GPX－abzyme对受XO／HX系统损伤的心肌线粒体的保护作用

探讨了研制的具有谷胱甘肽过氧化物酶活力的含硒抗体酶（ＧＰＸ－ａｂｚｙｍｅ）对于受损心肌线粒体的保护作用,利用牛的心肌线粒体为实验材料,通过线粒体的膨胀度、脂质过氧化物含量、ＣＣＯ活力变化及电镜观察等几个方面证明ＧＰＸ－ａｂｚｙｍｅ能抵抗ＸＯ／ＨＸ系统产生的自由基的损伤作用,ＥＳＲ研究也表明ＧＰＸ－ａｂｚｙｍｅ能明显降低ＸＯ／ＨＸ损伤系统中的自由基含量。     

化学修饰单克隆抗体模拟谷胱甘肽过氧化物酶

化学修饰具有底物谷胱甘肽（ＧＳＨ）结合部位的单克隆抗体（４Ａ４）,使其结合部位上的丝氨酸（Ｓｅｒ）转变成谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＰＸ）的催化基团硒代半胱氨酸（Ｓｅ－Ｃｙｓ）,因而产生高活力的含硒抗体酶（Ｓｅ－ａｂｚｙｍｅ）．突变的４Ａ４（ｍ４Ａ４）的ＧＰＸ活力达到了天然酶活力的１９％,并对ｍ４Ａ４的酶学性质和动力学性质进行了研究;硒代谷胱甘肽（ＧＳｅＨ）连到４Ａ４结合部位,其ＧＰＸ活力由３．８６Ｕ／μｍｏｌ提高到５９８．９Ｕ／μｍｏｌ用黄嘌呤氧化酶／次黄嘌呤为中心的心肌线粒体自由基损伤模型证明Ｓｅ－ａｂｚｙｍｅ（ｍ４Ａ４）可减轻活性氧对线粒体的损伤。     

参麦注射液抗心肌缺氧-再给氧损伤实验研究

采用Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆ离体心脏灌注模型,对大鼠心肌缺氧—再给氧损伤中抗自由基酶ＳＯＤ和ＧＳＨ－Ｐｘ,过氧化产物ＭＤＡ、心肌酶ＣＰＫ和心肌细胞超微结构进行了观察、同时探讨了参麦注射液的保护作用机理。结果表明：（１）心肌缺氧灌注４０ｍｉｎ,富氧再灌５ｍｉｎ,与正常对照组比较,心肌细胞超微结构损伤严重,线粒体数目减少,大部分空泡变性,嵴消失,糖原颗粒减少,心肌收缩结构受到严重破坏。同时ＣＰＫ活性明显升高,ＳＯＤ及ＧＳＨ－Ｐｘ活性明显降低,ＭＤＡ含量明显升高（Ｐ＜０．０１）。（２）预先给不同剂量参麦注射液进行灌注,与模型组比较,心肌超微结构损伤明显减轻,线粒体数目较多,嵴密集,未见肿胀变形,糖原颗粒丰富,心肌收缩结构基本正常。ＣＰＫ活性明显降低,心肌ＳＯＤ及ＧＳＨ－Ｐｘ活性明显增高,心肌ＭＤＡ含量明显降低（Ｐ＜０．０１）。且参麦大剂量组疗效优于复方丹参液（Ｐ＜０．０５）。我们推测其保护作用机理可能是稳定心肌细胞膜,保护心肌线粒体,增加能量供应,提高抗自由基酶活性,从而减轻氧自由基对心肌的损害     

高氧预适应对大鼠心肌缺血损伤时抗氧化酶的影响

抗氧化酶具有减轻心肌缺血再灌注损伤的作用,在抗氧化酶中,比较重要的是超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）,谷胱甘肽过氧化物酶（ＧｌｕｔａｔｈｉｏｎｅＰｅｒｏｘｉｄａｓｅ,ＧＳＨｐｘ）和过氧化氢酶（ＣＡＴ）。为了解高氧预适应（ＨｙｐｅｒｏｘｉｃＰｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇ,ＨＯＰ）对大鼠心肌缺血损伤时抗氧化酶的影响,本实验将实验组大鼠放入高压氧舱内,每日吸８０－８５％氧气（１ａｔｍ,１５－２０％为氮气）６ｈ,连续７ｄ。利用Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆ装置做成心肌缺血再灌注模型。实验动物随机分为二个部分。第一部分可逆性心肌缺血（ＨＯＰＡ组与对照Ａ组）：缺血１０ｍｉｎ,再灌注６０ｍｉｎ。观察冠脉回流液中ＳＯＤ活力,检测心肌内抗氧化酶活力（ＳＯＤ,ＧＳＨｐｘ,ＣＡＴ）。第二部分不可逆性心肌缺血（ＨＯＰＢ组与对照Ｂ组）：缺血６０ｍｉｎ,再灌注６０ｍｉｎ。测定冠脉回流液中肌酸磷酸激酶（ＣＰＫ）含量,ＳＯＤ及心肌内抗氧化酶活力。结果表明：对于可逆性心肌缺血：ＳＯＤ,ＧＳＨｐｘ活力升高;对于不可逆性心肌缺血损伤：ＨＯＰ能减少ＣＰＫ释放,ＳＯＤ活力升高。     

