一种复合益生菌粉增强免疫力功能的动物研究

通过细胞免疫、体液免疫、单核巨噬细胞吞噬功能、NK细胞活性测定试验检验由植物乳植杆菌HEAL9和副干酪乳酪杆菌8700:2配制而成的复合益生菌粉对小鼠免疫力功能的影响。

将50只雄性BALB/c小鼠按体质量随机分为阴性对照组、阳性对照组以及益生菌粉低、中和高剂量组,每组10只,分别使用去离子水、转移因子口服液和相应浓度的益生菌粉进行灌胃给药,1次/d,连续30 d。实验过程中分别对小鼠进行迟发型变态反应试验、抗体生成细胞检测及血清溶血素生成试验。末次给药次日,对小鼠进行淋巴细胞转化的影响试验、碳廓清试验和腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验。并委托细胞室进行靶细胞（YAC-1）传代,进行NK细胞活性试验。

与阴性对照组相比,益生菌粉低、中、高剂量组小鼠脾淋巴细胞增殖能力、抗体积数及NK细胞活性均升高,益生菌粉高剂量组小鼠耳肿胀度、溶血空斑数、吞噬指数及吞噬百分率升高,差异均有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）。

依照《保健食品功能评价方法（2020年版）（征求意见稿）》有助于增强免疫力功能检验方法及结果判定,判定该复合益生菌粉具有增强免疫力功能作用。

     

杀菌型副干酪乳酪杆菌N1115发酵乳饮品对小鼠免疫功能的影响

研究杀菌型副干酪乳酪杆菌N1115（Lacticaseibacillus paracasei N1115）发酵乳饮品对小鼠免疫脏器指数、免疫球蛋白、巨噬细胞、NK细胞、B淋巴细胞及T淋巴细胞的影响。

将SPF级6～8周龄雄性Balb/c小鼠随机分为对照组以及杀菌型副干酪乳酪杆菌N1115发酵乳饮品低、中、高剂量组,每组15只,连续灌胃30 d,进行免疫脏器指数测定、免疫球蛋白测定、碳廓清能力测定、腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验、NK细胞活性测定、脾淋巴细胞转化实验、迟发型变态反应、血清溶血素测定和抗体细胞生成实验。

杀菌型副干酪乳酪杆菌N1115发酵乳饮品低、中、高剂量组的小鼠碳廓清指数显著高于对照组（t = 3.926 2,P = 0.000 7;t = 6.000 1,P＜0.000 1;t = 5.314 4,P＜0.000 1）,腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬率显著高于对照组（t = 3.812 1,P = 0.001 5;t = 4.257 2,P = 0.000 4;t = 4.976 3,P = 0.000 5）。

杀菌型副干酪乳酪杆菌N1115发酵乳饮品具有增强小鼠非特异性免疫力的功能,可为副干酪乳酪杆菌N1115的开发利用提供科学依据。

     

具有分解嘌呤核苷能力的益生菌菌株筛选

在不同的肠道菌群及奶制品样品中筛选益生菌菌株,对其耐酸和耐胆盐能力、分解嘌呤核苷能力进行评价,为后续研发治疗高尿酸血症益生菌制剂提供依据。

采集内蒙古地区及巴马长寿村的健康婴儿肠道菌群或奶豆腐、奶疙瘩制品,通过选择性培养基划线培养、镜检及16S rDNA测序的方式筛选益生菌菌株。通过耐酸、耐胆盐试验,模拟胃液和模拟肠液筛选出对胃肠道环境耐受能力强的菌株并通过电镜观察其形态。再进一步通过分解嘌呤核苷能力检测确定分解能力最优的菌株。

在8个样本中筛选出23株益生菌,对其胃肠耐受能力进行检测后发现筛选出了8株耐受能力较强的益生菌菌株,分别为鼠李糖乳酪杆菌RH01103,罗伊氏粘液乳杆菌HCS02-001,植物乳植杆菌RH03010,动物双歧杆菌乳亚种RH04020,发酵粘液乳杆菌RH08050,副干酪乳酪杆菌HCS17-040,乳酸片球菌RH27102和戊糖片球菌RH34011。通过对分解嘌呤核苷能力检测,发现与未接种益生菌的空白对照组相比,罗伊氏粘液乳杆菌HCS02-001和副干酪乳酪杆菌HCS17-040对肌苷和鸟苷的分解能力最显著（P = 0.0002, P＜0.0001）。

