酰化人红细胞超氧化物歧化酶稳定性的研究

用月桂酸对人红细胞超氧化物歧化酶（ｈ－ＳＯＤ）进行化学修饰得到酰化ｈ－ＳＯＤ（Ａｃ－ｈＳＯＤ）,并对Ａｃ－ｈＳＯＤ和ｈ－ＳＯＤ的稳定性进行了比较。结果表明：Ａｃ－ｈＳＯＤ活力为ｈ－ＳＯＤ的７２％。比活力为４０００Ｕ／ｍｇ,Ａｃ－ｈＳＯＤ的热稳定性、酸碱稳定性及抗蛋白酶水解能力均比天然酶提高。     

高氧预适应对大鼠心肌缺血损伤时抗氧化酶的影响

抗氧化酶具有减轻心肌缺血再灌注损伤的作用,在抗氧化酶中,比较重要的是超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）,谷胱甘肽过氧化物酶（ＧｌｕｔａｔｈｉｏｎｅＰｅｒｏｘｉｄａｓｅ,ＧＳＨｐｘ）和过氧化氢酶（ＣＡＴ）。为了解高氧预适应（ＨｙｐｅｒｏｘｉｃＰｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇ,ＨＯＰ）对大鼠心肌缺血损伤时抗氧化酶的影响,本实验将实验组大鼠放入高压氧舱内,每日吸８０－８５％氧气（１ａｔｍ,１５－２０％为氮气）６ｈ,连续７ｄ。利用Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆ装置做成心肌缺血再灌注模型。实验动物随机分为二个部分。第一部分可逆性心肌缺血（ＨＯＰＡ组与对照Ａ组）：缺血１０ｍｉｎ,再灌注６０ｍｉｎ。观察冠脉回流液中ＳＯＤ活力,检测心肌内抗氧化酶活力（ＳＯＤ,ＧＳＨｐｘ,ＣＡＴ）。第二部分不可逆性心肌缺血（ＨＯＰＢ组与对照Ｂ组）：缺血６０ｍｉｎ,再灌注６０ｍｉｎ。测定冠脉回流液中肌酸磷酸激酶（ＣＰＫ）含量,ＳＯＤ及心肌内抗氧化酶活力。结果表明：对于可逆性心肌缺血：ＳＯＤ,ＧＳＨｐｘ活力升高;对于不可逆性心肌缺血损伤：ＨＯＰ能减少ＣＰＫ释放,ＳＯＤ活力升高。     

韭菜线粒体锰超氧化物歧化酶纯化及性质研究

经硫酸铵沉淀、ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｃｅｌ层析和Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２００凝胶过滤,将韭菜线粒体ＳＯＤ纯化到均一程度。从６０００ｇ韭菜叶片线粒体中纯化得到２．５ｍｇ酶,酶比活力达１２００Ｕ／ｍｇ蛋白。该酶对ＫＣＮ和Ｈ２Ｏ２都不敏感,热稳定性弱 外光区吸收峰在２８０ｎｍ,凝胶过滤法测得其分子量为８２００Ｄ,ＳＯＳ－ＰＡＧＥ法测定其亚基分子量的２２０００Ｄ,ＤＮＳ法测得其Ｎ－末端氨基酸为缬氨酸。上述结     

小球藻RubisCO的纯化及其在异养向自养转变过程中的含量变化

经硫酸铵分部沉淀、ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－３００和ＤＥＡＥ－纤维素柱层析纯化了小球藻ＲｕｂｉｓＣＯ,得率为１５％,比活力达１．２３２μｍｏｌＣＯ２ｍｓ－１ｍｉｎ－１,分子量是５００ｋＤ,它和菠菜叶片ＲｕｂｉｓＣＯ在分子量、亚基组成和免疫特性等方面相似,反映ＲｕｂｉｓＣＯ在高等和低等植物中有较高的同源性。自养小球藻ＲｕｂｉｓＣＯ占细胞可溶性蛋白质的２４％。而异养转变后的小球藻细胞内不含ＲｕｂｉｓＣＯ。异养小球藻向自养生长转变过程中,２０ｈ后细胞内叶绿素含量逐渐增加,２４ｈ时细胞内出现ＲｕｂｉｓＣＯ,２４ｈ后大量增加,至４１ｈ时含量达最高峰;标志着小球藻细胞光合作用能力的恢复和加强。     

