一种东亚钳蝎碱性神经毒素的纯化和初步晶体学研究

经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０和ＳＰ－ＳｅｐｈａｄｅｘＣ－２５两次柱层析,从河南淅川马氏钳蝎毒素中分得一种碱性神经毒素ＢｍＫＭＩ８．等电聚焦和ＳＤＳ电泳显示单一组分,其ｐＩ为９．１,Ｍｒ为７１００．毒性测试结果表明,该组分对小白鼠有较强的毒性,对昆虫也有一定的毒性,已获得该毒素的两种晶型的大单晶,并测定其空间群为Ｐ２＿１２＿１２＿１,晶胞参数为：ＢｍＫＭＩ８－Ａ：ａ＝３６．７,ｂ＝２６．６,ｃ＝５２．０,ＢｍＫＭＩ８－Ｂ：ａ＝３６．６４Ａ,ｂ＝３７．３１,ｃ＝３７．９５,已收集了ＢｍＫＭＩ８－Ｂ分辨率为１．７４的Ｘ射线单晶衍射数据。     

具有中等毒性的马氏钳蝎神经毒素的纯化和初步晶体学…

运用柱层析技术对产自淅川和常德的马氏钳蝎毒素进行分离纯化,得到８种哺乳动物神经毒素。运用制备型等电聚焦电泳技术,对常德样品中具有中等毒性的蝎神经毒素进一步纯化,获得了高纯度样品。两个产地的蝎毒素ＢｍＫ５均已经成功地获得了大晶体。空间群均为Ｐ２１２１２１,晶胞参数分别为：ａ＝３８．４６埃,ｂ＝３７．２８埃,ｃ＝３６．９７埃;ａ＝３８．４４埃,ｂ＝３７．５５埃,ｃ＝３６．８３埃。对两个产地的晶体分别收     

具有中等毒性的马氏钳蝎神经毒素的纯化和初步晶体学研究

运用柱层析技术对产自淅川和常德的马氏钳蝎毒素进行分离纯化,得到８种哺乳动物神经毒素。运用制备型等电聚焦电泳技术,对常德样品中具有中等毒性的蝎神经毒素（ＢｍＫ５）进一步纯化,获得了高纯度样品。两个产地的蝎毒素ＢｍＫ５均已经成功地获得了大晶体。空间群均为Ｐ２１２１２１,晶胞参数分别为：ａ＝３８．４６埃,ｂ＝３７．２８埃,ｃ＝３６．９７埃（淅川）;ａ＝３８．４４埃,ｂ＝３７．５５埃,ｃ＝３６．８３埃（常德）。对两个产地的晶体分别收集了２．１埃（淅川）和１．６２埃（常德）分辨率的衍射数据。     

一种强毒性中华马氏钳蝎哺乳动物神经毒素新晶型的初步晶体学研究

经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０和Ｓｐ－ＳｅｐｈａｄｅｘＣ－２５两次柱层析,从常德马氏钳蝎毒素中分离得到一种强毒性的哺乳动物神经毒（Ｂｍｋｌ）,等电聚焦及ＳＤＳ－电泳显示它为单一组份,其ｐＩ为９．４４,ＭＷ为７．１ＫＤ．毒性试验结果表明,该组份对小白鼠的最小致死刘量为０．５μｇ／ｇ小白鼠,对昆虫及甲壳动物也有毒性．已获得该毒素的一种新晶型的大晶体。其空间群为Ｐ２１２１２,晶胞参数为：α＝８３．４６Ａ,ｂ＝４０．３６Ａ,ｃ＝２４．００Ａ,单位晶胞体积为８０８４２．６９Ａ,一个不对称单位含１个分子,已收集了分辨率为１．７５Ａ的数据．     

两个东亚钳蝎抗哺乳动物神经毒素的cDNA序列

从我国山东东亚马氏钳蝎尾腺中分离纯化ｍＲＮＡ,经逆转录构建了ＢｍＫ蝎毒ｃＤＮＡ文库。利用ＰＣＲ扩增,筛选到两个抗哺乳动物毒素的ｃＤＮＡ基因,并测定了序列。这两个ｃＤＮＡ阅读框均为２５２ｂｐ组成,可翻译８４肽的毒素前体,包括Ｎ端１９个氨基酸组成的信号肽,６４个氨基酸残芭的成熟毒蛋白,以及Ｃ端一个额外的碱性氨基酸Ａｒｇ。其中由一ＣＤＮＡ所推导的氨基酸序列（ＢｍＫＭ１）一已知的天然毒素ＢｍＫ１蛋白序列完     