8个样本筛选出的23株益生菌中罗伊氏乳杆菌HCS02-001和副干酪乳杆菌HCS17-040的胃肠耐受能力最强,分解嘌呤核苷效率最高。

     

鼠李糖乳酪杆菌RH0121冻干工艺优化及降血糖作用的研究

优化鼠李糖乳酪杆菌（Lacticaseibacillus rhamnosus）RH0121的冻干工艺,探究其辅助降血糖作用。

通过单因素试验和响应面试验,优化鼠李糖乳酪杆菌RH0121冻干粉的生产工艺;同时利用小鼠实验,探究服用冻干粉后小鼠的体质量、口服葡萄糖耐量和血清生化指标水平的变化。

优化后的工艺为发酵时间9 h,发酵温度37 ℃,接种量4%,冻干时间50 h。经验证,冻干粉活菌数为5.5×10¹¹ CFU/g。灌胃冻干粉样品后的小鼠体质量缓慢回升,小鼠灌胃后120 min血糖水平低于灌胃前（P＜0.05）。灌胃后,样品组小鼠血清TC、TG、LDL和TNF-α水平均低于模型组,INS水平高于模型组（均P＜0.05）。

鼠李糖乳酪杆菌RH0121具有辅助降血糖作用,可为开发其他降血糖产品提供原料。

     

Mix-G200益生菌粉安全性毒理学评价

目的通过对Mix-G200益生菌粉的安全性毒理学进行研究,为以后的应用提供科学依据。方法采用雌雄小鼠急性毒性试验、小鼠骨髓细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、Ames试验和大鼠30天喂养试验等对Mix-G200益生菌粉进行安全性试验研究。结果急性经口毒性试验表明,Mix-G200益生菌粉对雌雄小鼠的急性经口LD50均大于21500 mg/kg,以急性毒性半数致死量毒性分级,属无毒级物质。小鼠骨髓细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、Ames试验结果均为阴性。30天喂养试验结果表明,大鼠生长情况良好,血液学检查、生化学检查、主要脏体以及组织学检查结果与对照组相比,差异均无统计学意义。结论 Mix-G200益生菌粉未见遗传毒性,使用Mix-G200益生菌粉是安全可靠的。     

复合益生菌粉对功能性便秘小鼠润肠通便的作用

探究由乳双歧杆菌V9、干酪乳杆菌Zhang、植物乳杆菌P9组成的复合益生菌粉对便秘模型小鼠的排便情况、肠动力水平的改善及肠道菌群结构的调整作用。

将100只Balb/c小鼠随机分为A、B两大组,每组又随机分为空白组、模型组以及复合益生菌粉低剂量组、中剂量组、高剂量组,其中A组50只用于排便情况测定,B组50只用于结肠HE染色及肠道菌群的检测。实验共进行15 d,空白组与模型组小鼠灌胃蒸馏水15 d,复合益生菌粉各剂量组小鼠灌胃相应剂量的复合益生菌粉15 d;同时,除空白组外,于第7天、第15天灌胃盐酸洛哌丁胺（4 mg/kg）进行造模。

与空白组相比,模型组小鼠首次排便时间显著延长（P＜0.01）,6 h内粪便质量显著减轻（P＜0.05）,肠推进率显著降低（P＜0.05）,提示造模成功;与模型组相比,复合益生菌粉低、高剂量组首次排黑便时间显著缩短（P＜0.05）,肠推进率显著升高（P＜0.05）,同时高剂量组小鼠6 h排便量增加（P＜0.05）。HE结果显示,复合益生菌粉可以增厚结肠肌层,恢复受损的结肠黏膜组织,并且腺管排列恢复至正常水平。菌群测序结果显示,与空白组相比,模型组小鼠肠道菌群结构发生显著改变;与模型组相比,复合益生菌粉中、高剂量组显著提高便秘模型小鼠肠道菌群的丰富度,其中Patescibacteria、厚壁菌门、放线菌门、疣微菌门、Eubacterium xylanophilum_group等丰度增加,另枝菌属、Odoribacter等丰度降低。

复合益生菌粉能够通过促进肠蠕动,调整肠道菌群结构发挥缓解小鼠便秘的作用。

     

