外源钙调蛋白对植物细胞分裂增殖作用的研究

外源钙调蛋白（Ｃａｌｍｏｄｕｌｉｎ,ＣａＭ）对胡萝卜悬浮细胞增殖具明显促进作用,不同浓度ＣａＭ的促进程度不同,７ｕｇ／ｍｌ时促进作用最大。ＣａＭ抑制剂ＴＦＰ（Ｔｒｉｆｌｕｏｐｅｒ－ａｚｉｎｅ）则明显抑制该悬浮细胞的增殖,ＴＦＰ浓度越高则抑制作用越强。另外,外源ＣａＭ可以加快珍珠梅花粉第二次有丝分裂,改变生殖细胞有丝分裂各期花粉管的比例,说明外源ＣａＭ对植物体细胞和性细胞的增殖和分裂均有促进作用。     

外源钙调素和钙调素拮抗剂对烟草离体花粉和生长和生殖核分裂 …

外源花椰菜钙调素,牛脑ＣａＭａｇａｒｏｓｅ以及ＣａＭ拮抗剂ＴＦＰ对花粉管生长与生殖核分裂的作用均具有浓度和时间效应,ＣａＭ在花粉管生长早期,较低浓度能促进花粉管生长和生殖核分裂;但后期,较高浓度则有抑制作用。     

外源钙调素对粟酒裂殖酵母细胞增殖的影响

外源钙调素（ＣａＭ）对粟酒裂殖酵母（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ）细胞增殖的影响。实验结果表明外源ＣａＭ能明显抑制粟酒裂殖酵母细胞的增殖,其作用方式是延长了粟酒裂殖酵母细胞生长的延滞期,抗粟酒裂殖酵母ＣａＭ抗体,ＴＦＰ及Ｐｈｅｎｙｌ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－４Ｂ能降低ＣａＭ对细胞生长的抑制作用,而Ｃａ＾２＋及Ｃａ＾２＋螯合剂ＥＧＴＡ对ＣａＭ的抑制作用均无影响。以上结果提示,外     

钙调素对细胞周期的调节

ＲＣ３细胞是一种用真核表达载体Ｐ＾ｃａｍ转染ＮＩＨ３Ｔ３细胞建成的可调钙调素（Ｃａｌｍｏｄｕｌｉｎ,ＣａＭ）高表达细胞模型。通过分子杂交及蛋白免疫印迹方法证实在地塞米松（Ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｍｅ,ＤＸＭ）作用下,ＲＣ３细胞可高表达ＣａＭ．ＣａＭ拮抗剂三氟拉嗪（ｔｒｉｆｌｕｏｐｒａｚｉｎｅ,ＴＦＰ）则使Ｇ１期细胞增加,Ｓ期细胞减少。高表达ＣａＭ使细胞分裂指数提高,Ｇ２期细胞减少,有丝分裂前期细胞     

TFP刺激裂殖酵母细胞钙离子内流的质膜效应

ＴＦＰ（１０－１００μｍｏｌ／Ｌ）可引起裂殖酵母（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ）细胞Ｃａ＾２＋内流,ＴＦＰ浓度不同,促进Ｃａ＾２＋内流程度也不一样,５０μｍｏｌ／Ｌ ＴＦＰ的促进作用最大。并且ＴＦＰ浓度越大,Ｃａ＾２＋内流出现峰值也越早,１０、２０、５０、１００μｍｏｌ／Ｌ ＴＦＰ处理后,胞内总钙出现峰值时间分别为４５、４５、３０、１５分钟。胞外Ｈ＾＋浓度也会对ＴＦＰ引起的     

