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应用基因工程手段,获得了枯草杆菌蛋白酶E的双突变体基因(M222A,N118S),此基因在枯草芽孢杆菌中表达得到了既抗氧又耐高温的碱性蛋白酶,含M222,N118S碱性蛋白酶基因的枯草杆菌发酵液经过硫酸铵分级沉淀和DEAESephadexA-25阴离子交换层析柱,再在FPLC层析系统上用Hiload26/10SSepharoseHP阳离子交换柱分离得到SDS-PAGE电泳纯的蛋白酶样品。突变体酶的等电点为pH8.9,分子量为27400,用四肽底物测得的动力学参数也有较大的变化。对该突变体酶进行了晶体生长研究,获得了较大的单晶体。 相似文献
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制备一定量的Cd、Zn兔肝金属硫蛋白(metalothionein,MT),然后脱掉其中的金属,获得不含金属的硫蛋白(apoMT).用一价金属CuCl或AgNO3以5.81的金属蛋白摩尔比与apoMT结合,将其β结构域用金属饱和,在37℃,pH7.0下用枯草杆菌蛋白酶水解掉未结合金属的α结构域,获得Cu(Ⅰ)、Ag(Ⅰ)结合的兔肝MT-I、MT-Ⅱ的β结构域.通过HPLC、羧甲基化后的SDS-PAGE、氨基酸组成分析、金属定量、N末端分析和紫外扫描等鉴定,证明确实得到了N末端为Met,分子量3000左右,金属蛋白摩尔比为5~5.51的MTβ结构域,其氨基酸组成与理论值基本相符 相似文献
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含有枯草杆菌碱性蛋白酶Ki-2基因的1.9kbDNA片段用限制酶切成几个小片段,将这些片段分别插入M13mp18或M13mp19中,用通用测序引物测得全序列。所得全序列与蛋白酶E相比较,在结构基因部分仅有8个碱基不同,由此而导致两个氨基酸的差异。此1.9kb的片段插入枯草杆菌大肠杆菌穿梭质粒Pbe-2,得到的重组质粒转化蛋白酶缺陷型的枯草芽孢杆菌DB104,结果表明枯草杆菌碱性蛋白酶Ki-2基因在DB104中能利用自身的调控元件表达并分泌到胞外。将Ki-2蛋白酶的222位甲硫氨酸突变成丙氨酸,突变后的Ki-2蛋白酶具有抗氧化性,但比活性比野生型的约低1倍 相似文献
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利用枯草杆菌碱性蛋白酶E基因的信号顺序构建分泌表达载体 总被引:7,自引:0,他引:7
本文利用枯草杆菌碱性蛋白酶基因E(aprE),对建立枯草杆菌分泌表达的载体-宿主系统作了探讨。首先用大肠杆菌-枯草杆菌穿梭的启动子克隆质粒pGKV210对aprE的启动子功能进行检测,发现用E.coli作为研究aprE表达信号的“中间宿主”是可行的;然后在穿梭质coli作为研究,aprE表达信号的“中间宿主”是可行的;然后在穿梭质粒,进而构建了基于aprE启动子和信号顺序的分泌表达载体pSP1和p 相似文献
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家蝇体内卵对CAT的摄入和传代的观察 总被引:2,自引:0,他引:2
家蝇体内卵对CAT的摄入和传代的观察INTAKINGANDTRANSMISSIONOFINJECTEDCATGENEBYHOUSEFLYEGGS关键词CAT基因,家蝇,腹腔注射,基因转移KeywordsCAT-gene,Housefly,Abdomi... 相似文献
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池塘养殖环境中底质-水界面营养盐扩散通量的现场测定 总被引:3,自引:0,他引:3
池塘养殖环境中底质-水界面营养盐扩散通量的现场测定FIELDDETERMINATIONOFDIFFUSIONFLUXOFNUTRIENTSFROMSEDIMENT-WATERINTERFACEOFCULTUREPOND¥SunYao(YellowSe... 相似文献
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Metylomonassp.GYJ3菌的甲烷单加氧酶(MMO)粗酶提取液经DEAE-SepharoseCL-6B阴离子交换层析、SephadexG-100凝胶过滤层析和DEAE-TSKgelHPLC分离纯化出MMO还原酶组分.经HPLC分析,纯度大于95%,纯化倍数为4.4,加入至MMO羟基化酶和调节蛋白B的体系中表现比活为228nmol环氧丙烷每分钟毫克蛋白.SDS-PAGE电泳表明还原酶由一种亚基组成,分子量42kD.ICP-AES测定还原酶的Fe含量为1.83molFe每mol蛋白.UV-Vis光谱表明还原酶除280nm蛋白质特征峰外在460nm有最大吸收峰,且A280nm/A460nm为2.50,与其它黄素一铁硫蛋白相似,推测还原酶可能含一个FAD辅基和Fe2S2中心.在厌氧条件下,还原酶能够和NADH作用,UV-Vis光谱分析表明还原酶460nm处特征吸收峰消失,说明在MMO催化过程中还原酶接受NADH的电子.DEAE-SepharoseCL-6B阴离子交换层析分离出调节蛋白B,部分纯化的调节蛋白B的分子量大约在20kD,它能够提高MMO比活性40倍,MMO还原酶和调节蛋白B单独存在时不具有MMO 相似文献