化学修饰单克隆抗体模拟谷胱甘肽过氧化物酶

化学修饰具有底物谷胱甘肽（ＧＳＨ）结合部位的单克隆抗体（４Ａ４）使其结合部位上的丝氨酸（Ｓｅｒ）转变成谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＰＸ）的催化基因硒代半胱氨酸（ＳｅＣｙｓ）因而产生高活力的含硒抗体酶（Ｓｅ－ａｂｚｙｍｅ）突变的４Ａ４（ｍ４Ａ４）的ＧＰＸ活力达到了天然酶活力的１９％并对ｍ４Ａ４的酶学性质和动力学性质进行了研究;硒代谷胱甘肽（ＧＳｅＨ）连到４Ａ４结合部位,其ＧＰＸ活力由３．８６Ｕ／μｍｏｌ提     

3,4‘,5—三羟基芪对外源性自由基发生致心肌损伤的保护作用

３,４’,４－三羟基芪能明显抑制外源性外源自由基发生素（ＯＦＲＧＳ）所致大鼠心肌肌膜和尼一粒体膜脂质过氧化物的增加。显著抑制ＯＦＲＧＳ引起的大鼠岂线粒体膨胀度增加,整体实验,ＴＳＨ能显著对抗阿毒素所致的心肌损伤。     

神经元缺氧复氧损伤时氧自由基的毒性作用及其机制＊

在原代分离培养Ｗｉｓｔａｒ乳鼠大脑皮质神经元上研究了缺氧复氧损伤（Ｈ／Ｒ）对神经细胞乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）,漏出率,死亡率和脂质过氧化物含量的影响,并选用一氧化氮（ＮＯ）合酶抑制剂Ｌ－ＮＧ－硝基－精氨酸（Ｌ－ＮＮＡ）巯基供体Ｎ－乙酰半胱氨酸（ＮＡＣ）和超氧化物歧化酶（Ｃｕ,Ｚｎ－ＳＯＤ）三种自由基清除剂进行预保护等方法来探讨机制。结果表明 Ｈ／Ｒ损伤引起ＬＤＨ漏出率,细胞死亡率和脂过氧化物含量极显著     

神经元缺氧复氧损伤时氧自由基的毒性作用及其机制

在原代分离培养Ｗｉｓｔａｒ乳鼠大脑皮质神经元上研究了缺氧复氧损伤（Ｈ／Ｒ）对神经细胞乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）,漏出率,死亡率和脂质过氧化物含量的影响,并选用一氧化氮（ＮＯ）合酶抑制剂Ｌ－ＮＧ－硝基－精氨酸（Ｌ－ＮＮＡ）巯基供体Ｎ－乙酰半胱氨酸（ＮＡＣ）和超氧化物歧化酶（Ｃｕ,Ｚｎ－ＳＯＤ）三种自由基清除剂进行预保护等方法来探讨机制。结果表明 Ｈ／Ｒ损伤引起ＬＤＨ漏出率,细胞死亡率和脂过氧化物含量极显著     

过氧化心肌线粒体产生的脂类自由基及（—）—EGCG的抑制…

本文利用ＥＳＲ技术研究了心肌线粒体酶修饰下的脂过氧化和脂类自由基,以及（－）－ＥＧＣＧ的抑制作用,结果表明：４－ＰＯＢＮ能捕集ｌｉｐｏｘｙｇｅｎａｓｅ诱发心肌线粒体产生的自由基,得到６条线谱的脂类自由基和４条线谱捕集物,（－）－ＥＧＣＧ对该本系中使用的ｌｉｐｏｘｙｇｅｎａｓｅ活性无影响,对所产生有明显的消除作用,并呈量效关系,对脂质过氧化的抑制作用,在本试验浓度范围内随浓度增加变化不大,最大抑制率     

过氧化心肌线粒体产生的脂类自由基及（－）－EGCG的抑制作用

本文利用ＥＳＲ技术研究了心肌线粒体酶修饰下的脂质过氧化和脂类自由基,以及（－）－ＥＧＣＧ的抑制作用。结果表明：４－ＰＯＢＮ能捕集ｌｉｐｏｘｙｇｅｎｇｓｅ诱发心肌线粒体产生的自由基,得到６条线谱的脂类自由基和４条线谱捕集物,（－）－ＥＧＣＧ对该体系中使用的１ｉｐｏｘｙｅｎａｓｅ活性无影响,对所产生的自由基有明显的清除作用,并呈量效关系。对脂质过氧化的抑制作用,在本试验浓度范围内随浓度增加变化不大,最大抑制率约２０％。     

