促甲状腺激素释放激素受体mRNA在大鼠睾丸中的表达(英文)

本应用原位杂交技术在大鼠睾丸恒冷箱切片上研究了促甲状腺激素释放激素受体（TRH－R）RNA的表达和定位。由DNA合成仪合成两个含48个碱基的寡核苷酸探针,两个探针分别与小鼠垂体TRH－R1005－1052和1332－1379区段的cDNA互补,生物素在5′末端标记寡核苷酸探针。结果显示TRH－R寡核苷酸探针与其互补的mRNA杂交信号集中在大鼠睾丸的间质细胞中,生精细胞地交信号,杂交信号的强度依探针浓度而增加,该结果表明RTH可能通过自分泌调节生殖功能和发育,TRH－R作用途径可能与在垂体的作用类似。     

大鼠睾丸前促甲状腺激素释放激素原及其受体的表达与发育变化

为研究促甲状腺激素释放激素（thyrotrophin-releasing hormone,TRH)及其受体（TRH receptor,TRHR)在大鼠睾丸组织中的表达规律和在生殖发育调节中的作用,依据大鼠下丘脑中的前TRH原（PreproTRH,ppTRH)和垂体中的TRH－R cDNA设计引物,采用RT－PCR法从大鼠睾丸组织中获得了ppTRH和TRH－R的cDNA克隆,测序后构建表达载体,在大肠杆菌中表达了可溶性的pTRH t TRH-R融合蛋白,利用实时动态定量RT－PCR（real time quantitative RT-PCR)法观察了ppTRH和TRH－R在不同发育阶段大鼠睾丸中的表达变化,发现在睾丸间质细胞发育的初期阶段（第8天）,没有ppTRH和TRH－R的表达,但从第15天起能观察到pp-TRH和TRH－R的表达,并且表达量在20天,35天,60天和90天逐渐增加,这些结果表明：大鼠睾丸组织能特异性表达ppTRH和TRH－R,并且表达量与发育过程相关,ppTRH和TRH－R体外表达产物的获得为后续研究其功能奠定了基础。     

促甲状腺激素释放激素受体-1(TRH-R1)蛋白在大鼠出生后睾丸不同发育阶段的表达和定位

目的研究促甲状腺激素释放激素受体-1(thyrotrophin-releasing hormone receptor type-1, TRH-R1)在大鼠睾丸出生后不同发育阶段的表达,探讨其在生殖发育调节中的作用.方法应用蛋白质免疫印迹杂交技术以及免疫组织化学ABC法检测TRH-R1在8d、15d、20d、35d、60d和90d大鼠睾丸中的表达和定位,并结合图像分析技术对免疫组化结果进行统计学分析观察其在发育过程中的变化.结果免疫印迹杂交发现TRH-R1蛋白表达于15d以后各阶段的大鼠睾丸;而运用免疫组化在第8d即检测到TRH-R1的表达,以后发育过程中的各个阶段均有阳性反应细胞, TRH-R1定位于大鼠睾丸的间质细胞;免疫反应阳性物均位于胞膜和胞质,胞核区为阴性;图像分析结果表明,随着大鼠睾丸的发育,TRH-R1表达量呈增多趋势,且具有统计学差异(P＜0.01).结论本实验证明TRH-R1在出生后8d大鼠的睾丸内即有表达,并持续表达于其后各个发育阶段;TRH-R1定位于睾丸的间质细胞,其表达量随着增龄变化呈增多趋势,即同发育过程相关.     

大鼠促甲状腺激素释放激素受体1基因的克隆及其在COS-7细胞系中的表达

目的:克隆大鼠促甲状腺激素释放激素受体1(TRH-R1)基因,构建其真核表达载体,并检测该基因在非洲绿猴肾细胞系COS-7中的表达。方法:应用RT-PCR方法,以大鼠脑源RNA为模板,扩增获得TRH-R1基因,定向克隆到pDsRed2-N1中,以LipofectAMINE 2000试剂转染pDsRed2-N1-TRH-R1表达载体至COS-7细胞系中进行瞬时表达。结果:测序结果表明,从大鼠脑源总RNA中克隆到正确的TRH-R1基因全长编码序列;显微照相观察到所构建的TRH-R1表达载体质粒在COS-7细胞系中获得有效表达。结论:大鼠TRH-R1基因的克隆、真核表达载体的构建及在COS-7细胞系中表达获得成功,为进一步研究其功能奠定了基础。     