16S rDNA实时荧光定量PCR检测大蒜提取物对小鼠肠道菌群的调节作用

探究蒜氨酸、大蒜辣素、大蒜粉对小鼠肠道菌群的调节作用。

将SPF级C57BL/6J小鼠分为空白对照组、蒜氨酸组、大蒜辣素组和大蒜粉组, 每组10只。空白对照组小鼠灌服蒸馏水30 d, 蒜氨酸组、大蒜辣素组、大蒜粉组小鼠灌服不同浓度的受试物溶液30 d, 采用16S rDNA实时荧光定量PCR检测实验前后小鼠粪便样本中乳杆菌、双歧杆菌、肠杆菌、肠球菌、产气荚膜梭菌水平变化。

给药30 d后, 与空白对照组相比、实验前后自身对比, 蒜氨酸组、大蒜辣素组、大蒜粉组小鼠的肠杆菌、肠球菌水平无明显变化; 乳杆菌、双歧杆菌水平显著增加; 产气荚膜梭菌水平显著降低。

蒜氨酸、大蒜辣素、大蒜粉对肠道菌群具有有益的调节作用, 是一种良好的天然有益于肠道菌群的食品。

     

双歧杆菌乳杆菌三联活菌片对幽门螺杆菌根治后消化道不良反应的改善作用

探讨加用双歧杆菌乳杆菌三联活菌片对临床四联疗法根除幽门螺杆菌(H.pylori)过程中患者消化道不良反应的改善作用。

选择2019年1月至2020年1月在昆明医科大学第二附属医院门诊就诊的100例H.pylori感染患者, 分为益生菌组和正常组, 各50例。全部患者通过四联疗法根除H.pylori后, 益生菌组患者继续加用双歧杆菌乳杆菌三联活菌片治疗, 对结果进行分析。

2组患者使用含有铋剂的四联疗法根除H.pylori后效果满意。益生菌组患者不良反应发生率低于正常组(25.5% vs 47.5%;χ²=11.023, P=0.001)。

益生菌可减轻四联疗法根除H.pylori后消化道不良反应, 根除H.pylori过程中加用益生菌的时机尚待进一步探讨。

     

厄贝沙坦片联合益生菌对高血压伴肥胖患者的疗效及对肠道菌群的调控作用

探讨厄贝沙坦片联合益生菌对高血压伴肥胖患者的疗效及对肠道菌群的调控作用。

选取2021年10月—2022年10月本院400例高血压伴肥胖患者。随机法分组：对照组（200例）给予厄贝沙坦治疗,研究组（200例）在对照组基础上联用益生菌。比较两组治疗前后舒张压（DBP）、收缩压（SBP）、C反应蛋白（CRP）、白细胞介素（IL）-6水平和肠道菌群变化,统计治疗期间不良反应发生情况。

治疗后,研究组DBP、SBP、CRP和IL-6水平均低于对照组（P＜0.05）。治疗后,研究组乳杆菌、拟杆菌及双歧杆菌水平高于对照组,肠杆菌及肠球菌水平低于对照组（P＜0.05）。研究组不良反应发生率为3.0%,对照组为4.5%,差异无统计学意义（χ² = 0.623,P = 0.430）。

厄贝沙坦联合益生菌治疗高血压伴肥胖可提升患者血压控制效果,减轻炎症反应,改善肠道紊乱菌群,且不良反应少。

     

两种乳杆菌联用在食蟹猴阴道的定植效率及其毒性分析

研究乳杆菌鼠李糖乳杆菌-格氏乳杆菌联用制剂(LACT)的定植效率, 评估其有效剂量在动物体内的急性和长期毒性。

在食蟹猴中进行2轮阴道定植试验, 通过检测阴道分泌物pH值和清洁度, 并分离鉴定分泌物中的乳杆菌, 确定乳杆菌联用制剂的定植率和定植剂量; 通过单次和多次阴道给药, 检测联用制剂对食蟹猴体质量、食量、生殖器官及生化指标等的影响, 检测联用制剂在体内的急性和长期毒性。

联用制剂在食蟹猴中连续阴道给药5 d后能成功定植, 改善阴道的微生态; 甲硝唑预处理能够提高定植效率和定植时间; 联用制剂对食蟹猴不具有急性和长期的毒性作用。

在动物模型中, 2种乳杆菌联用制剂对细菌性阴道病具有良好的治疗潜质。

     

