荧光发射峰发生蓝移,提示ＳＬＬ的构象发生改变。用ＫＩ·ＣｓＣｌ和丙烯酰胺淬灭剂研究ＳＬＬ分子中Ｔｒｐ残基的微环境,发现丙烯酰胺和ＣｓＣｌ能淬灭分子中１００％和５０％的Ｔｒｐ残基的荧光,而ＫＩ完全不能淬灭ＳＬＬ分子中Ｔｒｐ残基的荧光,因此Ｔｒｐ残基周围存在阴离子区,或者Ｔｒｐ残基处于分子表面的疏水环境中。     

百合巯基蛋白酶抑制剂的纯化及部分性质研究

百合的鳞茎中含有一种对木瓜蛋白酶有强抑制作用的巯基蛋白酶抑制剂．百合的鳞茎经浸取加热处理,木瓜蛋白酶偶联的Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ柱亲和层析和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００分子筛层析,可获得在ＰＡＧＥ和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ均为单一蛋白带的百合巯基蛋白酶抑制剂（ＣＰＩ）．此ＣＰＩ为单链蛋白,含有０．３０７％的中性糖;Ｎ端氨基酸为Ｉｌｅ;ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得亚基分子量为１２０００;ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００测得分子量为１２５００．百合ＣＰＩ在１００℃内和ｐＨ２～１２范围内非常稳定;对木瓜蛋白酶的抑制属竞争性抑制类型,其Ｋｉ值为１．１５×１０~（－９）ｍｏｌ／Ｌ,对木瓜蛋白酶的抑制摩尔比为８．５：１．     

铂配合物与细胞色素c修饰位点的核磁共振研究

用ＣＭ－５２阳离子交换色谱分离〔ＰｔｄｉｅｎＮＯ３〕Ｃｌ修饰细胞色素ｃ（Ｃｙｔ．ｃ）的反应产物,获得了Ｃｙｔ,ｃ的单标记和双标记衍生物。对此衍生物的核磁共振波谱研究表明,〔ＰｔｄｉｅｎＮＯ３〕Ｃｌ对Ｃｙｔ．ｃ的修饰作用不仅涉及位于蛋白分子表面的氨基酸残基Ｈｉｓ－３３,而且还涉及处于Ｃｙｔ．ｃ分子内部疏水区的Ｔｒｐ－５９。该衍生物为探讨Ｃｙｔ．ｃ中芳香族氨基酸（尤其是Ｔｒｐ－５９）在电子传递过程中的     

油麻藤凝集素的荧光光谱研究

用化学修饰、内源荧光和荧光淬灭等方法研究了油麻藤凝集素（ＭＳＬ）的溶液构象变化和微环境的构象特征。研究发现ＭＳＬ分子中总共有９个色氨酸（Ｔｒｐ）残基,它们的荧光能被丙烯酰胺淬灭,但不易为ＫＩ接近而淬灭,ＭＳＬ经Ｎ－溴代琥珀酰亚胺（ＮＢＳ）修饰后,其内源性荧光发射谱发生相应变化,结果表明ＭＳＬ分子中部分Ｔｒｐ残基埋藏于分子内部,而位于分子表面的Ｔｒｐ残基可能处于分子的疏水袋中。     

油麻藤凝集素的荧光光谱研究

用化学修饰,内源荧光和荧光淬灭等方法研究了油麻藤集素（ＭＳＬ）的溶液的象变化和微环境的构象特征,研究发现ＭＳＬ分子中总共有９个色氨酸（Ｔｒｐ）残基,它们的荧光能被丙烯酰胺淬灭,但不易为ＫＩ接近而淬灭,ＭＳＬ经Ｎ－溴化琥珀酰亚胺（ＮＢＳ）修饰后,其内源性荧光发射谱发生相应变化,结果表明ＭＳＬ分子中部分Ｔｒｐ残基埋藏于分子内部,而位于分子表面的Ｔｒｐ残基可能处于分子的疏水袋中。     

人胎盘谷胱甘肽S-转移酶中巯基的研究

 用巯基试剂5.5'-二硫双(2-硝基苯甲酸)(DTNB)测得人胎盘谷胱甘肽S-转移酶(GST-π)的总巯基数为每亚基2个,均为表面巯基,,其中一个与DTNB反应快,被修饰后可导致酶活力全部丧失。另一巯基与DTNB反应较慢,可能与酶活力无关。用在12℃测定剩余巯基和Stallcup-Koshland作图法求得DTNB修饰快反应和慢反应巯基的速度常数分别为44056和162min~(-1)(mol/L)~(-1)。底物谷胱甘肽的衍生物S-正辛烷谷胱甘肽(S-o-GSH)能保护GST-π能保护的快反应巯基免受DTNB的修饰,使反应速度常数随着S-o-GSH浓度的增高而降低。S-o-GSH也能保护酶被N-乙基马来酰亚胺(NEMI)修饰失活,但不能保护慢反应巯基被DTNB修饰。另一底物2,4-二硝基氯苯(CDNB)对NEMI的修饰失活没有保护作用。上述结果提示快反应巯基参与GST-π和谷胱甘肽的结合,是组成活性中心的重要基因。     