生长抑素对胃粘膜的保护作用可能与清除自由基有关

本文观察到生长抑素对大鼠冷冻－束缚应激性胃粘膜损伤具有明显的保护作用,同时显著地抑制应激引起的胃粘膜丙二醛含量的升高。应激时大鼠胃粘膜内黄嘌呤氧化酶的生增高,同时谷胱甙肽过氧化物酶的活性降低,但超氧化物歧化酶的活性未见明显变化,生长抑素预处理可使应激时ＧＳＨ－ＰＸ活性的降低恢复到正常水平,但对ＸＯ和ＳＯＤ未见明显影响。上述结果提示,生长抑素对应激性胃粘膜损伤的保护作用似与增强胃粘膜对自由基的清除有     

兼具SOD和GPX活力的双功能酶的制备及性质研究

用苯甲基磺酰氟（ＰＭＳＦ）和Ｈ２Ｓｅ相继处理铜锌超氧化物歧化酶（Ｃｕ,Ｚｎ－ＳＯＤ）,将酶分子中的丝氨酸（Ｓｅｒ）转化为硒代半胱氨酸（ＳｅＣｙｓ）,从而引入了谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＰＸ）的催化基因,使其在ＳＯＤ酶活性大部分保留的情况下,具有ＧＰＸ活性,其ＧＰＸ活力是ＰＺ５１活力的３０倍,研究了双功能酶的最佳制备条件,包括ＰＭＳＦ的剂量、反应最适温度及Ｈ２Ｓｅ处理时间等,并用电子能谱、ＤＴＮＢ等方法     

兼具SOD和GPX活力的双功能酶的制备及性质研究

用苯甲基磺酰氟（ＰＭＳＦ）和Ｈ_２Ｓｅ相继处理铜锌超氧化物岐化酶（Ｃｕ,Ｚｎ－ＳＯＤ）,将酶分子中的丝氨酸（Ｓｅｒ）转化为硒代半胱氨酸（ＳｅＣｙｓ）,从而引入了谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＰＸ）的催化基团,使其在ＳＯＤ酶活性大部分保留的情况下,具有ＧＰＸ活性,其ＧＰＸ活力是ＰＺ５１活力的３０倍。研究了双功能酶的最佳制备条件,包括ＰＭＳＦ的剂量、反应最适温度及Ｈ_２Ｓｅ处理时间等,并用电子能谱、ＤＴＮＢ等方法测定了双功能酶的硒含量;测定了双功能酶对不同底物的米氏常数及双功能酶的荧光光谱、紫外吸收光谱及稳定性。     

含硒抗体酶性质的研究

在成功地制备了具有谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＰＸ）活性含硒抗体酶（Ｓｅ－ａｂｚｙｍｅ）的基础上,我们筛选了制备Ｓｅ－ａｂｚｙｍｅ的最佳条件,并对其理化性质及酶学性质和稳定性进行了深入的研究。结果表明,Ｓｅ－ａｂｚｙｍｅ的等电点为６．９５和７．０８,一为１５８ｋｄ;适ＰＨ和最适温度范围比天然酶宽广;抗体酶的贮藏稳定性比天然酶高。高Ｘ射线光电子能谱技术测得在Ｓｅ－ａｂｚｙｍｅ中含硒量为５ｍｏｌＳｅ／ｍｏｌ     

超氧阴离子对心肌细胞Ca^2＋平衡的影响及硒的保护作用

在超氧阴离子（Ｏ２＾－）作用下,心肌细胞内游离钙深度（［Ｃａ＾２＋］ｉ）显著升高;心肌细胞膜通透性明显增强;膜脂流动性下降。一定深度的硒代蛋氨酸（Ｓｅ－Ｍｅｔ）亚硒酸钠（ＮａＳｅＯ３）可不同程度地拮Ｏ２＾－的影响。前者作用更为显著。这两种硒化合物也能提高谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－Ｐｘ）的活性。综上所述,硒缺乏,高自由基及心肌细胞Ｃａ＾２＋平衡失调三者之间存在着相关性。在Ｏ２＾－作用下,心肌细胞内     

支链氨基酸对心肌缺血大鼠体内抗氧化系统的影响

用异丙肾上腺素（Ｉｓｏ）造成大鼠心肌缺血动物模型,观察支链氨基酸（ＢＣＡＡ）对大鼠心肌缺血损伤体内抗氧化系统及游离氨基酸的影响。结果表明,ＢＣＡＡ能明显降低体内的丙二醛（ＭＤＡ）水平,保护了体内谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－Ｐｘ）和超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）的酶活力;并使心肌中谷氨酸、天冬氨酸水平显著升高,血清和心肌中丙氨酸水平显著提高。因此,给予ＢＣＡＡ对心脏缺血性损伤具有一定的防护效果。     