不同产地中华马氏钳蝎神经毒素的分离纯化和部分性质比较研究

经Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－５０,Ｓｐ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｃ－２５两次柱层析,从没产地的东亚马氏钳歇粗毒中分别得到了一组碱性哺乳动物神经素和一种甲壳类神经毒素,对它们进行的等电点、分子量、动物毒性等部分性质的研究与比较结果表明,淅川、常德与益都产的蝎毒无论在柱层析行为上,还是在等电点、分子量、各组分的毒性大顺序及某些对应组分的结晶行为上有很大相似性,仅存在略微的差异。     

东亚钳蝎神经毒素基因BmK IT3的克隆及其在大肠杆菌中的表达

东亚钳蝎毒素基因ＢｍＫＩＴ3 编码是由 6 5个氨基酸残基组成的多肽物质。该类毒素为专一性作用于昆虫的抑制型神经毒素 ,它已被广泛用于研究离子通道作用机理[1 ] ;同时 ,它是研究蛋白质结构和功能的极好模型 ,是研究神经药理学的理想工具 ,将具有药理活性和昆虫毒性的基因导入细胞或动植物体内具有十分重要的应用价值。它对昆虫作用的专一性很高 ,对哺乳动物无害或毒性很小 ,可作为一种安全、有效的生物杀虫剂[2 ,3 ] 。我们的研究是对该基因密码子进行优化 ,采用化学合成的方法合成了适于在昆虫中表达的ＢｍＫＩＴ3 的两条长的引物 ,通过…     

东亚钳蝎中一个中性哺乳动物神经毒素全长cDNA的克隆和分析

构建了东亚钳蝎毒腺cDNA文库,根据东亚钳蝎中性哺乳动物神经毒素BmKM4的氨基酸序列设计并合成引物,用PCR方法从文库中筛选到BmKM4全长cDNA序列.它由5′UTR、可读框和3′UTR组成.与其他东亚钳蝎哺乳动物神经毒素cDNA的相应区域相比,BmKM4cDNA的5′UTR高度保守,而其3′UTR则变异较大.AUG的旁侧序列为AAAATGAA,与绝大多数蝎毒素基因一致.在BmKM4mRNApoly(A)尾上游17nt处,有一典型的腺苷化信号(AATAAA).可读框编码84个氨基酸的毒素前体,包括N端19个氨基酸残基组成的信号肽,中间64个氨基酸残基组成的成熟毒素,以及C末端的额外碱性氨基酸Arg.椐据一般规律,尾端Arg在毒素前体的成熟过程中会被切除。 Abstract:A full-length cDNA sequence encoding the precursor of a neutral mammalian neurotoxin,BmKM4,was first isolated from a cDNA library made from thc venom gland of Chinese scorpion Buthus martensii Karsch.ABmKM4-specific primer and a primer corresponding to the partial sequence of pSPORT1 vector were used as forward primer and reverse primer,respectively,to screen the cDNA library by PCR reaction.Sequence analysis of positive clones showed that the BmKM4 cDNA is composed of three parts:5'UTR,open reading frame and 3'UTR.Compared with the corresponding regions of other scorpion mammalian neurotoxin cDNAs,the 5'UTR of BmKM4 cDNA is highly conservative versus highly variable for 3'UTR.The lateral sequence of initiation codon (AUG) is AAATGAA which is in consistent with that of most scorpion toxin genes.On the 3'-end,a putative polyadenylation signal (AATAAA) was 1Tnt upstream of Poly (A) tail.The open reading frame encodes a precursor of 84 amino acid residues,including a signal peptide of 19 residues,a mature toxin(BmKM4) of 64 residues,and a basic residue (Arg) tailwhich would be removed in the processing step.     

东亚钳蝎昆虫毒素研究进展

述了我国东亚钳蝎（Buthus martensii Karsch)昆虫神经毒素的分离、,纯化、性质、基因、结构、结晶及晶体学研究的概况。     

东亚马氏钳蝎(Buthus martensi Karsch)神经毒素组分BmK Ⅲ的激光拉曼光谱研究

毒素BmKⅢ是从马氏钳蝎毒液中提取的一个毒性最强的α类神经毒素.从该组分的水溶液和重水溶液拉曼光谱(450—1750cm~(-1))的分析,可以确定其分子的二级结构中以β折迭为主,有较大量的β回折结构和一定数量的无规卷曲,α螺旋不多.采用Lippert提出的线性方程组法计算得到分子中含β折迭41.7%,α螺旋17.7%,无规卷曲40.6%.分子中的四对二硫键均为gauche—gauche—gauche构型.侧链芳香性氨基酸残基大多数暴露在分子表面.文中对有有关毒素构象方面的问题进行了讨论.     