弯孢节丛孢和厚皮单顶孢菌株的RAPD分析

对来自不同地方的７个弯孢节丛孢（Ａｒｔｈｒｏｂｏｔｒｙｓ ｍｕｓｉｆｏｒｍｉｓ Ｄｒｅｃｈｓｌｅｒ）的９个厚皮单顶孢（Ｍｏｎａｃｒｏｓｐｏｒｉｕｍ ｅｕｄｅｒｍａｔｕｍ（Ｄｒｅｃｈｓｌｅｒ）Ｓｕｂｒａｍ）标准菌株用４个随机引物（ＯＶＷ－１８,ＯＰＷ－１６,ＯＰＭ－１,ＯＰＫ－１９）进行了随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）分析。扩增谱带聚类分析结果不能将弯孢节丛孢和厚皮单顶孢的菌株分开,具有附属丝的菌     

内皮素-1 mRNA反义寡核苷酸预防大鼠急性缺血性心律失常

本实验夹闭雄性ＳＤ大鼠冠状动脉左前降支（ＬＡＤ）造成急性心肌缺血,观察ＬＡＤ闭塞后１ｈ内缺血性心律失常的发生。在ＬＡＤ夹闭前２ｈ,静脉注射本室设计的人内皮素－１ｍＲＮＡ反义寡核苷酸（ＡＳ－ＯＤＮ）以阻断ＥＴ－１ｍＲＮＡ表达,观察ＡＳ－ＯＤＮ对血浆ＥＴ－１浓度和急性缺血性心律失常的影响。     

氧化修饰高密度脂蛋白对培养人动脉平滑肌细胞细胞周期蛋白D_1基因表达的影响

动脉平滑肌细胞（ｓｍ ｏｏｔｈ ｍ ｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌ,ＳＭＣ）是动脉粥样硬化（ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ,ＡＳ）斑块中的主要细胞,它的增殖在ＡＳ形成过程中极其重要．利用体外培养的人主动脉ＳＭＣ,观察了天然高密度脂蛋白（ｎａｔｉｖｅ ｈｉｇｈ ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ,Ｎ－ＨＤＬ）及氧化修饰ＨＤＬ（ｏｘｉｄｉｚｅｄ ＨＤＬ,ＯＸ－ＨＤＬ）对培养人主动脉ＳＭＣ ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１（细胞周期蛋白Ｄ１）基因转录表达的影响．结果表明：（１）Ｎ－ＨＤＬ对ＳＭＣｃｙｃｌｉｎ Ｄ１基因表达无影响（Ｐ＞ ０．０５）;（２）ＯＸ－ＨＤＬ使ＳＭＣｃｙｃｌｉｎ Ｄ１基因表达显著增强（Ｐ＜０．０１）,其表达量随时间（２、１２、２４ ｈ）延长而增加．上述结果表明,ＯＸ－ＨＤＬ的致ＡＳ作用可能与其刺激ＳＭＣｃｙｃｌｉｎ Ｄ１基因表达增加有关．     

