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1.
利用EB病毒转化可产生较高水平人IgG和特异性抗2型登革病毒人抗体的Hu-TLC-SCID小鼠脾细胞,通过免疫组化、免疫荧光和PCR法检测转化细胞的人B细胞表面标志、EB病毒抗原和EB病毒基因。结果表明,被转化的Hu-TLC-SCID小鼠脾细胞能继续产生抗2型登革病毒的特异性人抗体,并具有人B细胞的、SmIgG标志及EB病毒潜伏膜蛋白-1(LMP-1)基因,可表达LMP-1和EB病毒核抗原(EBNA)。 相似文献
2.
用丙肝病毒C+E1区真核表达质粒pcDNA-HCV/C+E1按400ug/只剂量免疫BALB/C小鼠,14周后同一剂量再加强免疫一次。加强免疫后2周,在50%PEG1450介导下将脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞(51)融合。实验结果融合率达54.3%(313/576)。阳性率为5.4%(17”313)。克隆化后得到6株稳定分泌抗丙肝病毒C区单克隆抗体杂交瘤细胞株。这6株杂交瘤均产生IgM抗体,接种BALB/C小鼠后产生腹水的效价为164-1320(ELISA)。 相似文献
3.
利用基因免疫技术,将重组质粒PBS-LMP-Hyg直接注入BALB/C小鼠骨骼肌中,于第2、4、8周,用间接免疫荧光法检测鼠血清中抗EB病毒潜伏膜蛋白(LMP)特异抗体,结果表明,所有免疫小鼠(5/5)均产生特异体体,且抗体滴度随时间变化逐渐增高。 相似文献
4.
用E.coli0111:B4死菌体及其脂多糖(LPS)免疫BALB/C小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合获得6株稳定分泌抗LPS特异性单克隆抗体细胞株,其中一株为IgG2a类,5株为IgM类,轻链均为K型;染色体数目为90-98条;5株IgM类单克隆抗体识别5种不同的抗原表位;相对亲和力在10~8~10~(10)之间;1B12单抗经SephadexG-150纯化后,经还原性SDS-PAGE显示只有70KD的重键和25KD的轻链。 相似文献
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6.
hBMP—2cDNA在COS细胞和小鼠肌肉中的表达 总被引:4,自引:1,他引:3
研究了骨形态发生蛋白BMP-2cDNA在COS细胞和小鼠肌肉中的表达的情况,从pSPS65BMP-2质粒中回收BMP-2cDNA,删除5端的非翻译序列,插入pSVL载体中,构建了含有BMP-2全长编码序列的重组表达质粒pSVLBMP-2将表达质粒导入COS-7细胞中,细胞RNA点杂交结果表明,转染BMP-2基因的细胞内BMP-2的mRNA水平明显升高,细胞培养上清的ELISA显示,转染BMP-2c 相似文献
7.
用单克隆抗体作芜菁花叶病毒不同分离物外壳蛋白抗原结构的比较研究 总被引:3,自引:0,他引:3
用芜菁花叶病毒辽宁分离物(TuMV-LN),山东分离物(TuMV-SD)和榨菜分离物(TuMV-ZC)作抗原,分别免疫BALB/c小鼠,经脾细胞与SP2/O-Ag14骨髓细胞融合,共获得7个单克隆抗体分泌细胞株,为研究3个分离物的抗原差异,用胰蛋白酶消化TuMV的外壳蛋白(CP)。分别形成4、2和1条降解带,经SDS-15%PAGE后,转移至硝酸纤维薄膜上,用3个分离物的抗血清和7种单隆抗体分别做 相似文献
8.
小鼠2—细胞期经电融合后的早期胚胎发育 总被引:1,自引:0,他引:1
小鼠2-细胞期经电融合后的早期胚胎发育小鼠,电融合,细胞数,核型,四倍体胚胎小鼠2细胞期经电融合后的早期胚胎发育EARLYDEVELOPMENTOFMOUSEEMBRYOSPRODUCEDBYELECTROFUSIONAT2CELLSTAGE关键... 相似文献
9.
