卡介苗标准化

<正> 当前,普通认为世界各地用于制备卡介苗的 BCG亚株的特性是不同的。国际和各国的研究机构在不断努力制定用于实验室和临床上评价卡介苗的一些标准。多年来为了制定出一些评价BCG效力的可接受标准,WHO,IUAT及国际儿童中心召开专家会议,举行讨论会,建立了研究小组。HEW生物学标准化常设分部已作出有关BCG标准化的最低要求,但是到目前为止并没有一个对所有菌苗进行测定的普通一致的有效方法。例如,哥本哈根WHO结核研究机构组织协作。于1959年在七个国家的八个实验室进行了测定BCG不同方法的研究,每个实验室都得到同样的四种菌苗,其中七个实验室用正规检定法做了活菌计数,一个实验室用自己的mg/ml法作细菌总数测定。同一批菌     

高密度共生发酵和强黏附性优势菌株的筛选CSCD

目的 比较10株乳酸菌的活菌数,筛选高密度共生发酵和高黏附性的共培养菌株,为后期开发应用奠定基础。方法 对单个菌株及共培养菌株进行发酵活菌数的筛选,筛选出对Caco-2细胞黏附性强的优势菌株,并比较其耐酸、耐胆盐和抑制肠道致病菌能力。结果 10株益生菌菌株中,鼠李糖乳酪杆菌AI-11与发酵粘液乳杆菌AI-25、两歧双歧杆菌AI-91与动物双歧杆菌乳亚种AI-01的组合菌株较单个菌株具有协同效应,活菌数显著高于单个菌株(均t=8.878 0,P<0.001),且具有较好的抑制肠道致病菌大肠埃希菌和奇异变形杆菌的效果,较好的耐受pH 2.5的酸性环境和胆汁盐环境的特性,较鼠李糖乳酪杆菌GG和发酵粘液乳杆菌CECT 5716具有较好的Caco-2细胞黏附性(t=9.004 1, P<0.001;t=11.301 2,P<0.001)。结论 筛选出的2个共培养组合菌株在发酵能力和细胞黏附性方面具有活菌数高、黏附性强的优势,可应用于食品、功能食品及膳食补充剂中,以增强改善肠道菌群的功效性。     

志贺氏菌链霉素依赖菌株回复突变的研究——Ⅱ.回复突变株的致病力

志贺氏菌链霉素依赖菌株(Streptomycin-dependcnt Shigella Strains以下简称S~d)能普遍地发生对链霉素不依赖的回复突变现象,并伴随有其它生物学性状的改变。目前S~d不仅作为痢疾减毒口服活菌苗株在现场人群中使用,而且布氏菌、伤寒、霍乱等其它传染病的致病菌也以此作为减毒途径而进行研究。因此,回复突变株(S~(rev))是否会发生毒力改变而返祖为有毒菌株,这在活菌苗使用中是一个共同关心的问题。本文着重研究回     

痢疾T32与伤寒Ty21a两价菌株的组建

用体内重组的方法,将经过多次现场考核,证明安全有效的痢疾T32无毒株和伤寒Ty21a无毒株,用前者作给体后者作受体,以两步法组建成一株既具痢疹福氏2a抗原特性又保持伤寒Ty21a株特性的两价菌株。经猴体免疫力试验,在对照组全部发病的情况下,能保护80％的免疫猴免于感染菌痢;以c,H系小鼠做免疫力试验,能保护伤寒毒菌的感染。该菌株经实验室传30代仍保持稳定,豚鼠角膜毒力试验无炎症反应,以400亿活菌口饲猴体,对101人,每人口服15 7—200亿活菌,均未发现不良反应,是一株有希望的菌苗候选株。     