三唑酮对绿豆幼苗叶片衰老的延缓作用

三唑酮处理可提高离体绿豆（ＰｈａｓｅｏｌｕｓｒａｄｉａｔｕｓＬ．）幼苗叶片叶绿素和蛋白质含量。叶片衰老过程中超氧物歧化酶（ＳＯＤ）、过氧化物酶（ＰＯＤ）、过氧化氢酶（ＣＡＴ）和抗坏血酸过氧化物酶（ＡｓＡＰＯＤ）活性及抗坏血酸（ＡｓＡ）和还原型谷胱甘肽（ＧＳＨ）含量降低。２０ｍｇ／Ｌ三唑酮可提高ＰＯＤ、ＡｓＡＰＯＤ活性和ＡｓＡ、ＧＳＨ含量,对ＳＯＤ、ＣＡＴ活性无影响。丙二醛（ＭＤＡ）含量在叶片衰老过程中提高,并与ＰＯＤ、ＡｓＡＰＯＤ活性和ＡｓＡ、ＧＳＨ含量呈显著负相关,三唑酮可降低ＭＤＡ含量。表明三唑酮有提高植物对膜脂过氧化作用的保护能力,延缓叶片的衰老作用。     

超氧阴离子对心肌细胞Ca~（2＋）平衡的影响及硒的保护作用

在超氧阴离子（Ｏ~－_２）作用下,心肌细胞内游离钙浓度（［Ｃａ~（２＋）］_ｉ）显著升高;心肌细胞膜通透性明显增强;膜脂流动性下降。一定浓度的硒代蛋氨酸（Ｓｅ－Ｍｅｔ）或亚硒酸钠（Ｎａ_２ＳｅＯ_３）可不同程度地拮抗Ｏ~－_２的影响。前者作用更为显著。这两种硒化合物也能提高谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－Ｐｘ）的活性。综上所述,硒缺乏,高自由基及心肌细胞Ｃａ~（２＋）平衡失调三者之间存在着相关性。在Ｏ~－_２作用下,心肌细胞内Ｃａ~（２＋）平衡失调比膜通透性的改变更为敏感。     

化学突变具有底物结合部位的单克隆抗体制备含硒抗体酶

开发了一种制备抗体酶的新方法。用二硝基氯苯（ＤＮＣＢ）专一地与谷胱甘肽（ＧＳＨ）的巯基反应,合成出半抗原ＧＳＨ－Ｓ－ＤＮＰ。用戊二醛将半抗原偶联到牛血清白蛋白（ＢＳＡ）上,制成全抗原。再用标准的单抗制备法获得具有ＧＳＨ结合部位的单抗（４Ａ４ＩｇＧ）。用苯甲基磺酞氟（ＰＭＳＦ）和Ｈ２Ｓｅ相继处理该单抗,则将单拉结合部位上的丝氨酸（Ｓｅｒ）突变成硒代半胱氨酸（ＳｅＣｙｓ,因而在单抗结合部位上引入了谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＰＸ）的催化基团。突变后的单抗具有ＧＰＸ活性,其活力已达到天然ＧＰＸ的数量级水平。动力学行为也与天然ＧＰＸ类似。这种新的含硒抗体酶有优于ＧＰＸ的一些特点。     

硒对培养人胚肝细胞Ⅲ型前胶原,羟脯氨酸合成的影响

原代培养人胚肝细胞经１．１５６×１０￣(－７）ｍｏｌ／Ｌ硒预处理４ｈ,加入２０ｍｍｏｌ／Ｌ四氟化碳作用２０ｈ,观察硒对其Ⅲ型前胶原（ＰＣⅢ）和羟脯氨酸（Ｈｙｐ）生成的影响。结果培养液中ＰＣⅢ水平、细胞内Ｈｙｐ含量及细胞内外丙二醛（ＭＤＡ）水平均降低,与未加硒对照组比较差别有显著性（Ｐ＜０．０１）。而硒谷腕甘肽过氧化物酶（Ｓｅ－ＧＳＨ－ＰＸ）活性则较对照组显著增高（Ｐ＜０．００１）,且ＰＣⅢ水平与Ｓｅ－ＧＳＨ－Ｐ＿Ｘ／ＭＤＡ比值呈负相关（ｒ＝－０．９１５６,Ｐ＜０．０１）。提示硒可提高Ｓｅ－ＧＳＨ－Ｐ＿Ｘ／ＭＤＡ比值,抑制脂质过氧化激发的肝细胞胶原合成。