复合生物杀菌剂F6-11的安全性毒理学研究

目的：为研究复合生物杀菌剂F6．11毒性,采用动物实验法进行毒理学评价。方法：对复合生物杀菌剂F6-11进行小鼠急性毒性试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、亚急性毒性试验、家兔多次完整皮肤刺激试验、急性眼刺激试验、豚鼠皮肤变态反应试验、鱼类延长毒性14天试验。结果：复合生物杀菌剂F6—11对小鼠急性毒性LD50〉5000mg／kg．bw,属于实际无毒级物质;小鼠微核试验该杀菌剂各剂量组与阴性对照组比较,微核率无显著性差异（P〉0．05）;亚急性毒性试验动物血常规、生化指标及各脏器均未发现异常;对家兔多次完整皮肤及眼刺激反应积分均为0,均属无刺激性;对豚鼠皮肤变态反应试验组动物与阴性对照组无可见不同．试验组动物皮肤致敏反应积分为0,无致敏作用;鱼类延长毒性14天试验无异常。结论：毒理学研究表明,复合生物杀菌剂F6．11具有良好的使用安全性。     

粘细菌Corallococcus sp. strain EGB及其培养发酵液的安全性评估

【目的】研究粘细菌Corallococcus sp. strain EGB及其细胞培养发酵液的毒理安全性,为菌株EGB作为新型生防微生物菌剂的开发和环境施用安全性提供一定的科学基础。【方法】通过Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验和小鼠睾丸染色体畸变试验测定粘细菌EGB菌体及其细胞培养发酵液的遗传毒性;通过经口灌胃的方式测定粘细菌EGB菌体及其细胞培养发酵液对ICR小鼠的急性毒性和28d亚急性毒性。【结果】Ames试验、微核试验和精母细胞染色体畸变试验结果表明,与对照组相比,EGB菌体及其细胞培养发酵液无基因突变能力,对ICR小鼠无明显的遗传毒性。EGB菌体及其细胞培养发酵液对ICR小鼠的急性经口半致死剂量(LD50)>10g/kg BW (body weight);连续灌胃28 d后,处理组ICR小鼠的体重变化、采食饮水、血液生化指标、血常规、主要脏器指数和主要器官病理切片与对照组相比无显著差异(P<0.05)。【结论】粘细菌EGB菌体及其细胞培养发酵液的毒理安全性属于无毒类别,粘细菌的生物安全性使其在工农业领域的植物病害控制和生物转化等方面具有潜在的应用价值。     

Toxicological Evaluation of Lactase Derived from Recombinant Pichia pastoris

A recombinant lactase was expressed in Pichia pastoris, resulting in enzymatic activity of 3600 U/mL in a 5 L fermenter. The lactase product was subjected to a series of toxicological tests to determine its safety for use as an enzyme preparation in the dairy industry. This recombinant lactase had the highest activity of all recombinant strains reported thus far. Acute oral toxicity, mutagenicity, genotoxic, and subchronic toxicity tests performed in rats and mice showed no death in any groups. The lethal dose 50% (LD₅₀) based on the acute oral toxicity study is greater than 30 mL/kg body weight, which is in accordance with the 1500 L milk consumption of a 50 kg human daily. The lactase showed no mutagenic activity in the Ames test or a mouse sperm abnormality test at levels of up to 5 mg/plate and 1250 mg/kg body weight, respectively. It also showed no genetic toxicology in a bone marrow cell micronucleus test at levels of up to 1250 mg/kg body weight. A 90-day subchronic repeated toxicity study via the diet with lactase levels up to 1646 mg/kg (1000-fold greater than the mean human exposure) did not show any treatment-related significant toxicological effects on body weight, food consumption, organ weights, hematological and clinical chemistry, or histopathology compared to the control groups. This toxicological evaluation system is comprehensive and can be used in the safety evaluation of other enzyme preparations. The lactase showed no acute, mutagenic, genetic, or subchronic toxicity under our evaluation system.     

