介绍一种简便快捷的网状纤维染色法

为了提高病理诊断的阳性率 ,提高网状纤维染色质量及速度 ,减少误诊现象。我们经过反复试验多次摸索 ,网状纤维加温染色法获得了满意的效果。本方法从原来的一个小时缩短到三十五分钟至四十分钟之间 ,即稳定又可靠 ,现将此方法介绍如下。材料和方法1.材料　试剂购自上海虹桥试剂研究所 ,氨银液由技术人员自己配制。二氨银液的配制 (10 %硝酸银、3%氢氧化钠、氨水均购自上海虹桥医用试剂研究所 )一滴一滴加氨水至硝酸银液中直到沉淀不能完全溶解为止 ,再加入氢氧化钠。为使沉淀再溶解在溶液内 ,再一滴一滴地加氨水到仅有微量乳白色为止。加玻…     

网状纤维染色中银氨离子的解离规律

目的 阐明网状纤维染色中银氨离子[Ag(NH3)2+]在蒸馏水中的解离规律,提高网状纤维染色的稳定性及一致性.方法 收集江门市中心医院病理科10例肝脏手术切除石蜡标本,采用改良Gordon-Sweets法进行染色,银氨液反应后置于蒸馏水中浸洗不同的时间以获得最佳的解离点,并在中山大学肿瘤防治中心146例肝癌病例中进行验...     

骨髓活检组织EBER原位杂交检测影响因素分析

目的探讨骨髓活检组织行EBV encoded RNA(EBER)原位杂交检测的影响因素,优化检测条件以期提高骨髓活检组织中EB 病毒的检出率。方法收集35 例EB 病毒相关疾病的骨髓活检标本,通过对比实验,比较不同脱钙方法、不同蛋白酶K 消化条件、不同抗体孵育温度下的骨髓活检组织行EBER 原位杂交检测的切片质量、脱片率及染色质量情况。结果脱钙以运用改良EDTA 脱钙液脱钙20~24h 后流水冲洗30min^1h 最佳;蛋白酶K 消化时间为9min 的组织切片脱片率低,杂交效果最好,阳性细胞着色深,定位准确;在37℃条件下进行抗体孵育杂交染色质量为佳。结论选取合适的脱钙方式,延长蛋白酶K 消化时间,选择最佳抗体孵育温度,可降低脱片率,显著提高骨髓活检组织行EBER 原位杂交检测的染色质量,为EBV 相关疾病的诊断和鉴别诊断提供重要依据。     

不同脱钙条件下三种脱钙液脱钙效果的比较

目的探讨在常温和加温脱钙条件下,甲酸混合液、Alexander硝酸甲醛液及Jenking脱钙液的脱钙效果和染色结果。方法取小鼠膝关节骨组织分为6份,根据脱钙条件和脱钙液的不同,分为常温脱钙组合加温脱钙组两组。常温脱钙组:三种脱钙液常温(25℃)脱钙48h并石蜡切片HE染色;加温脱钙组:三种脱钙液70℃温箱脱钙6h并石蜡切片HE染色,并分别观察骨组织在不同脱钙液及脱钙条件下的脱钙效果及染色结果。结果常温(25℃)脱钙组标本中,经甲酸混合液脱钙的骨组织较难切片,染色较差;经Alexander硝酸甲醛液脱钙的骨组织较易切片,染色较差;经Jenking脱钙液脱钙的骨组织较易切片,染色较好。加温脱钙组标本中,经甲酸混合液脱钙的骨组织较易切片,染色较好;经Alexander硝酸甲醛液脱钙的骨组织较易切片,染色一般;经Jenking脱钙液脱钙的骨组织较易切片,染色较好。结论不同的脱钙液种类及脱钙条件对脱钙及染色结果有较大的影响,标本经三种脱钙液加温脱钙后,使脱钙时间大大缩短,减少了酸对组织的破坏,在脱钙效果及染色结果方面,均要优于常温脱钙,而Jenking脱钙液无论在常温和加温条件下的脱钙和染色效果均要优于其它两种脱钙液,有一定的应用价值。     

