酰化人红细胞超氧化物歧化酶稳定性的研究

用月桂酸对人红细胞超氧化物歧化酶（ｈ－ＳＯＤ）进行化学修饰得到酰化ｈ－ＳＯＤ（Ａｃ－ｈＳＯＤ）,并对Ａｃ－ｈＳＯＤ和ｈ－ＳＯＤ的稳定性进行了比较。结果表明：Ａｃ－ｈＳＯＤ活力为ｈ－ＳＯＤ的７２％。比活力为４０００Ｕ／ｍｇ,Ａｃ－ｈＳＯＤ的热稳定性、酸碱稳定性及抗蛋白酶水解能力均比天然酶提高。     

羊红细胞超氧化物歧化酶的研究

自羊红细胞分离得到一种高等电点的铜.锌-超氧化物歧化酶(Cu.ZnSOD)。其沉降系数(S)为3.23,亚基分子量为16600,等电点为8.50,紫外最大吸收峰位于259nm,酶分子中含有铜和锌,氨基酸组成特点与其它动物来源的Cu.Zn-SOD相同。该酶的比活性为5500U/mg(黄嘌吟氧化酶—细胞色素还原法);对KCN的抑制作用敏感,最适pH值为6。     

聚乙二醇修饰超氧化物歧化酶稳定性变化的研究

目的：了解各种分子量的聚乙二醇修饰超氧化物歧化酶(SOD)对其稳定的影响。方法：采用氰尿酰氯的修饰方法,用分子量为2000～20000的聚乙二醇(PEG)修饰SOD,测定SOD的酶活残存率及对修饰后的SOD的耐热、耐酸、耐碱和抗酶解能力进行研究。结果：聚乙二醇修饰后的SOD的耐热性、耐酸、耐碱以及抗酶解能力都明显增强,其中发现分子量6000的PEG修饰的SOD活件残余率较高,对酸、碱和酶的抗性较强。结论：分子量为6000PEG修饰的SOD的稳定性较高。     

棕榈酰化超氧化物歧化酶的制备及性质研究

为了增强超氧化物歧化酶的稳定性,用棕榈酸对其进行了修饰,在修饰条件下,酶分子表面氨基修饰率为55％时,酶的活力回收为63％。修饰后的酶在耐热、耐酸、耐碱、抗有机溶剂变性和抗蛋白水解能力上均高于天然超氧化物歧化酶,为将超氧化物歧化酶作成实用药物和进一步扩大其应用范围创造了条件。     

人铜锌超氧化物歧化酶的大规模生产工艺

本文以干扰素生产中废弃的人红细胞为原料,采用乙醇－氯份沉淀→磷酸氢二钾盐析→丙酮沉淀手续和ＤＥＡＥ—５２层析步骤,进行了人铜锌超氧化物歧化酶（ＣｕＺｎ－ＳＯＤ）大规模生产工艺的实验研究。结果表明,生产的酶制剂中含量为９０．６％,比活性在２０００ＭｃＣｏｒｄ—Ｆｒｉｄｏｖｉｃｈ单位／ｍｇ蛋白以上,无菌、无热原质、安全性等项指标符合国家卫生部对血液制品的要求。     

金属螯合亲和层析法纯化猪红细胞超氧化物歧化酶

本文报道以Sephadex G-200为基质的金属螯合亲和层析法纯化SOD、其比活为4508U/mg蛋白,收率为90.4％,经酸、碱、SDS-PAGE、考马斯亮兰染色均呈一条带,特异性的SOD活性染色呈阳性。分子量为34,000,氨基酸组成测定表明Tyr含量少,Gly含量高,紫外吸收光谱最大吸收在258nm处,园二色谱结果表明SOD空间结构为β—折迭及无规态,含极少量或几乎不含α—螺旋,等电聚焦电泳测定SOD有微不均一性,等电点分别为5.25,5.35和5.65。     