噻吩磺隆的毒性及致突变性

选用大鼠、豚鼠及家兔,采用经口及皮肤,粘膜染毒途径,研究其急性毒性。同时有Ames试验,小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验及小鼠睾丸初级精母细胞染色体畸变试验进行致突变性研究,了解噻吩磺隆的毒性及致突变性。大鼠急性经口LD50大于5000mg／kg,经皮LD50大于2000mg／kg。家兔皮肤刺激试验阴性,轻度眼刺激性和弱致敏性。Ames试验,微核试验及小鼠睾丸初级精母细胞染色体畸变试验结果均为阴性。结论 噻吩磺隆属低毒性农药,在本实验条件下无致突变作用。     

Safety and toxicological evaluation of a novel niacin-bound chromium (III) complex

Chromium is an essential trace element required for normal protein, fat and carbohydrate metabolism. It also helps in energy production and increasing lean body mass. Niacin-bound chromium (NBC) is a unique form of bioavailable chromium that promotes healthy lipid profile. This study was focused on determining the broad spectrum safety of NBC. Acute oral, acute dermal, primary dermal irritation and primary eye irritation toxicities of NBC were evaluated. Ames bacterial reverse mutation assay, mouse lymphoma test and a dose-dependent 90-day subchronic toxicity were also conducted. In safety studies, the acute oral LD(50) of NBC was found to be greater then 5000 mg/kg in both male and female Sprague-Dawley rats. No changes in body weight or adverse effects were observed following necropsy. The acute dermal LD(50) of NBC was found to be >2000 mg/kg. The primary skin irritation test was conducted with NBC on New Zealand Albino rabbits. NBC was classified as slightly irritating. The primary eye irritation test was conducted with NBC on rabbits. NBC was classified as practically non-irritating to the eye. NBC did not induce mutagenic effects in the bacterial reverse mutation test in five Salmonella typhimurium strains (TA1535, TA98, TA100, TA97a and TA102), either with or without metabolic activation. Similarly, NBC did not induce mutagenic effects in the mammalian cell gene mutation test in L5178Y mouse lymphoma cells TK (+/-), either with or without metabolic activation. A dose-dependent 90-day subchronic toxicity study demonstrated no significant changes in selected organ weights individually and as percentages of body and brain weights. NBC supplementation did not cause changes in hepatic lipid peroxidation or DNA fragmentation after 30, 60 or 90 days of treatment. Hematology, clinical chemistry and histopathological evaluations did not show any adverse effects in all organs tested. Taken together, the above results indicate a broad spectrum of safety for NBC.     

一株白腐菌的食用安全性初步评价

本研究选取了一株白腐菌模式菌株进行了小鼠急性毒性试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验以及小鼠精子畸形试验,以分析该白腐菌的食用安全性,为进一步应用白腐菌开发功能性食品提供数据支持。结果显示,小鼠经灌胃白腐菌,其LD50为6.76 g/kg(以白腐菌菌丝干重计)。微核试验和精子畸形试验结果均为阴性(P0.05)。试验结果表明,本次实验条件下,白腐菌对小鼠表现出一定的急性毒性,但未见遗传毒性,由此推断,在一定剂量范围内使用白腐菌作为食用材料是相对安全的,安全的剂量范围需要进一步扩大浓度梯度来确定。     

嗜酸乳杆菌LA-G80的毒理学研究

目的对嗜酸乳杆菌的毒性进行研究。方法采用大、小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓细胞微核试验、小鼠精子畸形试验和大鼠30 d喂养等对嗜酸乳杆菌进行安全性试验研究。结果急性经口毒性试验表明,大、小鼠灌胃给予嗜酸乳杆菌,最大耐受剂量雌雄两性别均大于20.0 g/kg体重,Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性。大鼠30 d喂养试验结果表明各项指标均未见明显毒性反应。结论在本次实验条件下,嗜酸乳杆菌未见遗传毒性。由此可初步判定,使用嗜酸乳杆菌是安全可靠的。     

紫茎泽兰醇提物的毒理学研究

为确保以紫茎泽兰提取物为主要原药的植物源农药的安全性,对紫茎泽兰醇提物进行了小鼠经口急性毒性试验、大白兔急性皮肤和眼刺激试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核计数及小鼠精子畸形试验等急性毒性和遗传毒性试验。结果表明,受试物对两种性别的小鼠经口急性毒性试验,LD50大于5000mg／kg,对大白兔皮肤无刺激性;小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验及小鼠精子畸形试验结果均为阴牲,受试物未见遗传毒性。