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棕背鼠最适生境及其主导因子分析THEOPTIMALBIOTOPEOFLARGE-TOOTHEDRAD-BACKEDVOLEANDTHEANALYSESOFITSMAINFACTORSKeywordsLarge-toothedrad-dackedvol... 相似文献
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氯氨酮和L-NAME抑制模拟高原低氧大鼠下丘脑NOS和生长抑素mRNA的表达 总被引:3,自引:0,他引:3
用高原低氧模型及原位杂交、NADPH-d组织化学法,探讨氯氨酮和L-NAME对急性高原低氧大鼠下丘脑一氧化氮合酶(NOS)和生长抑素mRNA(SS mRNA)表达的影响。结果表明,急性高原低氧引起下丘脑NOS和SS mRNA过度表达,如先用NMDA受体拮抗剂氯氨酮和NOS抑制剂L-NAME预处理,NOS和SS mRNA的表达均明显被抑制。结果提示,NMDA受体参与了急生高原低氧引起的下丘脑NOS和 相似文献
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油蒿和籽蒿种子化学组成的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
油蒿和籽蒿种子化学组成的研究鲁作民(中国科学院兰州沙漠研究所,兰州730000)STUDIESONCHEMICALCOMPOSITIONSINSEEDSOFARTEMISIAORDOSICAANDA.SPHAEROCEPHALA¥LuZuo-min(... 相似文献
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利用PCR技术,从酵母染色体中扩增得到酵母豆蔻酰-CoA:蛋白质N端转酰基酶(YSCNMT)基因,并克隆到pBluescriptKS+载体中。由DNA全序测定表明,获得了YSCNMT编码基因。进一步构建了T7Promoter控制下的含上述完整YSCNMT编码基因的表达质粒pMFT7-5-NMT,转化大肠杆菌BL21(DE3),进行IPTG诱导表达研究。通过SDS-PAGE分析,观察到一与理论分子量一致的诱导条带(约53kD),占全菌蛋白的39%左右,且可溶性部分约占上清液中全部蛋白的34%。经一步P11磷酸纤维素阳离子交换柱层析,将其纯化到纯度达97%以上.纯化的表达产物经N端氨基酸序列分析,所测定的N端5个氨基酸的序列,与从克隆的YSCNMT基因推出的氨基酸序列完全一致(不含N端Met)。对所得的YSCNMT进行酶活力鉴定,观察到了明显的活力。 相似文献
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利用阴离子交换和凝胶过滤柱层析等方法对蟾蜍卵黄外被细胞溶素进行了分离纯化,获得了高纯度的样品.该酶的质量为32kD,其特异性MCA-人工合成底物为Boc-Gln-Arg-Arg-MCA,能被DFP、SBTI、leupeptin和p-AMPSF等蛋白酶抑制剂所强烈抑制,但不受chymostatin、bestatin、E-64和EDTA等的影响,表明该酶是一种丝氨酸类型的蛋白酶 相似文献
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圆弧青霉碱性脂肪酶的分离纯化的特性 总被引:1,自引:0,他引:1
圆弧青霉突变株PG37发酵液经离心、硫酸铵盐析、疏水层析、阴离子交换层析和凝胶过滤分离纯化得到了比活性为每毫克蛋白质5200u的碱性脂肪酶,纯化倍数16.5,得率33.2%,在聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电脉(SDS-PAGE)上均呈现单一 白质条带。SDS-PAGE和凝胶过滤分别测得酶的分子量为27.5kD和29.kD,表明该酶以单体形式存在。N末端10个氨基酸的序列测 相似文献
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珍稀植物华顶杜鹃的种子萌发试验 总被引:6,自引:0,他引:6
珍稀植物华顶杜鹃的种子萌发试验丁炳扬何耀华缪晶黄涛(杭州大学生命科学学院,杭州310012)THEGERMINATIONEXPERIMENTOFTHESEEDSOFRHODODENDRONHUADINGENSEDingBing-yangHeYao-h... 相似文献