伤寒沙门氏菌SOD的提取及抗原性研究

经硫酸铵分级沉淀,ＤＥＡＥ纤维素柱层析提取了伤寒沙门氏菌ＳＯＤ。提取后酶的比活性为３２７０Ｕ／ｍｇ,经聚丙烯酰胺凝胶电泳,蛋白质染色及酶活性染色显示提取的ＳＯＤ达到了电泳纯。酶活性染色法和原子吸收分光光度法测定结果表明提取的ＳＯＤ为Ｆｅ－ＳＯＤ。双向琼脂扩散试验结果显示抗伤寒沙门氏菌Ｆｅ－ＳＯＤ血清与牛红细胞ＳＯＤ不形成沉淀线,提示伤寒沙门氏菌Ｆｅ－ＳＯＤ与牛红细胞ＳＯＤ无交叉反应,抗体对酶活性抑制试验结果显示抗Ｆｅ－ＳＯＤ血清可抑制伤寒沙门氏菌及鼠伤寒沙门氏菌的Ｆｅ－ＳＯＤ和Ｆｅ／Ｍｎ－ＳＯＤ活性,对Ｍｎ－ＳＯＤ活性无抑制作用,说明伤寒沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌的ＳＯＤ之间有共同抗原,也提示ＳＯＤ的辅基似乎决定了其抗原特异性。     

两株发酵乳糖的伤寒沙门氏菌

我站于1983年分离的201株伤寒沙门氏菌中有两株从临床诊断为沙感的高烧病人血液中分离获得,此两株菌除对1、3和5%的乳糖迟缓发酵外,其余生化反应符合考夫曼沙门氏菌属定义;曾和标准伤寒沙门氏菌作交叉凝集吸收试验,两者抗原一致;尽管这类菌株很少见,但仍可能在日常实际工作中碰到,因而还是值得注意的问题。一个菌株若具有典型的沙门氏菌血清学特征,而个别生化反应异常。仍不能排除为沙门氏菌。     

从微生物中提取SOD的研究

对从某些微生物中提取ＳＯＤ的研究作了小结，指出深入探索破菌方法及纯化菌蛋白方法仍是今后的主要研究课题。     

鼠伤寒沙门氏菌噬菌体型的相变异

经过反复检查1980～1993年间在新疆维吾尔自治区各地收集的鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)菌株,发现了鼠伤寒沙门氏菌噬菌体型的相变异(phase variation)。在4774或4776噬菌体型(完全型)的培养物中,有一小部分可以发生变异,有的变为4000(第1相),有的变为0776或0774(第2相)。这种4000和0776(0774)噬菌体型培养物的多数,容易发生回复变异,变为原来的噬菌体型4774(或4776);有时,4000噬菌体型(第1相)可以变为0776(第2相),而0774噬菌体型(第2相)也可以变为4000(第1相)。在7776噬菌体型(完全型)的培养物中,也有一小部分可以变为7000(第1相)或0776(第2相)。7000(或7002)和0776噬菌体型培养物的多数容易发生回复变异,变为原来的噬菌体型7776(或7774)。从完全型培养物变为第1相或第2相的变异率为156%,从第1相或第2相培养物变为完全型的变异率为532%。这一现象的阐明,将有助于鼠伤寒沙门氏菌的噬菌体分型,和对鼠伤寒沙门氏菌感染的流行病学分析有重要意义。     

鼠伤寒沙门氏菌嘌呤生物合成调控研究

为研究16bp PUR box中8个完全保守的碱基中的2个碱基在与purR\++阻遏蛋白结合中的功能,对它们分别作了定点突变,使其分别从C,G突变为G,A。凝胶阻滞实验结果表明,含上述保守碱基突变的PUR box均不能与purR\++阻遏蛋白结合。证明这2个保守碱基对维持PUR box的功能是必须的,其中任一改变都导致PUR box功能的丧失。     

伤寒沙门氏菌的裂解气相色谱分析

本文应用裂解气相色谱法分析15株伤寒沙门氏菌(其中标准株1株,临床株14株)的色谱图,结果表明,临床株裂解气相色谱图分为A和B两类。A类(7株)色谱图完全相同;B类(7株)色谱图仅相似,但按其差异又可分为B₁组(4株),B:组(2株)和B,组(1株)。组内色谱图完全相同。B₁组图谱更接近于标准株。裂解图谱与血清型和抗药谱之间未发现有规律性的联系,但它们为伤寒沙门氏菌的鉴定和色谱图库的建立提供了有益的参考。     

