单克隆抗体及其抗感染作用的研究进展

骨髓瘤细胞和单个B细胞可融合形成杂交瘤细胞,这种细胞分离并克隆后可产生针对单一表位,且结构和功能相同的抗体,即单克隆抗体(monoclonal antibody, mAb)。单克隆抗体发展历程经历了四个阶段。其制备技术也在不断革新与发展。目前单克隆抗体技术发展日益成熟,在疾病治疗与诊断中发挥着关键的作用。单克隆抗体与天然抗体不同,具有效价高、特异性强、交叉反应少、可大量制备,靶向性高等特点。mAb可用于诊断及治疗感染性疾病、自身免疫病以及癌症等。对mAb的发展历程及mAb在抗感染性疾病中的应用进行简要阐述。     

抗牙龈卟啉单胞菌血凝素2单克隆抗体的制备

目的制备抗牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)血凝素2(hemagglutinin-2,HA-2)的单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb)。方法用重组HA-2(recombinant HA-2,rHA-2)免疫BALB/C小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,间接ELISA方法筛选杂交瘤细胞.用ELISA方法测效价。结果获得1株能够高效识别rHA-2的mAb,命名为4F11。此单克隆抗体的免疫球蛋白亚类为IgG1,效价达1?106。结论成功制备了重组牙龈卟啉单胞菌血凝素2的单克隆抗体mAb.将进一步用于牙龈卟啉单胞菌的诊断,并为牙周疾病的治疗研究奠定基础。     

利用转基因小鼠及转染色体小鼠产生人抗体的研究进展

自单克隆抗体（mAb)技术问世以来,解决了生命科学的许多重要问题,但其鼠源生导致的HAMA反应在大大限制了它在人体治疗中的应用,因此,制备人抗体成了亟待解决的难题,转入Ig基因组小鼠与转梁色体小鼠 的构建成功为解决这一难题提供了可行途径,本文就这两条小鼠的构建及其在制备人抗体中的应用进展作一综述。     

抗体基因工程

抗体基因工程阎锡蕴,田华松,田波（中国科学院微生物研究所,北京１０００８０）自从１９７５年杂交瘤技术问世以来,单克隆抗体在临床诊断和基础研究中的应用越来越广泛。但在疾病治疗方面还没有达到令人满意的效果。其主要原因是目前所获得的单克隆抗体绝大多数都来源...     

幽门螺杆菌尿素酶B单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备稳定分泌抗幽门螺杆菌尿素酶B单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞系,并对其分泌的mAb进行鉴定。方法:用初步纯化的重组幽门螺杆菌尿素酶B免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术制备抗尿素酶B的mAb,用间接ELISA检测mAb的特异性和亲和力,检测mAb腹水效价,鉴定Ig亚类并测定其抗原决定簇。结果:获得8株能稳定分泌抗尿素酶B的mAb杂交瘤细胞系,这8株单抗与能产生尿素酶的小肠结肠耶尔森氏菌、肺炎克雷伯氏菌和普通变形杆菌均无交叉反应,相对亲和力为1.13×10-8～4.66×10-10,腹水mAb效价可达2×104～3.2×105。其中2株单抗属IgG1亚类,3株单抗属IgG2a亚类。8株单抗分属于3种不同的抗原决定簇。结论:获得了IgG1和IgG2a类型的针对3种不同抗原决定簇的特异性幽门螺杆菌尿素酶B的mAb,为进一步用于幽门螺杆菌的临床诊断和实验研究创造了条件。     

蝶蛹金小蜂卵黄蛋白单克隆抗体的制备及其应用方法的建立

为深入研究寄生蜂卵黄发生及其内分泌调控,特采用杂交瘤细胞技术,制备4株能稳定分泌抗蝶蛹金小蜂Pteromalus puparum卵黄蛋白（vitellin, Vt）的单克隆抗体（mAb）,即PpVt mAb1,PpVt mAb2,PpVt mAb3和PpVt mAb4。这4株单克隆抗体的重链和轻链的亚类均分别为IgG1和κ类型,不仅特异性识别Vt,而且识别雌蜂血淋巴中卵黄原蛋白（vitellogenin,Vg）,但与雄蜂体液无反应。通过比较4种不同的ELISA方法,确定了微量检测蝶蛹金小蜂体内Vg/Vt的最适ELISA法,即双夹心ELISA法。该方法可用于单头雌蜂体内Vg/Vt的检测,其检测灵敏度为20 ng/mL。用Western 免疫印迹的方法证实了该蜂Vg的合成始于刚羽化的成虫,并在羽化后12～36 h内含量达到高峰。     

