恙虫病立克次体分子生物学研究进展

恙虫病立克次体（Rickettsiatsut－sugamushi,Rt）是一类以恙螨为传播媒介,专性细胞内奇生的微生物。恙虫病（ScrubTxpes）是一种自然疫源性疾病,主要流行于亚洲、太平洋一带。在我国,以往经病原学证实恙虫病只分布于长江以南和台湾省,而1986年以来山东及江苏相继发生了恙虫病暴发流行,90年代初期新疆、天津北部农村和山西侯马也发现了恙虫病流行。1991－1995年我所在东北三省从野鼠和恙虫中共分离出19株Rt,首次证实东北地区也存在恙虫病的自然疫源地。可见恙虫病仍是一值得注意的问题,要弄清恙虫病在我国的流行情况仍需采用先进…     

恙虫病立克次体组织培养 Ⅱ.应用兔睾丸单层细胞培养恙虫病立克次体

近年来,组织培养技术进展很快,自Dulbecco,Youngner等氏(1952,1954)以胰酶消化组织获得单层细胞,培养脊髓灰质炎病毒获得成功以来,许多学者都证实多种病毒能于各种单层细胞培养中繁殖,并引起细胞病变,便于观察病毒的繁殖。故目前单层细胞培养技术不但广泛应用于病毒分离培养及鉴定,同时也是研究病毒与宿主细胞间关系及病毒变异等问题的重要工具之一。立克次体一般繁殖较慢,除Q热立克次体外。     

恙虫病立克次体补体结合抗原的研究

本文介绍应用兔睾丸单层细胞制备恙虫病立克次体补体结合抗原的方法,并初步探讨了影响鸡胚卵黄囊膜抗原效价的一些因紊。鸡胚卵黄囊膜抗原产量大、效价高、特异性较好。但有些恙虫病立克次体株在鸡胚中不易繁殖。而在组织培养中很易繁殖,第一代即能获得大量立克次体,有利于同时制备多株恙虫病立克次体抗原。本文同时介绍了制备豚鼠及家兔免疫血清的简便方法。     

福建恙虫病立克次体的抗原型

采用补体结合试验和免疫荧光试验的方法,检查了近130株从福建省各种材料分离的恙虫病立克次体,它们分属于5个抗原型。其中3个型与国际公认的Karp、Gflliam和11A716型相同,另外两个型(c41和M4型)的国际型别尚待鉴定。这5个型在福建省的分布有一定的地区性差异,Karp型在光泽县和龙溪地区为多见;Gilliam型在平潭县多见;T^716型、C41和M4型分别在龙岩地区、长乐县和平潭县发现。     

用柠檬酸胰酶消化分散细胞

通常用于消化分散细胞的有胰酶、乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2 Na),以及两者的混合液,但它们消化分散细胞的效果并不理想。我们参考Adams用柠檬酸胰酶作消化剂获得了满意的效果,方法如下: 细胞人正常二倍体肌皮细胞(SM_2)、人喉癌细胞(Hep-2)、人肺癌细胞(A 549)、人宫颈癌细胞(HeLa)、鼠成纤维传代细胞(L_(929)、地鼠肾传代细胞(LLC-     

恙虫病立克次体毒力变异的研究

自沟鼠分离的“49”株恙虫病立克次体,经30℃培养,于兔睾丸单层细胞中传代及加入氰化钾等综合处理,获得弱毒变异株。经多次测定对小白鼠的ILD50≤10-1.00。但转种于鸡胚或小白鼠后毒力回升。用谷酰胺、癌敌处理,或以同一方法处理其他恙虫病立克次体株,均未获得对小白鼠不致病的弱毒变异株。     

冻干对恙虫病立克次体抗原性的影响

以含恙虫病立克次体的鸡胚卵黄囊膜材料冻干后,立克次体对小白鼠的ID,。平均下降1．93个对数,但若以鸡胚细胞培养材料进行冻干,则冻干后恙虫病立克次体的抗原性明显遭到破坏,对小白鼠的ID50 平均下降2.73个对数。冻干后的卵黄囊膜材料经4℃冰箱保存六个月至一年,对小白鼠的ID50,一般再下降一个对数左右。     

山东恙虫病立克次体弱毒株分离方法研究

恙虫病立克次体（Rt）弱毒株分离问题一直是较难解决的问题。分离过程中主要采取了以下措施：选择适当的病例;降低小鼠免疫力;严格掌握传代时间（接种后12～14d）;所有传代小鼠均作腹膜涂片及肝、脾、肾印片以免漏检;严格控制动物饲养室温度等。结果成功地从恙虫病人全血、3种鼠类、4种恙螨中分离到38株Rt,成功率在25％～100％。毒株接种小鼠后可引起弓背、耸毛、发烧等症状,并引起肝肿大及脾肿大（2～5倍）。     