人铜锌超氧化物歧化酶cDNA的克隆,测序及表达

用逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）,以人胎肝组织总ＲＮＡ为模板,扩增了人铜锌超氧化物歧化酶（ｈＣｕ,ＺｎＳＯＤ）的ｃＤＮＡ,并进行序列分析,将该ｈＣｕ,ＺｎＳＯＤｃＤＮＡ重组到Ｔ７启动子控制下的分泌型表达载体ｐＥＴ２２ｂ（＋）中,构建表达质粒ｐＥＴＳＯＤ,并转化大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）。ＳＤＳＰＡＧＥ及蛋白质印迹分析表明,经１ｍｍｏｌ／Ｌ异丙基硫代βＤ半乳糖苷（ＩＰＴＧ）诱导后,可高效表达一分子量为１９ｋＤ的蛋白质,与抗人ＳＯＤ多抗有特异的免疫反应,表达量约为菌体总蛋白质的３０％,具有特异性ＳＯＤ酶活性,酶活力可达１７９７ｕ／ｍｌ培基。     

白头叶猴的性比与社会结构

白头叶猴的性比与社会结构ＳＴＵＤＹＯＮＳＥＸＲＡＴＩＯＡＮＤＳＯＣＩＯ－ＳＴＲＵＣＴＵＲＥＯＦＦＷＨＩＴＥ－ＨＥＡＤＥＤＬＥＡＦＭＯＮＫＥＹＫｅｙｗｏｒｄｓＷｈｉｔｅ－ｈｅａｄｅｄｌｅａｆｍｏｎｋｅｙ;Ｓｅｘｒａｔｉｏ;Ｓｏｃｉｏ－ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ...     

化学修饰对反义寡核苷酸稳定性及抗流感病毒活性的影响

为了探讨 Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎ 化学修饰形式与 Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎ 稳定性,体外细胞毒性以及抗流感病毒活性之间的关系,合成了 ７ 种不同化学修饰形式的 Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎ：硫代 Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎ 及其 ３′端分别磷酸化和胆固醇修饰;３′与 ５′端硫代,中间为天然结构的混合骨架 Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎ;天然结构 Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎ 及其 ３′端分别磷酸化和胆固醇修饰等．测定了 ７ 种修饰体在小鼠血清, Ｍ Ｄ Ｃ Ｋ 细胞裂解液,含 ２％ 胎牛血清的 Ｄ Ｍ Ｅ Ｍ培养液以及水中的稳定性,体外细胞毒性和在细胞水平抗流感病毒活性．结果表明,混合骨架 Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎ,硫代 Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎ 及其 ３′端接磷酸和胆固醇的修饰形式在小鼠血清, Ｍ Ｄ Ｃ Ｋ 细胞裂解液与含２％ 胎牛血清的 Ｄ Ｍ Ｅ Ｍ 培养液中稳定性相对较高,作用 ２４～４８ ｈ 仅混合骨架 Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎ 与硫代 Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎ 发生部分降解;天然结构 Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎ 及其 ３′端接磷酸和胆固醇修饰体在 ２４ ｈ 内大部分降解．所有 Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎ 修饰体在水中具有很高稳定性,４８ ｈ 内未见降解作用．７ 种 Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎ 修饰形式在 Ｍ Ｄ Ｃ Ｋ 细胞中未表现明显的细胞毒性．硫代 Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎ 及其 ３′端接磷酸和胆     

苏云金杆菌超氧化物歧化酶的纯化和性质研究

苏云金杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）９１６５超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）,经硫酸铵分级沉淀、ＳｅｐｈａｄｅｘＦ－１００凝胶过滤及非变性凝胶电泳（ＰＡＧＥ）三步纯化,纯酶比活力为４３８８ｕ／ｍｇ,属Ｍｎ－ＳＯＤ,分子量为４７．９ｋｕ,由二个亚基组成,含１９种氨基酸。     

