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应用基因工程手段,获得了枯草杆菌蛋白酶E的双突变体基因(M222A,N118S),此基因在枯草芽孢杆菌中表达得到了既抗氧又耐高温的碱性蛋白酶,含M222,N118S碱性蛋白酶基因的枯草杆菌发酵液经过硫酸铵分级沉淀和DEAESephadexA-25阴离子交换层析柱,再在FPLC层析系统上用Hiload26/10SSepharoseHP阳离子交换柱分离得到SDS-PAGE电泳纯的蛋白酶样品。突变体酶的等电点为pH8.9,分子量为27400,用四肽底物测得的动力学参数也有较大的变化。对该突变体酶进行了晶体生长研究,获得了较大的单晶体。 相似文献
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制备一定量的Cd、Zn兔肝金属硫蛋白(metalothionein,MT),然后脱掉其中的金属,获得不含金属的硫蛋白(apoMT).用一价金属CuCl或AgNO3以5.81的金属蛋白摩尔比与apoMT结合,将其β结构域用金属饱和,在37℃,pH7.0下用枯草杆菌蛋白酶水解掉未结合金属的α结构域,获得Cu(Ⅰ)、Ag(Ⅰ)结合的兔肝MT-I、MT-Ⅱ的β结构域.通过HPLC、羧甲基化后的SDS-PAGE、氨基酸组成分析、金属定量、N末端分析和紫外扫描等鉴定,证明确实得到了N末端为Met,分子量3000左右,金属蛋白摩尔比为5~5.51的MTβ结构域,其氨基酸组成与理论值基本相符 相似文献
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含有枯草杆菌碱性蛋白酶Ki-2基因的1.9kbDNA片段用限制酶切成几个小片段,将这些片段分别插入M13mp18或M13mp19中,用通用测序引物测得全序列。所得全序列与蛋白酶E相比较,在结构基因部分仅有8个碱基不同,由此而导致两个氨基酸的差异。此1.9kb的片段插入枯草杆菌大肠杆菌穿梭质粒Pbe-2,得到的重组质粒转化蛋白酶缺陷型的枯草芽孢杆菌DB104,结果表明枯草杆菌碱性蛋白酶Ki-2基因在DB104中能利用自身的调控元件表达并分泌到胞外。将Ki-2蛋白酶的222位甲硫氨酸突变成丙氨酸,突变后的Ki-2蛋白酶具有抗氧化性,但比活性比野生型的约低1倍 相似文献
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利用枯草杆菌碱性蛋白酶E基因的信号顺序构建分泌表达载体 总被引:7,自引:0,他引:7
本文利用枯草杆菌碱性蛋白酶基因E(aprE),对建立枯草杆菌分泌表达的载体-宿主系统作了探讨。首先用大肠杆菌-枯草杆菌穿梭的启动子克隆质粒pGKV210对aprE的启动子功能进行检测,发现用E.coli作为研究aprE表达信号的“中间宿主”是可行的;然后在穿梭质coli作为研究,aprE表达信号的“中间宿主”是可行的;然后在穿梭质粒,进而构建了基于aprE启动子和信号顺序的分泌表达载体pSP1和p 相似文献
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家蝇体内卵对CAT的摄入和传代的观察 总被引:2,自引:0,他引:2
家蝇体内卵对CAT的摄入和传代的观察INTAKINGANDTRANSMISSIONOFINJECTEDCATGENEBYHOUSEFLYEGGS关键词CAT基因,家蝇,腹腔注射,基因转移KeywordsCAT-gene,Housefly,Abdomi... 相似文献
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池塘养殖环境中底质-水界面营养盐扩散通量的现场测定 总被引:3,自引:0,他引:3
池塘养殖环境中底质-水界面营养盐扩散通量的现场测定FIELDDETERMINATIONOFDIFFUSIONFLUXOFNUTRIENTSFROMSEDIMENT-WATERINTERFACEOFCULTUREPOND¥SunYao(YellowSe... 相似文献
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Metylomonassp.GYJ3菌的甲烷单加氧酶(MMO)粗酶提取液经DEAE-SepharoseCL-6B阴离子交换层析、SephadexG-100凝胶过滤层析和DEAE-TSKgelHPLC分离纯化出MMO还原酶组分.经HPLC分析,纯度大于95%,纯化倍数为4.4,加入至MMO羟基化酶和调节蛋白B的体系中表现比活为228nmol环氧丙烷每分钟毫克蛋白.SDS-PAGE电泳表明还原酶由一种亚基组成,分子量42kD.ICP-AES测定还原酶的Fe含量为1.83molFe每mol蛋白.UV-Vis光谱表明还原酶除280nm蛋白质特征峰外在460nm有最大吸收峰,且A280nm/A460nm为2.50,与其它黄素一铁硫蛋白相似,推测还原酶可能含一个FAD辅基和Fe2S2中心.在厌氧条件下,还原酶能够和NADH作用,UV-Vis光谱分析表明还原酶460nm处特征吸收峰消失,说明在MMO催化过程中还原酶接受NADH的电子.DEAE-SepharoseCL-6B阴离子交换层析分离出调节蛋白B,部分纯化的调节蛋白B的分子量大约在20kD,它能够提高MMO比活性40倍,MMO还原酶和调节蛋白B单独存在时不具有MMO 相似文献