恙虫病立克次体弱毒株的毒力及免疫原性的研究

本文比较了三株(“49”株、“l(J5”株、浙三联)从自然界分离或经人工减毒处理的恙虫病立克次体弱毒株的毒力和免疫原性。从实验结果证明,三株恙虫病立克次体对小白鼠的毒力都较一般从病人分离的菌株弱。三株中以“49”株的毒力最低,它对小白鼠的LD50<10-1.00LD50与ID50相差2．5--5．5个对数。用“49”株免疫后的小白鼠能耐受从广东、福建,云南等地分离的强毒株的攻击,保护指数大于三个对数。     

黑龙江,吉林,辽宁省恙虫病立克次体的分离鉴定

黑龙江、吉林、辽宁省恙虫病立克次体的分离鉴定胡玲美,鲁志新,蔡增林,金显涛,张海莲,许正莉（沈阳军区军事医学研究所１１００３１）１９９２～１９９４年,分别赴吉林省珲春市敬信乡、黑龙江省密山市三梭通乡和二人班乡、辽宁省宽甸县石湖沟乡和长甸乡等调查点,捕...     

用中空纤维超滤膜浓缩酶

本文介绍了2709碱性蛋白酶及7658α-淀粉酶采用03型与05型中空纤维超滤膜进行中试规模的浓缩试验,所获得的有关浓缩倍数,酶的收率,Rf值及超滤流率等数据,对该超滤膜进行了评价;并对运行中压力,温度以及关于膜的清洗进行了讨论。     

用中空纤维超滤膜浓缩酶

本文介绍了2709碱性蛋白酶及7658α-淀粉酶采用03型与05型中空纤维超滤膜进行中试规模的浓缩试验,所获得的有关浓缩倍数,酶的收率,Rf值及超滤流率等数据,对该超滤膜进行了评价;并对运行中压力,温度以及关于膜的清洗进行了讨论。     

应用PCR技术检测媒介恙螨体内恙虫病立克次体(英语)

本文PCR技术的引物是参考恙虫病立克次体Karp株Sta 58序列设计合成的一对DNA引物.以恙虫病立克次体DNA为模板,成功扩增长约1kb的DNA片段.该对引物首次应用于人工成虫腹内接种羔虫病立克次体(人工接种法)和幼虫叮咬恙虫病鼠(叮咬病鼠法)的我国主要恙虫病媒介地里纤羔螨的研究.PCR检测人工接种法成虫的不同时期和经卵传递的子代立克次体DNA均获满意结果,立克次体在恙螨体内生长持续360天及产卵孵出的第4代幼虫均呈阳性.叮咬病鼠法立克次体在恙螨亲代饱食蚴、若蛹、若虫、成虫及第2代子产代幼虫,PCR检测均呈阳性.结果显示PCR技术检测恙螨体内恙虫病立克次体的特异性和敏感性高;体外基因扩增检测恙螨体内及鼠宿主体内立克次体是流行病学调查的新的敏感方法.本法为恙虫病分子体流行病学调查提供了新的应用技术,亦为临床病人诊断提供了敏感方法.     

用亲和层析技术分离纯化天冬氨酸酶

<正> 亲和层析技术做为现代生化实验室常用的提纯方法,具有专一性强,活力损失小,分离步骤少等优点。天冬氨酸酶是重要的酶制剂,以往见报的分离纯化工艺步骤繁琐,活力损失大。本文报道的新工艺是用聚乙二醇(PEG)/磷酸钾双水相抽提;DEAE-sophadex A-50柱层析除PEG和部分杂蛋白;环氧氯丙烷活化载体,底物作配基的亲和层析技术获得了电泳纯的天冬氨酸酶。     

从山东费县不同季节优势恙螨分离到恙虫病立克次体(英文)

对山东费县秋冬型恙虫病疫源地恙螨进行了调查并进行恙虫病立克次体（Ｒｔ）分离。从３５２只活鼠体外收集到１１ ７６２只恙螨,隶属２属５种,太平洋无前恙螨数量最多,占３６．７３％;其次是临淮岗纤恙螨（２４．０４％）;小盾纤恙螨（２１．６５％）;须纤恙螨（１３．５７％）和泰山纤恙螨（３．９６％）。小盾纤恙螨出现在９—１２月,高峰在１１月;须纤恙螨出现在１０月一翌年４月,高峰在１２月;临淮岗纤恙螨从５月到１１月存在,高峰在８月;太平洋无前恙螨出现在４—１２月,高峰在７月。从小盾纤恙螨、须纤恙螨、临淮岗纤恙螨及太平洋无前恙螨中共分离到１２株Ｒｔ,血清分型结果分离株以Ｇｉｌｌｉａｍ型为主,但存在Ｋａｒｐ型Ｒｔ。这些结果表明,上述４种恙螨均能自然感染Ｒｔ,有在该地区充作不同季节Ｒｔ传播媒介的可能。结合以往的研究结果,当地小盾纤恙螨集中出现于发病季节,其消长与当地人群发病基本一致,且能叮刺、经卵传递Ｒｔ,从而证实小盾纤恙螨是引起该地区秋冬型恙虫病流行的最重要的媒介。