脂多糖对离体培养大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

本研究观察到１０－７～１０－５ｋｇ／Ｌ脂多糖（ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｈａｒｉｄｅ,ＬＰＳ）可显著促进血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）的增殖及ＤＮＡ的合成（Ｐ＜００５）。５×１０－４～１０－３ｋｇ／ＬＬＰＳ却抑制ＶＳＭＣ的增殖及ＤＮＡ的合成,降低其活力（Ｐ＜００１）,并呈时间依赖效应。一氧化氮合酶抑制剂ＮＮｉｔｒｏＬＡｒｇｉｎｉｎｅ（ＬＮＮＡ）可拮抗ＬＰＳ的抑制作用。大剂量ＬＰＳ作用组ＶＳＭＣ上清液中一氧化氮（ＮＯ）代谢产物ＮＯ－３和ＮＯ－２的含量与对照组相比显著增加（Ｐ＜００１）,４８ｈ组比２４ｈ组增加９１％,７２ｈ组比４８ｈ组增加４５％;同时,诱导性一氧化氮合酶（ｉｎｄｕｃｔｉｖｅｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｓｙｎｔｈａｓｅ,ｉＮＯＳ）免疫组化染色呈阳性。结果表明,低浓度ＬＰＳ促进ＶＳＭＣ增殖和ＤＮＡ合成,而高浓度ＬＰＳ却明显抑制ＶＳＭＣ增殖和ＤＮＡ合成,降低其活力。这种抑制作用可能与ＬＰＳ诱导ＶＳＭＣ产生的ＮＯ有关。     

诺卡氏菌形放线菌β-甘露聚糖酶的纯化和性质

产β－１,４－Ｄ甘露聚糖酶的诺卡氏菌形放线菌（Ｎｏｃａｒｄｉｏｆｏｒｍ ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ）菌株ＮＡ３－５４０,发酵培养７２ｈ,发酵液离心去菌体,上清经硫酸铵沉淀,９５％乙醇沉淀,ＣＭ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ５０柱层析、羟基磷灰石柱层析、ＤＥＡＥ－纤维素离子交换及Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００分子凝胶过滤柱等步骤,β－甘露聚糖酶的比活提高了１３７倍,获得凝胶电泳均一的蛋白样品。经ＳＤＳ－ＰＡＧ     

苏云金杆菌超氧化物歧化酶的纯化和性质研究*

苏云金杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）９１６５超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）,经硫酸铵分级沉淀、ＳｅｐｈａｄｅｘＦ－１００凝胶过滤及非变性凝胶电泳（ＰＡＧＥ）三步纯化,纯酶比活力为４３８８ｕ／ｍｇ,属Ｍｎ－ＳＯＤ,分子量为４７．９ｋｕ,由二个亚基组成,含１９种氨基酸。     

睫状神经营养因子对NO引起海马神经元毒性反应的影响

本研究采用原代培养大鼠海马神经元,观察睫状神经营养因子（ｃｉｌｉａｒｙ ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ ｆａｃｔｏｒ,ＣＮＴＦ）对ＮＯ引起细胞毒性反应的影响。ＮＯ供体硝普钠与Ｓ－亚硝基－乙酰青霉胺,ＮＯＳ底物Ｌ－Ａｒｇ及钙载体ｉｏｎｏｍｙｃｉｎ,均可引起海马神经元存活率下降,ＬＤＨ漏出增加;提前２４ｈ给予不同浓度ＣＮＴＦ,均能提高神经元的存活率,减少ＬＤＨ漏出,其作用呈剂量依赖性。     

大鼠内侧隔核、斜角带中NOS与ChAT、NGF-R、AChE的共存神经元

用酶组织化学和免疫组织化学双标技术,观察了正常ＳＤ大鼠基底前脑内侧隔核（ＭＳ）、斜角带垂直支（ＶＤＢ）和水平支（ＨＤＢ）中ＮＯＳ阳性神经元的形态和分布及ＮＯＳ与胆碱能神经元标志物ＣｈＡＴ、ＮＧＦ受体（ＮＧＦ－Ｒ）和ＡＣｈＥ之间的共存关系。结果发现,ＭＳ、ＶＤＢ和ＨＤＢ的头端ＮＯＳ阳性神经元较多、胞体较大、突起多,尾端ＮＯＳ阳性神经元数目较少、胞体较小、突起少而短。ＮＯＳ＋ＣｈＡＴ双标神经元占ＮＯＳ阳性神经元总数的９０％,占ＣｈＡＴ阳性神经元总数的３９％;ＮＯＳ＋ＮＧＦ－Ｒ双标神经元占ＮＯＳ阳性神经元总数的８３％,占ＮＧＦ－Ｒ阳性神经元总数的４０％;ＮＯＳ＋ＡＣｈＥ双标神经元占ＮＯＳ阳性神经元总数的９６％,占ＡＣｈＥ阳性神经元总数的３９％。这些结果为研究Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ＇ｓｄｉｓｅａｓｅ病理过程中基底前脑隔区胆碱能神经元退变与ＮＯ的关系提供了形态学依据。     