东亚钳蝎中一个中性哺乳动物神经毒素全长cDNA的克隆和分析

构建了东亚钳蝎毒腺cDNA库,根据东亚钳蝎中性哺乳动物神经毒素BmKM4的氨酸序列设计并合成引物用PCR方法从库中筛选到BmKM4全长cDNA序列。它由5′UTRc、可读框和3′UTR组成。与其他东亚钳蝎哺乳动物神经毒素cDNA的相应区域相比,BmKM4cDNA的5′UTR的高度保守,而其3′UTR则变异较大。AUG的旁侧序列为AAAATGAA,与绝大多数蝎毒素基因一致。在BmKM4mRNApoly(A)属上游17nt处,有一典型的腺苷化信号（AATAAA）。可读框编码84个氨基酸的毒素前体,包括N端19个氨基酸组成的信号肽,中间64个氨基酸残基组成的成熟毒素,以及C末端的额外碱性氨基酸Arg。根据一般规律,尾端Arg在毒素前体的成熟过程中会被切除。     

雄性东亚钳蝎减数分裂和染色体组型

本文作者对我国药用动物东亚钳蝎——Buthusmartensi的精母细胞减数分裂和染色体组型进行初步观察。该虫的减数分裂有细线期、偶线期、粗线期、双线期和终变期。染色体数目24者居多,2n=24,即2n=22A+xy。染色体组型有3对为中部着丝粒染色体,7对亚中部着丝粒和1对端部着丝粒染色体。1对性染色体xy均为亚中部着丝粒染色体。     

人工饲养东亚钳蝎的生态观察

本文对东亚钳蝎在人工饲养条件下的各种生态条件进行了多方面的实验，观察和分析。结果表明，该种对温度适应广泛，为－３－３９℃。对强光呈负趋性，对弱光及红光呈正趋性。不同季节对湿度要求不同。对强风、噪声、农药、化肥反应敏感。对盐碱有较强的适应性。该种为杂食性动物，以肉食为主，兼食植物，并具有相互残杀的习性。     

几种环境因素对东亚钳蝎繁殖的影响

本实验观察了温度、种群密度、风、噪声对东亚钳蝎繁殖的影响。结果表明,在控温条件下（２６￣３０℃）,东亚钳蝎不冬眠,比自然条件下养殖的蝎提前半年左右产下仔蝎,母蝎的成活率提高。种群密度过大时,种群内斗争激烈,母蝎和仔蝎成活率降低。噪声和强风对蝎繁殖不利。     

东亚钳蝎毒腺腺上皮细胞的光镜和电镜观察

本文取自人工饲养的成年雌蝎５０只，采用光镜和电镜技术，观察其腺上皮细胞的形态结构，其结果证实：蝎毒腺为单管泡状腺，腺上皮为单层柱状，主要由暗细胞和明细胞组成。暗细胞内充满了大量的分泌小泡和分泌颗粒，而明细胞内含有大量溶酶体样的结构。     

东亚钳蝎毒液透明质酸酶全基因序列的克隆和结构分析

本研究通过以东亚钳蝎毒腺为研究材料,采用TRIzol法分离透明质酸酶的全基因序列,并从中分离出4个东亚钳蝎透明质酸酶序列,分别命名为BmHYⅠ、BmHYⅡ、BmHYⅢ和BmHYⅣ。BmHYⅠcDNA全长是1423 bp,包括42 bp的5’非翻译区,1230 bp的开放阅读框,编码了一个410个氨基酸,还有151 bp的3’非翻译区;BmHYⅠ中包含5个糖基化位点;与其它物种蛋白质比对结果显示,BmHYⅠ中有10个高度保守半胱氨酸残基形成5个二硫键。BmHYⅠ在二级结构中形成了13个螺旋和14个折叠,其中折叠主要分布在N端和C端。系统进化树结构表明,东亚钳蝎BmHYⅠ与其它蝎子物种透明质酸酶亲缘关系最近,其次是蜘蛛,最后是脊椎动物。而BmHYⅡ、BmHYⅢ和BmHYⅣ序列缺少终止密码子,蛋白序列与BmHYⅠ具有高度同源性。本研究结果为进一步透明质酸酶的功能提供数据参考。