线粒体tRNA^Trp的原核起源

构建了３种来源于水稻、人和啤酒酵母的线粒体ｔＲＮＡ＾Ｔｒｐ基因。实验表明这些线粒体ｔＲＮＡ＾Ｔｒｐ的体外转录产物具有被枯草杆菌色氨酰－ｔＲＮＡ合成酶（ＴｒｐＲＳ）氨酰化的能力,但是不能被鼠肝来源的氨酰ｔＲＮＡ合成酶粗酶所催化。动力学资源常数测定表明枯草杆菌ＴｒｐＲＳ对线粒体ｔＲＮＡ＾Ｔｒｐ的亲和力为野生型ｔＲＮＡ＾Ｔｒｐ的一半,而在催化效率上,水稻和啤酒酵母线粒体ｔＲＮＡ＾Ｔｒｐ的色氨酰化能力比野     

S—PI对香菇酸性蛋白酶的抑制机理及其促进出菇的生化解释

Ｓ－ＰＩ对纯化的香菇酸性蛋白酶具有强烈的抑制作用,１０μｍｏｌ／Ｌ的Ｓ－ＰＩ可使酶活降低７７％,这种抑制属于可逆竞争抛物线型抑制。经２５μｍｏｌ／Ｌ酸性蛋白酶水解６小时后,香菇胞外酸性磷酸酶的活性从２４．６单位降低到２０．８单位,同时Ｃ１酶和Ｃｘ酶的活性分别比对照降低了７６％和５８％,这表明香菇酸性蛋白酶不仅直接左右着香菇发育的氮代谢,同时也间接地影响着碳代谢及能量转换。     

白介素—1β对大鼠应激性胃粘膜损伤的保护作用

本工作观察了人重组白介素１β（ＩＬ－１β）对大鼠束缚冷冻应激造成的胃粘膜损伤的影响。外周给予ＩＬ－１β后能防止胃粘膜损伤的形成,呈剂量依从关系。ＩＬ－１片段１６３－１７１对应激性胃粘膜损伤无明显影响。但巯基物质耗竭剂Ｎ－乙烯顺丁烯二酰亚胺（Ｎ－ｅｔｈｙｌｍａｌｅｉｍｉｄｅ）ｕｋ     

蛇肌果糖1,6—二磷酸酯酶,果糖2,6—二磷酸,AMP的结…

腺苷一磷酸对４个快反应巯基被修饰的蛇肌果糖１,６－二磷酸酯酶活性的抑制作用增强,而该修饰的酶受果糖２,６－二磷酸的抑制脱敏,ＡＭＰ对酶抑制为半部位反应,酶受果糖２,６－二磷酸抑制的脱敏则表现为全部位反应,经枯草杆菌蛋白酶限制性酶解的果糖１,６－二磷酸酯酶的Ｋ１增大１０倍,但受果糖２,６－二磷酸抑制的性质不变,经胰蛋白酶限制性酶解的果糖１,６－二磷酸酯酶的活性不再为ＡＭＰ抑制,但果糖２,６－二磷酸对     

丙型肝炎病毒丝氨酸蛋白酶的研究进展

丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）非结构３区（ＮＳ３）编码的丝氨酸蛋白酶是ＨＣＶ复制过程中的重要蛋白酶,负责对ＮＳ３、ＮＳ４及ＮＳ５进行加工。ＮＳ４ａ是ＨＣＶ丝氨酸蛋白酶作用的辅因子,并具有多种活性。ＨＣＶ丝氨酸蛋白酶有相对特异的底物,其活性不能被一般的丝氨酸蛋白抑制剂所抑制。丝氨酸蛋白酶是ＨＣＶ药物设计的靶目标之一。对其结构与功能的研究有着重要意义。     

tDNA^Trp识别位碱基的研究

识别位碱基Ｇ７３,为ｔＲＮＡ＾Ｔｒｐ的主要个性元件之一,ｔＤＮＡ＾Ｔｒｐ－ＮＣＣｒＡ的氨酰化活力测定及圆二色谱均表明在相同的ｐＨ条件下,识别位碱基的改变将影响到ｔＲＮＡ３′端的构象,而具有同一识别位碱基的ｔＤＮＡ＾Ｔｒｐ在不同ｐＨ条件下,亦显示出不同的构象及氨酰化活力,ｔＤＮＡ＾Ｔｒｐ的研究表明,是ｔＲＮＡ的构象而不是碱基本身决定了ｔＲＮＡ与其相应合成酶之间的精确识别。     

2-氯汞-4-硝基苯酚对人肌肌酸激酶巯基的修饰

本文用含汞试剂MNP修饰人肌肌酸激酶,结果表明,人肌肌酸激酶有6个可反应巯基。MNP首先修饰了一对与活力无关的非必需巯基,增大MNP摩尔比,则进一步修饰另外四个与活性有关的巯基。修饰酶的差吸收光谱、荧光光谱表明这三对巯基的微环境各不相同。其中第二对巯基很可能是位于活性部位的必需巯基,而第三对巯基则是由于第二对巯基,也就是必需巯基,被修饰后,微区构象发生改变而暴露出来的。比较MNP修饰人肌肌酸激酶、鸡胸脯肌肌酸激酶、兔肌肌酸激酶的结果,探讨了MNP对肌酸激酶的修饰以及人肌肌酸激酶可反应巯基的化学微环境。