钙调素拮抗剂对人肺癌细胞增殖抑制及与cAMP信号系统相关性之初探

对钙调素（ＣａＭ）拮抗剂—三氟拉嗪（ｔｒｉｆｌｕｏｐｅｒａｚｉｎｅ,ＴＦＰ）在人肺癌细胞ＰＬＡ８０１的增殖抑制中的作用和ＣａＭ与ｃＡＭＰ信号系统水平的变化进行了研究．用５、１０、１５和２０μｍｏｌ／ＬＴＦＰ处理人肺癌细胞时观察到ＴＦＰ在抑制细胞内ＣａＭ活性的同时,抑制了细胞的增殖．药物处理的细胞在软琼脂中形成的集落数减少且明显小于对照组细胞．使用流式细胞光度术分析细胞周期的结果表明：１０μｍｏｌ／ＬＴＦＰ处理抑制了Ｇ１期细胞向Ｓ期的转移．当用１０μｍｏｌ／ＬＴＦＰ作用细胞５ｍｉｎ时,细胞内ｃＡＭＰ水平达到正常水平的１．８倍,直到３ｈ仍明显高于正常水平．同时,ｃＡＭＰ依赖的ＰＫＡ的活性在加药后１５ｍｉｎ上升到正常水平的２．８倍,直到加药３ｈ．活性仍保持较高水平,结果表明：钙调素功能的抑制,提高了ＰＬＡ－８０１细胞内ｃＡＭＰ系统的水平,Ｃａ２＋－ＣａＭ和ｃＡＭＰ－ＰＫＡ两个信号系统的协调作用,抑制了细胞的增殖     

钙调素拮抗剂对人肺癌细胞增殖抑制及与cAMP信号系统相关性之初探

对钙调素（ＣａＭ）拮抗剂－三氟拉嗪在人肺癌细胞ＰＬＡ８０１的增殖抑制中的作用和ＣａＭ与ｃＡＭＰ信号系统水平的变化进行了研究,用５、１０、１５和２０μｍｏｌ／ＬＴＦＰ处理人肺癌细胞时观察到的ＴＦＰ在抑制细胞内ＣａＭ活性的同时,抑制了细胞的增殖,药物处理的细胞在软琼脂中形成的集落数减少且明显小于对照组细胞,使用流式细胞光度术分析细胞周期的结果表明：１０μｍｏｌ／ＬＴＦＰ处理抑制了Ｇ１期细胞的向Ｓ期折转     

TFP刺激裂殖酵母细胞钙离子内流的质膜效应

ＴＦＰ（１０－１００μｍｏｌ／Ｌ）可引起裂殖酵母（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｐｏｍｂｅ）胞外Ｃａ２＋内流,ＴＦＰ浓度不同,促进Ｃａ２＋内流程度也不一样,５０μｍｏｌ／ＬＴＦＰ的促进作用最大。并且ＴＦＰ浓度越大,Ｃａ２＋内流出现峰值也越早,１０、２０、５０、１００μｍｏｌ／ＬＴＦＰ处理后,胞内总钙出现峰值时间分别为４５、４５、３０、１５分钟。胞外Ｈ＋浓度也会对ＴＦＰ引起的Ｃａ２＋内流产生不同影响,缓冲液的ｐＨ值为６．０时最有利于ＴＦＰ引起胞内Ｃａ２＋含量增加,碱性条件下ＴＦＰ的效果最不明显。由ＴＦＰ引起的Ｃａ２＋内流增加要比单一地增加外钙浓度效果好得多,ＴＦＰ在１０μｍｏｌ／Ｌ浓度的外钙条件下引起的胞内钙含量数值比１０００μｍｏｌ／Ｌ的外钙条件而无ＴＦＰＴ所引起的胞内钙含量还要高５３．９％。缓冲液中加入０．８％的钙离子通道阻断剂ＬａＣ１３或溶液中无葡萄糖的存在,ＴＦＰ的促进作用消失,说明ＴＦＰ促进Ｃａ２＋内流是通过钙离子通道来完成的并需要能量参与。     

TFP刺激裂殖酵母细胞钙离子内流的质膜效应*

ＴＦＰ（１０－１００μｍｏｌ／Ｌ）可引起裂殖酵母（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｐｏｍｂｅ）胞外Ｃａ２＋内流,ＴＦＰ浓度不同,促进Ｃａ２＋内流程度也不一样,５０μｍｏｌ／ＬＴＦＰ的促进作用最大。并且ＴＦＰ浓度越大,Ｃａ２＋内流出现峰值也越早,１０、２０、５０、１００μｍｏｌ／ＬＴＦＰ处理后,胞内总钙出现峰值时间分别为４５、４５、３０、１５分钟。胞外Ｈ＋浓度也会对ＴＦＰ引起的Ｃａ２＋内流产生不同影响,缓冲液的ｐＨ值为６．０时最有利于ＴＦＰ引起胞内Ｃａ２＋含量增加,碱性条件下ＴＦＰ的效果最不明显。由ＴＦＰ引起的Ｃａ２＋内流增加要比单一地增加外钙浓度效果好得多,ＴＦＰ在１０μｍｏｌ／Ｌ浓度的外钙条件下引起的胞内钙含量数值比１０００μｍｏｌ／Ｌ的外钙条件而无ＴＦＰＴ所引起的胞内钙含量还要高５３．９％。缓冲液中加入０．８％的钙离子通道阻断剂ＬａＣ１３或溶液中无葡萄糖的存在,ＴＦＰ的促进作用消失,说明ＴＦＰ促进Ｃａ２＋内流是通过钙离子通道来完成的并需要能量参与。     