Antiidiotypic antibody related to the 84 kD human sperm membrane protein

Wistar rats were inoculated with purified YWK-I antibody.The anti-idiotypic antibodies were isolated from rat sera by successive passage over affinity chromatography columns of YWK-I mAb and normal mouse Igs.Specificity of anti-Id antibody was established by ELISA.The 84kD protein inhibited the binding of anti-Id to YWK-I mAb,but failed to repress antibody against normal mouse Ig binding to YWK-I mAb.In competitive inhibition assay,84kD protein had shown the ability to compete with anti-Id binding to YWK-I mAb in a dose-dependent manner.Crude sperm extract showed a lower competitive ability.No effect was found with the irrelevant 36kD sperm protein.The antisera from the Balb/C micr immunized with AId contained Ab3 that reacted with 84kD sperm protein.The binding of anti-Id to YWK-I mAb was inhibited by Ab3 in a dose-dependent fashion and Ab3 was shown to be able to induce human sperm agglutination.These results indicate that anti-Id which may mimic an epitope of the 84kD protein could be exploited as an antigen to raise antibodies against sperm protein.     

基因工程抗体研究进展

基因工程抗体研究进展刘喜富,黄华梁（中国科学院遗传研究所北京１００１０１）自１９７５年Ｋｏｈｌｅｒ和Ｍｉｌｓｔｅｉｎ等创立了杂交瘤技术以来,单克隆抗体已广泛应用于临床疾病的诊断,治疗和预防以及基础理论研究等多个领域,取得了令人鼓舞的结果。但由于鼠单克隆抗体对人体具有免疫原性,不能重复使用,影响疗效,而且生产单抗的成本较高,难以普及使用,围绕如何降低鼠源单克隆抗体的免疫原性以及在大肠杆菌中表达抗体基因的问题, 基因工程抗体技术得以产生和发展。     

自噬相关基因LC3-I的基因表达及单克隆抗体的制备

目的：通过克隆LC3．I基因,体外原核表达LC3-I蛋白后制备抗LC3单克隆抗体,作为自噬研究中的标记分子检测自噬的发生和发展过程。方法：RT．PCR方法从RAW264．7细胞基因组中克隆LC3基因,亚克隆至pQE80L原核表达载体后转化E．cobDH5a进行诱导表达,SDS—PAGE电泳及Westemblot鉴定表达蛋白。蛋白纯化后免疫BALB／c小鼠。采用淋巴细胞杂交瘤技术,制备分泌抗LC3．I杂交瘤细胞株,体内诱生腹水制备mAb,间接ELISA法测定其效价,辛酸一硫酸铵沉淀法及亲和层析法纯化mAb。结果：成功克隆了LC3一I基因,并对其在E．coilDH5a进行诱导表达,SDS-PAGE分析表明在相对分子量Mr为20×10^3有特异条带,Westernblot验证表达产物具有一定的生物学活性。建立了3株稳定分泌特异性抗LC3-ImAb的杂交瘤细胞株,诱导产生的腹水获得的抗体效价在10^5-10^7之间,结论：在E．coli中对LC3-I进行表达,并制备特异性较强抗LC3-I蛋白的单克隆抗体。为自噬研究提供了良好的标记分子,可对自噬形成和发展进行有效的检测。     

基因工程抗体研究进展

临床治疗中人抗鼠抗体反应的出现使鼠源性单克隆抗体的应用受到了极大的限制。为降低其免疫原性,人们利用基因工程技术对鼠源抗体进行改造,以减少其鼠源成分。简要概述了目前研究比较多的几种基因工程抗体及其临床应用。     

抗登革病毒2型E蛋白单克隆抗体的制备和生物学特性的鉴定

为了制备可用于胶体金快速检测试纸条的抗登革病毒2型（DEN2）E蛋白单克隆抗体（mAb）,通过基因克隆获得E基因与质粒pET32a（＋）的重组质粒,将重组质粒转化入大肠杆菌BL21,IPGT诱导表达重组蛋白。以DEN2重组E蛋白免疫BALB／c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗DEN2E蛋白的mAb,以间接ELISA法和Western blot进行mAb特异性鉴定;同时采用间接ELISA法鉴定mAb的Ig亚类。结果表明获得1株可分泌特异性mAb的杂交瘤细胞（7C7）,其抗体亚类为IgG1。Western blot显示该株mAb能特异识别重组pET32a-DEN2E蛋白。因此,成功制备出抗DEN2E的1株mAb,为建立快速特异橙测登革病毒感染的实验方法提供了有力的工具。     