口服卡介菌治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎的研究

目的：观察口服卡介菌对实验性变态反应性脑脊髓炎（EAE）的治疗效果。方法：制备EAE大鼠模型,随机分为BCG高、中、低剂量组和PBS对照组,每组各15只,对大鼠治疗后的临床症状及病理组织学进行评估,提取脾脏淋巴细胞,流式细胞术检测T淋巴细胞亚群,3H—TdR掺入法检测淋巴细胞增殖能力。结果：BCG组EAE大鼠与对照组相比,临床症状减轻,发病时间延迟,炎性细胞浸润数减少;急性期,口服BCG各组CD4^＋、CD8^＋T细胞的数量随剂量增加而增加,缓解期CD4^＋、CD8^＋T细胞数量减少;口服BCG可促进EAE大鼠T淋巴细胞增殖能力;高、中剂量组上述变化均较其它分组明显。结论：口服BCG可很好的诱导免疫耐受,延迟EAE发病,减轻炎症反应,改善临床症状。     

构巢曲霉冻干菌粉的制备及优化

【背景】目前,用以降解园林绿化废弃物中木质素的菌剂多为液体菌剂或固体菌剂,鲜有对粉状菌剂的研究。【目的】研制高活性冻干菌粉,提高其冻干存活率并优化其工艺,以解决液体菌剂或固体菌剂在运输、储藏及使用上存在的问题。【方法】以一株木质素降解菌构巢曲霉(Aspergillus nidulans)为研究对象,利用真空冷冻干燥法制备冻干菌粉。以菌株的冻干存活率为评价指标,通过单因素试验筛选适于菌株冻干过程的保护剂种类及浓度梯度,再通过正交试验优化冻干菌粉复合保护剂配方。获得配方后,进一步探究冻干菌粉的复水条件和储藏条件。【结果】保护效果较优的4种保护剂成分经复配后对冻干存活率的影响顺序为蔗糖>葡萄糖>脱脂乳粉> α-乳糖。经优化后的保护剂配方以蔗糖15%、葡萄糖1%、α-乳糖10%、脱脂乳粉1%为最佳;复水条件以生理盐水为溶剂,复水30 min为最优。在此条件下制备和使用冻干菌粉,菌株的冻干存活率可达83.33%,有效活菌数可达1.2×10¹⁰ CFU/g。最佳储藏温度为-20 ℃,在此温度下保存28 d后,菌粉活性无明显下降。【结论】该研究获得的制备和储藏构巢曲霉冻干菌粉条件,具有菌株损失率低、可长时间保存的特点,对推进木质素降解菌在实际生产中应用具有积极作用。     

口服卡介菌治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎的研究

目的:观察口服卡介菌对实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)的治疗效果。方法:制备EAE大鼠模型,随机分为BCG高、中、低剂量组和PBS对照组,每组各15只,对大鼠治疗后的临床症状及病理组织学进行评估,提取脾脏淋巴细胞,流式细胞术检测T淋巴细胞亚群,3H-TdR掺入法检测淋巴细胞增殖能力。结果:BCG组EAE大鼠与对照组相比,临床症状减轻,发病时间延迟,炎性细胞浸润数减少;急性期,口服BCG各组CD4+、CD8+T细胞的数量随剂量增加而增加,缓解期CD4+、CD8+T细胞数量减少;口服BCG可促进EAE大鼠T淋巴细胞增殖能力;高、中剂量组上述变化均较其它分组明显。结论:口服BCG可很好的诱导免疫耐受,延迟EAE发病,减轻炎症反应,改善临床症状。     