棕背鼠最适生境及其主导因子分析

棕背鼠最适生境及其主导因子分析ＴＨＥＯＰＴＩＭＡＬＢＩＯＴＯＰＥＯＦＬＡＲＧＥ－ＴＯＯＴＨＥＤＲＡＤ－ＢＡＣＫＥＤＶＯＬＥＡＮＤＴＨＥＡＮＡＬＹＳＥＳＯＦＩＴＳＭＡＩＮＦＡＣＴＯＲＳＫｅｙｗｏｒｄｓＬａｒｇｅ－ｔｏｏｔｈｅｄｒａｄ－ｄａｃｋｅｄｖｏｌ...     

扬子鳄颈髓一氧化氮合酶(NOS)和乙酰胆碱酯酶(AChE)阳性神经元的分布

本实验分别应用还原型尼克酰胺嘌呤二核苷酸脱氢酶（ＮＡＤＰＨ－ｄ）和乙酰胆碱酯酶（ＡＣｈＥ）方法,对扬子鳄颈髓ＮＯＳ和ＡＣｈＥ阳性神经元的分布进行了研究。结果表明：颈髓前角、中央灰质均含有ＮＯＳ和ＡＣｈＥ阳性神经元,颈髓后角有较为丰富的ＮＯＳ和ＡＣｈＥ阳性纤维和终末以及显色淡的ＮＯＳ阳性神经元。     

自由基对细胞膜和Ach受体效应的损伤及枸杞多糖的防护作用

本研究将爪蟾卵母细胞暴露于黄嘌呤氧化酶－次黄嘌呤（ＸＯ－ＨＰＸ）反应系统,观察自由基对细胞膜及其乙酰胆碱（Ａｃｈ）受体的损伤,结果表明,在自由基的作用下膜被动电学参数发生显著变化,其效果与ＸＯ－ＨＰＸ的浓度和作用时间成正比,ＸＯ－ＨＰＸ作用２ｈ不影响膜功能,大于４ｈ各项膜功能指标明显下降,Ａｃｈ极化反应减弱,上升时间延长,去极化幅度下降,下降１／２时间缩短;超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）可消除自由基对上述膜参数的影响。枸杞多糖可以使损伤膜的被动电学参数改善,但对Ａｃｈ去极化反应无恢复作用。结果提示,ＸＯ－ＨＰＸ反应系统是通过产生超氧阴离子自由基造成细胞膜和Ａｃｈ受体的损伤,枸杞多糖可对抗自由基对质膜的作用,但对Ｍ样受体无效。     

人Mn—SOD cDNA的克隆及高效表达

用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）,以人肝细胞株（Ｌ０２）总ＲＮＡ为模板,扩增了人锰超氧化物歧化酶（ｈＭｎ－ＳＯＤ）的ｃＤＮＡ。重组到Ｔ７启动子控制下的表达载体ｐＥＴ－２４ａ（＋）中,构建表爱质粒ｐＥＴ－ＭｎＳＯＤ,并转化大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及蛋白质印迹分析表明,经１ｍｍｏｌ／Ｌ异丙基硫代－β－Ｄ－半乳糖苷（ＩＰＴＧ）诱导后,可高效表达一分子量为２２ｋＤ的蛋白质,与抗人