超氧化物歧化酶在反胶束体系中稳定性的研究

目的：考察反胶束体系组成对超氧化物歧化酶(SOD)抗氧化活性的影响。方法：以大豆磷脂氧化产生的氧自由基量为检测指标,考察温度、有机试剂以及表面活性剂浓度对反胶束体系中超氧化物歧化酶抗氧化活性的影响。结果：60℃时,反胶束中超氧化物歧化酶的抑制率由在水溶液中的52．48%升到75．38%,即SOD包封于反胶束中后热稳定性明显提高。表面活性剂可有效阻止有机溶剂对SOD的变性作用,SOD是不具界面活性的酶。结论：超氧化物歧化酶在反胶束体系中稳定性及抗氧化活性增强。     

北京鸭红细胞铜锌超氧化物歧化酶电荷异构体的分离和某些性质

等电聚焦表明,北京鸭红细胞铜锌超氧化物歧化酶由等电点分别为５．０,５．３,５．９,６．１和６．５的五个主要的活性组分（电荷异构体）构成,利用分析型聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电流泳进行电荷异构体的制备级分离,采用三氯酸沉淀法快速确定蛋白条带的位置,电渗洗脱法回收蛋白,获得其中两个电荷异构体,对比研究结果表明电荷异构体的活性,在酸组成,二级结构等性质无明显差异。     

静电作用与修饰铜锌超氧化物歧化酶的稳定性

铜锌超氧化物歧化酶(Cu, Zn-SOD)表面的赖氨酸经化学修饰后, 酶的稳定性显著提高. 赖氨酸被修饰后, 酶的电荷结构遂发生变化, 从而影响到酶分子电场. 使用FDPB方法(有限差分法求解Poission-Boltzman方程)计算了酶修饰前后的静电场变化, 以及对维持酶的结构稳定起重要作用的Cu, Zn配位结构的影响.结果表明, Cu, Zn配位体的两级离解常数在酶修饰后分别约下降10³, 10⁶.     

鸭血超氧化物歧化酶(SOD)的纯化及性质研究

超氧化物歧化酶(E、C、1.15.1.1)是催化超氧阴离子起歧化反应的金属酶类,血红细胞中的SOD属Cu Zn—SOD。本文详细报道了从鸭血分离纯化SOD的改进方法(同时用猪血作对比研究)。设计了热变性、(NH_4)_2SO_4分级监析、低浓乙醇—氯仿短时去除残留血红蛋白、凝胶层析四步纯化方案,获得高产率电泳纯SOD。用紫外扫描,PAGE电泳后考马斯亮蓝和SOD活性杂色,SDS—电泳,HPLC分离和各电泳带组分的N—端测定等技术检测纯度,并进行性质研究。证明所得SOD是均一的;N—端为Ala;分子量和亚分子量各为32,359和16,500dt;并与猪血SOD对比研究其某些性质;对HPLC出现的多个活力峰及PAGE电泳显现的多条活性带进行了讨论。     

SOD对4℃保存人红细胞损伤的防护作用研究

目的：探讨SOD对延时保存红细胞损伤防护作用的机理。方法：取义务献血人员静脉血,置4℃冰箱保存。保存前后不同时期用标准方法分别检查各项指标,用生物荧光素标记红细胞,测定24h活存率。实验分3组：ACD和／或GMA、抗氧化剂（SOD）组。结果：SOD组保存75d,无氧糖酵解率维持在保存前的86．2％,ATP为56．4％,PK为64．3％,明显高于GMA或ACD组。保存75d整体回输后24h活存率为86．1％,与GMA保存42d(89.1%)结果接近。结论：用抗氧化剂保养液在4℃条件下保存人血红细胞从42d延长到75d,红细胞无氧糖酵解率、ATP、PK和整体回输后24h活存率等均与42d保存方相符,为红细胞的活存提供了理论根据。     