甘肃酒泉等地区豆科植物根瘤菌的遗传多样性和系统发育分析

采用16S rDNA PCR-RFLP和16S rDNA全序列分析技术对采集自甘肃酒泉、嘉峪关等8个地区的豌豆、菜豆等几个不同豆科植物根瘤中分离的53株供试菌株和9株参比菌株进行了遗传和系统发育分析。16S rDNA PCR-RFLP结果表明,在77.5%的相似性水平上全部供试菌株聚成5个分支。分支I为Sinorhizhobium-Rhizobium分支,分支II为Agrorhizobium-Bradyrhizobium分支,分支III是未知供试菌组成的分支,分支IV为Mesorhizobium分支,分支V为2株未知供试菌组成的分支。在89.8%的相似性水平上,分支I包括2个亚分支:亚分支1由CNU1008等14株供试菌组成,与Sinorhizobium meliloti LISPA1002T菌株聚在一起;亚分支2包括6株未知菌,与Rhizobium leguminosarum USDA 2370T聚在一起。分支II包括3个亚分支:亚分支1包括CNU 1041等4株菌,与2株Agrobacterium tumefaciens IAM 13129T和IAM 13569T聚在一起;亚分支2包括5株菌,与Bradyrhizobium japonicum USDA 6T菌株聚在一起;亚分支3包括3株未知菌。选取各分支和亚分支的代表菌株进行16S rDNA测序,结果表明,两种分析方法在结果上具有较好的一致性。处于分支I的Sinorhizobium亚分支的菌株,与S.fredii和S.meliloti的相似性达到99%,该亚分支菌株的确切系统发育地位有待于DNA-DNA杂交来确定。处于分支I的Rhizobium亚分支的菌株,与R.giardinii的相似性达到99%,与R.etli的相似性为98%。同样,该亚分支的确切地位有待于DNA-DNA杂交来确定。处于分支II Agrobaterium亚分支的菌株与A.rubi的相似性达到99%。处于分支II Bradyrhizobium亚分支的菌株,与B.liaoningense的相似性达到99%。     

志贺氏菌链霉素依赖菌株回复突变的研究——Ⅰ.体外回复突变率

南斯拉夫Mel氏应用志贺氏菌链霉素依赖菌株(Streptomycin-dependent Shigella strains,以下简称S~d)制备口服痢疾活菌苗进行预防菌痢的现场效果考核,取得满意的结果。目前,国内已引进南斯拉夫福氏志贺氏菌2a(Shigella flexneri 2a)S~d菌苗株,并选育出国内常见流行型福氏志贺氏菌1b、3a、4a及宋内氏志贺氏菌(Shigella sonnei)的S~d菌株,进行口服预防效果观察。     

用快中子法选育细菌脂肪酶高产菌株*

研究了从土壤中筛选产脂肪酶的菌株,利用紫外线、快中子、快中子和磁场复合、γ射线、γ射线和磁场复合诱变,以酶活为筛子进行诱变育种。结果,出发菌酶活较低的一株得到了一株酶活为３９６．２２Ｕ／ｍＬ的诱变株,此酶活比出发菌株高９２倍,并发现此菌对紫外线和快中子比较敏感;而出发菌酶活较高的一株得到了酶活为４２４．６０Ｕ／ｍＬ发酵液的诱变株,此酶活为出发菌株３．０倍。在此基础上,初步探讨了快中子、γ射线及磁场复合处理在产脂肪酸菌种诱变中的作用,并认为,在产脂肪酸菌株的诱变中快中子诱变更为有效。     

禽类饲用芽孢杆菌的筛选及固体发酵条件优化

筛选得到3株适用作为禽类饲料添加剂的枯草芽孢杆菌,分别命名为B395、B605和BM1。该3株菌株均能够在42℃正常生长,能抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌,且能耐受0.3%胆盐,能产生淀粉酶、蛋白酶、纤维素酶。通过饲喂试验,观察到菌剂组可明显促进肉鸡生长,有效降低料肉比。选取B395作为试验菌株,以培养后活菌数为指标,得到其最佳固体发酵条件为麦麸∶稻糠为3∶2、葡萄糖0.5%、尿素2%、KH2PO40.5%,含水量45%、接种量5%、温度37℃、培养时间3d。按上述培养条件,对B395进行培养,摇瓶式发酵可使活菌数可达到(1.3±0.1)×1010CFU/g,浅盘式发酵可使活菌数达到(1.3-1.4)×1010CFU/g;并对B605和BM1进行培养,得到活菌数均超过109CFU/g。     