大白鼠颌下腺促性腺激素释放激素受体(GnRHR)mRNA的RT-PCR和原位杂交的研究

本实验采用RT－PCR法探讨大白鼠颌下腺是否存在GnRH受体mRNA,并用原位杂交法对其细胞定位进行了研究。结果显示RT－PCR可扩增出大白鼠颌下腺GnRH受体mRNA的特异性片段,其碱基数与设计的一致,原位杂交发现颌下腺浆液性腺泡上皮细胞、颗粒曲管、排泄管及分泌管上皮细胞内有GnRH受体mRNA的杂交信号,信号物质分布于胸质内,胞核阴性。上述结果表明大白鼠颌下腺能合成GnRH受体,颌下腺产生的GnRH可作用于颌上腺的靶细胞,参与颌下腺生理功能的调节。     

大鼠颌下腺促性腺激素释放激素及其mRNA的免疫组织化学与原位杂交研究

用免疫组织化学及原位杂交法,研究了促性腺激素释放激素及其ｍＲＮＡ在大鼠颌下腺的分布。结果显示,大鼠颌下腺的浆液性腺泡的上皮细胞,各级导管的上皮细胞及副交感神经节细胞均呈促性腺激素释放激素免疫反应阳性,阳性反应物质分布在胞质,胞核呈阴性反应。颌下腺的浆液性腺泡上皮细胞,各级导管上皮细胞同样被检测到很强的促性腺激素释放激素ｍＲＮＡ杂交信号。以上结果提示,大鼠颌下腺能自身合成促性腺激素释放激素,促性腺激素释放激素对消化功能可能有重要调节作用。     

侧脑室内注射促甲状腺激素释放激素对大鼠胃肠推进运动的影响

用炭末胶液在大鼠小肠内推进距离占小肠全长的百分数,作为胃肠推进运动的指标,观察了侧脑室内注射促甲状腺激素释放激素(TRH)对这一推进运动的影响。侧脑室内注射0.5,1,5和10μg TRH能显著减弱胃肠推进运动,且这种效应呈剂量反应关系。酚妥拉明或心得安经肌肉或侧脑室内注射均不能对抗TRH抑制作用,当阿托品存在时,TRH抑制作用消失或甚或翻转。上述结果提示侧脑室内注射TRH后,可能激活中枢胆碱能系统,然后通过迷走神经中非肾上腺素能抑制神经而使胃肠推进运动减弱。     

Selection of reference genes for studies of porcine endometrial gene expression on gestational day 12

Comparing gene expression patterns in the endometrium on gestational day 12 (GD12) between Erhualian (ER) and Landrace × Large White (LL) pigs is helpful to understand the biological mechanisms of fecundity. Selecting genes that have stable expression levels as the internal standards in a comparative study is essential for identifying real gene-specific variation by quantitative RT-PCR (qRT-PCR). Five genes expressed in sow endometria on GD12 were evaluated for their suitability as internal control for relative quantification by qRT-PCR. These genes were beta-actin (ACTB), beta-2-microglobulin (B2M), phosphoglycerate kinase 1 (PGK1), RNA polymerase II polypeptide G (RPG), and ribosomal protein S20 (RPS20), which represent different functional classes. Our results indicated that ACTB, B2M, and PGK1 were not suitable as internal standards for normalization because of their huge variability between the two breeds. RPS20 and RPG were most stable, and the former is recommended to serve as the internal standard when the use of multiple housekeeping genes is unpractical.     

NASBA方法制备HIV／SHIV RNA定量测定标准品及其应用

目的应用NASBA方法制备SIV／SHIV RNA定量测定标准品。方法应用NASBA方法直接扩增SIVmac251病毒gag基因上1476～1685之间的片段,扩增的RNA产物（RS-NASBA）纯化后10倍系列稀释,测定定量曲线、标准曲线,测定该标准品的稳定性和重复性。结果应用Qiagen公司QuantiTect SYBR GREEN RT-PCRKit,该标准品可精确定量到2．033×10 copies／μL。结论外标准品RS．NASBA纯度高,稳定性好,可用于定量测定SIV／SHIV RNA拷贝数。     

钠米颗粒介导质粒DNA转染体外真核细胞

DNA传递是基因表达与功能研究及其医学应用的重要技术,安全高效的DNA传递一直是研究者期待的目标。利用一种新的阳离子多聚物脱乙酰甲壳胺16介导重组质粒pcDNA3vp1转染COS7细胞,RTPCR可检测到目的基因vp1在mRNA水平的表达,实时定量PCR结果表明其转染效率介于脂质体与磷酸钙法之间,同时还对转染条件进行了探讨。DNA结合分析发现脱乙酰甲壳胺16能够与DNA形成核酸纳米颗粒,提高DNA稳定性,促进真核细胞转染效率的提高。这些结果表明脱乙酰甲壳胺16确能做为一种新型的非病毒纳米DNA传递载体,并将可能在基因表达与功能研究及基因治疗等领域发挥重要作用 。     