将Epstein-Barr病毒(EBV)膜抗原(MA)BLLF1基因,插入含有CMV启动子的真核表达载体pcDNA3下游BamHI位点,构建成真核表达质粒pcDNA3-MA。将纯化的DNA注射Balb/c小鼠股四头肌。经免疫的动物产生抗EB病毒MA特异性的抗体和中和抗体,依赖抗体细胞介导的细胞毒作用(ADCC),特异性T淋巴细胞增生性反应及细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤作用。基因免疫与基因-蛋白 相似文献
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EB病毒(EBV)是一种与地区性伯基特氏淋巴瘤、鼻咽癌、何杰金氏病等多种人体肿瘤有关的疱疹病毒.已往的研究表明,潜伏膜蛋白(LMP)基因是EBV最可能的致瘤基因.为制备LMP基因转基因小鼠,探讨LMP的体内致瘤作用,首先构建了含鼠金属硫蛋白-1(MT-1)基因调控区和LMP基因编码区的pBR322-MT-LMP质粒,并用电击法将该质粒与pKJ1-Neo质粒共转染人胃癌细胞株MGC,对MT-LMP基因在转染细胞中的整合、转录情况及重金属镉和镍对该融合基因的转录调控进行了研究.结果表明:(1)两质粒共转染效率为86.7%;(2)PCR和Southern杂交分析显示,完整的MT-LMP基因已整合入转染的MGC细胞基因组,且在不同的转染细胞克隆中,MT-LMP基因整合的方式及拷贝数不同,拷贝数从1到19不等;(3)RT-PCR和Northern杂交分析证实,MT-LMP基因不仅在转染的MGC中能够转录,而且在10μmol/L镉诱导下,MT-LMP基因转录增强,平均增高约1.4倍.结果说明,在MT-1基因调控区指导下,LMP基因不但有mRNA水平的表达,而且其表达受重金属镉的调控,上述结果为制备MT-LMP转基因小鼠 相似文献
12.
低氧对肺动脉内皮细胞PDGF—B链释放及平滑肌细胞生长的影响 总被引:3,自引:0,他引:3
应用蛋白dotblot技术检测了低氧内皮细胞条件培养液(HECCM)和常氧内皮细胞条件培养液(NECCM)内PDGF相对含量,并利用[3H]-TdR掺入法和流式细胞术观察了HECCM和NECCM及加入特异PDGF抗体对肺动脉平滑肌细胞(PASMC)生长的影响。结果表明,HECCM中的PDGF含量明显高于NECCM;HECCM能明显增强PASMC内DNA合成,促进PASMC从Go/G1期进入S期;当预先加入PDGF-B链抗体时,则会明显地抑制HECCM对PASMC的DNA合成,阻止PASMC从Go/G1期进入S期。结果提示,低氧时PASMC增殖与肺动脉内皮细胞分泌释放PDGF增加有关 相似文献
13.
人肝癌细胞的IGF—BP1分子特性及内源性蛋白酶对其降解的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
用SDS-PAGE电泳、高效液相色谱(HPLC)、质谱等方法,研究了人肝癌细胞(HepG2)分泌的胰岛素样生长因子结合蛋白-1(^35S-IGF-BP1)的分子结构、特性,及其被内源性蛋白酶降解的特点,^35S-IGF-BP1的经抗体免疫沉淀、生化分离,纯化为均一体,其分子是由多个亚构成的蛋白质,分子量约为27kD;细胞UMR、HepG2、H35BRL3A分泌的蛋白酶能将^35S-IGF-BP1催 相似文献
14.
将抗癌胚抗原(CEA)单链抗体基因插入家蚕杆状病毒转移载体pBacPAKHis, 与修饰的家蚕核型多角体病毒BmBacPAKDNA共转染家蚕细胞, 经同源重组得到含有在多角体蛋白基因启动子控制下的抗CEAScFv 基因的重组病毒BmBacScFv。用重组病毒分别感染家蚕细胞和幼虫, 在两者中均得到了高效表达, 产物分子量为28kD, 前者占细胞总蛋白的6 % , 后者为0 .3 mg/ 蚕。目的基因在家蚕细胞和幼虫中表达产物经Ni2+IDASepharose6B亲和柱纯化, 前者纯度可达90% 以上, 后者纯度较低; 纯化后的融合蛋白具有CEA 结合活力, 其亲和常数分别为5 .4×108/mol·L- 1 和2.3 ×108/mol·L-1 , 略低于其亲本单抗E7B10 2.7 ×109/mol·L- 1 。 相似文献
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研究了骨形态发生蛋白BMP-2cDNA在COS细胞和小鼠肌肉中的表达的情况,从pSPS65BMP-2质粒中回收BMP-2cDNA,删除5'端的非翻译序列,插入pSVL载体中,构建了含有BMP-2全长编码序列的重组表达质粒pSVLBMP-2。将表达质粒导入COS-7细胞中,细胞RNA点杂交结果表明,转染BMP-2基因的细胞内BMP-2的mRNA水平明显升高;细胞培养上清的ELISA显示,转染BMP-2cDNA后,细胞分泌产生的BMP-2显著增加。小鼠实验发现,在肌肉内用注射法导入BMP-2重组质粒后,局部组织内BMP-2的mRNA转录水平也明显提高。 相似文献
16.