Ca^2＋对盐胁迫下黄瓜幼苗中CaM,MDA含量和质膜透性的影响…

添加ＣａＣｌ２可提高黄瓜幼苗中ＣａＭ含量,降低ＭＤＡ（丙二醛）和质膜透性,减轻盐害,添加ＣａＭ抑制剂ＣＰＺ（氯丙嗪）、ＴＦＰ（三氟拉嗪）则取得相反效果,添加外源ＣａＭ在体内合成,起到降低盐害作用。     

Ca^2＋对小麦种根及春根毛生长发育的影响

低浓度的ＣａＣｌ２对小麦种根生长,根毛发生和生长无明显影响,高浓度的ＣａＣｌ２对种根和根毛生长的抑制作用,但不影响根毛的发生。Ｃａ＾２专一性螯事剂ＥＧＴＡ抑制种根生长和根毛的发生及生长,添加一定浓度的外源ＣａＣｌ２,这种抑制作用可被消除。ＣａＭ抑制剂ＴＦＰ（三氟拉嗪）和ＣＰＺ对种根生长、根毛发生和生长均有抑制作用,添加外源ＣａＭ可减弱或消除这种抑制作用。     

内皮素和bFGF对MC的促增殖作用及胰岛素的协同效应

采用３Ｈ－ＴｄＲ参入法,测定碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）、胰岛素和内皮素－１（ＥＴ－１）对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞（ＭＣ）增殖的影响,以及胰岛素与ｂＦＧＦ或ＥＴ－１促ＭＣ增殖的协同作用。结果表明,不同浓度的ｂＦＧＦ（５－２００ｎｇ／ｍｌ）和胰岛素（０．１－２．４Ｕ／ｍｌ）均显著升高ＭＣ的３Ｈ－ＴｄＲ参入值（ｃｐｍ值）（Ｐ＜０．０１）。ＥＴ－１对ＭＣ的ｃｐｍ值的影响依剂量不同呈现两种不同的效应,在１０－９－１０－７ｍｏｌ／Ｌ时,随着浓度的升高,ＭＣ的ｃｐｍ值明显升高（Ｐ＜０．０１）,并以１０－８ｍｏｌ／Ｌ作用最强;当升高到１０－６ｍｏｌ／Ｌ时,ＭＣ的ｃｐｍ值出现降低趋势。胰岛素与ｂＦＧＦ或低浓度ＥＴ－１（≤１０－８ｍｏｌ／Ｌ）共同作用于ＭＣ时,ＭＣ的ｃｐｍ值明显高于二者单独作用之和（Ｐ＜０．０１）,与高浓度ＥＴ－１（＞１０－７ｍｏｌ／Ｌ）共同作用于ＭＣ时,ＭＣ的ｃｐｍ值小于二者单独作用之和（Ｐ＞０．０５）。上述结果说明,胰岛素、ｂＦＧＦ和ＥＴ－１均能显著促进ＭＣ增殖;胰岛素与ｂＦＧＦ或低浓度的ＥＴ－１促ＭＣ增殖具有正协同作用,与高浓度ＥＴ－１呈现负协同作用。     

Ca2+对小麦种根及其根毛生长发育的影响

低浓度的ＣａＣｌ２对小麦种根生长、根毛发生和生长无明显影响,高浓度的ＣａＣｌ２（０．１ｍｏｌ／Ｌ）对种根和根毛生长有抑制作用,但不影响根毛的发生。Ｃａ２＋专一性螯合剂ＥＧＴＡ抑制种根生长和根毛的发生及生长,添加一定浓度的外源ＣａＣｌ２,这种抑制作用可被消除。ＣａＭ抑制剂ＴＦＰ（三氟拉嗪）和ＣＰＺ（氯丙嗪）对种根生长、根毛发生和生长均有抑制作用,添加外源ＣａＭ可减弱或消除这种抑制作用。     