褐家鼠不同脏器中汉坦病毒自然感染的差异

为了解野外褐家鼠不同脏器中自然感染汉坦病毒状况和带毒量的差异,选取经检测鼠肺组织中HV-RNA并呈阳性的鼠个体20只,采用巢式RT-PCR检测这些个体心、肝、肺、脾和肾5种共85份脏器中的HV,对阳性标本重复扩增后直接测序,用DNASTAR软件对获得序列进行比较分析。另外,针对汉城型汉坦病毒株Z37-M片段全序列设计定量PCR特异性引物,采用SYBRGreen实时定量PCR法,检测上述85份不同脏器中HV带毒量情况与相对差异。结果显示:RT-PCR对除肺脏之外的其它脏器中HV-RNA的检出率较低(11/65),不同个体肺组织来源的HV-M片段变异较多,其中A→G碱基变异类型占1/3强。从11份除肺之外的脏器中扩增到的HV-M基因序列和其对应同一褐家鼠个体肺脏HV-M片段相比,其碱基差异不大;一肺脏来源的与该个体其他脏器来源的HV-M片段两个位点存在A→G差异,并分别导致两位置氨基酸差异。定量检测结果显示:褐家鼠不同脏器中HV-RNA检出率差异有统计学意义(χ2=16.10,P=0.003),总体阳性率大小为肺>肝>肾>心>脾;肺脏中病毒的分布比其他脏器更为普遍。带毒量也以肺脏中最高,其它脏器之间HV带毒量没有显著性差异(χ2=8.79,P=0.088)。这些结果说明:褐家鼠肺脏是HV侵犯与贮存的主要靶器官,HV基因在该器官中可能更易发生变异。这对进一步了解HV在宿主体内的贮存规律、传播及其在流行病学上的意义将有所裨益。     

外源水杨酸调控水稻化感抑草作用及其分子生理特性

为了探讨外源水杨酸（SA）调控水稻化感抑草效应的可行性,研究了不同浓度的外源SA对强化感水稻PI312777抑草效应的影响及其生理生化特性,并运用实时定量RT-PCR(FQ-PCR)技术检测SA介导的关键酶苯丙氨酸解氨酶基因（ZB8）的相对表达量.结果表明：外源SA能够诱导水稻化感抑草效应增强,而且这种诱导效应与SA的浓度和处理时间相关.叶面喷施SA后,PI312777对稗草的抑制率显著提高,其根系活力、超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化物酶（POD）活性增强,过氧化氢酶（CAT）活性降低;而伴生杂草稗草的相应生理指标的变化趋势则相反.PI312777植株中的苯丙氨酸解氨酶（PAL）活性增强,总酚含量升高.0.2 mmol·L^-1的SA诱导水稻化感抑草效应最显著,该浓度下目的基因ZB8的相对表达丰度随处理时间先上调后下调,在24 h达到表达高峰.     

土壤中棉花黄萎病菌SYBR Green Ⅰ荧光RT-PCR定量检测技术研究

为实现田间土壤棉花黄萎病菌的早期检测,建立了土壤中棉花黄萎病菌的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法.以含342bp PCR扩增产物的阳性质粒为参考,构建了标准曲线,并对该曲线的特异性、敏感性、可重复性进行了评价.结果表明,该方法具有快速、特异性强、敏感度高等特点.检测范围在3.8×103-3.8×108cop...     

Detection of Bovine Central Nervous System Tissue as Bovine Spongiform Encephalopathy Risk Material by Real-Time Reverse Transcriptase-PCR in Raw and Cooked Beef Products

PCR-SSCP and DNA sequencing methods were applied to reveal single nucleotide polymorphisms (SNPs) in the bovine VEGF-B gene in 675 samples belonging to three native Chinese cattle breeds. We found 3 SNPs and a duplication NC_007330.5: g. [782 A>G p. (Gly112 =) (;) 1000-1001dup CT (;) 1079 C>T (;) 2129 G>A p. (Arg184Gln)]. We also observed a statistically significant association of the polymorphism (1000-1001dup CT) in intron 3 of the VEGF-B gene with the body weight of the Nanyang cattle (p < 0.05). This polymorphisms of VEGF-B gene need to be verified among a larger cattle population before it can be identified as a marker for bovine body weight.