介绍一种改良的伊红染色液

在常规HE染色过程中,要求切片核浆对比要分明,细胞浆染色质量的好坏亦至关重要。伊红是细胞浆常用的染色剂,其配制方法较多,多用水溶性伊红染色液,在染色过程中发现水溶性伊红染色液易出现着色过淡、核浆共染及染色后的切片置一段时间后易褪色等现象,给观察切片的组织形态带来一定困难。我们根据伊红的化学性质和染色理论,结合实际应用情况,对传统伊红染液的配制方法进行了一些改良,收到了理想的染色效果。     

脱钙对鼠颅骨标本中肥大细胞组织化学与免疫组织化学染色的影响

目的:探讨脱钙对鼠颅骨标本中肥大细胞组织化学与免疫组织化学染色影响.方法:用不同脱钙液处理小鼠颅骨标本,组织切片后进行苏木素一伊红染色、甲苯胺蓝染色、醛品红染色以及免疫组织化学染色.结果:经过不同脱钙液处理后的颅骨组织切片组织结构保存完好,肥大细胞的组织化学染色(甲苯胺蓝和醛品红染色),及肥大细胞中胰蛋白酶的免疫组织化学染色清晰.结论:不同脱钙液(8%盐酸脱钙液、EDTA脱钙液、混合酸脱钙液)处理不影响鼻腔粘膜中肥大细胞的组织化学和免疫组织化学染色.     

肺隐球菌病标本在六胺银染色中的最佳温育时间

目的探索肺隐球菌在六胺银染色中的最适当温育时间,以期获得最佳染色效果,提高病理标本肺隐球菌病的诊断率。方法收集厦门大学附属第一医院病理科2017年1月—2017年12月确诊的30例肺隐球菌感染病例,每例病例选取最具代表意义的一个蜡块连续切片3张,不同蜡块为区组因素,将每个蜡块切取的3张切片简单随机化分为3组,每组1张,通过区组随机化将90张切片随机分为A、B、C 3组,A组切片在六胺银染液步骤中采用水温箱60℃温育20～25min,B组切片在六胺银染液中温育30～35min,C组切片在六胺银染液中温育40～50min。以10分制对90张六胺银染色片进行评分,比较3组切片得分情况、显微镜下的染色效果与诊断准确率。结果 B组切片镜下显示:隐球菌染成空心黑色,细胞核呈蓝色,周围肺纤维组织呈淡棕色至棕色,隐球菌与周围肺纤维组织染色对比清晰,染色效果显著高于A组与C组。结论在六胺银染色中,采用六胺银染液在水温箱60℃温育30～35min,病理切片六胺银染色评分结果得分更高、六胺银染色效果更好、肺隐球菌病的诊断准确率更高。     

免疫组化染色防脱片几种方法的比较

免疫组化染色技术以其操作简单、敏感性高、特异性强,能将形态和抗原定位结合起来等优点广泛应用于肿瘤临床病理诊断和鉴别诊断[1].但是影响免疫组化的因素较多[2-5],存在经验和判断上的差异.石蜡切片在免疫组化染色中的脱片问题由来已久.切片经抗原修复和缓冲液的长时间浸泡后,往往会部分或全部从载玻片上脱落,影响染色结果的判断.不同的粘附剂和粘附剂不同的涂胶方法防脱片效果不尽相同[6-7].我们在工作中也经常遇到石蜡切片脱落问题,为此探讨了多聚赖氨酸较好的涂胶方法,又进一步对三种粘附剂即APES(氨醛三已氧基硅烷),多聚赖氨酸和白乳胶的防脱片效果和染色情况作了比较,成功地总结出多聚赖氨酸双涂胶法.现介绍如下:     

提高网状纤维染色质量的技术探讨

网状纤维染色在病理工作中是一种最常用的特殊染色方法,它可以用来显示病变组织网状支架的破坏情况,对于判断病变的性质、程度及其发展与转归具有重要意义.尤其在肿瘤病理诊断中,对于鉴别来源于上皮组织和间叶组织的恶性肿瘤具有重要价值.网状纤维染色方法很多,但常用的方法是Gordon-Sweet氏法.该法是一种嗜银染色法,易受多种因素的影响,在染色过程中若操作不当,极易造成染色效果不佳.本文对此法进行了改良,并对其染色机理进行了探讨,同时对染色过程中易出现的问题,分析其原因,提出了具体解决办法,使染色质量明显提高.     