白芷细胞外21kD钙调素结合蛋白的生理功能初探

利用Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ１００ 及ＣＭＳｅｐｈａｒｏｓｅ层析法,从白芷悬浮培养细胞的胞外盐提液中纯化了２１ ｋＤ 钙调素结合蛋白（２１ ｋＤＣａＭＢＰ） ,测其等电点的ｐＨ 为８ ．９ ,紫外薄层扫描显示其纯度达９４ ％ 以上。以此蛋白为抗原,用免疫小鼠腹水法制备了特异性抗体。由纯化的２１ ｋＤＣａＭＢＰ及其特异性抗体研究其对白芷悬浮培养细胞增殖的影响,结果表明：加入外源纯化的２１ ｋＤＣａＭＢＰ 抑制细胞增殖,半抑制浓度约８ μｇ／ｍｌ;而加入２１ ｋＤＣａＭＢＰ特异性抗体却促进细胞增殖效应。推测胞外内源存在的２１ ｋＤＣａＭＢＰ在生理条件下可能具有参与调节胞外活化ＣａＭ 信号分子的浓度,从而调节胞外ＣａＭ 的生物学功能。     

钙调素对花粉萌发和花粉管生长的效应

牛脑和玉米胚ＣａＭ能显著促进花粉萌发和花粉管生长（图１）,而ＣａＭ抑制剂ＴＦＰ、ＣＰＺ及另外两个专一性更强的抑制剂Ｃｏｍｐｏｕｎｄ４８／８０和Ｗ７均严重抑制甚至阻止花粉的萌发（图２,３）。用对ＣａＭ亲和性较低的Ｗ７同系物Ｗ５,在与Ｗ７同样浓度下,对花粉萌发和花粉管生长无明显影响。此外,Ｗ７对花粉萌发和花粉管生长的抑制效应可被外源ＣａＭ所消除（图４）。在花粉萌发过程中,其内源ＣａＭ含量显著上升,在花粉萌发率接近最大值时,花粉ＣａＭ含量达最高水平（图５）。上述结果表明ＣａＭ对花粉萌发和花粉管生长的调控起重要作用。     

慢性低氧性肺动脉高压鼠原代培养肺动脉平滑肌细胞内钙的检定

用共聚焦激光扫描显微镜观察经Ｆｌｕｏ－３／ＡＭ负荷的慢性低氧性肺动脉高压（ＨＰＨ）大鼠原代培养的肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）的形态与内游离Ｃａ２＋浓度的动态变化。结果表明：原代培养的（ＨＰＨ）大鼠的ＰＡＳＭＣ与正常大鼠相比,①细胞内游离Ｃａ２＋浓度增加,但其收缩性减弱;②随培养日数增加,咖啡因（Ｃａｆｅｉｎ）所致的细胞内储钙池－肌浆网的Ｃａ２＋释放作用逐渐减弱,直至消失;③血管紧张素Ⅱ（ＡＴ－Ⅱ）升高细胞内钙作用明显增强;④部分呈大红色细胞对多种缩血管物质敏感性增强。结果提示,ＨＰＨ大鼠的ＰＡＳＭＣ的内钙明显增加,其调节机制处于紊乱状态。     

人主动脉硫酸乙酰肝素蛋白聚糖对培养的人血管壁细胞生长的作用

通过培养的人主动脉平滑肌细胞（ｈＡＳＭＣ）及脐静脉内皮细胞（ｈＵＶＥＣ）,应用３Ｈ－ＴｄＲ参入、Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析、逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）、放射免疫分析（ＲＩＡ）、和紫外比色法等技术观察了人主动脉中硫酸乙酰肝素蛋白聚糖（ＨＳＰＧ）对ｈＡＳＭＣ和ｈＵＶＥＣＤＮＡ合成的作用及对血小板源生长因子（ＰＤＧＦ）、ＰＤＧＦ受体、转化生长因子β（ＴＧＦ－β）、内皮素－１（ＥＴ－１）或碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）基因表达和肾素－血管紧张系统（ＲＡＳ）的影响,结果显示,ＨＳＰＧ明显抑制培养的ｈＡＳＭＣ基础的ＤＮＡ合成（ｃｐｍ值为：１０３８５±３２６３ｖｓ,２５５４１±６４２１,Ｐ＜０．０１）及外源性ＰＤＧＦ诱导的ＤＮＡ合成（ｃｐｍ值为：９８７８±１９４７ｖｓ．１３４８１±４４ｌ０,Ｐ＜０．０５）;抑制ＰＤＧＦＡ链、ＴＧＦ－Ｂｐ和ＥＴ－１ｍＲＮＡ表达,提高ＰＤＧＦａ和β受体ｍＲＮＡ的表达;显著降低ｈＡＳＭＣ培养液中血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）的浓度和血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）的活性,推测ＨＳＰＧ抑制ＰＤＧＦＡ链、ＴＧＦ－β及ＥＴ－１ｍＲＮＡ表达,降低ＡＣＥ活性及ＡｎｇⅡ浓度是其抑制ｈＡＳＭＣ增殖的重要机     