植物乳杆菌发酵、冻干工艺及其益生特性的研究

目的以Lactobacillus plantarum SQ-2506为目标,研究该菌株的发酵、冻干工艺及其益生特性。方法通过对培养基中C源、N源和刺激因子的浓度改变考察对活菌数的影响,从而确定培养基的最佳配方;在确定最佳培养基后做出该菌的生长曲线以确定最佳发酵时间点;同时考察冻干保护剂的配方和预冷时间对菌粉活菌数的影响;此外,对植物乳杆菌进行产酸、产H_2O_2、生物膜形成能力、抑菌特性以及抗氧化能力的检测。结果最佳MRS培养基中葡萄糖浓度为0.8%、酪蛋白胨为0.4%、牛肉粉为0.6%、吐温为0.06%;植物乳杆菌的生长曲线在5h时达到稳定期,此时发酵液活菌数为3.16×10~9 CFU/mL,发酵液的pH为4.45。最佳冻干保护剂的配方:脱脂乳100g/L,蔗糖120g/L,抗坏血酸20g/L,谷氨酸钠30g/L;冻干前对上机液预冻时间为2h,此时菌粉冻干存活率为70.21%。该菌株具有产酸、产H_2O_2能力,并对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和白色假丝酵母均有一定的抑制作用,形成膜能力较强,且具有一定的抗氧化能力。结论通过培养基成分、发酵条件和冻干工艺的优化以及对其益生特性的研究,为下一步新药开发和规模化生产奠定基础。     

用快中子法选育细菌脂肪酶高产菌株

研究了从土壤中筛选产脂肪酶的菌株,利用紫外线,快中子,快中子和磁场复合,γ射线,γ射线和磁场复合诱变,以酶活为筛子进行诱变育种,结果,出发菌酶活较低的一株得到了一株酶活为396．22U/mL的诱变株,此酶活比出发菌株高92倍,并发现比菌对紫外线和快中子比较敏感,而出发菌酶活较高的一株得到了酶活为424．60U/mL发酵液的诱变株,此酶活为出发菌株3．0倍,在此基础上,初步探讨了快中子,γ射线及磁场复合处理在产脂肪酶菌种诱变中的作用,并认为,在产脂肪酶菌株的诱变中快中子诱变更为有效。     

卡介苗标准化(续完)

<正> 7.菌苗不得含有其他微生物:菌苗生产整个过程要做无菌试验,通常取苏通培养物,批量菌苗和生产完毕后随机抽样的液体部份进行。最好使用硫乙醇酸盐培养基作所有的无菌试验,因它适合于需氧菌、厌氧菌及一些霉的生长。有些实验室也用琼脂、肉汤、沙氏或一些培养霉菌的培养基,一般pH为8.3。孵育温度30-32℃,至少观察7天。对浓度大的菌苗及观察有困难时,可于第5天后移种,重复培养。第二次接种也应在7天后观察判定结果。所有接种菌苗的管都不得污染。成品安瓶应进行菌苗的毒性试验,用一支安瓶内全部菌苗腹腔注射10只小鼠,10天后小鼠全部活存。其他试验:在短期内测定BCG活菌数,     

沙门氏伤寒-志贺氏宋内二价菌苗对志贺氏菌病的预防

<正> 志贺氏细菌性痢疾可以通过一种有效的菌苗而加以控制,从而解救少年儿童。虽然由灭活志贺氏菌组成的非肠道菌苗没有保护作用,而某些志贺氏菌的减毒菌株通过人群和现场的试验攻击中经口服已证明其型特异性保护作用。然而这些减毒的志贺氏菌苗因为它们偶尔有遗传学不稳定、轻度副反应以及在某些情况下免疫原性不足而没有广泛应     