汉滩病毒PS-6单克隆抗体的制备及其双抗体夹心ELISA检测方法的建立与应用

目的 制备汉滩病毒(Hantaan virus, HTNV)PS-6株小鼠单克隆抗体(monoclonal antibody, mAb),建立HTNV抗原双抗体夹心ELISA检测方法,验证方法的检测性能并初步应用于疫苗抗原含量检测。方法 以HTNV PS-6株灭活全病毒原液作为免疫原,采用小鼠杂交瘤融合技术,筛选mAb杂交瘤细胞株,制备mAb;用间接ELISA测定mAb效价;用Western blot鉴定mAb特异性;用间接ELISA测定mAb相对亲和力;经抗体配对筛选,建立双抗体夹心ELISA病毒抗原检测方法。以I型肾综合征出血热疫苗标准品作为定量标准,验证该方法的检测限、线性范围、特异性、准确度、精密度;对6批次I型肾综合征出血热灭活疫苗原液进行检测,初步验证该方法的适用性。结果 获得4株稳定分泌抗HTNV PS-6特异性抗体的阳性杂交瘤细胞株：4B2、3H8、5D7及2A7;间接ELISA检测腹水抗体效价均在1×10⁶～1×106～1×10⁷;Western blot鉴定4株mAb均能特异性识别HTNV PS-6;相对亲和力为4B2>5D7>3H8>2A7;抗体ELISA配对筛选后,选用5D7作为包被抗体,4B2作为标记抗体,包被抗体工作浓度为10μg/mL,HRP标记抗体工作浓度为1∶5 000。该方法对HTNV PS-6抗原检测限为0.039 1μg/mL;检测线性范围为0.078 1～2.500 0μg/mL,R7;Western blot鉴定4株mAb均能特异性识别HTNV PS-6;相对亲和力为4B2>5D7>3H8>2A7;抗体ELISA配对筛选后,选用5D7作为包被抗体,4B2作为标记抗体,包被抗体工作浓度为10μg/mL,HRP标记抗体工作浓度为1∶5 000。该方法对HTNV PS-6抗原检测限为0.039 1μg/mL;检测线性范围为0.078 1～2.500 0μg/mL,R²> 0.97;检测与I型肾综合征出血热疫苗生产主要原辅料成分、II型肾综合征出血热疫苗、森林脑炎疫苗及甲肝疫苗均无交叉反应;准确度验证,病毒抗原回收率在95.8%～110.5%之间;试验内和试验间精密度,CV分别在6.72%～8.03%、8.24%～9.70%之间。用该方法检测6批次I型肾综合征出血热灭活疫苗原液,结果均呈剂量依赖性。结论 成功制备HTNV PS-6株mAb,建立病毒抗原双抗体夹心ELISA抗原检测方法,方法准确、可靠,可初步应用于I型肾综合征出血热灭活疫苗科研、生产过程病毒抗原检测。     

HBV前S2蛋白单克隆抗体的制备和生物学特性的鉴定

目的克隆表达HBV前S2蛋白,用纯化的重组蛋白GST-S2免疫BALB/C小鼠,通过杂交瘤技术制备抗HBV前S2蛋白的单克隆抗体(mAb),并鉴定其特性.方法利用含双拷贝乙肝病毒adw2亚型基因全序列的质粒pEcob6,经PCR方法扩增出HBV前S2片段,在GST表达系统中表达,表达产物用谷胱甘肽亲和层析纯化后,用于免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗前S2蛋白的mAb,采用间接ELISA方法和Western blot进行mAb特异性鉴定;同时采用间接ELISA方法鉴定mAb相对亲和力.结果获得一株可分泌特异性mAb的杂交瘤细胞7A6;相对亲和力均在107以上.Western blot显示该株mAb能特异识别重组前S2蛋白.结论成功地制备出抗HBV前S2蛋白的一株mAb.     

抗人细胞角蛋白7(CK7)单克隆抗体的制备及鉴定

用KLH偶联合成细胞角蛋白7(CK7)优势表位多肽片段（C14）免疫小鼠,经细胞融合技术制备CK7单克隆抗体（mAb）,并收集临床组织进行免疫组化鉴定。C14多肽作为抗原具有良好的免疫反应性。本研究共获得了3株能稳定分泌抗CK7抗体的单克隆细胞株,选择亲和力较好的7A8单克隆抗体进行免疫组化鉴定,结果表明,本研究筛选的7A8单克隆抗体的质量浓度为0.49μg/mL时,与收集的临床标本均有良好的特异性反应,低于医院常用CK7检测试剂盒中抗体质量浓度2～5μg/mL,表现出较高的灵敏度。本研究筛选的7A8单克隆抗体为研发CK7快速诊断试剂提供了关键的原材料。     

基因工程抗体研究进展

随着对分子生物学研究和抗体分子结构功能的深入研究,利用细胞工程和遗传工程对抗体分子进行改建并赋予其新的功能,进而开发了新的抗体应用领域,使单克隆抗体技术又向前发展了一步.基因工程抗体是按人类设计所重新组装的新型抗体分子,可保留或增加天然抗体的特异性和主要生物学活性,去除或减少无关结构,从而可克服单克隆抗体在临床应用方面的缺陷.     