将切去3’端穿膜序列的EB病毒膜抗原(MA)基因,插入pSV2-dhfr质粒的SV40早期启动子下游,构建了真核表达载体pSV2-dhfrGPTR,使两个SV40早期启动子分别调控MA和二氢叶酸还原酶(dhfr)基因。将该重组质粒转化CHO-dhfr细胞,在选择培养基中筛选阳性克隆,用氨甲喋呤加压扩增,建立了表达EBV-MA的克隆细胞系。westernblot分析证明,所表达的蛋白的分子量大约为340kd和220kd。经过细Sepharose2B琼脂糖凝胶层析初步纯化的抗原与福氏佐剂混合免疫小鼠,2周后小鼠血清中出现明显的gp340/220特异性抗体,表明切去嵌膜区结构的EBV-MA基因在CHO细胞中的表达产物具有同天然膜抗原相似的分子量大小、糖基化程度、免疫特异性和免疫原性,可望成为EB病毒人用基因工程亚单位疫苗。 相似文献
17.
利用双功能试剂N-琥珀酰亚胺-3(2-二硫吡啶)丙酸酯(SPDP)作交联剂,合成了尿激酶(UK)-抗人交联纤维蛋白降解物D-二聚体单抗(MA-HID1)化学偶合体(UK.MA-HID1)并用苯甲脒-Sepharose6B及人交联纤维蛋白降解物D-二聚体-Sepharose4B亲和柱纯化,获得偶合体产物,SDS-PAGE呈现一条带,其分子量约为200000,纤维蛋白平板法测活结果显示,偶合体中酶比活 相似文献
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Epsten—Barr病毒诱导永生化人上皮细胞恶性转化 总被引:3,自引:0,他引:3
为了使EB病毒能直接感染人上皮细胞,将PSG-CR2-Hyg载体转入永生化人上皮细胞(293细胞)中。通过间接免疫荧光法测定发现,转化的细胞表达EB病毒受体。用EB病毒感染CR2-293细胞后,23%的细胞可表达EB病毒抗原。用TPA作用于这些细胞后,表达病毒抗原的细胞数增加,。用PCR法从EB病毒感染细胞DNA中扩增出EB病毒DNAW片段。在TPA持续作用下,EB病毒感染的形态特征发生改变。把E 相似文献
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乳酸脱氢酶C4的精子免疫荧光定位特性 总被引:2,自引:0,他引:2
用14个抗小鼠LDH-C4的单克隆抗体对小鼠、树鼯和人精子的LDH-C4进行了间接免疫荧光定位。结果显示:不同的单抗可以结合到小鼠精子表面不同的位置,其中PA1(K021)在尾部,PA2(K022)、PA4和PA5(K023)在中段和尾部,SM1、SM2和PG2的中段,SM3和SM4在顶体,SM5在顶体和赤道板。人和树鼯精子表面的LDH-C4也呈现类似的情况。这些研究表明精子表面的LDH-C4呈现 相似文献
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Egr-1基因调控序列连接OSM cDNA表达质粒的构建及其在黑色素瘤细胞中的表达 总被引:6,自引:0,他引:6
OSM是一种对黑色素瘤细胞显示抑制作用的细胞因子.为进行OSM针对黑色素瘤的基因-放射治疗研究,构建了小鼠Egr-1基因调控序列引导入OSMcDNA真核表达质粒(pEO),pEO质粒转染小鼠B-16黑色素瘤细胞,经G418和抗人OSM抗体的筛选,获得了稳定表达OSM的克隆细胞(pEO-1细胞),OSM表达量可达5.97ng每105细胞天,分子量为32kD.pEO-1细胞用一定浓度H2O2处理后OSM表达量可提高62%,表明pEO重组质粒可在氧自由基的刺激作用下增强OSM表达 相似文献