六胺银染液配制方法的改进

六胺银 (Methenamie silver)染色广泛用于病理检测 ,是临床肾活检的重要的染色方法之一 ,该法可特殊地显示肾小球毛细血管基底膜 ,系膜基质、肾小囊壁层基膜以及肾小管基底膜的病理变化 ,亦是显示真菌、尿酸盐 [1 ] 等常用的一种方法。由于临床送检组织时多时少 ,预先配制的六胺银贮备液往往因放置过久而失效 ,导致染色失败。我们在 Gomor氏六胺银贮备液 [2 ] 的基础上将配制方法进行了改进 ,报道如下 :材料和方法1.试剂配制 :1.1　硝酸银分装于 EP管中 ,每只 2 5 mg,加盖 ,贴好标签 ,置 4℃冰箱内保存 ;六次甲基四胺 30 0 m g/只 EP管 ,…     

周末组织处理程序的改进

目的探讨周末切取组织处理程序的改进方法。方法收集40例乳腺癌根治术标本,每例连续取3块组织,随机分为日常程序处理组(常规组)、延时程序处理组(延时组)和改进程序处理组(改进组),比较3组切片裂痕或脱片的发生率、HE染色质量、免疫组织化学检测质量、荧光原位杂交实验结果。结果切片裂痕或脱片的发生率在延时组明显高于常规组,改良组与常规组基本相同;改良组与常规组切片核质对比清晰,红蓝适度,延时组稍不清晰,组织结构稍模糊;免疫组织化学检测阳性率在3组基本相同,但常规组和改良组切片染色更强,背景清晰,而延时组切片染色强度较弱、背景欠清晰;FISH结果阳性率在常规组和改良组相同,而延时组显著低于常规组和改良组。结论改进的周末切取组织处理程序固定、透明、浸蜡3个环节与标准程序相同,而将多余的时间分配给脱水环节,组织脱水彻底,有利于后期制片,特别是有利于后期的HE染色、免疫组织化学检测或FISH检测,值得推荐。     

一种石蜡组织切片在载玻片上精准定位的方法

目的探讨改进包埋模具和改进载玻片应用于HE染色技术的改进方法,以满足病理医生对切片制作的要求及提高病理医生阅片的工作效率。方法应用传统方法与改进方法对阑尾、胆囊和肠壁的小组织块进行连续石蜡切片,分别比较两种方法对同一组织的HE染色制片效果在粘贴方向和粘贴位置的差异,以及在低倍显微镜下定位同一组织相同目标区域的耗时差异。结果应用传统方法同一组织的制片效果存在不同的角度差异或位置差异,应用改进方法同一组织的制片效果具有粘贴方向相对一致,粘贴位置相对固定的特点;改进方法在低倍显微镜下定位同一组织相同目标区域的耗时显著低于传统方法的耗时。结论改进方法的制片效果能够满足病理医生的要求,可提高病理医生阅片的工作效率。     

一种简单而快捷的半薄切片脱树脂新方法

目前,在HE染色、特殊染色或免疫组织化学染色研究方面多采用普通石蜡包埋切片,其切片厚度可薄达4μm,若更薄的切片,切割有一定的难度.对于各种染色而言,越薄的切片,细胞与组织结构越清晰,染色效果越好.环氧树脂(Epon)包埋的组织块不仅用于透射电子显微镜超薄切片的制备,也可用于光镜半薄切片的制备[1].经典的脱树脂的方法是将半薄切片置于氢氧化钠的无水乙醇饱和溶液中浸泡24h,然后再充分水洗.该法耗时长,容易脱片,本实验中摸索出一种简单而快捷的脱树脂的方法,现介绍如下.     