铜离子螯合亲和层析纯化人铜锌超氧化物歧化酶

用铜离子螯合亲和层析对人红细胞铜锌超氧化物歧化酶进行了纯化．3次实验的结果表明,此项层析具有重复使用率高和蛋白结合量大的显著优点．提纯的人铜锌超氧化物歧化酶的比活性为3037U每毫克蛋白,并经活性染色和SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳证实其纯度均一．纯化中,探索了用紫外260nm与280nm的A比值判断酶纯度的简便方法．     

人胎肝超氧化物歧化酶的研究

采用离子交换和凝胶过滤层析法,从正常人胎肝提取、纯化铜锌超氧化物歧化酶(Cu.Zn-SOD),并对其性质作了研究,结果测得人胎肝组织Cu·Zn-SOD平均含量为6.44unit/g湿重,并发现随着胎龄的增加人胎肝Cu.Zn-SOD含量上升;纯化后的Cu·Zn-SOD在聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱上呈现单一区带;其活性受氰化钾抑制;以原子吸收光谱测得其铜、锌含量分别为0.39％和0.1％,采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测得其亚基分子量为16kD;氨基酸自动分析仪测得其亚基的氨基酸残基数为151.5;在紫外吸收光谱上于265nm和258nm处分别出现两个吸收高峰。本研究结果表明,人胎肝Cu.Zn-SOD与成人肝及其他组织的Cu.Zn-SOD理化性质上基本一致。     

牛红细胞超氧化物歧化酶活性中心的紫外光谱研究

应用差示分光光度法研究了牛红细胞Ｃｕ２Ｚｎ２ＳＯＤ的紫外光谱,归属和讨论了酶活性中心金属离子与配体间全部电荷转移谱带,给出了相应的配体轨道光学电负性,特别研究了涉及Ｚｎ２＋的电荷转移谱带．     

超氧化物歧化酶活性的肾上腺素自氧化紫外测定法

实验表明肾上腺素自氧化过程的325nm吸收峰远比480nm吸收峰高和稳定,并用超氧化物歧化酶(SOD)标准样品和人红细胞样品建立了SOD活性的肾上腺素自氧化紫外分光测定法(A₃₂₅)。方法简便、快速,比用480nm的方法更为灵敏,并有良好的定量性和重复性。     

氧传感器法测定红细胞SOD诊断Down综合症的研究

本文报道用氧传感器法测定了健康成人、正常新生儿、Ｄｏｗｎ氏综合症患者、胎儿红细胞的ＳＯＤ活性。Ｄｏｗｎ氏综合症患者的ＳＯＤ活性显著高于正常人。本研究可望为Ｄｏｗｎ氏综合症的快速产前诊断开辟新途径。     

重组人超氧化物歧化酶化学修饰的初步研究

在高效表达重组人铜锌超氧化物歧化酶(rh Cu/Zn SOD),并纯化得到比活大于4000单位的 rh Cu/Zn SOD 纯品的基础上,采用活化酯法将聚乙二醇(PEG)与 rhCu/Zn SOD 交联,获得分子量约6万的 PEG-SOD 交联物.经 PEG 修饰的酶稳定性增强,表现为对酸、碱和热的耐受力均较未交联酶高.修饰酶的生物半衰期为15h,是天然酶的90倍,酶活性保留80%以上.还实验观察了修饰剂用量与修饰酶保留活性之间的关系.     

硬脂酸修饰超氧化物歧化酶的制备及其性质研究

报道了一种修饰ＳＯＤ的方法。所得硬脂酸修饰ＳＯＤ比活力为每毫克蛋白１００００单位,经鉴定已达均一程度。测得其分子量为３５０００．修饰ＳＯＤ和天然ＳＯＤ在紫外光区的最大吸收均在２６５ｎｍ。修饰ＳＯＤ对温度、ｐＨ、蛋白酶水解的稳定性比天然ＳＯＤ增强,且免疫原性消除。在低浓度的某些有机介质中活性比在水中高。