单克隆抗体的研究进展

单克隆抗体是一种由骨髓瘤细胞和带有抗体的B淋巴细胞结合形成的杂交瘤细胞,简称单抗。首先,本文对单克隆抗体的研究发展历程进行了分析和探讨,指出单克隆抗体的发展历程包括鼠源性单抗、嵌合抗体、人源化抗体以及人源性抗体这四大阶段,分别对其优缺点进行了说明;接下来,又对单克隆抗体在临床上的应用进行了说明,从疾病诊断方面及疾病的治疗两方面进行探讨。     

Y盒结合蛋白1单克隆抗体的研制、表位测定及其免疫学应用

建立稳定分泌抗人Y盒结合蛋白1单克隆抗体(anti-YB-1 mAb)的杂交瘤细胞株,鉴定其表位与免疫学应用。将重组YB-1蛋白免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合。经ELISA法筛选鉴定、定株后采用腹水诱生法制备anti-YB-1 mAb;Protein G亲和层析法纯化mAb,ELISA法测定mAb效价、亚型及相对亲和力。采用抗原表位预测法鉴定anti-YB-1 mAb识别表位所在区域。Western blot和免疫组化鉴定mAb识别内源性YB-1的特异性。经筛选鉴定获得2株稳定分泌anti-YB-1 mAb的杂交瘤细胞(1-D9,3-E8);腹水抗体效价均≥1×10-6,亚型均为IgGl;1-D9和3-E8单抗识别表位分别位于(134-160aa)与(266-303aa)肽段。Western blot、免疫组化结果证实anti-YB-1 mAb能特异性识别内源性YB-1。该研究为YB-1免疫学定性、定量检测方法的建立、肿瘤靶向抗体治疗及进一步探讨YB-1的生物学功能奠定了基础。     

结核分枝杆菌FurB蛋白的表达及其单克隆抗体的制备

目的:制备针对结核分枝杆菌FurB蛋白的单克隆抗体(mAb)并分析其特性。方法:利用E.coli DH5α表达含有6×His的融合蛋白FurB;采用小鼠腹股沟皮下包埋硝酸纤维素膜的方法免疫小鼠,然后进行细胞融合、克隆化制备抗FurB mAb,用ELISA法初步鉴定其特异性位点和相对亲和力。结果:获得了高表达的融合蛋白,经SDS-PAGE分析,在相对分子质量15.0×10~3处有特异的目的蛋白条带。用该融合蛋白免疫小鼠后,获得了抗FurB mAb。结论:所获得的抗FurB mAb效价高、特异性强,为进一步研究FurB在结核分枝杆菌铁调控和致病过程中的作用提供了有效工具。     

基于单克隆抗体的多元弧菌流式细胞术检测技术的研究

【目的】建立一种基于单克隆抗体的多元弧菌流式细胞仪检测技术。【方法】以副溶血弧菌表面蛋白r-OmpW的单克隆抗体(mAb)为基础,以细胞染色率为指标优化流式细胞仪检测副溶血弧菌时所需mAb的反应浓度和反应时间。通过菌落数对比评价在优化条件下流式细胞术方法的准确度、检出限和精密度。根据所建立的流式细胞术平台分析鉴定单抗对其它5种多元弧菌的特异性。【结果】流式细胞仪检测副溶血弧菌时所需r-OmpW单克隆抗体的优化反应浓度为20 mg/L,反应时间为60 min。当菌浓在104 107cells/mL范围时,检测值可信度较高,可特异性识别5种病原弧菌。对含不同菌体浓度的样品进行重复检测,变异系数均在7%以内。【结论】所建立的这种基于单克隆抗体的多元弧菌流式细胞仪检测技术可快速准确地检测多种病原弧菌。     

肠道单克隆抗体疗法的潜在候选物IgA可改善胃肠稳定性

正胃肠道黏膜表面在免疫稳态和免疫防御中起着重要作用,可能受到肠道疾病或感染的损害。单克隆抗体(mAb)的干预治疗具有最小的脱靶效应、口服给药时可能限制全身暴露等优势,为治疗提供了可能性。至关重要的是,为了在管腔表面获得疗效,单克隆抗体必须在胃肠道环境中保持稳定性和功能活性。