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氯氨酮和L-NAME抑制模拟高原低氧大鼠下丘脑NOS和生长抑素mRNA的表达 总被引:3,自引:0,他引:3
用高原低氧模型及原位杂交、NADPH-d组织化学法,探讨氯氨酮和L-NAME对急性高原低氧大鼠下丘脑一氧化氮合酶(NOS)和生长抑素mRNA(SS mRNA)表达的影响。结果表明,急性高原低氧引起下丘脑NOS和SS mRNA过度表达,如先用NMDA受体拮抗剂氯氨酮和NOS抑制剂L-NAME预处理,NOS和SS mRNA的表达均明显被抑制。结果提示,NMDA受体参与了急生高原低氧引起的下丘脑NOS和 相似文献
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棕背鼠最适生境及其主导因子分析THEOPTIMALBIOTOPEOFLARGE-TOOTHEDRAD-BACKEDVOLEANDTHEANALYSESOFITSMAINFACTORSKeywordsLarge-toothedrad-dackedvol... 相似文献
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油蒿和籽蒿种子化学组成的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
油蒿和籽蒿种子化学组成的研究鲁作民(中国科学院兰州沙漠研究所,兰州730000)STUDIESONCHEMICALCOMPOSITIONSINSEEDSOFARTEMISIAORDOSICAANDA.SPHAEROCEPHALA¥LuZuo-min(... 相似文献
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利用PCR技术,从酵母染色体中扩增得到酵母豆蔻酰-CoA:蛋白质N端转酰基酶(YSCNMT)基因,并克隆到pBluescriptKS+载体中。由DNA全序测定表明,获得了YSCNMT编码基因。进一步构建了T7Promoter控制下的含上述完整YSCNMT编码基因的表达质粒pMFT7-5-NMT,转化大肠杆菌BL21(DE3),进行IPTG诱导表达研究。通过SDS-PAGE分析,观察到一与理论分子量一致的诱导条带(约53kD),占全菌蛋白的39%左右,且可溶性部分约占上清液中全部蛋白的34%。经一步P11磷酸纤维素阳离子交换柱层析,将其纯化到纯度达97%以上.纯化的表达产物经N端氨基酸序列分析,所测定的N端5个氨基酸的序列,与从克隆的YSCNMT基因推出的氨基酸序列完全一致(不含N端Met)。对所得的YSCNMT进行酶活力鉴定,观察到了明显的活力。 相似文献
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珍稀植物华顶杜鹃的种子萌发试验 总被引:6,自引:0,他引:6
珍稀植物华顶杜鹃的种子萌发试验丁炳扬何耀华缪晶黄涛(杭州大学生命科学学院,杭州310012)THEGERMINATIONEXPERIMENTOFTHESEEDSOFRHODODENDRONHUADINGENSEDingBing-yangHeYao-h... 相似文献
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植物胚胎学实验方法(六)胚和胚乳的解剖和整体制片法 总被引:2,自引:0,他引:2
植物胚胎学实验方法(六)胚和胚乳的解剖和整体制片法胡适宜(北京大学生物系,北京100871)WHOLEMOUNTANDDISSECTINGMETHODSFORTHESTUDYINGOFPLANTEMBRYOSANDENDOSPERMS¥HuShi-y... 相似文献
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圆弧青霉碱性脂肪酶的分离纯化的特性 总被引:1,自引:0,他引:1
圆弧青霉突变株PG37发酵液经离心、硫酸铵盐析、疏水层析、阴离子交换层析和凝胶过滤分离纯化得到了比活性为每毫克蛋白质5200u的碱性脂肪酶,纯化倍数16.5,得率33.2%,在聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电脉(SDS-PAGE)上均呈现单一 白质条带。SDS-PAGE和凝胶过滤分别测得酶的分子量为27.5kD和29.kD,表明该酶以单体形式存在。N末端10个氨基酸的序列测 相似文献