细胞松驰素B促微丝解聚对DNA合成的作用

利用微丝（ｍｉｃｒｏｆｉｌａｍｅｎｔ,ＭＦ）解聚药物细胞松驰素Ｂ（ｃｙｔｏｃｈａｌａｓｉｎＢ,ＣＢ）处理Ｇ_０期小鼠Ｃ_３Ｈ_（１０）Ｔ_（１／２）成纤维细胞,对Ｇ_０至Ｓ期ＤＮＡ合成,胸腺嘧啶核苷激酶（ｔｈｙｍｉｄｉｎｅｋｉｎａｓｅ,ＴＫ）活性、ＴＫ基因表达、钙调素（ｃａｌｍｏｄｕｌｉｎ,ＣａＭ）水平和一些细胞周期早期基因的表达进行了观察,Ｇ_０期细胞经３ｍｇ／ＬＣＢ处理２ｈ,促ＭＦ解聚增强了血清对Ｓ期细胞ＴＫ活性、ＴＫ基因表达和ＤＮＡ合成的刺激作用,并促进细胞提前进入Ｓ期．血清刺激Ｇ_０期细胞进入晚Ｇ_１期和Ｓ期时,ＣａＭ水平明显升高,而ＣＢ预处理则使ＣａＭ含量进一步增加,特别是ＣＢ处理促使Ｓ期ＣａＭ增加向核内转移．ＣＢ处理明显增强血清对ｃ－ｊｕｎ、ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｍｙｃ基因表达的刺激作用,而ＰＫＣ抑制剂Ｈ_７则抑制ＣＢ处理对这些基因转录的刺激作用,说明ＣＢ使Ｇ_０期细胞ＭＦ解聚刺激ｃ－ｊｕｎ、ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｍｙｃ的转录活性与ＰＫＣ的作用有关．结果表明Ｇ_０至Ｓ期早期ＭＦ的重组可促进细胞进入Ｓ期,增强ＤＮＡ合成．     

白芷细胞外21kD钙调素结合蛋白的生理功能初探

利用Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００及ＣＭ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ层析法,从白芷悬浮培养细胞的胞外盐提液中纯化了２１ｋＤ钙调素结合蛋白（２１ｋＤ ＣａＭＢＰ）,测其等电点的ｐＨ为８．９,紫外薄层扫描显示其纯度达９４％以上,以此蛋白为抗原,用免疫小鼠得水法制备了特异性抗体。由纯化的２１ｋＤ ＣａＭＢＰ及其特异性抗体研究其对白芷悬浮培养细胞增殖的影响,结果表明：加入外源纯化的２１ｋＤ ＣａＭＢＰ抑制细胞增殖,     

血小板第四因子保护造血前体细胞及其作用机制的研究

我们曾报道血小板第四因子（ＰＦ４）是巨核细胞形成的有效的抑制因子,它可以保护干细胞免遭５－ＦＵ的毒性作用。本研究中试比较ＰＦ４和ＴＧＦ－β１对人脐带血ＣＤ３４＾＋来源的ＭＫ的作用。ＰＦ４（５ｕｇ／ｍｌ）和ＴＧＦ－β（１ｎｇ／ｍｌ）在半固态凝块培养和悬浮培养中明显抑制人脐带血ＣＤ３４＾＋来源的ＭＫ的生长。用ＰＦ４处理的ＣＤ３４＾＋细胞在撒去ＰＥ４后仍能再生成集落,说明ＰＦ４的抑制作用的可逆性的。相反