基底膜染色方法比较及在胃粘膜异型增生与胃腺癌中的应用

目的探讨胃粘膜上皮基底膜有效、便捷、直观的实验方法,及基底膜、Ki67免疫组织化学、粘液多重染色在胃腺癌组织染色中的可行性。方法用过碘酸希夫(periodie acid Schiff,PAS)反应、六胺银法(methenamine silvermethod,PASM)、网状纤维染色、苦味酸-天狼猩红(Picrosirius red,SR)和IV型胶原免疫组织化学5种染色方法对多种胃粘膜异型增生及胃腺癌病理标本基底膜进行染色,并利用Friedman检验、Wilcoxon检验定量分析、比较基底膜阳性区域面积。此外,在同一张胃腺癌组织切片上进行显示基底膜、蛋白质、粘液的多重染色。结果 5种基底膜染色方法中,IV型胶原免疫反应阳性面积与SR染色阳性面积(胃粘膜中-重度异型增生标本除外)无显著性差异、PAS与PASM染色阳性面积无显著性差异、网状纤维染色阳性面积最大。多重染色实验结果显示胃腺癌Ki-67、阿尔新蓝(Alcian blue,AB)-PAS二重染色和Ki-67、AB、SR三重染色,分别显示对应结构,效果良好。结论观察基底膜,胃粘膜中-重度异型增生标本中IV型胶原免疫组织化学与SR染色要分别选用;胃粘膜轻度异型增生及胃腺癌标本中IV型与SR染色可相互替代;PAS与PASM染色法可相互替代,我们推荐较为便捷的SR和PAS染色;网状纤维染色观察比较直观,可选用。此外,SR、PAS也可分别应用于胃腺癌Ki67免疫组织化学与AB的多重染色中,效果良好。     

介绍一种改良的油红O脂肪染色法

在日常病理诊断和科研工作中,显示组织内的脂肪常采用油红O进行染色。应用过程中发现,配制该染液所用的丙酮和异丙醇容易挥发,致使染液产生沉淀,染色时易在组织切片上留下红色的结晶,给染色结果的准确判断带来很大影响。为此,我们对染液配方进行了改进,收到较好效果。材料和方法1·标本人或动物的肝组织等,甲醛—钙液固定,冰冻切片,厚10μm。2·改良的油红O染色液油红O 0.5g,50%乙醇100m l。将油红O溶于乙醇内,且不断搅拌至完全溶解即可。配制好的染液置磨口瓶内保存备用。3·染色步骤①切片干燥后入50%乙醇稍洗;②油红O乙醇染液作用8m in…     

两种脱钙法植被鼠尾病理切片的比较

目的探讨制作大鼠尾巴标本石蜡切片的方法。方法采用盐酸脱钙液运用两种脱钙方法制作大鼠尾巴标本石蜡切片。结果两种方法制作的石蜡切片完整、无破碎,HE染色观察组织结构细胞形态完整,核浆分明,红蓝适度。结论两种方法都能制作理想大鼠尾巴标本石蜡切片,可保证病理诊断质量。     

石蜡包埋前组织去黑色素法探讨

在研究含有黑色素的肿瘤时,其组织石蜡切片HE染色如未经去色素处理,显微镜下可见大量浓密的黑色素颗粒,遮盖组织结构无法正常观察,作出正确判断,必须进行去黑色素处理。传统的去黑色素方法是在石蜡切片上进行脱色素反应,常用脱色剂为高锰酸钾或过氧化氢,二者均为强氧化剂,在去除黑色素的同时,极易使组织片脱落。尤其在进行免疫组化染色时脱片更为严重。     

组织内纤维成份的彩色图象分析

取正常鼠肝,狗胸主动脉和狗腹腔淋巴结,Bouin液固定,常规石腊包埋,切片厚8μm。肝胶原纤维Masson染色,血管弹性纤维Weigert染色,淋巴结网状纤维Foot染色。测量使用IBAS全自动图象分析系统(德国KONTRON公司)每张玻片随机顺序选择6个视野,10倍物镜下经JVC KY-110彩色摄象机输入,横/数转换后暂存于帧图象存贮器。     

细菌鞭毛染色法的进一步改进

目前,细菌鞭毛染色存在三方面的困难:准备手续烦琐,染液配制费时且有效期短,染色效果不稳定。为此,我们探讨了改进方法。在两类染色方法中,目前多认为银盐法较碱性复红法优越,我们以前法为基础作了一些改进。     

网状纤维染色与免疫组织化学方法在显示肿瘤细胞及间质成分中的应用

免疫组织化学技术在判断肿瘤细胞来源、分类及鉴别诊断中应用十分广泛。网状纤维作为细胞外间质成分,存在于人体各组织器官中,通过网状纤维染色观察网状纤维在肿瘤组织中的形态变化是肿瘤鉴别诊断中又一重要参与依据。应用免疫组织化学方法和网状纤维染色,对一些不同类...