几株非模式白腐菌降解能力的研究

利用愈创木酚选择培养基,从11种白腐菌株中定性筛选出3株白腐菌,分别是毡毛栓孔菌Trametes velutina Dai10149、鍺栓孔菌T.ochracea Cui 6888、绒毛栓孔菌T.pubescens Cui 7571。重量法绘制它们的生长曲线,同时测定其蛋白质含量及胞外酶活。通过比较发现,绒毛栓孔菌T.pubescens Cui 7571的生长速度快,且具有较强及稳定的酶活分泌能力;对针叶植物、阔叶植物及单子叶草本的木质纤维素均表现出较好的降解效果。     

小鼠模型用作口服痢疾活菌苗效力指标的意义

小鼠皮下免疫、腹腔攻击模型作为验证减毒痢疾活菌苗效力的指标已沿用多年,但其能否代表痢疾菌苗的效力还有待商榷。实验选用口服痢疾活菌苗ＦＳ,以不同活菌含量来验证模型的意义。实验表明,菌体皮下免疫均能产生类似的保护效果,与活;菌含量无关,血清学试验也论证了同样观点,而人体试验表明,菌苗的保护效果与活菌数密切相关,故认为小鼠皮下免疫、腹腔攻击模型不能准确反应痢疾菌苗的保护效果。     

保加利亚乳杆菌冻干保护剂的优化

目的 研究4种常用冻干保护剂的添加量.方法 以保加利亚乳杆菌为出发菌株,以其冻干菌粉活菌数为指标,通过正交试验优化4种常用冻干保护剂的添加量.结果 保加利亚乳杆菌的最佳冻干保护剂配比为乳糖∶谷氨酸钠∶抗坏血酸∶脱脂奶粉=3∶1∶2∶7,其中脱脂奶粉对菌体保护效果极显著(P＜0.01),乳糖对菌体保护效果显著(P＜0.05).结论 通过对保加利亚乳杆菌的4种常用冻干保护剂的添加量进行优化,为保加利亚乳杆菌的冻干工艺提供基础.     

多重PCR方法特异性鉴定卡介苗菌株多糖核酸的初探

与结核分枝杆菌H37Rv菌株进行比较,BCG菌株可找到一个特殊的缺失片段RD1,它存在于所有有毒分枝杆菌中,而在所有的卡介苗菌株中均缺失。应用多重PCR方法检测RD1区的存在与否,可以区别BCG和其它有毒的分枝杆菌。卡介菌多糖核酸来源于卡介菌,检测成品中DNA是否含有RD1区,能特异性地鉴别该制品。结果显示牛分枝杆菌标准株和结核分枝杆菌H37Rv存在RD1区;而卡介菌多糖核酸注射液和国内皮内注射用BCG疫苗生产用菌株扩增产物一致,提示均缺失RD1区。因此,这种多重PCR方法适用于卡介菌多糖核酸注射液的特异性鉴别试验。     

降胆固醇乳酸菌的筛选和分析比较

目的比较7株乳酸菌各项生理特性,筛选高效、安全降解胆固醇的益生菌株,为后期开发应用奠定基础。方法对选定菌株依次进行体外降胆固醇、胆盐水解酶(BSH)活力、人工胃肠液及胆盐耐受性、细胞粘附性能的测定和比较,并分析抗生素耐药性和抑制病原菌活性,最后利用16S rRNA基因测序确定细菌种属。结果不同菌株各项生理指标存在差异。其中菌株ZL-2、JQI-7和PC-26的BSH酶活分别为0.010、0.015和0.030 U,可高效清除体外胆固醇,3株菌体外降解胆固醇率在58%以上;并且耐酸、耐胆盐,具备较好的HT--29细胞粘附性,不存在抗生素耐药性,可有效抑制大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌和阴沟肠杆菌生长。结论菌株ZL-2、JQI-7和PC-26满足降胆固醇益生菌株的生物学特性,可用于进一步研究和开发。