伤寒沙门氏菌L型易变性及其流行病学意义探讨

本文研究表明,伤寒沙门氏菌在抗生素或胆盐等化学因素诱发下,极易形成Ｌ型缺壁细菌。而且该菌耐受去氧胆酸钠长期作用的现象,解释了伤寒沙门氏菌可以长期存活于胆囊中,成为具有重大流行病学意义的胆囊带菌者。文中还对Ｌ型引起伤寒的临床改变,从菌体变异角度进行了探讨。     

鼠伤寒沙门氏菌asd基因的克隆及序列分析

以鼠伤寒沙门氏茵标准株基因组DNA作为模板,用PCR的方法扩增鼠伤寒沙门氏菌的asd基因并克隆入质粒pUCl9,并对其进行测序,序列与献报道一致。同时将质粒pYA248上的链球菌asd基因进行了置换,观察了分别含有链球菌asd基因与鼠伤寒沙门氏菌asd基因的质粒在减毒鼠伤寒沙门氏菌X4072中的生长情况,结果表明含有鼠伤寒沙门氏菌的asd基因的高拷贝质粒pUCl9的菌株生长情况更好。为完善染色体／质粒平衡致死系统,构建减毒鼠伤寒沙门氏活菌疫苗奠定了基础。     

鼠伤寒沙门氏菌嘌呤生物合成基因表达的调控研究：Ⅱ.O^c突变体的…

已有研究证明,编码阻遏蛋白的调节基因ｐｕｒＲ能调节嘌呤从头合成途径中除ｐｕｒＢ外所有结构基因的表达。但迄今还缺乏阻遏蛋白与这些基因的操作基因相结合的直接证据。本文报道以嘌呤结构基因ｐｕｒＤ和ｐｕｒＧ的ＭｕｄＪ插入物为出发株,在外加过量腺嘌呤核苷（２ｍｍｏｌ／Ｌ）的ＭａｃＣｏｎｋｅｙ平板上通过选择红色菌落分离Ｏ＾ｃ突变体的结果,从上述两株出发株分别获得了８株和９株独立的消阻遏突变体。共转导分析和顺反     

焦磷酸测序检测食品中鼠伤寒沙门氏菌

根据鼠伤寒沙门氏菌的特异序列,分别设计扩增引物和测序引物,建立焦磷酸测序检测鼠伤寒沙门氏菌的方法。针对鼠伤寒沙门氏菌设计特异性扩增引物,对目标片段进行PCR扩增,然后制备单链模板,并利用测序引物进行焦磷酸测序。测序结果表明,6株不同来源的鼠伤寒沙门氏菌均可以扩增出碱基序列为TACAACCGGA GTGCACATTA ATCCCGCAGC的基因片段,而30株阴性对照菌株均未得到扩增。进行BLAST比对表明,该序列与GenBank中鼠伤寒沙门氏菌的碱基序列100%匹配。焦磷酸测序法是一种快速、准确的检测方法,可用于食品中鼠伤寒沙门氏菌的快速检测。     

PhoQ基因重组鼠伤寒沙门氏菌株的构建及毒力研究

应用PCR技术从鼠伤寒沙门氏菌基因组DNA中克隆phoQ基因片段,构建原核表达pUC18重组质粒,测定序列(GenBank登录号为DQ787014),并转入鼠伤寒沙门氏菌,经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,进行高效表达。对重组菌株、野生菌株进行毒力检测对比实验,通过口腔注入45日龄健康无菌KM小鼠,测定其半数致死量(LD50)。结果发现：重组菌株与野生菌株的毒力存在显著差异,其半致死量分别为3.981×107 cf u/ mL and 5.012×102 cf u/ mL,PhoQ基因重组菌株的毒力远远低于非重组菌株。说明phoQ基因是调节鼠伤寒沙门氏菌致病机制中一个重要的调节因子。     

鼠伤寒沙门氏菌嘌呤生物合成调控研究XI.PUR box的突变分析

为研究１６ｂｐ ＰＵＲ ｂｏｘ中除第３位的Ｇ与第１４位的Ｃ外,余下６个完全保守碱基的４个在与ＰｕｒＲ阻遏蛋白结合中的功能,对它们分别做了定点突变,使其分别从Ｃ、Ａ、Ａ和Ｔ突变为Ｇ、Ｇ、Ｇ和Ｃ。凝胶阻滞实验结果表明,含上述指定突变的：ＰＵＲｂｏｘ均不能与ＰｒｕＲ阻遏蛋白结合。由此证明,这４个保守碱基对维持ＰＵＲ ｂｏｘ的功能是必须的,其中任一改变都导致ＰＵＲｂｏｘ功能的夹失。